▼ Hintergrund: Zur Beurteilung vaskulärer Komplikationen (Kompl.), insbesondere Pseudoaneurysmen (PsA) und arteriovenösen Fisteln (AVF), wurden 2 VS, das Angio-SealTM-(AS) und das StarClose®-System (SC), mit der manuellen Kompression (MK) in einer prospektiv randomisierten Studie verglichen. Methode: Patienten (P), nach PCI, wurden in drei Gruppen (G) randomisiert: G I: 210 P mit AS, G II 196 P mit SC, G III 213 P mit MK. Farbkodierte Duplexsonographie bei allen P zur Erfassung von Kompl.. Ergebnisse: 619 P wurden eingeschlossen. Keine signif. Unterschiede bei Kompl.. PsA: G I: 4,8 %, G II 3,1 %, G III 4,7 %, p= 0,63. AVF: G I 0,5 %, G II 2,0 %, G III 0,9 %, p= 0,31. G III Lymphödem 0,5 %, G I Thrombose 0,5 %. Prädiktive Faktoren wurden nicht festgestellt. Schlussfolgerungen: VS sind eine sichere Methode nach PCI. Kein signifikanter Unterschied bei Kompl. in G I-II gegenüber MK. Unter Berücksichtigung des Patientenmanagements und des klinischen Alltags bieten VS Vorteile gegenüber der MK. Advisors/Committee Members: Medizin.

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La thrombose est la formation d’un caillot sanguin (thrombus) dans le système cardiovasculaire. Il s’agit d’un des principaux problèmes des dispositifs biomédicaux en contact avec du sang. Toutefois, les biomatériaux utilisés jusqu’à présent dans ces dispositifs déclenchent la coagulation à travers le système de contact. Ce système n’a pas été pris en compte dans les modèles de thrombose dédiés aux dispositifs, alors que son importance pour la thrombose a été récemment remarquée. L’objectif de cette thèse est d’introduire les réactions de coagulation initiées par le système de contact dans la modélisation de la thrombose liées aux dispositifs. Un nouveau modèle réduit pour la génération de thrombine est proposé en incluant l’activation par contact. Le modèle arrive à calculer la formation de thrombine dans du plasma physiologique et du plasma déficient en prothrombine. Une fois réalisée, l’approche réduite est incluse dans un modèle de croissance du thrombus basé sur l’activité des plaquettes. Cette nouvelle stratégie est utilisée pour calculer la formation du thrombus dans une configuration académique.

Thrombosis, which is the formation of a blood clot (thrombus) in the vascular system, is one of the major issues of blood-coated medical devices. To reduce thrombosis risk in this type of devices, computational fluid dynamics has been used. Up to date, bio-material surfaces used in blood coated devices initiate blood coagulation through the contact activation system. This system has not been considered in models dedicated to devices, even though its importance in thrombosis has been recently highlighted. The objective of this thesis is to introduce device-triggered coagulation reactions in the modeling of device-related thrombosis.A novel reduced kinetic model including the contact activation system is proposed. The model correctly captures thrombin formation in physiological and prothrombin deficient platelet-poor-plasma. The reduced set of reactions is then included in a platelet-based model for thrombus formation considering platelet activation by thrombin. This approach is used to study thrombus formation in an academic configuration.

Advisors/Committee Members: Nicoud, Franck (thesis director).

▼ Im Institut für Diagnostische und Interventionelle Radiologie und Nuklearmedizin der Ruhr-Universität Bochum im St.Josef-Hospital werden akute arterielle Gefäßverschlüsse der unteren Extremität mit rt-PA unter Verwendung eines Niedrigdosisprotokoll behandelt. Ziele der Untersuchung sind die Effektivität des verwendeten Lyseprotokolls im Hinblick auf den technischen Erfolg und unter Berücksichtigung von weiteren revaskulisierenden Maßnahmen, (z. B. PTA), zu ermitteln, sowie die Evaluierung von mittel- u. langfristigen Ergebnissen durch klinische und duplexsonographische Nachuntersuchungen. 60 Patienten wurden nach dem o. g. Schema behandelt und aus diesem Kollektiv wurden 32 Patienten nachuntersucht. Die Erfolgsrate im Gesamtkollektiv lag bei 73,3 % und im nachuntersuchten Kollektiv bei 84,4 %. Die Niedrigdosistherapie mit rt-PA erweist sich bei akuten arteriellen Gefäß-verschlüssen auch im Literaturvergleich als komplikationsarm, sehr effektiv, sicher, sowie im Zeitverlauf erfolgreich. Advisors/Committee Members: Medizin.

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La maladie cancéreuse et la maladie thrombotique sont des problématiques fréquentes et graves rencontrées en pathologie humaine et en santé publique. Elles ont une relation réciproque médiée par des interactions cellulaires et des mécanismes moléculaires complexes faisant intervenir des acteurs de l’hémostase et de l’immunité. Tout ou partie de ces phénomènes rendent en effet compte du processus d’inflammation et de réponse de l’organisme à l’agression. La caractérisation de certains médiateurs moléculaires ayant des rôles connus dans l’hémostase et l’inflammation peut nous permettre d’améliorer la compréhension de ces phénomènes et de proposer des pistes de réflexion diagnostiques ou thérapeutiques.Nous nous sommes donc intéressé au couple facteur Willebrand/ADAMTS13 : une protéine clé de l’hémostase dont le taux est influencé par les processus inflammatoires et sa protéase régulatrice. Cette étude menée chez des patients atteints de cancer nous a permis de montrer que l’utilisation de ces protéines comme des biomarqueurs peut améliorer la stratification du risque individuel de thrombose pour les patients et donc d’améliorer la prise en charge thérapeutique. Le rôle de ces protéines dans la physiopathologie de ces mécanismes reste à préciser.Par ailleurs, sur la base de connaissances structurelles, nous avons l’émis l’hypothèse d’une interaction entre deux récepteurs de la surface des leucocytes, cellules-clés de la réponse inflammatoire. En effet, PSGL-1 (P-sélectine glycoprotéine ligand 1), récepteur présent sur une grande partie des leucocytes est le ligand de la P-sélectine sur l’endothélium vasculaire et joue un rôle majeur dans le roulement des leucocytes permettant leur recrutement aux sites de l’inflammation. PSGL-1 a une structure riche en acides sialiques. Le Siglec-5 est quant à lui un récepteur de structure proche des immunoglobulines qui lie des acides sialiques. Nous avons donc décrit et caractérisé la liaison entre ces deux protéines, et étudié son rôle dans le roulement des leucocytes in vitro et in vivo. Avant d’envisager toute application, il reste bien sûr à caractériser plus précisément les modalités de cette interaction (site de liaison, etc…) et son effet dans d’autres mécanismes régulés par l’interaction PSGL-1/P-sélectine comme la formation du thrombus.

Cancer and thrombosis are frequent and serious concerns in human pathology and public health. This conditions are known to share closed relationships, and reciprocal promotion involving cellular interactions and complex molecular mechanisms. Molecular pathways often involve hemostasis or immunity actors and participate in inflammation process, which can be either cause or consequence. Improved knowledge on molecular mediators at the crossroads of hemostasis and inflammation may allow best understanding of these mechanisms and improving therapeutic management.Thus, we studied Willebrand factor / ADAMTS13 couple : a key protein in hemostasis whose rate is influenced by inflammatory processes and its regulatory protease. This study in cancer…

Advisors/Committee Members: Denis, Cécile (thesis director).

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Dans le cancer, l'activation de la cascade de coagulation et des plaquettes participent à la formation de thromboses, à la croissance tumorale, et les métastases. Ces thromboses représentent une complication clinique chez les patients atteints du cancer du pancréas. Cet état serait dû à expression par la tumeur et leurs microparticules (MPs) de facteur tissulaire (FT). Dans une première partie, nous avons identifié le FT et le FT pathway inhibitor exprimés par les MPs cancéreuses et la P-sélectine plaquettaire impliqués dans la progression tumorale, les métastases et la thrombose associée au cancer du pancréas .Nous avons montré le rôle des intégrines αvβ3 et αvβ et des "neutrophils extracellular traps" dans l’interaction des MPs cancéreuses avec les plaquettes dans des modèles murins de « deep vein thrombosis » et de blessure au laser. Nous avons alors évalué l’efficacité du clopidogrel qui présente une action anti tumorale et thrombotique. Cette étude a permis d’initier une étude clinique de phase III pour d’évaluer le potentiel thérapeutique du clopidogrel chez des patients atteints de cancer du pancréas. Dans une seconde partie, nous avons montré que des neutrophiles exprimant le FT agissent comme « starter » de la formation de thrombi. A l’inverse, dans un modèle d’inflammation stérile, nos travaux montrent le rôle de la P-sélectine plaquettaire dans le slow rolling, l’adhésion et la transmigration des neutrophiles a des temps précoses. L’ensemble de nos résultats suggère que les coopérations cellulaires entre l’endothélium, les plaquettes, les MPs et les neutrophiles constituent des mécanismes essentiels à la thrombose et l'inflammation.

In cancers, the blood coagulation cascade and platelets can be activated to form thrombosis. This state will mainly due by the tumor and their microparticles (MPs) expression of tissue factor (TF), key protein of the coagulation cascade. In the first part of this study, we demonstrated that TF and the TF pathway inhibitor expressed by cancer MPs and the platelet P-selectin are involved in tumor progression, metastasis and the associated thrombosis in pancreatic cancer in mice. We showed the key role-play by αvβ3 and αvβ1 integrins and neutrophils extracellular traps in the interaction between cancer cells-derived MPs and platelets. We also evaluated the effect of clopidogrel, but not aspirin, treatment exhibits an anti-tumor action and limits thrombosis formation in preclinical models of pancreatic cancer. This study initiates a national investigation of a multicenter clinical phase III study to evaluate the therapeutic potential of clopidogrel in pancreatic cancer patients. In the second part of this study, we identified a “population of neutrophils expressing TF” that acts like a starter of the thrombus formation. At the reverse, in a sterile inflammatory model, our work showed the primordial role of platelet P-selectin in the slow rolling, the adhesion and the transmigration of neutrophils. All together our results suggest that the cooperation between the endothelium,…

Advisors/Committee Members: Dubois, Christophe (thesis director).

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Rationnel: Bien qu'elles constituent la majorité des thromboses veineuses des membres inférieurs, les thromboses veineuses profondes (TVP) distale et les thromboses veineuses superficielles (TVS) ont été peu étudiées et leur significativité clinique et leur prise en charge sont débattues.Méthodes: Cette thèse collige les résultats des travaux effectués par J.P. Galanaud sur les TVP distales et les TVS à partir des études épidémiologiques OPTIMEV, POST et RIETE.Résultats commentés: TVP distale: La TVP distale n'a pas le même profil de facteur de risque que la TVP proximale. Sa mortalité associée à court terme est plus faible que celle des TVP proximales mais supérieure à celle de témoins confirmant qu'il s'agit d'une entité cliniquement significative. Les différences de profil de population et de complications entre ces deux types de TVP suggèrent que le rapport bénéfice/risque du traitement anticoagulant est différent. Il n'est donc pas légitime d'extrapoler les résultats des essais des TVP proximales aux TVP distales. Des essais spécifiques sont donc nécessaires.TVS: En cas de TVS le risque de TVP concomitante est élevé. Un examen écho-doppler doit être réalisé et devra au moins explorer l'ensemble du réseau profond du membre inférieur affecté. Sexe masculin et antécédents de TVP/Embolie pulmonaire constituent des facteurs prédictifs indépendants de récidive. Si certaines TVS peuvent être traitées avec succès sans traitement anticoagulant, celles associées à un cancer ou à une atteinte saphéno-fémorale sont à haut risque de récidive y compris après un traitement anticoagulant curatif.

Background: Though they represent the majority of all lower limbs thromboses, isolated distal deep-vein thrombosis (DVT) (without symptomatic pulmonary embolism (PE)) and isolated superficial vein thrombosis (SVT) (without DVT or PE) have been poorly studied. Their clinical significance and management are under debate.Methods: Data from epidemiological multicenter prospective studies OPTIMEV, POST, RIETEResults and comments: Isolated distal DVT: Distal and proximal DVTs exhibit a different risk factor profile, the latter being more associated with chronic risk factors. Three-month mortality of distal DVT patient is lower than that of proximal DVT ones but is higher than that of controls. This evidences that distal DVT is a clinically significant finding. Differences in population profile and outcomes suggests that the benefit/risk ratio of anticoagulant treatment is not similar. Data from proximal DVT clinical trials should no longer be extrapolated to distal DVT.Isolated SVT: In case of SVT the risk of concomitant DVT is high. A compression ultrasonographic exam should be performed and at least explore the whole deep venous system of the affected limb. Male gender and history of DVT/Pulmonary embolism are independent predicators of recurrence. Some SVT can be safely treated without anticoagulants. On contrary, in patients with cancer or a sapheno-femoral junction involvement, the risk of deep venous recurrence is high even upon…

Advisors/Committee Members: Dauzat, Michel (thesis director), Leizorovicz, Alain (thesis director).

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La sévérité potentielle de la thrombose veineuse superficielle (TVS) des membres inférieurs a récemment été documentée par des études réalisées en soins secondaires et tertiaires. Son épidémiologie reste cependant inconnue en soins primaires. Le premier objectif de ce travail était de mesurer la prévalence de la TVS en soins primaires, ainsi que le taux d'évènements thromboemboliques concomitants au moment du diagnostic. Pour y répondre, un réseau de recherche collaborative entre médecins généralistes et médecins vasculaires de la région stéphanoise a été mis en place. Une étude transversale descriptive a été réalisée au sein de ce réseau pendant un an. La prévalence annuelle de la TVS a été mesurée à 0,64 pour mille habitants. Au moment du diagnostic, 24,6% des TVS étaient associées à une thrombose veineuse profonde symptomatique et 4,7% à une embolie pulmonaire symptomatique. Une seconde étude a recherché une variation saisonnière de la fréquence de la TVS en analysant les données individuelles de trois études aux designs différents ; l'étude STENOX, l'étude POST et l'étude STEPH. Une variation significative n'a été retrouvée que dans l'étude POST, et les peak-to-low ratios étaient inférieurs à 1,2 dans les trois études. Ainsi, si une variation existe, celle-ci parait être de faible envergure, sans conséquence sur la pratique et la recherche

The potential severity of superficial vein thrombosis (SVT) of the lower limbs has recently been shown by studies perfomed in secondary and tertiary care. The epidemiology of SVT remains unknown in primary care. The first objective of this study was to measure the prevalence of SVT in primary care, and the rate of concomitant thromboembolic events at diagnosis. A collaborative research network between general practitioners and vascular physicians from Saint-Etienne has been set up. A cross-sectional study has been conducted within this network during one year. The annual prevalence of SVT was measured to 0.64 per thousand inhabitants. At diagnosis, 24.6% of SVT were associated with symptomatic deep vein thrombosis and 4.7% with symptomatic pulmonary embolism. A second study was looking for a seasonal variation of SVT frequency by analyzing individual data from three studies with different designs; the STENOX study, the POST study and the STEPH study. A significant variation was found only in the POST study, and peak-to-low ratios were below 1.2 in the three studies. Thus, if other more powerful and exhaustive studies could find a seasonal variation, that variation would probably be of low magnitude and without clinical significance

Advisors/Committee Members: Tardy, Bernard (thesis director).

▼ Die Studie untersucht erstmals in-vivo, ob Desmopressin die Thrombogenese bei der durch Aspirin induzierten Thrombozytendysfunktion wiederherstellen kann. An männlichen Lewis-Ratten (n=40, 275 ± g KG, 4 Gruppen a 10 Tiere: 1. Kontrolle, 2. ASS, 3. DP, 4. ASS+DP) wurde die thrombogene Mikroanastomose untersucht: Parameter: Zeit bis zum Erreichen der max. Thrombusgrösse, max. Thrombusgrösse, Thrombozytenfunktion. Die Thrombusasbildung war unter DP im Verglich zu den ASS- und den Kontrolltieren signifikant beschleunigt. Die max. Thrombusgrösse war in der DP- und der DP+ASS-Gruppe verglichen mit den ASS-Tieren erreicht. Die Thrombozytenfunktion war unter DP verglichen zu den Kontrollen und der ASS-Gruppe signifikant stärker. Desmopressin beschleunigt signifikant die Thrombusbildung in ASS-behandelten Tieren. Kann die Thrombusgrösse nach ASS- Gabe wiederherstellen. Verbessert signifikant die Thrombozytenfunktion. Kann bei der ASS-induzierten Thrombozytendysfunktion sinnvoll eingesetzt werden. Advisors/Committee Members: Medizin.

▼ Die Pankreastransplantation (PTx) ist eine effektive Therapie des mit schweren Folgeerkrankungen einhergehenden Diabetes mellitus Typ 1, die jedoch ein erhöhtes Komplikationsrisiko birgt. Diese Studie analysiert den diagnostischen Nutzen serieller C3d-Bestimmungen mittels Rocket-Immunelektrophorese im EDTA-Plasma im Verlauf nach PTx (n = 25) bzw. isolierter Nierentransplantation (NTx, n = 15). Postoperativ war eine Komplementaktivierung festzustellen, die innerhalb von 40 Tagen nach NTx auf Normwerte fällt, nach PTx tendenziell ansteigt. Während P-Abstoßung (AR) war das mittlere C3d im Vergleich zur P-Thrombose (Thr) (p = 0,012) wie auch zur Kontrollgruppe erhöht. N-AR nach SPKT zeigten einen nicht-signifikanten Anstieg, N-AR nach NTx keinen Anstieg. Infektionen waren assoziiert mit erhöhten C3d-Spiegeln. C3d kann bei der Differenzierung von P-AR und -Thr nach Ausschluss von Infektionen zur Diagnosefindung beitragen, ist jedoch kein verlässlicher Parameter in der Prädiktion einer AR. Advisors/Committee Members: Medizin.

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L'objectif de notre première étude était d'identifier les déterminants génétiques et environnementaux du risque de maladie thromboembolique veineuse (MTEV) chez les femmes sous contraceptifs oraux combinés (COC). Après ajustement pour les facteurs confondants, les principaux déterminants environnementaux de la MTEV étaient le tabagisme (OR = 1,65) et un indice de masse corporelle supérieur à 35 kg.m2 (OR = 3,46). En outre, la thrombophilie héréditaire sévère (OR = 2,13) et les groupes sanguins non-O (OR = 1,98). Nous avons confirmé que l’histoire familiale au premier degré de MTEV prédit mal la thrombophilie. En conclusion, cette étude confirme l'influence du tabagisme et de l'obésité et pour la première fois l'impact du groupe sanguin ABO sur le risque de MTEV chez les femmes sous COC. Elle confirme également la faible sensibilité de l'histoire familiale de MTEV pour dépister les thrombophilies héréditaires.Le but de la deuxième étude était d'étudier, chez les utilisatrices de COC, l'impact des polymorphismes génétiques nouvellement identifiés par les études pangénomiques associés au risque de MTEV dans la population générale. Neuf polymorphismes situés sur les gènes KNG1, F11, F5, F2, PROCR, FGG, TSPAN15 et SLC44A2 ont été génotypés dans un échantillon de 766 cas et 464 témoins dans le cadre de l’étude PILGRIM. Seul le polymorphisme rs2289252 situé sur le F11 était significativement associé au risque de MTEV. La présence de l’allèle rs2289252-A du F11 était associée à un risque accru de MTEV (OR =1,6). En outre, la combinaison de l’allèle rs2289252-A et du groupe sanguin non-O, était associée à un risque d’OR de 4.

The aim of our first study was to identify the genetic and environmental determinants of venous thromboembolism (VTE) risk in a large sample of women using combined oral contraceptives (COC). A total of 968 women with a personal history of VTE during COC use were compared with 874 women under COC, but no personal history of VTE. After adjustment for confounding factors, the main environmental determinants of VTE were smoking odds ratio (OR = 1.65) and a body mass index greater than 35 kg.m-2 (OR = 3.46). In addition, severe hereditary thrombophilia (OR = 2.13) and non-O blood groups (OR = 1.98) have been shown to be important genetic risk factors for VTE under COC. First-degree family history of VTE predicts thrombophilia poorly. In conclusion, this study confirms the influence of smoking and obesity and for the first time the impact of ABO blood group on the risk of VTE in women under COC It also confirms the low sensitivity of the family history of VTE to detect hereditary thrombophilia. The purpose of the second study was to study, in COC users, the impact of newly identified genetic polymorphisms by genome-wide as associated with the risk of VTE in the general population. Nine polymorphisms on the KNG1, F11, F5, F2, PROCR, FGG, TSPAN15 and SLC44A2 genes were genotyped in a sample of 766 patients and 464 controls in the PILGRIM study. Only the rs2289252 polymorphism on the F11 was significantly…

Advisors/Committee Members: Morange, Pierre-Emmanuel (thesis director).

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L’hémostase est un processus physiologique permettant de préserver l’intégrité du système vasculaire et de prévenir une perte de sang en réponse à une blessure. En situation pathologique, comme dans le cas de cancers, d’infections ou de maladies cardiovasculaires, il peut y avoir activation de la cascade de coagulation entraînant la formation d’un thrombus.Dans cette étude, nous avons utilisé la microscopie intravitale dans un modèle de blessure au rayon laser pour comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires mis en jeu dans la formation d’un thrombus plaquettaire en conditions physiologiques et pathologiques lors du développement d’un cancer. La première partie de ce travail a consisté à décrire l’implication des polynucléaires neutrophiles dans la formation d’un thrombus. Nous montrons que les neutrophiles sont les premières cellules à s’accumuler au niveau du site de blessure et représentent la principale source de facteur tissulaire menant à la génération de fibrine et à la formation du thrombus. Ces neutrophiles sont nécessaires au recrutement de cellules endothéliales progénitrices (Endothelial colony- forming cells, ECFCs), qui sont des cellules capables de jouer un rôle important dans la réparation vasculaire. Dans une seconde partie, nous avons déterminé, dans des modèles murins adaptés, l’implication de l’activation du FT et des plaquettes dans la thrombose associée au cancer. En conclusion, notre travail donne de nouvelles perspectives dans la compréhension du rôle pathophysiologique des neutrophiles, des cellules progénitrices endothéliales et des plaquettes.

Hemostasis is a physiological process to preserve the integrity of the vascular system and to prevent blood loss in response to injury. In pathological conditions, such as cancers, infections or cardiovascular diseases, the blood coagulation cascade can be activated, leading to the formation of a platelet thrombus.Using a laser-injury model coupled with a high-definition, high-speed camera, we explored the cellular and molecular mechanisms involved in thrombus formation in physiological and in pathological conditions associated with the development of a cancer. The first part of this work describes the role of polymorphonuclear neutrophils (PMNs) in thrombus formation. We show that PMNs are the first cells to accumulate at the site of injury and represent the main source of blood-borne tissue factor (TF), leading to the generation of fibrin and thrombus formation. We also show that once present at the site of injury, PMNs recruit Endothelial Progenitor Cells (endothelial colony-forming cells, ECFCs), which play a key role in vascular repair. The second part of this work we determined, in dedicated mouse models, the involvement of TF and platelet activation in thrombosis associated with cancer. Together, our findings provide new perspectives in the understanding of the pathophysiological role of polymorphonuclear neutrophils, Endothelial Progenitor Cells and platelets.

Advisors/Committee Members: Dubois, Christophe (thesis director).

▼ Le monoxyde de carbone (CO) est un gaz diffusible dont la production à l'état physiologique est majoritairement issue de la dégradation de l’hème par l’hème oxygénase (HO). Le CO endogène a des propriétés vasorelaxantes comparables à celles du monoxyde d’azote. L’effet du CO a été étudié dans des modèles d’ischémie coronarienne, d’insuffisance rénale aigue et d’hypertension artérielle : des propriétés anti-agrégantes, anti-prolifératives, anti-inflammatoires et anti-apoptotiques ont été mises en évidence. Ces propriétés suggèrent que le CO pourrait aussi jouer un rôle dans la prévention de la thrombose vasculaire, et la prévention de la progression de l’insuffisance rénale chronique. Dès lors, les objectifs de cette thèse ont été : 1) d’évaluer les effets in vivo d’un inducteur de l’HO-1, l’hémine, administré en chronique respectivement dans un modèle de thrombose carotidienne et dans un modèle d’insuffisance rénale chronique chez le rat et ; 2) de fournir des éléments susceptibles d’expliquer la mécanistique qui sous-tend les effets liés à l’induction de l’HO-1. Dans le modèle de thrombose artérielle validé chez le rat par notre laboratoire, l’administration chronique d’hémine à la dose de 50 mg/kg a réduit significativement le taux d’occlusion vasculaire par rapport aux animaux non traités (7,2% versus 71%; p<0,01). A l’inverse, les animaux traités par l’hémine recevant parallèlement un inhibiteur de l’HO-1 ont présenté des taux d’occlusion vasculaire comparables à ceux des animaux "contrôles". Ces résultats suggèrent que la réduction du taux d’occlusion artérielle observée, qui ne s’est pas accompagnée de modifications significatives de la pression artérielle, des paramètres sanguins ou de l’hémostase, est directement liée à l'expression vasculaire de l’HO-1. Dans le modèle d’insuffisance rénale chronique par néphrectomie des 5/6 chez le rat, l’administration chronique 2 fois par semaine d’hémine à la dose de 50 mg/kg a diminué significativement, par rapport aux animaux contrôles, la protéinurie (1,0 versus 7,3 g/mmol de créatinine), les index de glomérulosclérose (0,84 versus 2,53) et d’atrophie tubulaire rénale (0,9 versus 2,33), l’expression des protéines impliquées dans la progression de l’insuffisance rénale [(TGF-???0,62 versus 1,0) caspase-3 (0,35 versus 0,71); BMP-4 (0,11 versus 0,32)] et a augmenté significativement l’expression de la protéine BMP-7 néphroprotectrice (1,31 versus 0,38). Par rapport aux animaux recevant un antagoniste des récepteurs AT1 de l'angiotensine II (losartan à la dose de 20 mg/kg), traitement de référence utilisé au cours de l'étude, les effets de l'hémine ont été comparables pour l’expression de TGF-?? (0,62 versus 0,65) voire supérieurs pour son effet sur protéinurie (1 g/mmol de créatinine versus 2,2 g/mmol de créatinine), l’index de glomérulosclérose (0,84 versus 1,68) et d’atrophie tubulaire (0,9 versus 1,66), malgré une réduction de la pression artérielle plus faible (152,4 mmHg versus 134,7 mmHg). D’autres travaux doivent à présent être entrepris afin d’évaluer si… Advisors/Committee Members: Halimi, Jean-Michel (thesis director).

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La simplification des algorithmes diagnostiques a entrainé une augmentation de la suspicion d’une embolie pulmonaire (EP). Sa prévalence est passée de 50% à moins de 20%. L’évocation du diagnostic peut être gênée par la coexistence d’une Broncho Pneumopathie Chronique Obstructive (BPCO). La 1ère étape de prise en charge d’un patient suspect d’EP est l’évaluation de la probabilité clinique, par exemple par le score de Genève. Nous montrons qu’en revenant au résultat de ce score, le clinicien prédit le risque de décès et de ré-hospitalisation dans les 3 mois que le patient ait – ou n’ait pas- d’EP. Ces résultats devraient permettre d’aider à décider d’un traitement ambulatoire ou d’une hospitalisation. De plus, nous montrons que l’existence d’une BPCO est associée à une modification de la présentation clinique de la Maladie Veineuse Thrombo-Embolique (MVTE): alors que ratio dans la population sans BPCO est de 2 Thromboses Veineuses Profondes (TVP) pour une 1 EP, ce rapport s’inverse dans la population de patients souffrant de BPCO. Ce point est critique car nous montrons par ailleurs que les patients BPCO avec MVTE présentent une moins bonne évolution que les patients sans BPCO, avec une augmentation du nombre de décès et de complication hémorragique pendant les 3 mois de suivi. En se concentrant sur les patients avec BPCO, il apparait que ceux se présentant initialement avec une EP sont plus à risque de mourir et de saigner dans les 3 mois de suivi par rapport aux patients BPCO avec TVP. Il est donc indispensable de trouver un traitement protégeant efficacement les patients BPCO avec EP d’une récidive embolique, mais sans augmenter le risque hémorragique

The simplification of the management of patients with a suspicion of pulmonary embolism (PE) has led to an increase in PE suspicion, but also a decrease in PE prevalence from 50% to 20% of patients suspected of PE. The co-existence of Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) may mimic PE symptoms leading to a decrease of PE suspicion. The first step of the management of PE suspicion is the assessment of the clinical probability, for example with the Geneva Rule. We have shown that clinician may predict 3-month mortality and readmission rate if they return to the Geneva Rule results, even if PE has been confirmed or ruled out. It may help the clinician to propose an outpatient management or a hospitalization. Moreover, we have found that PE was the more frequent form of venous thromboembolism (VTE) presentation in COPD patients, although it is Deep Venous Thrombosis (DVT) in non-COPD patients. This point is crucial as COPD patients with VTE have a decreased survival with more frequent bleeding than non-COPD patients. When focusing on COPD patients, those presenting with PE were at higher risk of dying and bleeding than those presenting with DVT during the 3-month follow-up. A more efficient treatment but without an increase in the bleeding risk is needed

Advisors/Committee Members: Mismetti, Patrick (thesis director), Costes, Frédéric (thesis director).

▼ Myeloproliferative Neoplasien sind eine Gruppe von Krankheiten, die durch die maligne Expansion reifer myeloischer Zellen gekennzeichnet sind. Eine dieser Krankheiten ist die Polycythemia vera, die durch Erythrozytose, Leukozytose und Thrombozytose oder eine Kombination davon gekennzeichnet ist. Bei Patienten mit Polycythemia vera besteht ein erhöhtes Risiko für Thromboembolien und das Fortschreiten zu einer sekundären Myelofibrose und / oder einer akuten myeloischen Leukämie. Thromboembolien sind die Hauptursache für Morbidität und Mortalität bei diesen Patienten, obwohl ihre Inzidenzrate zwischen Patienten sehr stark variieren kann. Die zugrundeliegenden Mechanismen für diese Heterogenität bleiben bis jetzt unklar. Einer der Hauptverantwortlichen von myeloproliferativen Neoplasien ist die JAK2V617F-Mutation, die bei etwa 95% der Polycythemia vera-Patienten gefunden werden kann. Diese konstitutiv aktive JAK2-Variante aktiviert STAT5 und führt so zur Aktivierung von Überlebens- und Proliferationsgenen. STAT5 umfasst zwei verschiedene Genprodukte: STAT5A und STAT5B. Sie haben weitgehend gleiche Funktionen, obwohl auch spezielle Funktionen identifiziert wurden. Bisher ist unklar, welche STAT5-Variante für die Entwicklung von JAK2V617F positive myeloproliferativen Neoplasien die wichtigere ist. Wir glauben, dass STAT5B das entscheidende STAT5-Protein ist, da es in Krebserkrankungen häufiger mutiert vorgefunden wurde als STAT5A. In dieser Masterarbeit haben wir drei verschiedene Ansätze verwendet, um die unterschiedliche Rolle von STAT5A und STAT5B bei JAK2V617F positive myeloproliferativen Neoplasien zu untersuchen. Wir haben ihre Expressionsniveaus in drei myeloproliferativen neoplastischen Zelllinien analysiert und stellten durch Vergleich von JAK2V617F positiven und JAK2V617F negativen Zellen fest, dass JAK2V617F die Expression erhöhter STAT5B-Niveaus nicht beeinflusst. Wir erzeugten auch stabile myeloproliferative neoplastische Zelllinien, die eine der STAT5-Varianten über exprimieren, und stellten fest, dass STAT5B einer JAK2V617F positiven Zelllinie einen proliferativen Vorteil verlieh. Wir untersuchten auch die Megakaryozyten-Differenzierung in einem JAK2V617F/hSTAT5B-Mausmodell, da Megakaryozyten stark an der Entwicklung von Thromboembolien beteiligt sind. Wir fanden heraus, dass eine zusätzliche Expression von STAT5B bei diesen Mäusen zu einer erhöhten Differenzierung von Blutstammzellen zu Megakaryozyten führt. Wir untersuchten auch die Lunge der Mäuse und stellten fest, dass sich in den JAK2V617F tragenden Mäusen Gerinnsel in einigen Blutgefäßen bilden. Wir müssen noch bestätigen, ob die Expression von zusätzlichem hSTAT5B zu erhöhten Gerinnseln führt, was unsere Hypothese bestätigen würde, dass ein erhöhter STAT5B-Wert mit erhöhten Thromboembolien zusammenhängt. Zuletzt analysierten wir periphere Blutproben von Patienten mit myeloproliferativem Neoplasien und ermittelten die Expressionsniveaus von STAT5A und STAT5B. Die Werte waren sehr heterogen und es wurden keine deutlichen Unterschiede zwischen…

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De nombreux dispositifs médicaux implantables sont utilisés chaque jour. Le contrôle de l'interface du dispositif avec les tissus vivants environnants doit encore être amélioré. De nombreux dispositifs médicaux implantés dans le corps sont le siège d’une ou plusieurs complications graves, telles que l'infection ou la thrombose. C’est notamment le cas des cathéters intraveineux. Dans ce contexte, nous avons cherché à développer une stratégie permettant de réduire les complications associées à leur utilisation, via l’immobilisation covalente de polymères sur les matériaux utilisés en implantation (polyuréthane). La réactivité des uréthanes a d’abord été étudiée, permettant d’identifier la réaction de transcarbamoylation comme outil efficace de modification des uréthanes et polyuréthanes en conditions douces. La réaction entre des poly(éthylène glycol) et la surface de polyuréthane, catalysée par des bases, a permis de rendre les surfaces de PU hydrophiles. Les conditions de modification ont été optimisées. Les surfaces ont été analysées: angle de contact, spectrométrie infrarouge, XPS et TOF-SIMS. Les surfaces modifiées ont montrées d’excellentes propriétés antiadhésives avec une diminution significative de l’adsorption protéique, de l’adhésion de cellules, de plaquettes et de bactéries. Les propriétés des surfaces modifiées ont été évaluées et comparées à d’autres systèmes. Cette stratégie est prometteuse pour la modification en une étape de surfaces de polyuréthane. Les tests in vitro montrent le potentiel de cette modification de surface pour obtenir un polyuréthane ayant une biocompatibilité accrue.

Many implantable medical devices (stents, catheters, cardiac valves…) are used everyday in many domains. The control of the interface between the medical device and the surrounding tissue is still to be improved. Many implanted devices are facing serious complications following implantation such as infections or thrombosis. These problematics are especially present for intravenous catheters used to administrate drugs. In this context, we investigated a way to strongly limit the problematics associated with their implantation, by covalently binding polymers at the surface, to reduce protein adsorption and cell adhesion on the materials used in implantation (polyurethane). The reactivity of urethanes was first studied, it allowed identifying the transcarbamoylation reaction as an efficient tool to modify urethanes and polyurethanes in soft reaction conditions. The reaction of poly (ethylene glycol) and the polyurethane surface, catalyzed by bases, allowed us to get hydrophilic polyurethane surfaces. Modification conditions were optimized to obtain a good covering of the surface with PEG. Surfaces were analyzed: contact angle, profilometry, infrared spectroscopy, XPS and TOF-SIMS. Modified surfaces showed excellent antiadhesive properties with a strong reduction of protein adsorption, cell and bacterial adhesion. The properties of modified surfaces were evaluated and compared to other systems. This strategy of…

Advisors/Committee Members: Semetey, Vincent (thesis director).

▼ Ce projet de thèse concerne les 2 principales complications rencontrées en pratique clinique dans les suites de l’angioplastie-stenting artériel : la resténose et la thrombose aigüe. Pour remédier à ce problème, des stents enrobés d’agents antiprolifératifs sont déjà sur le marché, mais leurs résultats restent décevants en raison de l’augmentation du taux de thrombose tardive intrastent (RR 1,2 vs stent nu) à l’origine d’une surmortalité (RR 1,32 vs stent nu) [Lagerqvist Bo et al., N Eng J Med 2007]. Dans ce travail, nous proposons d’immobiliser sur le stent une ancre spécifique au substrat métallique soit pour immobiliser i) la molécule thérapeutique, soit pour immobiliser ii) une matrice polymère sur laquelle sera adsorbée une molécule thérapeutique dans le cas d’un système à libération prolongée; cette dernière ciblant la resténose et la thrombose. Cette ancre, issue des protéines permettant l’accroche des moules marinières à tout type de substrat [Waite JH et al., Science 1981], est la base commune pour une immobilisation par liaisons covalentes de la molécule thérapeutique ou du système polymère. La première partie du projet concernait la mise au point de l’ancre chimique spécifique dans le cadre d’une immobilisation de surface. Avec cette technique d’immobilisation, l’ancre dopamine inclue un ester activé, permettant de générer un polymère de longueur de chaine contrôlé et capable d’adsorber une quantité contrôlée et définie de molécule thérapeutique [C Zobrist et al., Macromolecules 2011]. Ce polymère de N-(Acryloyloxy)succinimide a pu être caractérisé et couplé à une molécule de glucosamine, protéoglycane aux caractéristiques pertinentes dans la problématique développée. Ce modèle a été validé sur le plan chimique et biologique. Les résultats restaient décevants concernant la prolifération des cellules musculaires lisses qui sont les cellules cibles dans la resténose.L’ancre dopamine a par la suite était modifiée dans le but de permettre le greffage d’autres fonctions chimiques, notamment amines et acides. Elle a finalement été utilisée en conditions basiques (pH 8,5) permettant d’obtenir une polydopamine [Lee et al., Science 2007].Cette polydopamine a permis l’interaction sur notre surface d’un polymère bien connu au sein de notre unité et déjà employé pour la fonctionnalisation des tissus dans le domaine biomédical, le polymère de cyclodextrine (CD) [Martel B et al., European Polymer Journal 1995]. Les CD sont des oligosaccharides cycliques sous forme de cône tronqué possédant une cavité hydrophobe interne et des groupements hydroxyles à l’extérieur engendrant un caractère hydrophile. Cette structure cyclique leur confère la capacité de former des complexes d’inclusion réversibles avec un grand nombre de molécules hydrophobes. Elles peuvent donc stocker une molécule thérapeutique en grande quantité et ont la capacité de la libérer dans le temps.L’ensemble des paramètres du procédé de fonctionnalisation permettant l’adsorption de ces 2 couches successives : polydopamine et polymère de CD a pu être optimisé.… Advisors/Committee Members: Haulon, Stéphan (thesis director).

▼ Orthopädische Eingriffe, insbesondere Implantationen von Hüft- und Kniegelenken, bergen ein hohes Risiko für eine Thrombose und Lungenembolie. In der vorliegenden Arbeit sollte die Wirksamkeit und Sicherheit unter der oralen Thromboseprophylaxe mit Dabigatran, im Vergleich mit der bisherigen Standardprophylaxe Enoxaparin untersucht werden. Hierzu wurde der Blutverlust von 162 Patienten nach primärem Kniegelenkersatz ermittelt. 74 Patienten erhielten präoperativ 0,4ml Enoxaparin, während die Referenzgruppe 1 - 4 h postoperativ mit der Einnahme von 110mg Dabigatran begann. Die Operation erfolgte bei allen Patienten in Oberschenkelblutleere. Die Art der Prophylaxe führte zu keinem signifikanten Unterschied. Es zeichnete sich jedoch unter Enoxaparinprophylaxe ein tendenziell größerer Hämoglobin- und Hämatokritabfall und eine höhere Bluttransfusionsrate ab. Die Kombination aus Enoxaparinprophylaxe und ASS-Gabe führte zu einem signifikant erhöhten Blutverlust. Advisors/Committee Members: Medizin.

▼ Überprüfung der Wertigkeit ambulanter Behandlung der tiefen Beinvenenthrombose in der Verlaufskontrolle im Hinblick auf Wirksamkeit und Verträglichkeit. Ausgewählte Patienten einer gefäßchirurgischen Praxis mit akuter, gesicherter, symptomatischer TVT wurden ambulant mit NMH, Kompressionsverbänden und anschließender oraler Antikoagulation behandelt und mindestens 1 Jahr kontrolliert. Anteil der Patienten mit 3-, 4-Etagen Thrombose lag bei 62%., die Häufigkeit von klinisch relevanten Lungenembolien bei 0,6%, die Thromboserezidivrate bei 4,7%, thromboembolieassoziierte Letalität wurde keine verzeichnet, relevante Blutungen bei 0,32 %. Das postthrombotische Syndrom wurde bei 40,5% der Patienten verzeichnet. Der Vergleich der Daten der Studie mit den durchschnittlichen Literaturangaben zeigt, dass die ambulante Behandlung der TVT bei Patienten, die zum Zeitpunkt der Diagnose mobil waren, mindestens so effektiv, wirksam und sicher ist, wie konservative, stationäre Behandlung. Advisors/Committee Members: Medizin.

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T-Zellen sind an der Induktion und Erhaltung chronischer Entzündungen maßgeblich beteiligt. Im Bereich kardiovaskulärer Erkrankungen konnte eine Beteiligung von T-Zellen an der Entstehung von Ateriosklerose, Bluthochdruck und arterieller Thrombose aufgezeigt werden. Allerdings sind sowohl die Mechanismen ihrer Aktivierung, als auch die für die Entstehung und Persistenz vaskulärer Entzündung relevanten Effektorfunktionen weitgehend unbekannt. rnIn der vorliegenden Arbeit konnte erstmals in zwei Mausmodellen gezeigt werden, dass sowohl die dem Bluthochdruck zugrundeliegende Entzündung der Arterienwände als auch die durch venöse Thrombose ausgelöste Entzündung der Venenwand zu einer selektiven Einwanderung von CD4+ und CD8+ T-Zellen mit einem Effektor-Gedächtniszell-Phänotyp führt. Mit Hilfe von Nur77-GFP-transgenen Mäusen konnte gezeigt werden, dass die in die entzündeten Gefäßwände eingewanderten T-Zellen lokal T-Zell-Rezeptor-unabhängig aktiviert werden.rnBluthochdruck und venöse Thrombose sind durch eine verstärkte Expression eines ähnlichen Musters an Zytokinen und Chemokinen in den Gefäßwänden begleitet, das in rekombinanter Form in einem Teil der Effektor-T-Gedächtniszellen die Bildung von IFN-γ auslöst. Die in dieser Arbeit vorgestellten Ergebnisse weisen erstmals eine Beteiligung von T-Zellen an der Entzündung der Venenwand im Rahmen einer venösen Thrombose nach. Des Weiteren konnten erstmals Hinweise darauf gefunden werden, dass T-Zellen Gefäßentzündungen durch eine Zytokin-induzierte IFN-γ-Bildung erhalten und verstärken.rn

T lymphocytes are important participants in inflammatory responses both through their adaptive and innate functions. Recent evidence indicates that T cells contribute to vascular inflammation in the setting of arteriosclerosis, hypertension, and arterial thrombosis. However, the molecular events regulating vascular T cell recruitment and inflammatory activity are largely unknown.rnThe current thesis examined T cell recruitment and activation in response to hypertension and deep vein thrombosis (DVT) in two unrelated mouse models. Both hypertension and venous thrombosis selectively recruit CD4+ and CD8+ effector-memory T cells (TEM) into inflamed vascular walls. Using Nur77-GFP reporter mice intravenous TEM in thrombotic mice are shown to express activation markers but reveal no evidence of T cell receptor-mediated activation. It is further shown that both hypertension and DVT induce an up-regulation of a similar set of cytokines and chemokines in the vascular walls that triggers IFN-γ-production in a subpopulation of TEM. Together these results demonstrate that T cells contribute to acute vascular inflammation in DVT and hypertension through cytokine-induced cytokine production in the absence of cognate antigen recognition.rn

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Lors d'une lésion vasculaire, les plaquettes adhèrent, s’activent et agrègent pour former un clou hémostatique qui stoppe le saignement. Dans un contexte pathologique, l’agrégation plaquettaire mène à la formation d’un thrombus qui peut obstruer une artère malade et entrainer des pathologies ischémiques graves. Les agents antiplaquettaires actuels, qui ciblent l’activation et l’agrégation des plaquettes, ont une efficacité reconnue, mais ont pour limites, la récurrence d'événements ischémiques et le risque hémorragique. L’objectif central de ma thèse a été d’explorer l’importance des étapes initiales d’adhérence des plaquettes aux protéines sous-endothéliales et du rôle du flux sanguin dans l’agrégation des plaquettes. J’ai pu montrer qu’un anticorps dirigé contre la GPIbβ, RAM.1, réduit la signalisation du complexe GPIb-V-IX et la formation de thrombi sans affecter l'hémostase. J’ai également mis en évidence que la fibronectine cellulaire fibrillaire est une surface thrombogène qui assure l’adhérence, l'activation, l'agrégation et l'activité pro-coagulante des plaquettes. Enfin, mes travaux indiquent que la pulsatilité du flux sanguin possède un rôle inverse sur la croissance des thrombi en conditions physiologique et pathologique. En conclusion, ce travail met en lumière l’importance des étapes initiales d’adhérence des plaquettes et de la pulsatilité du flux sanguin dans l’agrégation plaquettaire.

Following vascular injury, blood platelets adhere, become activated and aggregate to form a hemostatic plug which stops the bleeding. In a pathological context, platelet aggregation can also lead to the formation of an occlusive thrombus, responsible for lifethreatening ischemic events. Current antiplatelet drugs targeting platelet activation and aggregation, have a recognized efficacy, but also present some limitations including the recurrence of ischemic events and the risk of bleeding. The aim of my thesis was to explore the importance of the initial step of platelet adhesion to subendothelial proteins and the role of pulsatile blood flow in platelet aggregation. I provided evidence that RAM.1 an antibody directed against GPIbβ, reduces GPIb signaling and thrombus formation without affecting hemostasis. My work also showed that fibrillar cellular fibronectin is a thrombogenic surface which supports efficient adhesion, activation, aggregation and procoagulant activity of platelets. Finally, I observed that the pulsatility of the blood flow has an inverse role in the growth of thrombi in physiological and pathological settings. In conclusion, this work highlights the importance of initial stages of platelet adhesion and of the blood flow pulsatility in platelet aggregation.

Advisors/Committee Members: Lanza, François (thesis director).

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La thromboélastométrie (TEM) rotative est un examen évaluant les propriétés viscoélastiques du sang dans des conditions de faible cisaillement. La TEM est capable d'apprécier dynamiquement la fonction hémostatique globale d'un patient depuis la formation du caillot à sa lyse. Le profil obtenu par cette technique peut être classé en hypercoagulable, normal ou hypocoagulable. Les études de ce travail révèlent que le sexe et la stérilisation n'affectent pas la valeur des différents paramètres TEM. L'âge est associé à l'apparition de profils hypercoagulables et à une diminution de l'activité fibrinolytique chez le beagle en bonne santé. La présence d'une inflammation évoluant à bas bruit semble impliquée dans ce processus. L'âge devrait être considéré comme un facteur de complications thromboemboliques chez le Chien. Par ailleurs, la TEM semble peu sensible dans le monitorage biologique des effets anticoagulants de l'énoxaparine sodique, une héparine à bas poids moléculaire, chez le beagle en bonne santé. Enfin, la TEM s'avère utile dans la description et la caractérisation des désordres de l'hémostase chez des chiens souffrant de leptospirose. Un profil hypocoagulable est associé à la présence de saignements et les paramètres TEM sont significativement différents entre les chiens avec et sans coagulation intravasculaire disséminée. Certains paramètres et indices TEM ont une valence pronostique à l'admission de ces chiens, un profil hypocoagulable étant associé à une augmentation du taux de mortalité

Rotational thromboelastometry (TEM) can be used to assess the viscoelastic properties of clot formation in whole blood under low shear conditions, which provides information on global hemostatic function from the beginning of clot formation through fibrinolysis. The shape of the TEM profile defines a patient’s hemostatic condition as normal, hypercoagulable, or hypocoagulable. First, the studies of this work emphasize that sex and neutered status does not affect the values of TEM parameters. The second study demonstrated an age-related hypercoagulable profile that was associated with decreased fibrinolysis ability in healthy Beagles. Low-grade inflammation seemed to be involved in this process. The incidence of thromboembolic diseases remains to be established in old dogs, but age should be considered a primary risk factor. Third, TEM is insensitive to detect the biological activities of a particular low molecular weight heparin, sodium enoxaparin, in healthy Beagles. Finally, TEM is useful for the description of hemostatic disorders in dogs with naturally occurring leptospirosis. A hypocoagulable profile is associated with bleeding diatheses and the measured TEM parameters are significantly different between dogs with and without disseminated intravascular coagulation. Some measured TEM parameters and calculated indices are associated with outcomes: a hypocoagulable profile is correlated with a higher mortality rate

Advisors/Committee Members: Bonnet-Garin, Jeanne-Marie (thesis director), Goy-Thollot, Isabelle (thesis director).

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Objectifs: Malgré beaucoup de progrès dans la gestion médico-électrique, certains problèmes demeurent et plusieurs patients souffrant d'insuffisance cardiaque sont encore dans l'impasse. Ainsi, les dispositifs d'assistance ventriculaire gauche (LVAD) ont été développés pour réduire les conséquences de l'insuffisance cardiaque et améliorer la qualité de vie. Malgré les avantages évidents, plusieurs complications : thrombo-embolie, infection dû au câble d'alimentation externe, dépendance aux batteries demeurent. L'ICOMS est un nouveau concept de LVAD mélangeant une pompe entièrement intraventriculaire, synchronisé avec le cœur et relié à une batterie interne. Méthodes et résultats : L'intervalle de fonctionnement prévu est un débit de 0.8 to 6.7 10-5 m3/s à une vitesse de rotation de 733 to 942 rad/s, avec des pressions physiologiques. Le point de fonctionnement choisi pour la conception est un débit de 3.3 10-5 m3/s et 10.6 103 Pa . Dans cette étude, Une simulation numérique est réalisée avec des profils de lames différents pour chaque région de fluide étudié. Les performances telles que l'efficacité, la contrainte de cisaillement sont analysée pour vérifier l'efficacité pour les patients atteints d'insuffisance cardiaque. Afin d'obtenir le meilleur résultat avec le logiciel ANSYS, le modèle k-ε turbulent a été appliquée pour obtenir des caractéristiques d'écoulement entre l'entrée et à la sortie de l'évacuateur du redresseur de la pompe. Les résultats numériques montrent une performance acceptable pour les adultes pour délivrer des pressions physiologiques avec une efficacité hydraulique de 10 à 37% ainsi qu'un niveau acceptable de stress de cisaillement maximale le long de la surface de la partie mobile de la pompe. La deuxième partie de l'étude est une étude expérimentale où un prototype a été testé sur banc d'essai. Les résultats ont montré que la pompe pourrait fonctionner et améliorer le débit cardiaque de 1.7 à 6.7 10-5 m3/s. Les résultats in vitro convergent vers les résultats numériques. Pour les tests in vivo, 6 moutons ont été opérés pour l'implantation du LVAD. L'ICOMS a été implanté dans l'apex du ventricule gauche. Plusieurs paramètres hémodynamiques et échocardiographiques ont été stockés dans des conditions normales ou pathologiques. Conclusion: Nous avons montré que l'ICOMS pourrait présenter un effet potentiel pour réduire les conséquences de l'insuffisance cardiaque. De nouvelles expérimentations sont nécessaires pour confirmer notre résultat et optimiser ce nouveau LVAD

Objectives: Despite much progress in medical-electrical management, some problems remain and several heart failure patients are still in a no option solution. In this way, artificial hearts as Left Ventricular Assist Device (LVAD) have been developed. Despite evident benefits, several complications as thromboembolism, driveline infection, batteries dependency remain. ICOMS is a new LVAD concept mixing a fully intraventricular pump, heat rate-synchronized and connected with intracorporeal batteries. Methods and Results : It is…

Advisors/Committee Members: Naili, Salah (thesis director).

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L’élastine est la protéine de la matrice extracellulaire (MEC) responsable des propriétés de résilience et d'élasticité des tissus élastiques. Durant le vieillissement, les protéines de la MEC vasculaire sont exposées à des réactions délétères qui altèrent leurs propriétés structurales et fonctionnelles. Une des caractéristiques principales des protéines de la MEC est leur longue demi-vie, associée à un renouvellement très lent, comme pour l'élastine. Ainsi, tout dommage survenant sur l'élastine est essentiellement irréparable. La fragmentation des fibres élastiques génère des peptides d’élastine (EDP) bioactifs capables de modifier le comportement des cellules environnantes en se liant au complexe récepteur de l’élastine (CRE), composé de trois sous-unités dont la neuraminidase-1 (Neu-1), sous-unité catalytique du CRE. Cette thèse a consisté en l'étude, chez la souris, du rôle des EDP dans le développement du diabète de type 2 et dans la thrombose, deux pathologies vasculaires liées à l'âge, et s'est également focalisée sur la sous-unité Neu-1 du CRE. Dans un premier temps, nous avons montré que les EDP favorisent le développement d’une insulinorésistance et d’un diabète de type 2. Cet effet implique l'interaction de Neu-1 avec la sous-unité β du récepteur à l'insuline qui diminue son niveau de sialylation altérant ses voies de signalisation. Dans un second temps, nous avons identifié un mécanisme d'action des EDP à deux niveaux (matriciel et plaquettaire) et mis en évidence la présence d'un CRE fonctionnel dans les plaquettes régulant la thrombose. Enfin, nous avons étudié la topologie membranaire de Neu-1 par différentes approches technologiques et identifié un domaine transmembranaire potentiel jouant un rôle important pour sa dimérisation et son activité sialidase. En conclusion, les EDP sont des acteurs clefs du remodelage vasculaire physiopathologique et des pathologies vasculaires associées et de contribuer à faire avancer nos connaissances sur l'organisation de Neu-1 à la membrane plasmique.

Elastin is the extracellular matrix (ECM) protein responsible for resilience and elasticity of tissues such as arteries. During ageing, vascular ECM proteins are subjected to deleterious reactions that alter their structural and functional properties (addition reactions, proteolysis). One of the main features of ECM proteins is their long half-life, associated with a low, or even, inexistent turnover. This is the case for elastin with an estimated half-life at 70 years. Therefore, any damage occurring on elastin will be mostly irreparable. Fragmentation of elastic fibers produces bioactive elastin-derived peptides (EDP) able to modify the behavior of surrounding cells by binding to the elastin receptor complex (ERC). This receptor is composed of three subunits, among which neuraminidase-1 (Neu-1) is the catalytic subunit. The aim of this thesis was to study, in mice, the role of EDP in the development of type 2 diabetes and in thrombosis, two age-related vascular diseases, and to focus on the Neu-1 subunit of the ERC.…

Advisors/Committee Members: Debelle, Laurent (thesis director).

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Le cancer colorectal (CRC) est le plus fréquent des cancers digestifs. Cependant, il est moins grave et moins fréquemment associé à une complication thrombo-embolique que le cancer du pancréas (PC). Les microparticules (MPs) sont de petites vésicules produites par bourgeonnement de la membrane cellulaire. Les MPs sont impliquées dans la croissance tumorale, le développement de métastases et l’activité pro-coagulante associée aux cancers. Les objectifs de ces travaux étaient d’identifier et de caractériser les différentes MPs dans le CRC and le PC, afin de décrire une signature microparticulaire, puis d’évaluer leur implication dans la survenue de complications thrombo-emboliques. Nous avons donc rapporté une signature microparticulaire spécifique dans le CRC et le PC par rapport à des pathologies bénignes colorectales et pancréatiques, ainsi que des sujets sains, que nous avons appelé “microparticulosome”. Le microparticulosome se modifie avec l’évolution de la maladie, pour se rapprocher des formes bénignes voire des sujets sains, en cas de rémission du CRC. De plus,il varie en présence ou non d'une complication thrombo-embolique. Nous avons également rapporté le cas d’un cancer du sein diagnostiqué grâce à des taux élevés de MPs exprimant la fibrine. En conclusion, les MPs pourraient constituer de nouveaux bio-marqueurs pertinents en cancérologie, dans le diagnostic, le pronostic de survie et de survenue d’une complication thrombo-embolique. La connaissance des interactions des MPs avec le microenvironnement tumoral permettra de mettre au point des thérapeutiques adaptées et efficaces dans la croissance tumorale et l’extension métastatique.

Colorectal cancer (CRC) is the most common gastrointestinal cancer. It is less serious and less frequently associated with thrombo-embolic event than pancreatic cancer (PC). Microparticles (MPs) are small vesicles produced and released by exocytic blebbing of the activated and apoptotic cell membrane from most, if not all, types of cells. They are known to be implicated in the tumor growth, the development of metastases and the cancer-associated procoagulant activity. Our objectives were to identify and to characterize the different concentrations of circulating MPs in CRC and PC, in order to describe a MPs hallmark, and to evaluate their implication in the occurrence of a venous thromboembolism. We have thus reported a specific hallmark of MPs in CRC and PC, comparing to benign colorectal and pancreatic diseases and healthy subjects, so-called the “microparticulosome”. We have observed that microparticulosome changed with the evolution of the disease, and tended to the signature observed for benign diseases or healthy subject in case of CRC remission. We also reported variations in the microparticulosome in case of an occurrence of a thrombo-embolic event.In conclusion, MPs may constitute new pertinent biomarkers in cancers, in the diagnosis, the survival prognostic and the prognostic of the occurrence of thrombo-embolic events. Understanding the interactions of MPs with…

Advisors/Committee Members: Dubois, Christophe (thesis director).

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Le syndrome des anticorps antiphospholipides (SAPL) est caractérisé par une atteinte auto-immune systémique à l’origine d’événements cliniques thrombotiques ou obstétricaux en présence d’anticorps antiphospholipides (aPL) persistants sur 2 prélèvements. Ce travail de thèse s’est intéressé à des manifestations cliniques et des tests biologiques dont le but est d’évaluer le risque thrombotique dans ce syndrome. En premier lieu, le risque de valvulopathie associé aux aPL chez les patients lupiques a été étudié. L’existence d’une telle association faisait l’objet d’une controverse non résolue. En ayant recours à une revue systématique de la littérature et à une méta-analyse d’études observationnelles, les fréquences des valvulopathies chez les patients lupiques en fonction de la présence ou non d’aPL ont été comparées. Le résultat principal est, qu’en présence d’aPL chez les patients lupiques, ce risque est multiplié par 3. En second lieu, la valeur pronostique sur le risque de thrombose des thromboses veineuses superficielles (TVS) a été étudiée chez les patients atteints d’un SAPL. Une étude de cohorte prospective monocentrique a montré que la présence d’un antécédent de TVS était prédictive du risque de thrombose ultérieure. D’autre part, l’apport de nouveaux marqueurs biologiques, les anticorps spécifiquement dirigés contre le domaine I de la [bêta]2-Glycoprotéine I ainsi que les paramètres de thrombinographie prenant en compte la sensibilité à la protéine C activée ont été étudiés. Les résultats montrent que ces 2 tests sont prédictifs du risque thrombotique incident. Enfin, les données de qualité de vie d’une cohorte multicentrique de patients atteints de lupus et/ou porteurs d’aPL, ont été analysées. Les résultats montrent que la présence d’un antécédent de thrombose artérielle était associée à une altération de toutes les dimensions de la qualité de vie évaluée par un auto-questionnaire généraliste (MOS-SF36) en comparaison à des patients atteints de maladie auto-immune sans ce type de thrombose. Ces résultats pourront avoir un impact significatif dans la réflexion sur l’évolution des critères de classification de ce syndrome

Antiphospholipid syndrome (APS) is characterized by an auto-immune disorder with thrombotic and obstetrical morbidity in the presence of persistant antiphospholipid antibodies (aPL). This work studied clinical manifestations and laboratory assays for the determination of thrombotic risk in APS patients. Firstly, the risk of heart valve disease associated with aPL in systemic lupus erythematosus (SLE) patients was studied. Since 20 years, data regarding this association yielded conflicting results. A systematic review and a meta-analysis were performed to compare frequencies of heart valve disease in SLE patients with and without aPL. Main result concluded that the presence of aPL in SLE patients is associated with a 3-fold increased risk for heart valve disease in comparison with SLE patients without these antibodies. Secondly, prognostic significance of superficial vein thrombosis (SVT)…

Advisors/Committee Members: Wahl, Denis (thesis director), Rat, Anne-Christine (thesis director).

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Platelet activation requires sweeping morphological changes, supported by contraction and remodelling of platelet actin cytoskeleton. In epithelial and endothelial cells, AMP-activated protein kinase (AMPK) controls actin cytoskeleton organization through the phosphorylation of cytoskeletal targets, namely myosin regulatory light chains (MLC), cofilin and the vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP), extending the role of AMPK beyond metabolism. In this thesis, we hypothesized that AMPK was activated in thrombin-stimulated platelets and played a role in platelet secretion, aggregation and clot retraction, by regulating polymerization and/or organization of actin cytoskeleton through the phosphorylation of MLC, cofilin and VASP. We show that human platelets expressed exclusively the AMPKα1 isoform. In human purified platelets, thrombin led to a transient activation of AMPKα1 and to phosphorylation of its substrate acetyl coA carboxylase (ACC). Platelets isolated from mice lacking AMPKα1 exhibited reduced aggregation and secretion in response to thrombin, associated with a defect in ACC, MLC, cofilin and VASP phosphorylation. These changes were associated with an abrogation of thrombin-dependent F-actin formation. Moreover, the percentage of platelets able to form lamellipodia after immobilization on fibrinogen-coated coverslips and stimulation by thrombin, was significantly reduced in the absence of AMPKα1, indicating an altered cytoskeleton reorganization during spreading. More importantly, clot retraction was slower and less effective in KO platelets. Conclusion: AMPKα1 plays a critical role in platelet function in response to thrombin through the phosphorylation of cytoskeletal targets and the subsequent regulation of cytoskeleton organization -dependent processes. This conclusion is supported by clinical data showing that AMPK is also activated in vivo, in platelets of patients undergoing cardiac surgery and therefore submitted to a thrombotic process designed to counter bleeding.

(BIFA - Sciences biomédicales et pharmaceutiques)  – UCL, 2014

Advisors/Committee Members: UCL - SSS/IREC/CARD - Pôle de recherche cardiovasculaire, UCL - Faculté de pharmacie et des sciences biomédicales, Horman, Sandrine, Beauloye, Christophe, Decottignies, Anabelle, Constantinescu, Stefan, Hermans, Cédric, Rider, Mark, Vanoverschelde, Jean-Louis, Oury, Cécile, Bachelot-loza, Christilla.

▼ Depuis déjà quelques années au Canada, l’arrivée progressive de nouveaux anticoagulants oraux (NACO) propose des options dans le traitement de la thromboembolie veineuse (TEV). Le rivaroxaban, le premier NACO approuvé pour cette indication, possède des caractéristiques différentes des antagonistes de la vitamine K (AVK), les seuls agents anticoagulants oraux disponibles jusqu’à ce jour. Dans la littérature scientifique actuelle, peu de données sont disponibles sur le rivaroxaban et aucune étude n’a été identifiée concernant l’usage de ce médicament en contexte réel de soins de santé. Or, les objectifs de cette étude étaient de décrire le portrait de l’usage des anticoagulants pour le traitement initial et subséquent de la TEV au CHUS depuis l’introduction du rivaroxaban au formulaire thérapeutique de cet établissement et dans un deuxième temps, à identifier les facteurs associés au choix de l’anticoagulant oral prescrit pour le traitement subséquent de la TEV. Pour ce faire, une étude transversale a été réalisée. Les patients qui ont visité l’urgence ou qui ont été hospitalisés au CHUS entre le 18 février 2013 et le 18 septembre 2013 pour une thrombose veineuse profonde (TVP) et/ou une embolie pulmonaire (EP) ont été inclus. Les patients devaient toutefois nouvellement débuter un traitement anticoagulant durant le séjour, et ce dernier devait être poursuivi au congé de l’hôpital. Les anticoagulants prescrits pour le traitement initial et subséquent de la TEV ont été décrits. Les facteurs potentiels du choix ont d’abord été évalués à l’aide d’analyses bivariées et par la suite, une régression logistique multiple utilisant une méthode ascendante a été utilisée afin d’identifier les facteurs indépendamment associés au choix du rivaroxaban plutôt que de la warfarine (seul AVK disponible au CHUS). Ainsi, sur une période de 7 mois, 256 patients ont été inclus dans l’étude. Le traitement initial et le traitement subséquent les plus prescrits correspondaient respectivement, à l’héparine de bas poids moléculaire (HBPM; 61,7 %) et à la warfarine (54,7 %). Le rivaroxaban était peu utilisé en phase initiale de traitement (1,6 %) alors qu’il a été prescrit chez près de 20 % des individus au congé de l’hôpital pour le traitement subséquent de la TEV. Les facteurs indépendamment associés à la prescription de rivaroxaban plutôt que de warfarine étaient l’âge ˂ 65 ans (Rapport de cotes [RC] ajusté 2,86; Intervalle de confiance [IC] à 95 % 1,29–6,37), un diagnostic de TVP seule plutôt qu’une EP (RC ajusté 2,54; IC à 95 % 1,20–5,40) et une visite à l’urgence sans hospitalisation (RC ajusté 2,24; IC à 95 % 1,06–4,71). En conclusion, parmi les nouveaux utilisateurs d’anticoagulants pour le traitement de la TEV au CHUS, la thérapie conventionnelle (HBPM suivie d’un AVK) était la plus prescrite par les médecins malgré l’arrivée d’une nouvelle option pharmacologique de traitement. De plus, les jeunes patients, les individus qui avaient une TVP sans EP et ceux qui n’étaient pas hospitalisés étaient plus susceptibles de recevoir le… Advisors/Committee Members: Beauchesne, Marie-France (advisor), Vanasse, Alain (advisor).

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Les microARNs (miARNs) sont les membres d’une classe de petits ARNs non codants d’environ 22 nucléotides, dont le mécanisme principal est de réguler l’expression des gènes dans le cytoplasme. Leurs importance est telle qu’il est estimé que la majorité des gènes humains sont régulés par ces petits ARNs, et ils sont ainsi potentiellement impliqués dans le développement de nombreuse pathologies. La séquence des miARNs peut-être soumise à des variations post- transcriptionnelles et des variations génétiques générant alors des séquences isoformes appelées isomiRs. Afin de détécter et quantifier précisemment l’expression des miARNs à partir de données de séquençage, cette hétérogénéité intra-miARN, due aux isomiRs, doit être prise en compte, tout comme l’homogénéité inter-miARN due aux miARNs paralogues. Le pipeline optimiR, développé dans le cadre de cette thèse, permet de surmonter ces challenges grâce notamment à l’intégration de l’information génétique des échantillons analysés, ainsi qu’à une stratégie d’alignement originale, qui permettent de détecter les isomiRs tout en distinguant les miARNs paralogues. Les données analysées lors de cette thèse proviennent de la cohorte MARTHA, composée de patients ayant développé une thrombose veineuse (VTE), parfois avec récidive. L’expression normalisée de 162 miARNs obtenue pour 344 patients a ensuite été utilisée afin d’analyser: 1) les déterminants génétiques de l’expression de ces miARNs; 2) l’association des miARNs avec le risque de récidive pour la VTE; 3) les corrélations avec certains paramètres biologiques de l’hémostase. Collectivement, ces analyses m’ont permis d’identifier des microARNs d’intérêt pour la recherche sur la thrombose veineuse et sur l’hémostase.

MicroRNAs (miRNA) are small non coding RNAs with an average size of 22 nucleotides, mainly known to regulate gene expression in the cytoplasm. These small RNAs are estimated to regulate the majority of human genes, and are potentially involved in several diseases. MiRNA sequences might contain genetic variants and can undergo post-transcriptional variations, which generate miRNA isoforms called isomiRs. In order to accurately detect and quantify miRNA expression, isomiRs as well as paralogous miRNAs must be accounted for. The optimiR pipeline developed during this project overcome these challenges by integrating genetic information and by implementing an original strategy based on local alignement. Sequencing data were obtained from the MARTHA cohort, which is composed of french unrelated patients who experienced venous thrombosis (VTE). Normalized expression of 162 miRNAs from 334 patients were used to analyze: 1) the genetic determinants of miRNA expression; 2) the association of miRNA expression levels with VTE recurence; 3) the correlations between miRNA expression levels and hemostatic traits. As a whole, these analyses allowed me to identify miRNAs of interest for the study of VTE and hemostasis.

Advisors/Committee Members: Tregouet, David-Alexandre (thesis director).

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La thrombose est souvent liée à la survenue d’une rupture de la plaque d’athérosclérose qui expose le tissu sous endothélial thrombogène aux plaquettes sanguines circulantes. L’un des problèmes actuels est l’identification des mécanismes qui sont à l’origine de la fracture. Nous avons testé l’hypothèse que la vasoconstriction, induite par le LTC4 ou le thromboxane A2 (TXA2), joue un rôle dans la rupture de plaques d’athérosclérose et dans la formation de l’athérothrombose. Dans ce travail nous avons adapté la technique classique de la microscopie électronique pour observer les ruptures survenues sur une plaque d’athérosclérose. Avec cette méthode, nous avons montré qu’une vasoconstriction peut engendrer des ruptures de plaques, mais seulement lorsque ces plaques sont fragilisées (dites ‘vulnérables’) soit par un régime riche en graisse ou après exposition de la souris à un lipopolysaccharide extrait de membranes bactériennes. Nous avons montré aussi que la plaque produit du TXA2, et que l’absence de son récepteur chez les souris apoE-/- déficientes en TP prévient la rupture des plaques vulnérabilisées. La vasoconstriction constitue donc un élément déterminant dans la rupture des plaques vulnérables. Les résultats de ce travail identifient le TXA2 comme étant une éventuelle cible thérapeutique pour prévenir les ruptures des plaques. D’autre part, les analyses par microscopie électronique à balayage de la thrombose in vivo, et les analyses en microscopie électronique en transmission (MET) de l’ultrastructure des plaquettes agrégées in vitro, ont montré que les plaquettes activées fusionnent entre elle permettant ainsi la cicatrisation de l’endothélium lésé.

Rupture of atherosclerotic plaques exposes sub-endothelial thrombogenic material to circulating platelets, frequently leads to thrombus formation. At present, the mechanisms behind plaque ruptures are not well understood. We studied the hypothesis that vasoconstriction induced by LTC4 or thromboxane A2 (TXA2) plays an important role in plaque rupture and formation of atherothombosis. We used scanning electron microscopy to study rupture of the plaque in detail. We were able to show that vasoconstriction leads to plaque rupture, but only after plaques have been vulnerabilized by high fat diet, or by exposure of mice to lipopolysaccharide extracted from bacterial membranes. We could also show that plaques produce TXA2. As consequence the absence of TP, a receptor for TXA2 in apoE-/- mice prevented rupture of vulnerable plaques. Vasoconstriction is hence a determining factor in the rupture of vulnerable plaques. Our work has identified TXA2 as a potential therapeutic target in preventing plaque rupture. Moreover, analysis of the thrombosis in vivo by scanning electron microscopy, and the in vitro study of the ultra structure of aggregated platelets by transmission electron microscopy, showed that activated platelets fuse together to heal the injured endothelium.

Advisors/Committee Members: Fabre, Jean-Etienne (thesis director).

▼ La maladie thromboembolique veineuse (MTEV) est une complication fréquente des interventions chirurgicales. Le risque de développement d'une phlébite chez un patient ayant subi une chirurgie est calculé à partir de facteurs prédisposants du patient, ainsi que du type de chirurgie. Plusieurs méthodes préventives ont été démontrées efficaces pour réduire le risque de développement d'une phlébite. Des recommandations de l' American College of Chest Physicians (ACCP) concernant les traitements antithrombotiques appropriés ont été publiées en septembre 2004. Malgré la disponibilité de traitements préventifs efficaces et la publication de lignes directrices, les cas de MTEV évitables sont bien trop fréquents. Objectifs. Les objectifs principaux étaient (1) d'évaluer l'adhérence intrahospitalière des médecins du CHUS aux recommandations de l'ACCP concernant les traitements antithrombotiques en périopératoire, et (2) de connaître les caractéristiques (des patients et de la chirurgie) influençant l'adéquation des modalités de traitement. L'objectif secondaire de l'étude fut de confirmer l'impact de l'adhérence aux recommandations sur le taux d'événements thromboemboliques cliniques. Méthodes. Nous avons révisé les données hospitalières informatisées de tous les patients admis pour une chirurgie (pour laquelle l'ACCP recommande un traitement thromboprophylactique) pendant l'année 2006 afin d'estimer la fréquence de (1) thromboprophylaxie présente et (2) thromboprophylaxie adéquate. Des modèles de régression logistique ont permis d'identifier les facteurs associés à ces 2 variables. Ensuite, nous avons suivi ces mêmes patients, par le biais d'une étude de cohorte prospective, pour une période de 3 mois suivant la date de leur chirurgie, pour établir s'il y a eut développement ou non d'une MTEV. Résultats. Des 2286 admissions inclues dans notre cohorte, 1852 (81%) patients ont reçu un traitement prophylactique, et 582 (26,5%) ont reçu un traitement conforme aux recommandations de l'ACCP. Les variables liées à l'absence de traitement prophylactique étaient le sexe, l'âge et le niveau de risque de développement de MTEV du patient, un diagnostic de varices, une grossesse dans les 3 mois précédent la date de chirurgie, le type de chirurgie et la durée de séjour à l'hôpital. Les variables liées à l'adéquation du traitement prophylactique étaient l'âge, un diagnostic de cancer dans les 3 mois précédent la date de chirurgie, une insuffisance cardiaque, une affection abdominale inflammatoire ainsi que le type de chirurgie. Seize patients (0,7%) ont développé une MTEV dans les 3 mois suivant leur chirurgie. Parmi ces patients, 2 n'avaient reçu aucun traitement, 11 ont reçu un traitement inadéquat et 2 ont reçu un traitement conforme aux recommandations. Le risque relatif de développer une phlébite lorsqu'un patient reçoit un traitement inadéquat ou absent est de 1,49 (intervalle de confiance à 95% = 0,42 à 5,23). Conclusion Par le biais de cette étude, nous démontrons que le taux de prescription adéquate de traitement… Advisors/Committee Members: Pilon, Danielle (advisor), Dubois, Marie-France (advisor), Tagalakis, Vicky (advisor).