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As estrongiloidíases são parasitoses intestinais causadas por várias espécies do gênero Strongyloides e apresentam distribuição cosmopolita. O objetivo deste estudo foi investigar a interferência do tratamento diário com dexametasona no ciclo pulmonar durante a infecção por Strongyloides venezuelensis em ratos. Investigamos o efeito do tratamento com glicocorticóides na migração de eosinófilos, mastócitos e macrófagos no parênquima pulmonar. Demonstramos ainda, como os efeitos do tratamento diário com a dexametasona atuam na formação do granulomas. Três principais aspectos foram encontrados: 1) Aumento da inflamação hemorrágica, provocado pela passagem das larvas para o espaço alveolar; 2) Significante redução da migração de eosinófilos e mastócitos no eixo axial pulmonar e, 3) Interferência crucial na migração de eosinófilos para os focos de passagem das larvas e, conseqüente, impedimento da organização do granuloma, sugerindo que a formação da rede de fibras reticulares deve ter um papel crucial no aprisionamento do parasita, favorecendo um melhor desempenho das células inflamatórias na eliminação do mesmo. Este trabalho mostrou que o uso de drogas com ação imuno-modulatória, tais como a dexametasona, pode interferir na morbidade no ciclo pulmonar durante a infecção por S. venezuelensis, contribuindo para revelar os mecanismos envolvidos na sua patogênese.

The aim of this study was investigate the interference of dexamethasone treatment in the pulmonary cycle of Strongyloides venezuelensis infection in rats. The immunomodulatory effects on the inflammatory process generated by the passage of the larvae into pulmonary parenchyma during their migration were analyzed. Three principal effects were found: 1) Increased alveolar hemorrhagic inflammation provoked by the passage of larvae into the alveolar spaces; 2) Significant decrease of eosinophil and mast cell migration to the axial septum of the lungs and 3) Impaired eosinophil migration to the parasite foci and deficient formation of the reticular fiber network, interfering with the granuloma organization. This study demonstrated that the use of drugs with immunomodulatory actions, such as dexamethasone, in addition to interfere with the morbidity from the pulmonary cycle of S. venezuelensis infection, can contribute to reveal the mechanisms involved in its pathogenesis.

Advisors/Committee Members: Ramos, Simone Gusmão.

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The intestinal parasites are a major medical-health problem, in view of the large number of people involved and the numerous organizational changes which may result in the host. Infections caused by Strongyloides venezuelensis have a local immune response in both lungs as in the intestine, predominantly from the Th2 type, characterized by the production of cytokines IL-4, IL-5, IL-13 and IL-10, resulting in eosinophilia, increased production of mucus, mastocytosis and high levels of IgE. In addition, infections caused by mycobacteria stimulate predominantly an Th1-type immune response characterized by the production of IFN-α, IL-12, TNF-γ and nitric oxide. Tuberculosis, caused by intracellular pathogen Mycobacterium tuberculosis, is one of the most important infectious diseases, accounting for approximately 2.9 million deaths and 8 million new cases per year. Are still scarce papers involving co-infections, and because of the complex relationship between parasites and between them and their host, it is necessary criterious evaluations. This study evaluated the modulatory effect that the virulent Mycobacterium bovis has on the immune response of mice co-infected with S. venezuelensis. The results showed that the profile of immune response during infection with S. venezuelensis seems to be directly influenced by the presence of M. bovis, because the profile of Th2 response, specific to the worm, was reduced in co-infected animals. This decline could be observed by increasing the number of eggs and worms in animals co-infected when compared with animals infected only with S. venezuelensis, as well as decreased levels of IgE specific to the L3 larvae of the worm detected at different points of infection, decreased levels of IL-10 produced by spleen cells stimulated in vitro with L3 larvae antigen; decreased levels of IL-4, IL-5 and IL-13 in the intestine, reducing the expression of CD80, CD86 and CD25 cells in the spleen and lymph nodes and increased expression of CD28 cells in mesenteric lymph nodes. Together, these results suggest that infection with M. bovis, and the consequent activation of the profile of Th1-type immune response, was able to modulate the development of the profile of Th2 type of immune response against S. venezuelensis in co-infected animals, leaving them more susceptible to infection with S. venezuelensis. This work is the first to evaluate the mechanisms involved in imunoregulatory mechanisms involved in co-infection S. venezuelensis versus M. bovis

As parasitoses intestinais representam um importante problema médico-sanitário, tendo em vista o grande número de pessoas acometidas e as inúmeras alterações orgânicas que podem provocar no hospedeiro. Infecções provocadas por Strongyloides venezuelensis apresentam uma resposta imune local tanto nos pulmões quanto no intestino, predominantemente do tipo Th2, caracterizada pela produção das citocinas IL-4, IL-5, IL-13 e IL-10, resultando em eosinofilia, aumento da produção de muco, mastocitose e altas concentrações de IgE. Por outro lado,…

Advisors/Committee Members: Ana Paula Ferreira, Sylvio Celso Gonçalves da Costa, Celeste da Silva Freitas de Souza, Cláudio Galuppo Diniz.

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A estrongiloidíase é a infecção parasitária causada pelo nematódeo Strongyloides stercoralis. O diagnóstico definitivo é realizado pela visualização de larvas, principalmente nas fezes. Porém as técnicas parasitológicas têm baixa sensibilidade. As técnicas sorológicas apresentam-se como importante alternativa diagnóstica. Pesquisas apontam para a utilização de antígenos heterólogos solúveis, principalmente de Strongyloides venezuelensis. A identificação e caracterização dos antígenos de membrana podem fornecer fonte alternativa de antígenos e assim auxiliar o desenvolvimento das técnicas imunológicas. O presente trabalho teve como objetivo a avaliação das técnicas ELISA e WB frente a diferentes frações antigênicas de larvas filarioides de S. venezuelensis. Foram utilizadas amostras de sangue e fezes de 92 indivíduos, 20 indivíduos com estrongiloidíase (grupo I), 32 indivíduos com outras parasitoses (grupo II) e 40 indivíduos negativos (grupo III) pelos métodos de Lutz, cultura em placa de ágar e Rugai. Para preparação dos antígenos foram utilizadas larvas infectantes obtidas a partir de ratos infectados experimentalmente com S. venezuelensis. Seis frações antigênicas foram preparadas: frações salinas solúveis e de membrana (PBS 0,01M pH 7,2 e SDS 1%, SS e MS; Tris-HCl 25mM pH 7,5 e CHAPS 1%, ST e MT, respectivamente) e frações alcalinas solúvel e de membrana (NaOH 0,15M e SDS 1%, SA e MA, respectivamente). Para a técnica ELISA foram utilizadas placas sensibilizadas com 10ug/mL de antígeno, soro dos indivíduos diluídos 1:200 em PBS 0,05% Tween 3% de leite (PBSTM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em PBSTM. As amostras foram consideradas positivas quando o Índice ELISA foi maior que 1. Para a técnica de WB os soros foram diluídos 1:100 em Tris-HCl 5% de leite (TM) e o conjugado (anti IgG-humana peroxidase) em TM. Após as técnicas sorológicas foram determinadas os parâmetros de diagnóstico pela curva ROC como sensibilidade (SE), especificidade (ES), Likelihood ratio (LR) além da determinação da acurácia diagnóstica (AC) e do índice Kappa (k). A técnica ELISA destacou as frações de membrana com melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 95%, ES 94,4%, AC 94,8%, LR 17,1, k 0,848). O WB revelou componentes antigênicos imunodominantes variando de 260-10kDa, mas destacam-se as frações de 40-35kDa mais frequentes em todas frações antigênicas. Pela técnica de WB, a fração ST apresentou melhor desempenho em relação aos parêmetros diagnósticos estudados (SE 100%, ES 93,1%, AC 94,5, LR 14,4,k 0,854). A utilização das frações de membrana no imunodiagnóstico da estrongiloidíase humana torna-se fonte acessível e eficaz em relação às frações purificadas, não necessitando de gastos complementares para sua obtenção

Strongyloidiasis is a parasitic infection caused by a nematode Strongyloides stercoralis. The definitive diagnosis is made by the larvae visualization in stool samples. However parasitological techniques have low sensitivity. Serological techniques became as suitable diagnostic…

Advisors/Committee Members: Gryschek, Ronaldo Cesar Borges.

▼ Durante a infecção por Strongyloides venezuelensis em camundongos, assim como outros nematódeos intestinais, a participação de eosinófilos no mecanismo de proteção bem como na imunopatologia ainda é bastante controversa. Trabalhos anteriores do nosso grupo de pesquisa demonstram que o eosinófilo é uma célula importante no processo de eliminação do S. venezuelensis em casos de infecção primária pelo parasito. Porém, sabe-se que os mecanismos protetores que atuam em animais previamente expostos ao parasito atuam principalmente sobre as larvas migrantes e podem diferenciar da resposta efetora em infecções primárias. Outro fato importante é que a maioria dos resultados obtidos em experimentos laboratoriais é controversa, uma vez que protocolos experimentais geralmente utilizam a exposição do hospedeiro a uma carga parasitária muito elevada, que geralmente não acontece em processos naturais. No intuito de esclarecer a diferença de resposta imunológica e o papel do eosinófilo na resposta imune induzida por diferentes formas de exposição primária ao parasito este trabalho experimental utilizou três diferentes linhagens de camundongos: animais heterogênicos da linhagem Swiss, animais isogênicos da linhagem Balb/c e animais Balb/c dblGATA, deficientes na maturação de eosinófilos. Em cada linhagem os camundongos foram divididos em quatro grupos experimentais. Sendo que um grupo foi mantido não infectado, outro sofreu apenas uma infecção, o outro foi exposto à infecção primária com alta carga parasitária seguida de infecção secundária e o último foi exposto a várias infecções com baixo número de larvas infectantes antes do desafio com Strongyloides venezuelensis. A avaliação comparativa da infecção foi realizada através da quantificação de formas evolutivas de S. venezuelensis recuperadas do pulmão, intestino, e fezes dos camundongos. Parâmetros imunológicos, como análise do infiltrado celular nos parênquimas pulmonar e intestinal, da resposta sorológica pela técnica de ELISA, e análise da presença de citocinas do perfil Th-2 no parênquima pulmonar também foram comparativamente analisados. Os dados mostram que animais submetidos às múltiplas infecções com baixa dose parasitária eliminam as larvas da infecção desafio mais precocemente que os previamente expostos a uma alta carga parasitária. A eliminação das larvas foi associada à produção de anticorpos específicos e eosinofilia tecidual. Estudo detalhado em animais isogênicos revelou que nos animais previamente expostos ao parasito houve aumento precoce de IgG1 e IgM parasito-reativa e aumento nos níveis de IgE total, não sendo detectado aumento de reatividade de IgG2a nos animais re-infectados ou nos animais submetidos múltiplas infecções. Apesar do perfil Th-2 da resposta observada nos animais previamente expostos ao parasito e da intensa infiltração de eosinófilos na pele e pulmão destes animais, a proteção conferida aos hospedeiros durante o processo de re-infecção, nas diferentes formas de exposição primária ao parasito, não foi alterado na ausência de eosinófilos. Este… Advisors/Committee Members: Deborah Aparecida Negrao Correa, Deborah Aparecida Negrao Correa, Simone Fulgêncio Lima, Marcos Pezzi Guimaraes.

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Human strongyloidiasis is an intestinal parasitosis of worldwide importance, is asymptomatic in 50% of infected individuals, however, can cause hyperinfection and dissemination in immunosuppressed patients. The use of accurate diagnosis is very important for identification and control of this disease. The use of fractionated antigens has enabled the development of diagnostic tests more reliable, the sensitivity and specificity greater than total extracts. The aim of this study was to characterize and compare the total saline extract (ES) and alkaline (EA) of Strongyloides venezuelensis and their fractions detergent (ESD and EAD) and aqueous (ESA and EAA) in the immunodiagnosis of human strongyloidiasis. The antigenic fractions were obtained from the ES and EA extracts by fractionation with Triton X-114 and tested in serum samples to detect IgG by ELISA and by immunoblotting (IB). We analyzed 120 serum samples: 40 patients with strongyloidiasis (Group 1), 40 patients with other parasitic infections (Group 2) and 40 apparently healthy individuals (Group 3). Parasitological tests Baermann-Moraes and Lutz were performed with three samples of faeces per individual for identification or not of intestinal parasites. We calculated the sensitivity, specificity and diagnostic efficiency of each test employed for each antigenic preparation. Sensitivities and specificities of ELISA were 90% and 90% (ES), 95% and 95% (ESD), 90% and 90% (ESA), 92.5% and 93.8% (EA), 87.5% and 88.8% (EAD) and 77.5% and 78.8% (AAS) respectively and the IB were 95% and 92.5% (ES), 95 and 97.5% (ESD), 82 , 5% and 97.5% (ESA), 90% and 95% (EA), 92.5% and 95% (EAD) and 45% and 100% (AAS). In IB each extract showed a different profile of immunodominant antigenic components with variations between bands of apparent molecular weight of 126, 126-90, 90, 55, 45-41, 45-33, 33 and 28 kDa. The efficiency of diagnosis for the ELISA and IB for each extract were 90% and 93.3% (ES), 95% and 96.7% (ESD), 90% and 92.5% (ESA), 93.3% and 93.3% (EA), 88.3% and 94.2% (EAD) and 78.3% and 81.7% (AAS). The detergent fraction obtained of total salt extract of S. venezuelensis showed better diagnostic efficiency in both tests and is recommended as an alternative antigen in the immunodiagnosis of human strongyloidiasis.

A estrongiloidíase humana é uma parasitose intestinal de importância mundial, ocorre de forma assintomática em 50% dos indivíduos infectados, contudo, pode causar hiperinfecção e disseminação em pacientes imunodeprimidos. A utilização do diagnóstico preciso é de grande importância para identificação e controle desta parasitose. O emprego de antígenos fracionados tem possibilitado o desenvolvimento de testes diagnósticos mais confiáveis, uma vez que apresentam sensibilidade e especificidade superiores aos antígenos de extratos totais. O objetivo do presente estudo foi caracterizar e comparar os extratos totais salino (ES) e alcalino (EA) de Strongyloides venezuelensis e suas respectivas frações detergente (ESD e EAD) e aquosa (ESA e EAA) no imunodiagnóstico da…

Advisors/Committee Members: Julia Maria Costa-Cruz, Adenilda Cristina Honorio França, Cláudio Vieira da Silva.

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O diagnóstico definitivo da estrongiloidíase normalmente é realizado mediante a detecção de larvas nas fezes; porém a quantidade de parasitos é limitada e a eliminação de larvas é reduzida e irregular. Sendo assim, o desenvolvimento de testes sorológicos confiáveis para o diagnóstico da estrongiloidíase torna-se uma alternativa necessária. O objetivo deste estudo foi demonstrar a cinética de detecção de coproantígenos e de antígenos, anticorpos e imunocomplexos circulantes em amostras de soro e de lavado bronco alveolar (LBA) de ratos imunossuprimidos e experimentalmente infectados por Strongyloides venezuelensis. Para a cinética (0 e 5, 8, 13 e 21 dias pós-infecção (d.p.i)) de coproantígenos utilizou-se anticorpo policlonal anti-L3 produzido em coelhos. Para a detecção de antígenos e de imunocomplexos em amostras de soro e de LBA (0 e 2, 5, 8, 13 e 21 d.p.i), placas de microtitulação foram sensibilizadas com IgG anti-S. venezuelensis e com extrato alcalino de larvas para a detecção de anticorpos. A análise estatística foi realizada por Two Way ANOVA, seguida pela teste de Bonferroni, considerando p<0,05 significativo. A cinética de eliminação de ovos/g de fezes mostrou que o pico ocorre no 8 d.p.i sendo significativamente maior nos animais imunossuprimidos (p<0,01). O pico de detecção de coproantígenos nos animais não imunossuprimidos foi no 13 d.p.i (p<0,05), sendo que nos animais imunossuprimidos a detecção foi antecipada para o 5 d.p.i. A detecção de antígeno em amostras de soro não foi uma boa ferramenta diagnóstica para avaliar a infecção enquanto que em amostras de LBA mostrou ser ferramenta auxiliar. A detecção de IgG específica para S. venezuelensis em amostras de soro de animais não imunossuprimidos foi preferencialmente durante o 5 e o 8 d.p.i. e em animais imunossuprimidos, durante toda a cinética experimental. Nas amostras de LBA, a detecção de anticorpos ocorreu do 8 ao 21 d.p.i em animais não imunossuprimidos e em animais imunossuprimidos, foi antecipada para o 2 d.p.i, como pico de reatividade no 5 d.p.i (p<0,05). A detecção de imunocomplexos em amostras de soro de animais não imunossuprimidos foi possível do 5 aos 13 d.p.i e em animais imunossuprimidos, durante toda a cinética. Em amostras de LBA, a detecção de imunocomplexo foi maior em animais não imunossuprimidos. Concluiu-se que a detecção de coproantígeno e de imunocomplexos circulantes em amostra de soro e em amostras de LBA são uma alternativa para o diagnóstico precoce da estrongiloidíase principalmente nos casos de imunossupressão.

The definitive diagnosis of strongyloidiasis is normally done by detection of larvae on faecal samples; however, the number of parasites is limited in most cases and the elimination of larvae is irregular. Thus, developing reliable serological methods for the diagnosis of strongyloidiasis becomes imperative. The aim of this study was to establish a coproantigen ,antigen, antibody and immune complex detection by enzyme-linked immunosorbent assay in serum and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) samples of non…

Advisors/Committee Members: Julia Maria Costa-Cruz.

▼ Abstract: The present study the antihelmintic effect of the hidroalcholic extract (EHA) Chenopodium ambrosioides L. (Chenopodiaceae) and fractions obtained of dry column on Strongyloides venezuelensis (Brumpt, 1934) was evaluated The EHA of C. ambrosioides was obtained from dried and powered using ethanol:H2O solution (70:30). The extract was evaporated and liophilized, getting the hidroalcoholic crude extract. The EHA was partitioned in dry column using chloroform: methanol solution (90:10) and analyzed by TLC (Thin Layer Chromatography) and GC-MS (Gasous Cromatography Mass Espectometry). Tests for the determination of the concentration response had been carried out in Swiss male mice of 30 days infected with S. venezuelensis and treated with the concentrations to 100mg kg-1/animal/day, 250mg kg-1/animal/day and 400mg kg-1/animal/day during five days by intraesophageal intubation. Groups of 10 animals for each concentration and a control group were formed. The animals had been infected subcutaneous injection with 1500 larvae sacrificed in 6o d.p.i (day post-infectuion) for evaluation for the number of eggs and females. The concentration of 400mg kg-1/animal/dia presented greater in such a way effectiveness for the eggs (75.89 %) how much for the parasites females (86.31 %). In another experiment it was compared concentration of 400mgKg-1/animal/day of the EHA of C. ambrosioides with Thiabendazole (TBZ) in regimen of treatment post and preinfection being formed groups of 10 animals for each treatment and drugs. In the preinfection treatments, the animals had been treated with EHA of C. ambrosioides or TBZ during five days and infected. In the post-infection treatments, the animals had been infected, treated with TBZ or EHA of C. ambrosioides 24h after infection during five days. The animals had been sacrificed for quantification of eggs and females in the 6o d.p.i..The 400mgKg-1/animal/dia concentration presented effectiveness of 99.14 % and 89.95 % for the eggs and females respectively when evaluated the pre-infection treated group against 79.60 % to (eggs) and 86.46 % (females) in the group post-infection treated. The TBZ presented a effectiveness of 39.91 % for eggs and 89.54 % for the females in the preinfection treated group and effectiveness of 100 % for eggs how much for the females parasites in the regimen of post-infection treatment. The TBZ revealed little efficient as preventive of the infection of mice with S. venezuelensis. The EHA of C. ambrosioides presented moderate effectiveness to the number of female parasites in the treatment post infection. After the partition of the EHA six fractions had been gotten and three (Fraction 4, 5 Fraction 5 and Fraction 6 ) had been tested in regimen of post-infection and pre-infection in the 250 mg kg-1/animal/dia concentration during five days. Groups of 10 animals for each fraction had been formed and one control group. The infection and administration had been carried through as described previously. The fraction 6 presented greater effectiveness for the eggs… Advisors/Committee Members: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS (CRUESP), Ueta, Marlene Tiduko, 1941- (advisor), Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia (institution), Programa de Pós-Graduação em Parasitologia (nameofprogram), Rehder, Vera Lúcia Garcia (committee member), Simoni, Isabela Cristina (committee member), Allegretti, Silmara Marques (committee member), Guaraldo, Ana Maria Aparecida (committee member).

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This study presents development and results of an automated tool for the estimation, based on cloud displacement, of wind speed and direction within the low troposphere. The data were originated by visible and near infrared (3,9 μm) channels images by geostationary GOES-12 satellite. The study utilized visible channel images in estimating the variables during daylight time and near infrared images for the nightly period. Both the high spatial resolutions of the visible channel (1x1 km at the subsatellite point) and the high contrast between low clouds and the Earth surface were highly beneficial. Such contrast difference between the surface and cloud-covered areas albedos makes cloud detection easier and so, by means of consequence, its tracking. For the detection of low clouds in the nightly period, the near infrared channel presented more efficient images than window infrared and water vapor channels. The estimation of wind related variables was successful when associated with oceanic areas, but such did not happen with wind in continental settings, due to lack of surface homogeneity. Both vegetation and orography have an influence in cloud development, unlike what happens with oceanic clouds, that tend to keep their structures for a longer period of time. Such morphological changes hamper the tracking of the clouds over continental areas. For estimating the wind variables in low levels, near infrared and visible channel images are recommended.

Este trabalho consiste em um estudo sobre estimativas de direção e velocidade do vento na baixa troposfera baseado no deslocamento de nuvens. O trabalho incluiu o desenvolvimento de um método automático para avaliar o vento utilizando imagens dos canais visível e infravermelho próximo (3,9 μm), ambos do satélite geoestacionário GOES-12. O estudo utilizou imagens do canal visível na estimativa do vento durante o período diurno e do canal infravermelho próximo para estimar o vento durante a noite. O trabalho explorou as altas resoluções espaciais das imagens do canal visível, que possuem a resolução de 1x1 km no ponto subsatélite, bem como o grande contraste entre as nuvens baixas (Alto Albedo) e a superfície do planeta (Baixo Albedo). Essa diferença de contraste entre os albedos da superfície e as áreas cobertas por nuvens facilita a detecção das nuvens e consequentemente, o seu rastreamento. Na detecção das nuvens baixas no período noturno, as imagens do canal infravermelho próximo mostraram-se mais eficazes do que as dos canais infravermelho janela e do vapor d água. Foi possível estimar, com êxito, o vento sobre as regiões oceânicas, mas a estimativa sobre a região continental foi insatisfatória, devido à falta de homogeneidade das superfícies continentais. Vegetação e orografia influenciam na formação e desenvolvimento das nuvens, ao contrário do que ocorre com as nuvens situadas sobre os oceanos, que tendem a manter sua estrutura por um tempo mais longo. Tais modificações na morfologia prejudicam o processo de rastreamento das nuvens sobre as regiões…

Advisors/Committee Members: Prakki Satyamurty, Nelson Jesus Ferreira, Luiz Augusto Toleto Machado, Juan Carlos Ceballos, Leila Maria Vespoli de Carvalho.

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A infecção por Strongyloides sp. induz resposta imune caracterizada por eosinofilia tecidual, mastocitose, produção de citocinas Th2 e anticorpos, tanto em roedores como em humanos. O objetivo desse estudo foi investigar a resposta imune contra a infecção por Strongyloides venezuelensis em camundongos geneticamente deficientes em complexo de histocompatibilidade principal (MHC) de classe I ou de classe II. Camundongos C57BL/6 (WT), MHC I-/- e MHC II-/- foram subcutaneamente inoculados com 3000 larvas (L3) de S. venezuelensis e sacrificados no 50, 80, 130 e 210 dias pósinfecção (p.i.). A taxa de infectividade foi estimada pela contagem de ovos/g/fezes, número de fêmeas recolhidas do intestino e taxa de fecundidade. Amostras do intestino delgado foram rotineiramente processadas e coradas com hematoxilina eosina, azul de toluidina e PAS-azul de alciano para identificação de eosinófilos, mastócitos e células caliciformes, respectivamente. Níveis de IL-4, IL-5, IL-12 e IFN-γ foram quantificados nos homogeneizados do intestino delgado e no soro dos camundongos infectados e não infectados por ELISA. Níveis de IgM, IgA, IgE, IgG total, IgG1 e IgG2a anti- Strongyloides foram quantificados no soro dos camundongos infectados e dos não infectados por ELISA. Amostras de sangue foram colhidas para realizar a contagem global e diferencial dos leucócitos. Os camundongos MHC II -/- foram mais susceptíveis a infecção por apresentar elevado número de ovos eliminados nas fezes e retardo na eliminação dos vermes adultos quando comparado aos camundongos selvagens (WT) e MHC I-/-. Analise histopatológica revelou a presença de infiltrado inflamatório leve no intestino delgado dos camundongos MHC II-/- com redução da eosinofilia tecidual, mastócitos e células caliciformes. Esses camundongos apresentaram também o número de eosinófilos e células mononucleares no sangue, significativamente reduzidos, acompanhados de redução de citocinas Th2 no homogeneizado do intestino e soro quando comparado aos camundongos WT e MHC II-/-. Além disso, os níveis de IgM, IGA, IgE, IgG total e IgG1 Strongyloides específicos no soro dos camundongos MHC II -/- reduziram significativamente, enquanto que discreto aumento nos níveis de IgG2a pode ser observado em comparação aos camundongos WT e MHC I-/-. Entretanto, estes resultados demonstraram que a expressão das moléculas de MHC II mas não as de MHC classe I são essenciais para um controle efetivo da infecção por Strongyloides, podendo explicar os possíveis mecanismos envolvidos na evasão do parasito da resposta imune do hospedeiro desencadeando assim nas formas potencialmente fatais da estrongiloidíase e disseminação para outros órgãos, principalmente em indivíduos imunossuprimidos.

In rodents and in humans, Strongyloides sp. infection induces an immune response characterized by tissue eosinophils, mastocytosis, production of Th2 cytokines and antibodies. Accordingly, in this study, we investigated the immune response against Strongyloides venzuelensis infection in major histocompatibility complex (MHC)…

Advisors/Committee Members: Ernesto Akio Taketomi, Maria Aparecida de Souza, Dulcinéa Maria Barbosa Campos, Eleuza Rodrigues Machado, Julia Maria Costa-Cruz.

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No presente estudo, foram analisados os mecanismos envolvidos na resposta imune de camundongos geneticamente deficientes em Major Histocompatibility Complex de classe I ou de classe II (MHC I-/- ou MHC II-/-), pós-infecção por Strongyloides venezuelensis. Camundongos C57BL/6 (WT), MHC I-/- e MHC II-/-, foram subcutaneamente infectados com 3000 larvas (L3) de S. venezuelensis e sacrificados nos dias 1, 3, 5, 8, 13 e 21 pós-infecção (p.i.). Foram colhidas amostras de sangue, pulmão e intestino delgado. As amostras teciduais foram rotineiramente processadas e coradas com hematoxilina e eosina para as análises patológicas. A presença do antígeno do parasito foi demonstrada por análise de imunohistoquímica. Os camundongos MHC II-/- apresentaram um número significativamente maior de fêmeas recuperadas do intestino delgado no dia 5 p.i. (p <0,001) e eliminaram maior quantidade de ovos nas fezes. Entretanto, a infecção por S. venezuelensis foi completamente eliminada após 13 dias de infecção, tanto nos WT como nos MHC I-/-, já nos MHC II-/- houve uma redução significativa no número de ovos e fêmeas no 21 p.i. O número de leucócitos totais no sangue foi significativo para os animais MHC I-/- e MHC II-/-, principalmente no dia 3 p.i. (p <0,05) em relação aos camundongos WT. A análise da mucosa duodenal confirmou a presença de parasito em todos os animais. No pulmão, a presença do antígeno foi observada nos camundongos MHC I-/- no dia 1 p.i. e em MHC II-/-, nos dias 1 e 5 p.i. No intestino delgado de animais WT, observou-se maior número de parasito no 8 p.i. e ausência do antígeno após o 13 p.i. Em animais MHC II-/-, o número de parasitos no duodeno foi reduzido no 8 p.i., quando comparado aos animais WT infectados, no entanto, o antígeno do parasito foi detectado nas porções inferiores do intestino delgado, o que não aconteceu no WT. Estes achados contribuem para melhor compreensão da resposta imune em hospedeiros imunodeficientes e apresenta potencial aplicação clínica uma vez que a metodologia utilizada no modelo experimental de imunossupressão permite a extensão dos resultados para delineamentos da resposta imune na infecção animal e humana.

In the present study, we investigated the mechanisms involved in the immune response of Major Histocompatibility Complex class I or class II knockout mice (MHC I-/- or MHC II-/-), after S. venezuelensis infection. Wild-type C57BL/6 (WT), MHC II -/- and MHC I -/- mice were individually inoculated with 3.000 larvae (L3) of Strongyloides venezuelensis and sacrificed on days 1, 3, 5, 8, 13 and 21 post-infection (p.i.). Samples of blood, lung and small intestine were collected. The specimen were routinely processed and stained with hematoxylin-eosin for the pathological analysis. The presence of the parasite antigen was demonstrated by immunoperoxidase analysis. MHC II-/- mice presented a significantly higher number of adult worms recovered from the small intestine on day 5 p.i. (p <0,001) and presented elevated numbers of eggs in feces. The infection by S. venezuelensis was completely…

Advisors/Committee Members: Julia Maria Costa-Cruz, Ernesto Akio Taketomi, Ana Alice Diniz dos Santos.

▼ La interacción parásito-hospedador se establece mediante un sistema complejo que permite la eliminación del parásito o su perpetuación en el hospedador. Esta relación depende del parásito y sus mecanismos de evasión ante la defensa del hospedador y de la respuesta del organismo parasitado frente a la agresión. En los mamíferos el sistemainmunitario provee protección por dos mecanismos que se correlacionan: la inmunidad adaptativa y la innata. La adaptativa se caracteriza por su especificidad y memoria y esmediada por linfocitos B y T. La innata es la primera línea de defensa contramicroorganismos invasores y está mediada por macrófagos, células dendríticas y neutrófilos. Los macrófagos activados producen citocinas como TNF?, IL-1 e IL-6 asícomo radicales libres de oxígeno y óxido nítrico (ON). El ON es una molécula simple que está implicada en la patogenia y el control de las enfermedades infecciosas y parasitarias.Se ha estudiado la acción del ON en diferentes protozoos como Leishmania, y Trypanosoma así como en helmintos como Toxocara, Ascaris, Trichinella o filarias. En unos el ON actúa como mecanismo de defensa ante el parásito y en otros permite que el parásito evada el sistema inmunológico del hospedador. Se desconocía el papel del ON enla estrongiloidosis, geohelmintosis cuya infección se perpetúa en el tiempo por su capacidad de auto-infección y de producir alta mortalidad en personas inmunosuprimidas causando infección diseminada. En este trabajo se evalúa la participación del ON en laestrongiloidosis experimental. Se estudia la presencia de ON en el parásito, se evalúa su producción in vitro en macrófagos alveolares estimulados con ocho antígenos y sedesarrollan modelos experimentales de infección en ratones normales einmunosuprimidos con el objetivo de analizar los efectos de la inhibición o la donación de este mediador inflamatorio. Los resultados muestran que existe producción de ON porestructuras larvarias. Los antígenos somáticos de larva y metabólicos de adultos estimulan la producción de ON de forma específica y dosis dependiente. El ON desempeña un papel clave en la defensa de la estrongiloidosis estudiado tanto en modelos in vitro como in vivo. La falta de producción de ON en estrongiloidosis ocultas sometidas a tratamieno con corticoides es uno de los factores responsables del síndrome de hiperinfección. Advisors/Committee Members: Muro-Álvarez, Antonio (advisor), López Abán, Julio (advisor).