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Universidade Estadual de Campinas

1. Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues, 1989-. Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications .

Degree: 2018, Universidade Estadual de Campinas

Resumo: Glutaminases (GLS) s?o enzimas envolvidas no crescimento e progress?o tumoral dado seu papel na manuten??o da homeostase redox, produ??o de energia e aumento de biomassa celular. Assim, as GLS t?m sido caracterizadas como importantes para os processos de migra??o e invas?o. A via da PI3K/mTOR est? intimamente relacionada ao aumento de biomassa e crescimento tumoral, estando com sua fun??o desregulada em tumores. mTOR regula glutaminases em n?vel de estabilidade de RNA em mecanismo envolvendo aumento traducional de c-MYC que, por sua vez, inibe a express?o de um miRNA, impactando nos n?veis proteicos de GLS. Neste trabalho, interferimos na via da mTOR atrav?s da sua inibi??o com rapamicina ou pelo knockdown do regulador negativo TSC2, assim como a estimulamos pela express?o da RagB selvagem ou de um mutante constitutivamente ativo. Em todos os casos, observamos uma rela??o positiva entre a atividade de mTOR e a atividade de GLS, o que, entretanto, n?o envolveu altera??o no n?vel proteico da enzima. Intrigados sobre qual poderia ser o mecanismo por tr?s da regula??o, investigamos via espectrometria de massas se a glutaminase C (GAC, uma das isoforma do gene GLS) sofria modifica??es p?s-traducionais ou liga??o a parceiros de intera??o, dependentes da a??o de mTOR. Como poss?veis candidatos, identificamos a prote?na Sec13 (componente de GATOR2), HNRNP H1 (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1), EEFD (Eukaryotic elongation factor delta) e ASS1 (Argininosuccinate synthase). Por outro lado, tamb?m identificamos uma fosforila??o em serina 95 (S95) e acetila??o na lisina 197 (K197), os quais, entretanto, n?o responderam diferencialmente ao tratamento com rapamicina. Verificamos que a express?o do fosfomim?tico S95D levou a diminui??o na atividade de glutaminase de lisado celular. Em acordo, a express?o de GAC.S95D levou a diminui??o nos fen?tipos de prolifera??o e migra??o celular. Curiosamente, o mutante S95A, com pouco impacto na atividade de glutaminase, levou a um aumento proeminente de prolifera??o, migra??o e dos n?veis de marcadores de transi??o epit?lio-mes?nquima (EMT). Tomados em conjunto nossos resultados apontam que GAC tem o potencial de ser regulada por mTOR via intera??o proteica. Al?m disto, mostramos que o N-terminal de GAC sofre fosforila??o no res?duo S95 e, atrav?s do uso de mutantes, identificamos que esta modifica??o tem o potencial de afetar a fun??o da enzima glutaminase end?gena e par?metros celulares tais como prolifera??o e migra??o; Abstract: Glutaminases (GLS) are enzymes involved in tumor growth and progression due to their role in maintaining redox homeostasis, energy production and increased cellular biomass. In this sense, GLS have been characterized as important for migration and invasion processes. The PI3K / mTOR pathway is closely related to increased biomass and tumor growth and is frequently dysregulated in tumors. mTOR regulates glutaminases in RNA stability in a mechanism involving c-MYC translational control, which in its turn, inhibits miRNA expression, impacting on… Advisors/Committee Members: Dias, Sandra Martha Gomes (advisor), Kobarg, J?rg (committee member), Marin, Talita Miguel (committee member), Oliveira, Ana Karina de (committee member), Smetana, Juliana Helena Costa (committee member).

Subjects/Keywords: Metabolismo; C?ncer; Serina-treonina quinases TOR; Fosforila??o

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Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues, 1. (2018). Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications . (Thesis). Universidade Estadual de Campinas. Retrieved from http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/333855

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Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues, 1989-. “Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications .” 2018. Thesis, Universidade Estadual de Campinas. Accessed November 20, 2019. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/333855.

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Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues, 1989-. “Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications .” 2018. Web. 20 Nov 2019.

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Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues 1. Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications . [Internet] [Thesis]. Universidade Estadual de Campinas; 2018. [cited 2019 Nov 20]. Available from: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/333855.

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Ascen??o, Carolline Fernanda Rodrigues 1. Estudo do mecanismo de a??o da via da mTOR sobre a atividade da enzima glutaminase C e identifica??o e caracteriza??o de modifica??es p?s-traducionais nesta enzima : Understanding the underlying mechanism behind of mTOR control of glutaminase C activity and identification and characterization of glutaminase C post-translational modifications . [Thesis]. Universidade Estadual de Campinas; 2018. Available from: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/333855

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