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A dermatofitose é micose superficial desencadeada, principalmente, pelo Microsporum canis e de ocorrência comum nos felinos da raça Persa. Objetivou-se no presente estudo avaliar e comparar a melhora clínica e negativação micológica nos animais tratados com a terbinafina em pulsoterapia em relação a terapia contínua; evidenciar o acúmulo de terbinafina no pelame e o tempo em que o fármaco permanece em doses terapêuticas após a suspensão de sua administração; correlacionar a melhora clínica com a quantificação do fármaco no pelame; comparar a ocorrência de efeitos colaterais em pulsoterapia em relação a terapia contínua.. Foram incluídos nesse estudo, 27 gatos da raça Persa, 17 portadores assintomáticos e 10 sintomáticos do M. canis, o Grupo I foi composto por 13 fêmeas tratadas em pulsoterapia. Durante os primeiros sete dias a terbinafina foi administrada na dose de 20 mg/kg a cada 24 horas por via oral, seguidos por um período de suspensão da medicação pelos 21 dias subseqüentes, posteriormente foi realizado um segundo ciclo de sete dias, na dose de 40 mg/kg a cada 24 horas, novamente seguidos por um período de suspensão do fármaco nos 21 dias posteriores. O Grupo 11 foi constituído por 14 machos, que receberam terapia contínua, durante 56 dias. Nos primeiros 28 dias foi administrada a dose de 20 mg/kg a cada 24 horas por via oral e nos 28 dias subseqüentes a dose foi aumentada para 40 mg/kg diários. Os animais foram submetidos à duas colheitas de pelame pela Técnica do carpete com intervalo de 15 dias, anteriormente e posteriormente à terapia. Também eram realizadas colheitas de pelame nos dias zero, sete, 28, 35 e 56 dias para realização da quantificação das concentrações de terbinafina no pelame dos animais tratados, pela cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Quinzenalmente, colhia-se sangue para realização de função hepática. Houve cura clínica e micológica em 100% dos animais tratados, as concentrações de terbinafina no pelame dos gatos se mantiveram acima daquelas consideradas terapêuticas por 21 dias após a pulsoterapia de sete dias, tanto na dose de 20, quanto na dose de 40 mg/kg diários, mas ocorreu maior acúmulo do fármaco na dose mais alta em terapia contínua, todavia esses animais apresentaram episódios eméticos na primeira semana de terapia, além de aumento da atividade sérica das transferases e da fosfatase alcalina. Já no grupo da pulsoterapia, não houve aumento da atividade sérica das enzimas hepáticas. A terbinafina foi eficaz e segura no tratamento de portadores sintomáticos e assintomáticos de M. canis.

Dermatophytosis is a superficial mycosis caused mainly by Microsporum canis and is very common in Persian cats. The goals of this study were: to evaluate the clinical and mycological cure in the animais treated with terbinafine in pulse therapy compared with continuous therapy; the accumulation of terbinafine in cats hair and the time that it is maintained in therapeutical concentrations after its suspension; correlates the clinical cure with…

Advisors/Committee Members: Larsson, Carlos Eduardo.

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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

A otite externa é uma das doenças mais frequentes nos cães, afetando 10 a 20% dos animais. Os microrganismos mais frequentemente isolados são Malassezia pachydermatis e Staphylococcus pseudintermedius, agentes comensais que em presença de condições propícias podem iniciar sobrecrescimento. A deteção de Malassezia spp. e de Staphylococcus spp. por citologia é prática comum na clínica para diagnóstico e avaliação de resposta ao tratamento de otites externas. Este estudo teve como objetivo determinar a eficácia de um composto à base de florfenicol, betametasona e terbinafina no tratamento de otite externa diagnosticada por citologia em 48 aplicações em cães do Hospital Veterinário Sul do Tejo. A natureza da infeção correspondia a 71% infeções por Malassezia spp., 19% infeções mistas e 10% infeções bacterianas. Este composto medicamentoso revelou ser eficaz em 81% das aplicações, sendo que as restantes ocorreram em animais com dermatite atópica e cujo episódio de otite era recorrente. Tanto a dermatite atópica como o facto de ser recorrente demonstraram ter uma relação significativa com o insucesso terapêutico (p < 0,001 e p = 0,043, respetivamente). Esta combinação farmacológica demonstrou potencial interesse, uma vez que se revelou eficaz na maioria dos casos e, aliado à grande vantagem da sua posologia, deverá ser considerada na escolha terapêutica da otite externa. Palavras-

ABSTRACT - Otitis externa is one of the most common diseases in dogs, affecting 10 to 20% of animals. The most commonly isolated microorganisms are Malassezia pachydermatis and Staphylococcus pseudintermedius, which are commensal, although the presence of certain conditions can lead to their overgrowth and pathogenic change. Cytological identification of Malassezia spp. and Staphylococcus spp. is a common clinical approach for the diagnosis and assessment in the treatment of external otitis. The present study aims to determine the efficacy of a medicine containing florfenicol, betamethasone and terbinafine in the treatment of external otitis diagnosed by cytology in 48 applications in dogs examined in Hospital Veterinário Sul do Tejo. The nature of the infections was 71% Malassezia spp., 19% mixed infection and 10% bacterial infection. This topical treatment was effective in 81% of all applications. Failure occurred in dogs with atopy and recurrent otitis. Both atopy and recurrence were demonstrated to have a significant relation with lack of success (p < 0,001 e p = 0,43, respectively). This pharmacological combination has demonstrated potential interest for its efficiency in most cases allied to the great advantage of dosage. Therefore, it should be considered for treatment of otitis externa.

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Advisors/Committee Members: Azevedo, Verónica Lúcia Nobre, Mestrinho, Lisa Alexandra Pereira.

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A amplificação gênica pode ser compreendida como um mecanismo de regulação de expressão protéica em Leishmania. A exposição a concentrações não letais de diferentes drogas isoladamente, como o metotrexato, a primaquina, cloroquina e antimônio levam à amplificação de regiões específicas como as localizadas no cromossomo 6 e no cromossomo 23. Essas linhagens tornam-se resistentes a estas drogas e eventualmente apresentam resistência cruzada a outras. A terbinafina é uma substância sintética utilizada como antifúngico que age pela inibição da esqualeno epoxidase impedindo a síntese de ergosterol, componente da membrana celular de Leishmania. A exposição do parasita à terbinafina leva à amplificação da região H. A fragmentação da região H permitiu delimitar a resistência a 2,8 kb; fragmento T1. Por mutagênese insercional o gene de resistência à terbinafina foi definido e nomeado HTBF. A proteína codificada pelo HTBF possui uma extremidade N-terminal hidrofílica e C-terminal hidrofóbica com quatro alfa-hélices sendo, supostamente, uma proteína integral de membrana. Possui semelhança com a proteína Yip de Saccharomyces cerevisiae, que participa do transporte vesicular do retículo endoplasmático para o complexo de Golgi. O gene HTBF foi detectado em linhagem sensível de L. major e de outras espécies de Leishmania e seu transcrito em linhagens sensíveis e resistentes de L. major. Levantou-se a hipótese de se tratar de locus de resistência a múltiplas drogas já que as regiões amplificadas, mesmo que induzidas por uma determinada droga, podem levar a resistência a outras. A co-transfecção do gene de resistência ao antimonial MRPA no transfectante portador do HTBF levou à diminuição em até cinco vezes da capacidade de resistência ao antimônio. Apesar dos genes de resistência amplificarem juntos na região H, foi constatado que possuem ação contrária. Sendo que a terbinafina interfere na integridade da membrana celular, levantou-se hipótese na qual a resistência envolveria o mecanismo de reparo de membrana. A perda do fenótipo de resistência pela falta de cálcio sugerindo a inativação desse mecanismo é um fenômeno previsto corroborando a hipótese.

Gene amplification can be recognized as a protein regulation mechanism in Leishmania. Exposure to non-lethal concentrations of different drugs in isolated manner, such as, methotrexate, primaquine, chloroquine and antimony drives the amplification of specific regions. Examples for amplified regions are contained in chromosomes six and 23. The strains become resistant to these drugs and eventu-ally to other drugs as well. Terbinafine is a synthetic substance used as an antifungal agent. Its mechanism of action is by squalene epoxidase inhibition, blocking ergosterol synthesis, a cell membrane component in Leishmania. Parasite exposure to terbinafine elicits H region amplification. H region fragmentation allowed resistance delimitation to 2.8kb, T1 fragment. By insertional mutagenesis terbinafine resistance gene was defined and termed HTBF. HTBF coded protein has a hydrophilic…

Advisors/Committee Members: Tosi, Luiz Ricardo Orsini.

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Pitiose é uma doença granulomatosa de humanos e animais que ocorre principamente em áreas tropicais e subtropicais de todo o mundo. Ela é causada por um microrganismo aquático semelhante aos fungos chamado Pythium insidiosum. O tratamento para pitiose é incerto, com um prognóstico desfavorável tanto para humanos como para os animais. Com isso, novas possibilidades para tratamentos devem ser examinados. Desta forma, avaliou-se a atividade in vitro da terbinafina (0,25 a 32 mg/L) sozinha e em combinação com caspofungina (0,5 a 128 mg/L), miconazol (0,25 a 32 mg/L), fluconazol (0,125 a 64 mg/L), cetoconazol (0,125 a 64 mg/L), anfotericina B (0,25 a 16 mg/L), fluvastatina (0,125 a 64 mg/L), rifampicina (0,25 a 64 mg/L), metronidazol (0,25 a 128 mg/L) e ibuprofeno (8 a 2.048) frente a 17 isolados clínicos de P. insidiosum. As atividades antifúngicas foram avaliadas por microdiluição em caldo, baseado no protocolo M38-A para fungos filamentosos, adaptado para P. insidiosum, e pela técnica de checkerboard. Sinergismos foram observados nas combinações de terbinafina mais caspofungina (41,18%), fluconazol (41,18%), anfotericina B (41,18%), cetoconazol (29,41%) e miconazol (11,76%). As combinações de terbinafina mais rifampicina e terbinafina mais metronidazol foram indiferentes para 94,12% das cepas. Terbinafina mais ibuprofeno foi indiferente para 82,35% dos isolados. Antagonismos foram observados nas combinações de terbinafina mais fluvastatina (35,30%) ou rifampicina (5,88%). As combinações de terbinafina mais caspofungina, terbinafina mais fluconazol e terbinafina mais anfotericina B podem ter significante potencial terapêutico para o tratamento da pitiose.

Pythiosis is a granulomatous disease of human and animals that occurs primarily in tropical and subtropical areas of the world. It is caused by an aquatic, fungus-like organism called Pythium insidiosum. The treatment for pythiosis is uncertain, with an unfavorable prognosis for human and animals. Therefore, new possibilities for treatments must be examined. We have evaluated the in vitro activities of terbinafine (0.25 to 32 mg/L) alone and in combination with caspofungin (0.5 to 128 mg/L), miconazole (0.25 to 32 mg/L), fluconazole(0.125 to 64 mg/L), ketoconazole (0.125 to 64 mg/L), amphotericin B (0.25 to 16 mg/L), fluvastatin (0.125 to 64 mg/L), rifampicin (0.25 to 64 mg/L), metronidazole (0.25 to 128 mg/L) and ibuprofen (8 to 2,048) against 17 clinical isolates of P. insidiosum. Antifungal activities were assayed by broth microdilution, based on protocol M38-A for filamentous fungi, adapted to P. insidiosum, as well as the checkerboard method. Synergisms were observed in combinations of terbinafine plus caspofungin (41.18%), fluconazole (41.18%), amphotericin B (41.18%), ketoconazole (29.41%) and miconazole (11.76%). The combinations of terbinafine plus rifampicin and terbinafine plus metronidazole were indifferent for 94.12% of strains. Terbinafine plus ibuprofen was indifferent for 82.35% of strains. Antagonisms were observed in combinations of terbinafine…

Advisors/Committee Members: Sonia Teresinha dos Anjos Lopes, Janio Morais Santurio, Daniela Isabel Brayer Pereira.

▼ This study has been to assess interest in ambulatory patients with onychomycosis of the foot seen at the Dermatology Outpatient Hospital Central Militar, the security aspect in the liver of antifungals (fluconazole and terbinafine orally). To do this, we performed the monitoring and assessment of hepatic biochemical profile of patients. The research design was descriptive, longitudinal and prospective. Was selected from a population of 143 patients, 24 of which 11 patients showed abnormal liver profile, final inspection, during treatment with fluconazole or terbinafine, a grade hepatotoxicity detected in three patients: two of them taking fluconazole and a terbinafine, and the remaining patients showed no hepatotoxicity. The prevalence of hepatotoxicity was 12.5% level a total of 24 patients, and abnormal liver profile, 45.8% of the total. The statistical analysis, they found no significant difference (p> 0,05) between treatment with fluconazole or oral terbinafine, age, gender, baseline results glutamic oxaloacetic transaminase and glutamic pyruvic transaminase, cholesterol, triglycerides and liver profile monitoring results end of patients during antifungal therapy. The 11 patients with abnormal liver profile, final inspection, had risk factors for hepatotoxicity as harmful habit (alcohol intake), diseases of background, the baseline or control (disorder of lipoprotein metabolism and other lipidemias, hepatomegaly, biliary disease, diabetes mellitus, hepatic steatosis, suspicion of hepatic steatosis or of nonalcoholic steatohepatitis with two or three risk factors); physiological condition to uptake (elderly, overweight or obese), and taking concomitant medications. In conclusion, the greatest influence on the abnormal liver profile final check would have been the suspicion of hepatic steatosis or of nonalcoholic steatohepatitis with two risk factors (four cases), followed by concomitant atorvastatin (two cases). Of the 11 patients with abnormal liver profile, seven took fluconazole, was suspected that this was conditional causality for three of the seven, and for the remaining four patients treated with terbinafine, it was possible causality for two of the four, as predominant, by application of Decision Algorithm for the Evaluation of Causality of ADR. Included in the cases cited, were the three cases of hepatotoxicity, and by applying the algorithm mentioned, it was found that fluconazole causality unlikely to have had a case and for the other conditional, in the case of terbinafine, causality was possible. Keywords: transaminase, gamma-glutamyltransferase, bilirubin, antifungal agents, onychomycosis, hepatotoxicity. Advisors/Committee Members: Delgado Pérez, Gladys Martha (advisor).

▼ O fenômeno de amplificação gênica é um mecanismo de auto-preservação celular observado com freqüência no protozoário parasita Leishmania quando submetido a estímulos negativos como, por exemplo, a presença de drogas. A região H do genoma de Leishmania (Leishmania) major é um dos loci mais estudados que leva à amplificação em resposta a drogas não relacionadas, como a terbinafina. Foram isoladas linhagens de L. (L.) major e Leishmania (Viannia) braziliensis resistentes à terbinafina. Análises por corridas curtas de eletroforese em campo pulsado (PFGE) e Southern blotting revelaram que a resistência observada nestas linhagens não foi gerada pela amplificação do locus H. Sendo assim, a resistência ao inibidor da esqualeno epoxidase está sendo gerada por um outro mecanismo uma vez que outros loci podem estar envolvidos na resistência à terbinafina e através da análise diferencial do perfil de proteínas, os mutantes resistentes apresentaram diferenças na expressão de proteínas. O alvo inicial para a elucidação da resistência à terbinafina nas linhagens selecionadas foi a via de biossíntese de ergosterol. Foram escolhidos os genes da 3-cetoacil-CoA tiolase (ERG10), esqualeno sintase (ERG9 ou SQS1), esqualeno epoxidase (ERG1), oxidoesqualeno-lanosterol ciclase (ERG7) e lanosterol 14-demetilase (ERG11), de L. major e L. braziliensis, além do gene YIP1 de L. braziliensis. Para isso foram sintetizados oligonucleotídeos a partir das seqüências geradas pelo projeto genoma destas espécies depositadas em bancos de dados. Os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 de L. major e de L. braziliensis além do YIP1 de L. braziliensis amplificados por PCR foram clonados no vetor pGEM-T Easy, que possibilitou a construção de reagentes para ruptura de todos genes pela inserção da marca HYG e, com exceção do gene ERG7 de L. braziliensis, os genes foram subclonados no vetor pXG1. Fragmentos de restrição dos genes clonados no vetor pGEM-T Easy foram utilizados para analisar o nível de seus transcritos por northern blot. Também verificamos através de corridas curtas de PFGE e análises de Southern, que as linhagens em estudo não apresentam amplificação dos loci em estudo. A participação de genes da via de biossíntese de ergosterol de L. major e L. braziliensis e do gene YIP1 de L. braziliensis na resistência ou susceptibilidade à terbinafina e/ou anfotericina B foi verificada através de experimentos funcionais. Com esse objetivo, os genes YIP1, ERG10 e ERG1 de L. braziliensis foram transfectados na linhagem LB2904 de L. braziliensis, e os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 e a ruptura do gene ERG1 pelo cassete HYG de L. major foram transfectados na linhagem LT252 de L. major. Foram realizados experimentos para analisar a susceptibilidade à anfotericina B associada ou não à terbinafina, das linhagens selvagens de L. major e L. braziliensis, e a partir destes experimentos iniciais, foram selecionadas linhagens destas duas espécies resistentes à anfotericina B. Para analisar a possível função regulatória dos elementos RIME 5/2/6 de L.… Advisors/Committee Members: Tosi, Luiz Ricardo Orsini.

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As dermatofitoses dos carnívoros domésticos são infecções fúngicas superficiais, causadas habitualmente por dois gêneros fúngicos: Microsporum sp e Trichophyton sp. Trata-se de uma antropozoonose, com importância na saúde pública Objetivou-se: caracterizar a população de cães e gatos acometidos por dermatofitose atendidos no Serviço de Dermatologia do HOVET /USP num período de 27 meses; determinar a valia do exame histopatológico como metodologia diagnóstica; e comparar a eficácia da griseofulvina e da terbinafina na terapia das dermatofitoses. Foram atendidos 76 animais com diagnóstico de dermatofitose, 47,3% pertenciam à espécie fetina e 52,7% à canina O agente etiológico isolado com maior freqüência em caninos e felinos foi Microsporum canis. Não se observou distribuição sazonal. Os cães de raça definida foram os mais acometidos (75,0%), dentre estes, aqueles da raça Yorkshire Temer (23,3%). Os felinos com e sem definição racial igualmente acometidos, porém os Persas (93,7%) foram os mais acometidos dentre aqueles com plena definição. Observou-se que a maioria dos animais infectados apresentava menos de um ano de idade (65,8%). As lesões mais observadas foram: alopecia, eritema, escamas e crostas. A maioria das lesões apresentava configuração circular e estavam localizadas nas regiões cefálicas, de tronco e de membros. O prurido esteve ausente em 50,0% dos caninos e em 88,8% dos felinos. As lesões dos cães tinham caráter mais inflamatório. O exame histopatológico mostrou-se pouco sensível (28,6%) e com alto número de falsos negativos (71,4%). A griseofulvina (5Omg/kg/dia) foi eficaz em l00,0% dos casos, sem acarretar efeitos colaterais, com média de tempo para cura de 41 dias. Já a terbinafina na dose de cinco mg/kg/dia, apresentou eficácia de 81,8%, sem induzir efeitos colaterais e com êxito terapêutico em 21 dias. Demonstrou-se assim, que a dose de 20 mg/kg/dia demonstrou a mesma eficácia que a dose de cinco, porém, com efeitos colaterais em 16,6% dos animais tratados, com tempo médio para cura de 33 dias. Demonstrou-se que a terbinafina é uma boa alternativa terapêutica, porém, a griseofulvina ainda se constitui na droga de eleição para o tratamento das dermatofitoses de caninos e felinos.

Dermatophytosis in domestic carnivorous are superficial infections caused mainly by two genus of fungus: Microsporum sp and Trichophyton sp. This disease is an anthropozoonosis important for public health. The goals of this study were: characterize the population of cats and dogs with dermatophytosis treated in the Dermatology Service of HOVET FMVZ/USP in a period of 27 months; evaluate the validity of the histopathological exam as a methodology of diagnosis; and compare the efficacy of griseofulvin and terbinafine in the therapy of the dermatophytosis. Seventy six animals (47,3% were felines and 52,7% were canines) were evaluated in this study. The more frequent isolated etiological agent in canines and felines was Microsporum canis. Seasonality was not observed. The dogs with a defined breed were more predisposed…

Advisors/Committee Members: Larsson, Carlos Eduardo.