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A angiostrongilíase abdominal (AA) é uma doença causada pelo nematódeo Angiostrongylus costaricensis, tendo como hospedeiros definitivos roedores silvestres e hospedeiros intermediários moluscos terrestres. No homem, hospedeiro acidental, pode causar infartos intestinais e pseudotumorações, que podem complicar com peritonite e sepse. <em class="hilite">Oem> diagnóstico definitivo é realizado pelo estudo histopatológico de peças cirúrgicas, ao serem identificadas estruturas parasitárias como vermes, ovos ou larvas. Este processo demanda tempo e experiência do patologista. Até <em class="hilite">oem> presente momento nã<em class="hilite">oem> existe tratamento disponível contra <em class="hilite">oem> parasito ou para evitar as complicações, apesar de várias tentativas realizadas com <em class="hilite">oem> uso de antiparasitários. <em class="hilite">Oem> presente estudo teve dois objetivos: 1. Testar a reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase (PCR) em bloco parafinado para <em class="hilite">oem> diagnóstico de angiostrongilíase abdominal em seres humanos; e 2. Avaliar <em class="hilite">oem> efeito da enoxaparina na prevençã<em class="hilite">oem> de complicações isquêmicas intestinais em camundongos com AA. Para a técnica da PCR utilizamos iniciadores de DNA do Angiostrongylus cantonensis. Blocos parafinados de 4 grupos foram divididos em: (1) casos confirmados (n=20), onde haviam estruturas parasitárias; (2) casos suspeitos (n=20), sendo alvos os granulomas e infiltrado eosinofílico; (3) controle negativo (n=3), proveniente de pacientes operados por adenocarcinomas; e (4) controle de especificidade (n=7), outras parasitoses, representados por estrongiloidíase, enterobíase, ascaridíase e esquistossomose. Para avaliar do tratamento foram utilizados 24 camundongos Swiss infectados com Angiostrongylus costaricensis (10L3/animal), sendo 12 tratados com enoxaparina subcutânea (40mg/kg/dia) e 12 com água destilada (placebo) por 50 dias. Os resultados mostraram que a sensibilidade da PCR foi de 55%, a especificidade de 100% e valor preditivo positivo de 100% para confirmaçãoo da AA. <em class="hilite">Oem> tratamento dos camundongos com enoxaparina nã<em class="hilite">oem> mostrou diferença com <em class="hilite">oem> grupo placebo, em relaçã<em class="hilite">oem> a prevençã<em class="hilite">oem> das lesões tissulares e óbito. Concluindo, a PCR pode tornar-se uma ferramenta promissora para auxiliar na definiçã<em class="hilite">oem> diagnóstica da AA, em especial quando <em class="hilite">oem> patologista nã<em class="hilite">oem> está familiarizado com esta doença. A enoxaparina na dose profilática nã<em class="hilite">oem> preveniu as lesões e os óbitos causados pelo parasito.

Abdominal angiostrongyliasis (AA) is a disease caused by the nematode Angiostrongylus costaricensis. The parasite has wild rodents as definitive hosts and molusks as intermediate hosts. Incidental contamination in men can provoke bowel infarction and pseudotumoral lesions, clinically manifested as acute abdomen. The diagnosis has been confirmed after histopathological examination of surgical specimens, with the identification of parasitic structures such as worms, eggs and larvae. Diagnostic workup demands high expertise from the pathologist. Hitherto there is no available treatment either for parasite eradication or avoidance of complications, despite several studies addressing the effect of anti-parasitic drugs. The current study aimed:…

<em>Advisors/Committee Members: Fornari, Fernando.em>

▼ <em class="hilite"><em class="hilite">Oem>em> citomegalovÃrus (CMV) à um vÃrus altamente prevalente em todo mundo. Em pacientes transplantados, à <em class="hilite">oem> agente mais comum de infecÃÃ<em class="hilite">oem>, com uma incidÃncia variando de 20 a 60% e mortalidade podendo chegar a 90%. <em class="hilite">Oem> aparecimento de infecÃÃes no perÃodo pÃs-transplante à determinado pelo perfil sorolÃgico da dupla receptor/doador. <em class="hilite">Oem> objetivo do trabalho foi determinar a infecÃÃ<em class="hilite">oem> ativa pelo citomegalovÃrus (CMV) em pacientes transplantados renais utilizando a tÃcnica de PCR em Tempo Real. <em class="hilite">Oem> estudo foi do tipo transversal, retrospectivo e quantitativo onde participaram 132 pacientes submetidos a transplante renal no Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio (HUWC) da Universidade Federal do CearÃ, que realizaram a pesquisa de CMV pela tÃcnica de PCR em tempo real, no perÃodo de janeiro a dezembro de 2012. Foi feita a anÃlise da soroprevalÃncia para CMV do par Doador/Receptor mostrando que a maioria dos receptores (85,6%) e seus respectivos doadores (87,9%) eram soropositivos para CMV antes da realizaÃÃ<em class="hilite">oem> do transplante. Os 132 receptores foram distribuÃdos em quatro grupos em funÃÃ<em class="hilite">oem> da sorologia para CMV do par Doador/Receptor antes da realizaÃÃ<em class="hilite">oem> dos transplantes. Grupo 1 (D+/R-), grupo 2 (D+/R+), grupo 3 (D-/R+) e grupo 4 (D-/R-). A maioria (n=99, 75%) dos 132 receptores encontra-se no Grupo 2 (D+/R+), formado por receptores soropositivos para CMV que transplantaram com Doadores soropositivos. A terapia de induÃÃ<em class="hilite">oem> com Timoglobulina foi realizada em 77 (58,3%) e com Basiliximab em 49 (37,1%) dos 132 receptores. Em seis pacientes nÃ<em class="hilite">oem> foi possÃvel determinar a terapia de induÃÃ<em class="hilite">oem>. EpisÃdios de rejeiÃÃ<em class="hilite">oem> foram observados em 17 (12,9%) dos 132 receptores, sendo 15 (88,2%) receptores do Grupo 2 (D+/R+) e 2 (11,8%) do Grupo 1 (D+/R-). A maioria dos receptores (62,1%) realizou diÃlise apÃs <em class="hilite">oem> transplante. Entretanto, um maior nÃmero de pacientes em diÃlise foi observado no Grupo 2 (D+/R+) quando comparado com os trÃs grupos. CÃpias de DNA do CMV foram detectadas em 26 (19,7%) dos 132 receptores, com mÃdia de 567.235,00  2.231.948,00 cÃpias de DNA/mL do CMV. Maior nÃmero de cÃpias de DNA do CMV foi encontrada no Grupo 2 (D+/R+) em relaÃÃ<em class="hilite">oem> ao Grupo 1 (D+/R-). PorÃm, somente 13 (50%) dos 26 pacientes apresentavam cÃpias de DNA do CMV com âcut-offâ acima de 2.000, consideradas com infecÃÃ<em class="hilite">oem> ativa pelo CMV, sendo os 2 pacientes do Grupo 1 e 11 (45,8%) dos 24 pacientes do Grupo 2. A doenÃa citomegÃlica foi observada em 12 (9,1%) dos 132 pacientes avaliados, sendo 10 (83,3%) pacientes do Grupo 2 (D+/R+) e 2 (16,7%) do Grupo 1 (D+/R-). Em conclusÃ<em class="hilite">oem> os resultados deste trabalho reforÃam a necessidade do monitoramento da carga viral pela PCR em tempo real em pacientes considerados de risco moderado para <em class="hilite">oem> desenvolvimento da doenÃa citomegÃlica (grupo 2) e a adoÃÃ<em class="hilite">oem> de terapia preemptiva naqueles com infecÃÃ<em class="hilite">oem> ativa. <em>Advisors/Committee Members: Josà Ajax Nogueira Queiroz, Maria Jania Teixeira, Ronald Feitosa Pinheiro, SÃnia Leite da Silva.em>

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Melioidosis is a potentially fatal disease caused by the bacterium Burkholderia pseudomallei, considered emerging in Brazil since the first cases were reported in 2003, on State of CearÃ. This study aimed to perform the molecular identification of 31 isolates of B. pseudomallei (26 clinical and 5 environmental) maintained in the culture collection of CEMM (Specialized Center for Medical Mycology), based on sequences 16S and 16S-23S rRNA. The DNA of these samples was extracted with the kit Wizard  Genomic DNA Purification (Promega), quantified by spectrophotometry and stored at 4ÂC. The amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA specific to B. pseudomallei was performed by PCR reaction with primers Bp1 and Bp4. The sequencing of 16S and 16S-23S rRNA was performed by using of the kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). The phylogenetic tree of 16S rRNA and the sequence identity matrix and sequence difference count matrix based on the 16S-23S rRNA were generated by the program MEGA4, version 4.1. The results confirmed the identification of 15 strains of B. pseudomallei (5 clinical and 10 environmental), which represents 48.4% of the isolates analyzed in this study. The phylogenetic tree based on 16S rRNA shows that the clinical and environmental isolates of B. pseudomallei of State of Cearà are evolutionarily clustered with the strains B. pseudomallei MSHR346 (Australia), B. pseudomallei 1106a (Thailand), B. pseudomallei K96243 (Thailand), B. pseudomallei 1710b (Thailand) and B. pseudomallei 668 (Australia). Using the same extraction kit was possible to extract DNA from B. pseudomallei directly from clinical specimen (bronchoalveolar lavage), confirming a new case of melioidosis in Ubajara/CE. In this study, the use of PCR for amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA identified correctly B. pseudomallei, and to confirm the discrimination between B. pseudomallei and B. mallei, the sequencing of the 16S and 16S-23S rRNA genes was performed. The technique of PCR coupled with sequencing of 16S and 16S-23S rRNA resulted in a high sensitivity and specificity of detection of B. pseudomallei in this study.

A melioidose à uma doenÃa potencialmente fatal causada pela bactÃria Burkholderia pseudomallei, sendo considerada emergente no Brasil desde que os primeiros casos foram reportados em 2003, no Estado do CearÃ. Este estudo pretendeu realizar a identificaÃÃ<em class="hilite">oem> molecular de 31 isolados de B. pseudomallei (cinco clÃnicos e 26 ambientais) mantidos na coleÃÃ<em class="hilite">oem> de culturas do CEMM (Centro Especializado em Micologia MÃdica), com base nas sequÃncias 16S e 16S-23S DNAr. <em class="hilite">Oem> DNA destas amostras foi extraÃdo com <em class="hilite">oem> kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega), quantificado por espectrofotometria e armazenado a 4ÂC. A amplificaÃÃ<em class="hilite">oem> de um fragmento de 302 pb da regiÃ<em class="hilite">oem> espaÃadora 16S-23S DNAr especÃfico para B. pseudomallei foi realizada por meio de reaÃÃ<em class="hilite">oem> de PCR com os primers Bp1 e Bp4. <em class="hilite">Oem> sequenciamento das regiÃes 16S e 16S-23S DNAr foi realizado pelo mÃtodo da terminaÃÃ<em class="hilite">oem> da cadeia pelo…

<em>Advisors/Committee Members: Marcos FÃbio Gadelha Rocha, Raimunda SÃmia Nogueira Brilhante, Thalles Barbosa Grangeiro, Nilce Maria Martinez-Rossi.em>

▼ <em class="hilite"><em class="hilite">Oem>em> diagnóstico da malária tem como teste de referência a gota espessa, porém é consenso que é preciso adotar alternativas em situações específicas, com técnicas mais sensíveis e que possam ser aplicadas no processamento de grande número de amostras, como estudos clínicos, epidemiológicos ou triagem de doadores em bancos de sangue. Com a finalidade de formar uma plataforma de diagnóstico para malária em amostras agrupadas em pools, foi realizada análise comparativa da PCR em tempo real, a nested PCR e um teste rápido específico para detecçã<em class="hilite">oem> de anticorpos contra P.falciparum e P. vivax, com intuito de reduzir <em class="hilite">oem> número de ensaios, com custo relativamente baixo. Foram utilizadas 50 amostras de sangue positivas para Plasmodium, de acordo com a prevalência das espécies no Brasil (P. vivax 75%, P. falciparum 22% e P. malariae 3%), com diagnóstico realizado pelo método padrã<em class="hilite">oem> ouro. Adicionalmente, 48 amostras de sangue negativas para Plasmodium foram selecionadas para controle negativo e confecçã<em class="hilite">oem> de 15 pools, contendo amostras positivas e negativas. Quatro das amostras negativas para malária eram positivas para outras doenças. Tanto as amostras positivas como as negativas foram submetidas individualmente aos ensaios de PCR em tempo real, nested PCR e teste imunocromatográfico SD Bioline Pf/Pv para detecçã<em class="hilite">oem> de malária. Um teste de PCR convencional foi incluído a fim de testar a qualidade do DNA, mediante amplificaçã<em class="hilite">oem> de uma sequência do gene humano da -globina como controle interno. Posteriormente as amostras foram analisadas em pools pelos ensaios moleculares e sorológicos. Nos testes individuais, 45/49 amostras foram positivas para Plasmodium pela PCR em tempo real, com Sensibilidade de 91,84%, e Especificidade (48/48) de 100,00%; 46/49 amostras detectaram Plasmodium pela nested PCR, com Sensibilidade de 93,88%, e Especificidade (12/12) de 100,00%; 32/46 amostras foram reagentes no teste sorológico SD Bioline Pf/Pv, com Sensibilidade de 69,56%, e Especificidade (10/10) de 100,00%. Nos ensaios com amostras agrupadas, 13 pools (86,66%) foram positivos pela PCR em tempo real; a nested PCR também obteve positividade nos mesmos 13 pools (86,66%). <em class="hilite">Oem> teste imunocromatográfico SD Bioline apresentou Sensibilidade de 73,33% considerando <em class="hilite">oem> diagnóstico pela gota espessa. Tanto a PCR em tempo real como a nested PCR apresentaram boa sensibilidade e especificidade, seja nas amostras clínicas analisadas individualmente ou em pools, diferentemente do teste sorológico SD Bioline. Ambas as metodologias moleculares apresentaram desempenho semelhante, com bons resultados de acurácia e indicadores de validade, como Sensibilidade, Especificidade, Valor Preditivo Positivo e Negativo. Considerando-se as vantagens inerentes à PCR em tempo real, como rapidez, processamento em sistemas fechados e dispensa de eletroforese após amplificaçã<em class="hilite">oem>, este método deve ser indicado como primeira escolha para diagnóstico de malária em grande número de amostras, seguido da nested PCR para diferenciaçã<em class="hilite">oem> de espécies de Plasmodium. <em class="hilite">Oem> teste sorológico, que é específico… <em>Advisors/Committee Members: Santi, Sílvia Maria Fátima di.em>

▼ Introduçã<em class="hilite">oem> - A Infecçã<em class="hilite">oem> do Trato Urinário (ITU) é uma das doenças mais comuns, especialmente em mulheres jovens e sexualmente ativas, causada, na maioria das vezes, pela Escherichia coli. Este estudo objetiva analisar os fatores de risco associados com este tipo de infecçã<em class="hilite">oem>, além de estudar <em class="hilite">oem> perfil de resistência à genotipagem da E. coli. Pacientes e métodos - Foram avaliados 62 pacientes femininas, residentes em Santa Cruz do Sul, com idade variando entre 18 a 84 anos, com <em class="hilite">oem> diagnóstico ambulatorial de ITU nã<em class="hilite">oem> complicada. <em class="hilite">Oem> diagnóstico foi estabelecido na presença de sintomas urinários e urocultura com a contagem superior a 105 UFC/mL. Os pacientes responderam a um questionário para obtençã<em class="hilite">oem> de dados clínicos. A sensibilidade dos isolados de E. coli frente aos antimicrobianos foi determinada usando <em class="hilite">oem> método de difusã<em class="hilite">oem> em disco em meio Mueller Hinton. A genotipagem foi realizada através da técnica de reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase baseada na regiã<em class="hilite">oem> consenso repetitivo intergênica. Resultados: <em class="hilite">Oem> perfil de resistência bacteriana aos antibióticos testados foi de 22,6% para a sulfametoxazol-trimetoprim, 19,3% para a cefalexina, 8,1% para a norfloxacina, 4,8% para a gentamicina e 3,2% para a nitrofurantoína. A genotipagem revelou que 43,5% dos isolados clínicos de E. coli apresentavam relaçã<em class="hilite">oem> clonal. A comparaçã<em class="hilite">oem> dos dados clínicos dos pacientes que eram portadores de cepas formadoras de clones com os que nã<em class="hilite">oem> eram, revelou que nã<em class="hilite">oem> houve diferença entre os dois grupos em relaçã<em class="hilite">oem> ao perfil de resistência, idade da primeira infecçã<em class="hilite">oem> urinária, atividade sexual, história de doença renal no passado, número de episódios de ITU, hospitalizaçã<em class="hilite">oem>, uso prévio de antibióticos nos últimos 2 meses e presença de animal de estimaçã<em class="hilite">oem> em casa. A análise dos grupos classificados pelo resultado da genotipagem quanto ao perfil de resistência revelou que nã<em class="hilite">oem> há diferença estatisticamente significante nos níveis de resistência à cefalexina, à gentamicina, à nitrofurantoína, à norfloxacina e à sulfametoxazol-trimetoprim nos diferentes clones observados. Conclusã<em class="hilite">oem>: <em class="hilite">Oem> perfil de resistência da E. coli aos antibióticos testados mostrou altos níveis de resistência à SMT e à cefalexina. A genotipagem da E. coli identificou, em 43,5% dos isolados, a presença de uma relaçã<em class="hilite">oem> clonal embora nã<em class="hilite">oem> tenha sido observado uma associaçã<em class="hilite">oem> da relaçã<em class="hilite">oem> clonal com perfil de resistência e variáveis clínicas. <em>Advisors/Committee Members: Barros, Elvino José Guardã<em class="hilite">oem>.em>

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As ataxias espinocerebelares (SCAs) sã<em class="hilite">oem> doenças neurodegenerativas com herança autossômica dominante que apresentam grande heterogeneidade clínica e genética. <em class="hilite">Oem> diagnóstico é realizado pela detecçã<em class="hilite">oem> da mutaçã<em class="hilite">oem> no gene causador, que, na sua maioria, é uma expansã<em class="hilite">oem> de repetições trinucleotídicas CAG. <em class="hilite">Oem> objetivo deste estudo foi analisar os polimorfismos de repetições trinucleotídicas nos genes associados as SCAs tipo 1, tipo 2, tipo 3 e tipo 6 através de PCR-multiplex e eletroforese capilar, visando a melhoria do diagnóstico molecular e a determinaçã<em class="hilite">oem> da distribuiçã<em class="hilite">oem> das regiões polimórficas nos alelos normais. As análises foram realizadas em 124 pacientes nã<em class="hilite">oem>-aparentados que apresentavam sintomas de ataxia. Nessa amostra, foram identificados 10 pacientes com SCA2, 39 pacientes com SCA3 e 2 pacientes com SCA6. Nã<em class="hilite">oem> encontramos amostras com uma expansã<em class="hilite">oem> CAG no gene SCA1. Os polimorfismos de cada loci foram estudados nos cromossomos normais desses pacientes (n=209-248). A freqüência dos alelos normais grandes no locus SCA1 (>32 repetições CAG) foi estabelecida em 0,05 e no locus SCA2 (>22 repetições CAG) foi 0,11, enquanto que no locus SCA3 (alelos >28 repetições) a freqüência foi 0,11. A freqüência de alelos normais grandes para <em class="hilite">oem> locus SCA6 (>13 repetições) foi 0,04. Concluindo, este estudo proporcionou a primeira análise detalhada da distribuiçã<em class="hilite">oem> de repetições CAG nos loci SCA1, SCA2, SCA3 e SCA6 por amplificaçã<em class="hilite">oem> multiplex e eletroforese capilar em pacientes brasileiros. A freqüência dos alelos normais grandes nos genes SCA3 e SCA6 nessa amostra reflete a prevalência destas duas doenças na nossa populaçã<em class="hilite">oem>, concordando com a hipótese que alelos patogênicos podem ser originados pela expansã<em class="hilite">oem> de alelos normais grandes.

Spinocerebellar ataxias (SCAs) are neurodegenerative disorders inherited as an autosomal dominant trait that present large genetic and clinical heterogeneity. An accurate diagnosis relies on mutation detection in a specific causative gene, which is typically an abnormal number of CAG trinucleotide repeats. The aim of this study was to analyze polymorphic regions of trinucleotide repeats in SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 associated genes through multiplex PCR and capillary electrophoresis, aiming the improvement of molecular diagnosis and distribution of CAG repeats number in normal alleles. Analyses were carried out in 124 unrelated Brazilian patients who presented symptoms of progressive ataxia. To date, we identified 10 patients with SCA2, 39 patients with SCA3, and 2 patients with SCA6. No alleles were identified with a CAG expansion tract in the SCA1 gene. Normal CAG repeats length range was established using data from normal chromosomes (n=209-248). Frequency of large normal alleles in SCA1 locus (>32 CAG repeats) was determined to be 0.05. Frequency of large normal alleles at the SCA2 locus (>22 CAG repeats) was shown to be 0.11 while at the SCA3 locus (>28 CAG repeats) frequency of large normal alleles was 0.11. At the SCA6 locus, frequency of large normal alleles (>13 CAG repeats) was found to be…

<em>Advisors/Committee Members: Pereira, Maria Luiza Saraiva.em>

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Ureases (uréia amino-hidrolases; EC 3.5.1.5) sã<em class="hilite">oem> metaloenzimas níquel-dependentes, que catalisam a hidrólise da uréia à amônia e dióxido de carbono. Elas sã<em class="hilite">oem> produzidas por fungos, bactérias e plantas, mas nã<em class="hilite">oem> por animais. A soja produz duas isoenzimas, a urease ubíqua, que é codificada pelo gene Eu4, presente em pequenas quantidades em todos os tecidos da planta, e a urease embriã<em class="hilite">oem>-específica, codificada pelo gene Eu1, que é sintetizada apenas no embriã<em class="hilite">oem> em desenvolvimento. A urease ubíqua é responsável pela biodisponibilizaçã<em class="hilite">oem> de nitrogênio para planta, enquanto <em class="hilite">oem> papel da embriã<em class="hilite">oem>-específica permanece desconhecido. Estudos prévios, sugerem que esta urease possa estar envolvida na defesa da planta.Como a urease ubíqua é encontrada em pequenas quantidades em todos tecidos da planta, tornando difícil sua obtençã<em class="hilite">oem>, pouco é conhecido sobre esta enzima. No presente trabalho, estabeleceu-se um sistema de expressã<em class="hilite">oem> e purificaçã<em class="hilite">oem> parcial da urease ubíqua recombinante, expressa como uma proteína fusionada a uma cauda de glutationa-S-transferase (GST). <em class="hilite">Oem> gene da urease foi amplificado por PCR e ligado em plasmídeo pGEX-4T-2 e expresso em Escherichia coli BL21 (DE3). A urease recombinante foi parcialmente purificada em resina de afinidade Glutationa Sepharose 4B, obtendo-se um rendimento de aproximadamente 2 mg/L de cultura. A proteína recombinante foi analisada para atividade enzimática e imunorreatividade para anticorpos contra urease de Canavalia ensiformis.<em class="hilite">Oem> sucessodeste método de expressã<em class="hilite">oem> da urease ubíqua da soja, permitirá a produçã<em class="hilite">oem> de quantidades suficientes desta proteína para estudos posteriores de caracterizaçã<em class="hilite">oem>.

Urease (EC 3.5.1.5, urea amidohydrolase) is a nickel-dependent metalloenzyme, that catalyzes the hydrolysis of urea to form ammonia and carbon dioxide. Ureases are produced by many organisms, including plants, fungi and bacteria. Soybean produces two isoenzymes, the ubiquitous urease, which is encoded by Eu4 gene and is present in small amounts in all plant tissues, and the embryo-specific urease, which is encoded by the Eu1 gene, and is synthesized only in the developing embryo. The ubiquitous urease is responsible for recycling metabolically derived urea while the role of the embryo-specific urease remains unkown. Previous studies had suggested that the embryo-specific urease could be involved in plant defense. Since the ubiquitous urease is found in low amounts in plant tissues making difficult to purify the enzyme, little is known about this protein.In the present work, a system for the expression and partial purification of soluble soybean ubiquitous urease was established expressing a protein fusioned with glutathione S- transferase (GST). The urease gene amplified by PCR was inserted into a pGEX-4T-2 GST fusion vector and then expressed in Escherichia coli BL21 (DE3). The recombinant urease was partially purified by a Glutathione Sepharose 4B affinity chromatography, yielding about 2 mg protein/L of culture broth. The recombinant protein was tested for enzymatic activity and imunoreactivity…

<em>Advisors/Committee Members: Carlini, Celia Regina Ribeiro da Silva.em>

▼ Objetivos: Avaliar <em class="hilite">oem> desempenho e <em class="hilite">oem> custo-efetividade de duas técnicas de PCR (Polymerase Chain Reaction) in house: PCR dot-blot e <em class="hilite">oem> PCR utilizando a eletroforese em gel de agarose (PCR-AG) no diagnóstico de Tuberculose Pulmonar em pacientes infectados ou nã<em class="hilite">oem> pelo HIV . Material e Métodos: Um estudo prospectivo foi conduzido (de Maio de 2003 a Maio de 2004) em um Hospital de Referência para TB/HIV. Escarros de 277 indivíduos com suspeita de Tuberculose Pulmonar (PTB) foram testados pelas técnicas de microscopia direta pela coloraçã<em class="hilite">oem> de Ziehl-Neelsen (ZN), cultura e pelas metodologias de PCR in house (PCR dot-blot e PCR-AG). A acurácia dos testes foi avaliada de acordo com <em class="hilite">oem> status de HIV, com <em class="hilite">oem> status de tratamento prévio ou nã<em class="hilite">oem>, e com a estimativa de probabilidade pré-teste feita pelos pneumologistas. <em class="hilite">Oem> padrã<em class="hilite">oem> ouro utilizado foi a cultura positiva combinada com a definiçã<em class="hilite">oem> clínica de PTB (usando sintomas, fatores de risco e Raios-X). <em class="hilite">Oem> custo efetividade foi expresso por: a) custo por correto caso diagnosticado de Tuberculose; b) custo por correto caso diagnosticado de Tuberculose e tratado incluindo tratamento de casos falsamente diagnosticados; c) custo por casos incorretamente diagnosticados e nã<em class="hilite">oem> tratados. Resultados: Prevalência de PTB foi 46,2% (128/277); em HIV soropositivo (HIV+) foi de 54% (40/74). Em pacientes com baciloscopias negativas foi de 28,4% (43/151) e nos grupos com probabilidades pré-teste alta, intermediária e baixa foi de 67,4% (31/46); 24% (6/25) e 7,5% (6/80). A sensibilidade e a especificidade do PCR dot-blot foi 74% (CI 95%; 66,1%-81,2%) e 85% (CI 95%; 78,8%-90,3%); do PCR-AG foi 43% (CI 95%; 34,5%-51,6%) e 76% (CI 95%; 69,2%-82,8%), respectivamente. Sensibilidades do PCR dot-blot (72% vs 75%; p=0,46) e PCR-AG (42% vs 43%; p=0,54) foi similar para HIV+ and HIV seronegativo (HIV-). Em relaçã<em class="hilite">oem> ao efeito da suspeita clínica no desempenho do PCR em pacientes com PTB e com a baciloscopia negativa, <em class="hilite">oem> PCR dot-blot combinado com alta probabilidade pré-teste de TB mostrou uma sensibilidade, Valor Preditivo Negativo (VPN) e Razã<em class="hilite">oem> de Verossimilhança negativa (RV-) de 93%, 96% e 0,1, respectivamente. Usando a estratégia de associar ZN a Cultura, a PCR-AG e PCR dot-blot. A ZN associada à Cultura mostrou <em class="hilite">oem> melhor desempenho com sensibilidade de 94% e VPN de 99%, e RV- de 0,07, seguida da ZN associado ao PCR dot-blot com sensibilidade de 90%, com VPN de 99% e uma RV- de 0,12. Nã<em class="hilite">oem> houve diferença significativa no desempenho do PCR em relaçã<em class="hilite">oem> ao status de HIV. Na análise de custo-efetividade os custos por correto caso diagnosticado de Tuberculose foram U1.462,00 , U1.296,00 e U1.136,00; os custos por correto caso diagnosticado de Tuberculose e tratado, incluindo tratamento de casos falsamente diagnosticados, foram de US1.608,00 para a estratégia do ZN associado ao PCR-dotblot e de US2.359,00 para a estratégia de ZN associado a Cultura. Os custos por casos nã<em class="hilite">oem> diagnosticados que retornam aos serviços de saúde foram de US3.735,00 para a estratégia de ZN associado ao PCR-dot-blot e de US2.329,00 para… <em>Advisors/Committee Members: Kritski, Afrânio Lineu.em>

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Mancha marrom ou Helmintosporiose é uma das principais doenças do trigo, causada pelo fitopatógeno Bipolaris sorokiniana, sendo responsável por grandes perdas econômicas no cultivo do trigo no mundo inteiro. Este fungo apresenta uma grande diversidade morfológica, fisiológica e genética. Com objetivo de caracterizar a diversidade molecular de amostras monospóricas de B. sorokiniana isolados de sementes do Brasil e outros países, foram utilizados 60 isolados monospóricos tendo <em class="hilite">oem> DNA genômico desses isolados sido submetidos à amplificaçã<em class="hilite">oem> por PCR. Foram utilizados 12 oligonucleotídeos iniciadores universais construídos a partir de sequências repetidas do genoma do arroz (URP). Os perfis gerados foram analisados pelo método de médias aritméticas nã<em class="hilite">oem> ponderadas (UPGMA). <em class="hilite">Oem> método PCR – URP permitiu obter informações importantes sobre <em class="hilite">oem> perfil genético das culturas monospóricas mostrando distinções entre os três conídios isolados oriundos da mesma cepa polispórica. Os oligonucleotídeos URP-30F, URP-6R, URP-17R e URP-38Famplificaram com um elevado índice de isolados. Em contra partida, os oligonucleotideos URP-13R, URP- 25F e URP-32F apresentaram um perfil de amplificaçã<em class="hilite">oem> menor entre os isolados do fitopatógeno. <em class="hilite">Oem> número total de fragmentos gerados com cada um dos oligonucleotídeos variou entre 41 e 77 fragmentos. Os oligonucleotídeos URP-17R, URP-30F, URP-32F e URP-6R apresentaram maior índice de fragmentos polimórficos. Os isolados apresentaram uma grande diversidade intra-especifíca entre os oligonucleotideos iniciadores URP e entre os conídios monospóricos. A análise forneceu informações relevantes sobre a variabilidade genética e a relaçã<em class="hilite">oem> entre os isolados de B. sorokiniana.

Leaf spot disease or helmintosporiosis is one of the most important diseases of wheat cultures caused by the phytopathogem Bipolaris sorokiniana. It is responsible for great economic loss of wheat cultivation worldwide. This fungus presents a great morphologic, physiologic and genetic diversity. The aim of this study was to characterize the molecular diversity of B. sorokiniana monosporic isolates isolated from seeds from Brazil and other countries. For this purpose 60 monosporic isolates were used. The genomic DNA of this isolates were submitted to PCR amplification using 12 universal primers built from repeated sequences of rice genome (URP). The analysis of the amplification profile were calculated by Unweighted Pair Group Arithmetic Mean (UPMGA) Method. The PCR-URP method provided important information about the genetic profile to the monosporic culture, showing distinctions between the three spore isolates of the same polysporic strain. The primers URP-30F, URP-6R, URP-17R and URP-38F were able to amplify a higher percentage of the isolates been the more efficient in the study of this phytopathogen. However, the primers URP-13R and URP-32F have shown a lower amplification profile between the B. sorokiniana isolates. The number of fragments that resulted from the amplification of each primer had varied between 41 and 77 fragments. The…

<em>Advisors/Committee Members: Van der Sand, Sueli Terezinha.em>

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<em class="hilite">Oem> papel dualístico exercido por Enterococcus na natureza estimula a pesquisa dos fatores que determinam sua virulência. <em class="hilite">Oem> objetivo desse estudo foi investigar a distribuiçã<em class="hilite">oem> de genes envolvidos com fatores de virulência entre isolados de Enterococcus e sua correlaçã<em class="hilite">oem> com a capacidade de formaçã<em class="hilite">oem> de biofilme e confirmar a identificaçã<em class="hilite">oem> de E. casseliflavus e E. gallinarum por PCRRFLP. Foram analisados 66 isolados clínicos e 70 alimentares quanto a presença dos genes gelE, esp, agg, ace e cylA por PCR e atividade de gelatinase e citolisina. Isolados clínicos apresentaram maior incidência de fatores de virulência quando comparados com alimentares, exceto para os genes gelE e ace. Em ambas amostragens houve a ocorrência de isolados positivos para os genes gelE e cylA, porém sem atividade enzimática, indicando a presença de genes silenciosos. A maioria dos isolados apresentou capacidade de formaçã<em class="hilite">oem> de biofilme, entretanto nã<em class="hilite">oem> houve uma correlaçã<em class="hilite">oem> entre os genes analisados e <em class="hilite">oem> fenótipo de formaçã<em class="hilite">oem> de biofilme, porém é possível que <em class="hilite">oem> gene ace e gelE atuem como potencializadores na formaçã<em class="hilite">oem> de biofilmes em Enterococcus. Para testar a técnica de PCR-RFLP, 32 e 20 isolados de E. gallinarum e E. casseliflavus, respectivamente, identifcados bioquimicamente foram avaliados. <em class="hilite">Oem> fragmento de 661 bp correspondente a uma regiã<em class="hilite">oem> conservada do 16S rDNA foi clivado com HinfI e 47% E. gallinarum e 25% E. casseliflavus apresentaram fragmentos de 589bp e 72bp, padrã<em class="hilite">oem> esperado para <em class="hilite">oem> PCR-RFLP. Assim sendo, a PCR-RFLP mostrou ser uma ferramenta molecular útil na confirmaçã<em class="hilite">oem> das espécies E. casseliflavus e E. gallinarum.

The dualistic role played by enterococci in the nature, encourages the study of virulence factors. The aim of this study was to investigate the distribution of genes involved in virulence among Enterococcus isolates and to correlate with biofilm formation ability and to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples by PCR-RFLP. Sixty six clinical and 70 food isolates were analyzed for the presence of gelE, esp, agg, ace and cylA genes by PCR and the gelatinase and cytolysin activities. Clinical isolates showed a higher incidence of virulence factors when compared to food isolates, except for gelE and ace genes. In both samples was observed the occurrence of isolates positive for gelE and cylA genes, but with no enzymatic activities, indicating the presence of silent genes. Most isolates showed ability to form biofilm, although there was no correlation between the presence of the genes and the phenotype of biofilm formation, but it is possible that ace and gelE genes perform as enhancers in biofilm formation in Enterococcus. To test the PCR-RFLP tecnhique, 32 and 20 strains identified by conventional biochemical exams as E. casseliflavus E. gallinarum, respectively, were were submitted to PCR amplification and digested with HinfI.. The DNA fragment of 661 bp corresponding to a conserved region of 16S rDNA was cleaved with HinfI and 47% and 25% of…

<em>Advisors/Committee Members: Frazzon, Ana Paula Guedes.em>

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As pneumonias sÃ<em class="hilite">oem> problemas de saÃde publica mundial, especialmente em crianÃas menores que cinco anos de idade. Os vÃrus parainfluenza (VPI-1, 2 e 3) sÃ<em class="hilite">oem> agentes frequentes de pneumonia, pouco se conhecendo sobre a participaÃÃ<em class="hilite">oem> do VPI-4 devido a dificuldades do seu isolamento em cultura de cÃlulas, a ausÃncia de antÃgenos especÃficos para este vÃrus nos painÃis de rotina de detecÃÃ<em class="hilite">oem> dos vÃrus respiratÃrios, alÃm de serem relacionados apenas a casos de infecÃÃes respiratÃrias leves. <em class="hilite">Oem> objetivo do presente estudo à descrever <em class="hilite">oem> perfil epidemiolÃgico e clÃnico das pneumonias causadas pelos quatro tipos de VPI na populaÃÃ<em class="hilite">oem> de estudo, no perÃodo de janeiro de 2013 a dezembro de 2014. Para tanto, aspirados nasofarÃngeos de 542 crianÃas de atà cinco anos atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS), que receberam <em class="hilite">oem> diagnÃstico de pneumonia, foram submetidos à RT-PCR para a detecÃÃ<em class="hilite">oem> dos VPI-1, 2 e 3 e 4. Estas amostras tinham sido analisadas anteriormente por imunofluorescÃncia indireta para vÃrus sincicial respiratÃrio (VSR), influenza (A e B), adenovÃrus e VPI (1, 2 e 3). Os VPI foram detectados em 165 casos, seguido de VSR (136), adenovÃrus (34) e influenza (30). As caracterÃsticas clÃnicas e epidemiolÃgicas de pneumonias pelos VPI foram analisadas em 104 amostras que apresentaram infecÃÃ<em class="hilite">oem> isolada por um dos quatro tipos de VPI. Os VPI mais frequentemente detectados, em ordem decrescente, foram os tipos VPI-3 (64,42%), VPI-4 (19,23%), VPI-1(14,42%) e VPI-2 (1,92%). <em class="hilite">Oem> VPI-4 foi <em class="hilite">oem> mais associado a co-infecÃÃes. <em class="hilite">Oem> VPI-4 foi <em class="hilite">oem> Ãnico VPI cuja circulaÃÃ<em class="hilite">oem> esteve associada à estaÃÃ<em class="hilite">oem> chuvosa dos dois anos de estudo (p<0,0001). <em class="hilite">Oem> VPI-3 e <em class="hilite">oem> VPI-1 apresentaram pico de circulaÃÃ<em class="hilite">oem> associado à estaÃÃ<em class="hilite">oem> seca. Os VPI sÃ<em class="hilite">oem> agentes frequentes de pneumonias em crianÃas menores que cinco anos na cidade de Fortaleza.

Pneumonia are public health problems worldwide, especially in children younger than five years old. Human parainfluenza virus (HPIV-1, 2 and 3) are common agents of pneumonia, little was know about the involvement of HPIV-4 due to difficulties of isolation in cell culture, the absence of antigens specific for this virus in panels routine detection of respiratory viruses, and are associated only with cases of mild respiratory infections. The aim of this study is to describe the clinical and epidemiological profile of pneumonia caused by four types of HPIV in the study population, from January 2013 to December 2014. To this end, nasopharyngeal aspirates of 542 children under five treated at Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS), who were diagnosed with pneumonia, were subjected to RT-PCR for the detection of HPIV-1, 2, 3 and 4. These samples had been previously analyzed by indirect immunofluorescence for respiratory syncytial virus (RSV), influenza (A and B), adenovirus, and HPIV (1, 2 and 3). The HPIV were detected in 165 cases, followed by RSV (136), adenovirus (34) and influenza (30). Clinical and epidemiological characteristics of pneumonia by HPIV were analyzed in 104 samples with isolated infection with one of four…

<em>Advisors/Committee Members: Fernanda Edna AraÃjo Moura, Maria Fatima da Silva Teixeira, DÃbora Castelo Branco de Souza Collares Maia, SÃnia Mara Raboni.em>

▼ A tuberculose é uma das principais causas de morte ao redor do mundo envolvendo um único agente infeccioso, <em class="hilite">oem> Mycobacterium tuberculosis. A severidade desta epidemia global é exacerbada pela co-infecçã<em class="hilite">oem> com <em class="hilite">oem> HIV, que alterou drasticamente a epidemiologia da mesma, causando um aumento na dinâmica de transmissã<em class="hilite">oem>, morbidade e mortalidade dos infectados, e com <em class="hilite">oem> surgimento de cepas multi-resistentes a drogas. No Brasil, praticamente um milhã<em class="hilite">oem> de pessoas está infectado. Com <em class="hilite">oem> avanç<em class="hilite">oem> da genética e biologia molecular, diversos tipos de métodos laboratoriais vêm sendo utilizados para <em class="hilite">oem> rápido diagnóstico e estudo da patogenicidade de doenças infecciosas de diversos microorganismos. A disponibilidade de seqüências genômicas de um grande número de microrganismos patogênicos proverá uma melhor compreensã<em class="hilite">oem> de sua genética evolutiva, virulência e interações com <em class="hilite">oem> hospedeiro. <em class="hilite">Oem> presente estudo tratou da implementacã<em class="hilite">oem> de um teste para deteccã<em class="hilite">oem> e quantificaçã<em class="hilite">oem> absoluta de Micobacterium sp. a partir do emprego da reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase associada a fluorescência. Para tanto, <em class="hilite">oem> gene da enoil-ACP redutase NADHdependente (inhA) foi selecionado como gene identificador e primers e sonda marcada com fluoróforo (TaqMan) foram desenhados. Padrões para quantificaçã<em class="hilite">oem> absoluta foram produzidos a partir da clonagem da sequencia identificadora em plasmídios, sendo posteriormente empregados em ensaios para quantificacã<em class="hilite">oem> de amostras de DNA isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose e células de M. tuberculosis em cultura. Os resultados mostraram que <em class="hilite">oem> sistema utilizando a inhA como gene identificador nas condições implementadas foi capaz de amplificar de 106 a 101 células de M.tuberculosis em cultura. Comparativamente ao método da espectrofotometria, <em class="hilite">oem> ensaio em tempo real empregando <em class="hilite">oem> gene da inhA foi mais sensível, apresentando menor variaçã<em class="hilite">oem> em número absolutos. Amostras de DNA (n=13) isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose de ++ e +++ foram submetidas ao ensaio e foram postivamente detectadas com variaçã<em class="hilite">oem> de três ordens de magnitude. Amostras de indivíduos controle saudáveis nã<em class="hilite">oem> apresentaram sinal positivo, atestando a especificidade do sistema. <em>Advisors/Committee Members: Diógenes Santiago Santos.em>

▼ <em class="hilite"><em class="hilite">Oem>em> adenocarcinoma colorretal é uma das neoplasias mais incidentes no ser humano. A expressã<em class="hilite">oem> do Fator Tecidual (FT) foi associada ao desenvolvimento de metástases e a um pior prognóstico em várias neoplasias malignas, sendo considerado um dos mais importantes fatores pró-angiogênicos. Este estudo teve como objetivo principal demonstrar a expressã<em class="hilite">oem> diferencial do FT em adenocarcinomas colorretais através da técnica de quantificaçã<em class="hilite">oem> de ácidos nucléicos (mRNA) por Reaçã<em class="hilite">oem> de Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR), Foram estudados blocos de parafina de 19 pacientes com tumor (casos) e 15 sem tumor (controles) do banco de dados, do Serviç<em class="hilite">oem> de Colo-proctologia do Hospital Sã<em class="hilite">oem> Lucas da PUCRS. A intensidade da expressã<em class="hilite">oem> do TF foi comparada com a DMV e com dados clínicos e anatomo-patológicos. <em class="hilite">Oem> grupo tumor apresentou expressã<em class="hilite">oem> do FT maior do que <em class="hilite">oem> grupo controle (p< 0,001), e teve uma expressã<em class="hilite">oem> do FT em média 7,33 vezes maior do que <em class="hilite">oem> grupo controle. Houve associaçã<em class="hilite">oem> significativa entre a presença de metástase e a expressã<em class="hilite">oem> aumentada do FT (p= 0,001), bem como entre a idade e a expressã<em class="hilite">oem> do FT nos pacientes com tumor (p=0,026); entretanto, nã<em class="hilite">oem> foi encontrada associaçã<em class="hilite">oem> entre a expressã<em class="hilite">oem> do Fator Tecidual e a Densidade microvascular, (p=0,67), e em relaçã<em class="hilite">oem> a localizaçã<em class="hilite">oem> dos tumores e sexo dos pacientes. Em conclusã<em class="hilite">oem>, a expressã<em class="hilite">oem> diferencial do FT do grupo tumor foi significativamente mais alta do que no grupo controle. Apresentou ainda uma associaçã<em class="hilite">oem> positiva com a idade mais elevada dos pacientes e com a presença de metástases. <em>Advisors/Committee Members: Vinícius Duval da Silva.em>

▼ Papilomavírus bovinos (BPVs), vírus da família Papillomaviridae, acometem <em class="hilite">oem> gado com a induçã<em class="hilite">oem> do aparecimento de verrugas, cânceres de bexiga e do trato digestório, causando importantes prejuízos à economia pecuarista. Dez tipos de BPV já foram bem caracterizados (BPV-1 a 10). <em class="hilite">Oem> presente trabalho teve como foco detectar seqüências do genoma de BPVs em amostras de sangue de animais de uma fazenda leiteira em Pernambuco e nas culturas de linfócitos correspondentes, visando investigar a presença dos tipos virais, mais especificamente 1, 2 e 4, verificar a presença simultânea de mais de um tipo viral e <em class="hilite">oem> eventual tipo mais freqüente. Para <em class="hilite">oem> diagnóstico viral, utilizou-se a técnica da reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase (PCR), empregando-se iniciadores específicos para os tipos 1, 2 e 4, direcionados aos genes L1, L2 e E7, respectivamente. A confirmaçã<em class="hilite">oem> dos produtos amplificados foi realizada com digestã<em class="hilite">oem> enzimática e posterior seqüenciamento. Foram detectadas seqüências virais em todos os animais trabalhados, independente da presença de papilomas aparentes. Os tipos 1 e 2 foram detectados diretamente de amostras de sangue e em cultura celular de linfócitos, enquanto que <em class="hilite">oem> tipo 4 nã<em class="hilite">oem> foi detectado em nenhuma das amostras. Os resultados positivos puderam ser confirmados por digestã<em class="hilite">oem> enzimática. A presença viral em sangue corrobora trabalhos descritos na literatura que discutem a disseminaçã<em class="hilite">oem> do BPV pelo sangue, enquanto que a detecçã<em class="hilite">oem> em cultura indica manutençã<em class="hilite">oem> viral neste sistema. A partir do seqüenciamento de algumas amostras positivas para BPV-1, sugeriu-se uma nova variante viral, quando comparadas às seqüências depositadas no GenBank. Faz-se necessário a ampliaçã<em class="hilite">oem> deste estudo, abordando-se outras fazendas importantes do Estado. Em conclusã<em class="hilite">oem>, os resultados obtidos neste trabalho geram maiores conhecimentos acerca de BPV em Pernambuco, mais especificamente no município de Ribeirã<em class="hilite">oem> <em>Advisors/Committee Members: de Cássia Stocco, Rita (advisor).em>

▼ Introduçã<em class="hilite">oem>: A psoríase é uma doença inflamatória sistêmica crônica que afeta predominantemente a pele e as articulações. Sua etiologia é multifatorial e ainda nã<em class="hilite">oem> completamente entendida. A suscetibilidade genética à psoríase é um fator causal importante, e vários genes e polimorfismos têm sido associados à sua ocorrência. Poucos estudos avaliaram a influência dos polimorfismos C677T e A1298C do gene metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) na suscetibilidade à psoríase em diferentes populações (asiáticos e caucasides), e os resultados foram contraditórios. Material e métodos: Foram estudados 339 indivíduos caucasoides; desses, 142 eram pacientes com diagnóstico clínico de psoríase e 197 controles. Os grupos foram comparados quanto à freqüência dos polimorfismos C677T e A1298C do gene MTHFR através de reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase. Resultados: Para <em class="hilite">oem> polimorfismo C677T do gene MTHFR, a prevalência do genótipo mutante foi de 16,0% nos casos e 9,1% nos controles (p=0,103). Quando comparados os genótipos CC versus CT+TT, nã<em class="hilite">oem> houve diferença entre os grupos (p=0,605). A prevalência do genótipo CC para <em class="hilite">oem> polimorfismo A1298C foi de 2,8% nos casos e 4,1% nos controles (p=0,824). Quando comparados os genótipos AA versus AC + CC também nã<em class="hilite">oem> houve diferença significativa (p=0,943). A análise combinada dos genótipos foi similar entre os grupos. Conclusã<em class="hilite">oem>: Nossos resultados nã<em class="hilite">oem> indicam qualquer associaçã<em class="hilite">oem> entre os polimorfismos C677T e A1298C do gene MTHFR e suscetibilidade à psoríase nem demonstraram açã<em class="hilite">oem> sinérgica da presença de ambos na reduçã<em class="hilite">oem> de atividade da enzima MTHFR. <em>Advisors/Committee Members: Picon, Paulo Dornelles.em>

▼ The relationship between periodontal disease (PD) and diabetes mellitus (DM) is bidirectional, however, there is a need for more evidence regarding basic periodontal treatment on clinical aspects and the presence of bacteria in patients with and without diabetes. Thus, the present study aimed to evaluate the influence of type II diabetes mellitus (DM) on the efficacy of basic periodontal treatment through the clinical and microbiological parameters of saliva. Fifty-one patients were treated between 30 and 65 years of age using the "Full Mouth Disinfection" (FMD) technique, 17 in the diabetic group (DG) and non-diabetic group (NDG). These patients were evaluated before the beginning of the periodontal treatment, at 6 and 12 months after its conclusion. In the periodontal examination, the Bleeding on Probing (BOP), Visible Plaque Index (VPI), Probing Depth (PD), Gingival Recession (RG) and Clinical Attachment Level (CAL) were evaluated. The blood parameters evaluated were fasting glucose and glycated hemoglobin (HbA1C) only for DG. Saliva samples were collected before each periodontal examination. Quantification of the bacterial species Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, and Tannerella forsythia through the real-time polymer chain reaction (PCR) technique was performed. The results showed that the clinical parameters showed a significant improvement for ISS, IPV and PS for both groups, whereas for NCI only for GD (p = 0.023). Regarding the microbiological parameters, there were no differences between the group with diabetes and no diabetes in the evaluated periods, only Tanerella forsythia presented a statistically significant difference in the 12-month period (p = 0.004), with a higher median for the NDD group. In the intragroup analysis, only the DG presented statistical difference for all species evaluated (p <0.05), in which there was reduction after treatment, but increase after the evaluation of 6 months. The species Porphyromonas gingivalis increased significantly after 12 months, in this period of evaluation it obtained median higher than baseline. <em>Advisors/Committee Members: Gurgel, Bruno César de Vasconcelos (advisor), 02569549410 (advisor), http://lattes.cnpq.br/4649601602612601 (advisor).em>

▼ Este trabalho decorre do estudo ecoepidemiologico da entomofauna Triatominae (Hemiptera: Reduviidae) e distribuiçã<em class="hilite">oem> populacional das unidades discretas de tipagem (DTU) de Trypanosoma cruzi em Mato Grosso do Sul, Brasil. Foi analisado <em class="hilite">oem> conteúdo intestinal de 515 triatomíneos, utilizando-se microscopia óptica e a Reaçã<em class="hilite">oem> em Cadeia da Polimerase (PCR) para identificaçã<em class="hilite">oem> de Trypanosoma cruzi. As amostras positivas para <em class="hilite">oem> parasito, proveniente de 12 triatomíneos, foram submetidas a uma segunda PCR, cujo alvo era <em class="hilite">oem> gene cromossômico TcSC5D, seguido da técnica de polimorfismo no comprimento de fragmentos de restriçã<em class="hilite">oem> (RFLP) com enzimas de restriçã<em class="hilite">oem> HpaI e SphI, clonagem e sequenciamento do amplificado. Em uma segunda etapa foram analisados, a partir de dados secundários, 14.178 espécimes de insetos vetores de T. cruzi capturados em 50 municípios de Mato Grosso do Sul em um período de nove anos e a influência de fatores climáticos, como temperatura, umidade relativa do ar e precipitaçã<em class="hilite">oem>, sobre sua frequência. Observou-se que a PCR foi mais precisa na identificaçã<em class="hilite">oem> do parasito que <em class="hilite">oem> exame de microscopia (19,6% e 11,3%, respectivamente). Foram identificadas três unidades discretas de tipagem (DTU): TcI (58,34%), TcII (33,33%) e TcBat/TcVII (8,33%). A espécie mais frequente no estado é Triatoma sordida (96,22%) e a maioria dos espécimes foi coletada em peridomicílio (85,06%). Verificou-se que a frequência desses insetos foi afetada por fatores climáticos como temperatura e umidade relativa do ar, sendo esta última a mais influente. Este trabalho aponta que os dados oficiais das taxas de infecçã<em class="hilite">oem> natural dos triatomíneos podem estar subestimados em todo <em class="hilite">oem> estado, apresenta a distribuiçã<em class="hilite">oem> de três linhagens de T. cruzi, sendo que esse é <em class="hilite">oem> primeiro relato de infecçã<em class="hilite">oem> natural por TcBat/TcVII em triatomíneos e que as características climáticas ao longo do ano devem ser observadas pelas equipes de controle de vetores. Tais achados podem subsidiar programas de controle do vetor, propiciando a otimizaçã<em class="hilite">oem> dos recursos destinados às ações de prevençã<em class="hilite">oem> e controle da transmissã<em class="hilite">oem> vetorial de T. cruzi em Mato Grosso do Sul. <em>Advisors/Committee Members: Andreotti, Renato (advisor).em>

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Esta pesqusisa teve como objetivo demonstrar a expressã<em class="hilite">oem> diferencial do fator tecidual (FT) em tumor de Wilms (TW), através de um estudo do tipo transversal. <em class="hilite">Oem> TW é a neoplasia renal maligna mais comum na infância. Os estudos sobre angiogênese em neoplasias malignas pediátricas apresentam possíveis vias de terapias antiangiogênicas, com menor agressividade e melhor especificidade tumoral. E, entre os fatores angiogênicos possíveis, foi estudo <em class="hilite">oem> Fator Tecidual (FT), proteína transmebrana com sua principal funçã<em class="hilite">oem> no processo de hemostasia, mas que demonstra ter importante papel nos processos patológicos de tumorigênese, angiogênese e microambiente tumoral favorável à disseminaçã<em class="hilite">oem> neoplásica. Sua expressã<em class="hilite">oem> vem sendo associada às metástases e piora no prognóstico. Contuto, só a partir da pesquisa de Maciel et al (1) que a associaçã<em class="hilite">oem> do FT com TW foi observada, onde se encontrou, utilizando imunoistoquímica, a correlaçã<em class="hilite">oem> positiva entre a expressã<em class="hilite">oem> do FT, recidiva tumoral e óbito. Entã<em class="hilite">oem>, a partir desses dados iniciais, a presente pesquisa analisou uma amostra com 27 espécimes fixadas em parafina de TW e 26 controles (á<em class="hilite">reaem> sem TW), para demonstrar a expressã<em class="hilite">oem> diferencial do FT em TW, através da técnica de quantificaçã<em class="hilite">oem> de ácidos nucléicos (RNAm) por Reaçã<em class="hilite">oem> Cadeia de DNA Polimerase em Tempo Real (RT-PCR), avaliar a expressã<em class="hilite">oem> do FT em diferentes componentes tumorais, com a densidade microvascular (DMV) do TW e a ocorrência de metástases. Foi observado aumento da expressã<em class="hilite">oem> diferencial do FT no TW, sua maior variaçã<em class="hilite">oem> do FT foi encontrada nos componentes blastematoso e epitelial, enquanto no componente estromal apresentou variaçã<em class="hilite">oem> mínima em relaçã<em class="hilite">oem> ao tecido nã<em class="hilite">oem> tumoral, em lesões metastáticas <em class="hilite">oem> FT se mostrou significativamente mais elevado, sugerindo um papel importante para essa proteína no processo de disseminaçã<em class="hilite">oem> dessas células malignas, <em class="hilite">oem> aumento da DMV apresentou associaçã<em class="hilite">oem> positiva com a expressã<em class="hilite">oem> do FT. Os resultados apresentados corroboram os achados de Maciel et al (1) de forma mais concisa e quantitativa, enfatizando a importância do FT na biologia do TW

The Wilms Tumors (WT) is the most frequent renal tumors of children, and although curable, fatal outcomes may occur. A number a genetic alterations have been suggested as associated factors but still, the exact pathogenesis of WT remains to be fully characterized. Tissue factor (TF) is a glycoprotein which happens to be a key receptor for factor VII/VIIa and is the primary initiator of blood coagulation. Also important, TF has been associated with processes that lead to angiogenesis. It is widely expressed among cells and tissues and recent evidences pointed out an important role for TF in cancer progression and metastasis. Recent evidences suggested that TF may have a role in WT since its immunodetection was associated with poor prognosis. In the present investigation the differential expression of TF was assessed in WT using real-time PCR of RNA retrieved from paraffin sections using microdissection. Different histological components of WT - (blastema, epithelial…

<em>Advisors/Committee Members: Vinícius Duval da Silva.em>

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Pre-exposure to low doses of LPS induces resistance to a lethal challenge, a phenomenon known as endotoxin tolerance. In this study, tolerance was induced in human PBMC by culturing cells with 1 ng/mL LPS for 48 h. Cells were subsequently challenged with 100 ng/mL LPS for 2, 6 and 24 h, and the expression of 84 genes encoding proteins involved in the TLR signaling pathway was evaluated at each time point by PCR array. LPS pretreatment did not modulate the expression of TLR4 and CD14 on the surface of monocytes. A gene was defined as tolerized when LPS pretreatment reversed the effect of LPS challenge on the expression of the gene or as non-tolerized when LPS pretreatment did not reverse the effects of LPS challenge. We observed impaired or attenuated signal transduction through the NF-κB, JNK, ERK and TRIF pathways, whereas expression of p38 pathway-related genes was preserved in LPStolerant cells. These results show a distinct regulation of the TLR pathway cascades during tolerance; this may account for the differential gene expression of some inflammatory mediators, such as up-regulation of IL-10 and COX2 as well as down-regulation of TNF-α and IL-12. Depending on the effect of LPSinduced gene up-regulation or down-regulation, tolerance, as a reversion of such LPS effects, may result in repression or induction of gene expression.

Pré-exposiçã<em class="hilite">oem> a pequenas doses de LPS induz resistência a uma dose letal de LPS, um fenômeno conhecido como tolerância à endotoxina. A pré-exposiçã<em class="hilite">oem> ao LPS modula <em class="hilite">oem> padrã<em class="hilite">oem> de resposta celular, conforme ilustrado pela expressã<em class="hilite">oem> gênica e síntese protéica alteradas de citocinas inflamatórias. No entanto, os mecanismos envolvidos neste processo ainda sã<em class="hilite">oem> parcialmente descritos. Interessante, as células tolerantes ao LPS assemelham-se àquelas obtidas de pacientes sépticos. Métodos: Tolerância ao LPS foi induzida em células mononucleares do sangue periférico humanas pela incubaçã<em class="hilite">oem> destas com 1 ng/mL de LPS durante 48 horas. Após este período, as células foram desafiadas com 100 ng/mL de LPS por 2, 6 e 24 horas. Em cada um destes momentos, foi avaliada a expressã<em class="hilite">oem> de 84 genes relacionados à via dos receptores do tipo Toll, por PCR array. Resultados: <em class="hilite">Oem> pré-tratamento com LPS nã<em class="hilite">oem> modulou a expressã<em class="hilite">oem> de CD14 e TLR4 na superfície de monócitos, demonstrando que a tolerância nã<em class="hilite">oem> ocorreu devido à modulações dos receptores do LPS. Um gene foi considerado tolerizável quando <em class="hilite">oem> pré-tratamento com LPS reverteu <em class="hilite">oem> efeito causado na expressã<em class="hilite">oem> gênica pelo desafio com LPS; enquanto um gene foi considerado nã<em class="hilite">oem> tolerizável quando <em class="hilite">oem> pré-tratamento com LPS nã<em class="hilite">oem> reverteu <em class="hilite">oem> efeito do desafio com LPS. As cascatas no NF-κB, JNK, ERK e TRIF estavam bloqueadas ou atenuadas em células tolerantes, enquanto a expressã<em class="hilite">oem> dos genes relacionados à cascata da p38 estava aumentada. Conclusã<em class="hilite">oem>: Esses resultados demonstram uma regulaçã<em class="hilite">oem> distinta entre as cascatas da via de sinalizaçã<em class="hilite">oem> dos TLRs durante a tolerância. Além disso, este achado pode explicar a regulaçã<em class="hilite">oem> diferenciada entre alguns mediadores inflamatórios,…

<em>Advisors/Committee Members: Ismael Dale Cotrim Guerreiro da Silva, Reinaldo Salomã<em class="hilite">oem>, Hugo Caire de Castro Faria Neto, Francisco Garcia Soriano.em>

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Associações simbióticas, comensais e parasitárias sã<em class="hilite">oem> amplamente relatadas em insetos. Pelo fato de larvas de culicídeos e amebas de vida livre (AVL) habitarem meios aquáticos similares, objetivou-se verificar a prevalência de Acanthamoeba spp. em populações silvestres de Aedes aegypti. Esta AVL foi investigada em 60 pools contendo 10 larvas de A. aegypti, as quais foram coletadas através de ovitrampas instaladas em diversos bairros da cidade de Porto Alegre (RS, Brasil). Os isolados de Acanthamoeba spp. foram caracterizados morfologicamente e submetidos à técnica de Reaçã<em class="hilite">oem> em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmaçã<em class="hilite">oem> do gênero. Ademais, realizouse análise genotípica e testes presuntivos de patogenicidade para algumas cepas. Entre os pools, 54 (90%) foram positivos para AVL, dos quais 47 (87%) isolados eram pertencentes ao gênero Acanthamoeba. Os grupos genotípicos T4, T3 e T5 foram identificados, correspondendo a 14 (53,8%), 10 (38,5%) e dois (7,7%) isolados, respectivamente. De acordo com testes fisiológicos empregados para 14 cepas, 12 (85,7%) foram consideradas nã<em class="hilite">oem> patogênicas e duas (14,3%) foram consideradas com baixo potencial patogênico. Estes resultados servem como base para um maior conhecimento acerca da interaçã<em class="hilite">oem> entre estes protozoários e mosquitos vetores, em seu habitat natural. Além disso, é <em class="hilite">oem> primeiro estudo dedicado ao isolamento de Acanthamoeba spp. a partir de culicídeos coletados do ambiente.

Symbiotic, commensal and parasitic associations are widely reported in insects. By the fact of mosquito larvae and free-living amoebae (FLA) occupy the similar aquatic sites, the aim of this study was to determine the prevalence of Acanthamoeba spp. in Aedes aegypti larvae collected in the environment. The amoebae were investigated in 60 pools, each containing 10 larvae of A. aegypti which were collected by using larvitraps installed in various districts of Porto Alegre (RS, Brazil). Acanthamoeba isolates were morphologically characterized and submitted to Polymerase Chain Reaction technique to confirm the genus. In addition, genotype analyses as well as presumptive tests for pathogenicity in some samples were performed. Among the pools, 54 (90%) were positive for FLA. From those isolates, 47 (87%) belong to the genus Acanthamoeba. The genotype groups T4, T3 and T5 have been identified corresponding to 14 (53.8%), 10 (38.5%) and two (7.7%) isolates respectively. The physiological tests performed in 14 strains showed that 12 (85.7%) were non pathogenic, while two (14.3%) were considered with low pathogenic potential. These results provide a basis for a better understanding between these protozoan and mosquitoes interaction in their natural habitat. Moreover, this study is the first to report isolation of Acanthamoeba spp. from mosquitoes collected in the environment.

<em>Advisors/Committee Members: Silva, Onilda Santos da.em>

▼ Introduçã<em class="hilite">oem>: <em class="hilite">Oem> Papilomavírus Humano (HPV) e <em class="hilite">oem> Herpesvírus Humano-8 (HHV- 8) podem influenciar na carcinogênese de lesões anogenitais e orofaríngeas na mulher e no homem. Métodos: A amostra foi de trinta e um casais heterossexuais. Foram avaliados condições sócio-econômicas, hábitos gerais e sexuais e história prévia de doenças sexualmente transmissíveis, seguido da coleta de esfregaç<em class="hilite">oem> peniano de lesões malignas e/ou potencialmente malignas possivelmente associadas ao HPV. As respectivas parceiras foram submetidas a coleta de esfregaç<em class="hilite">oem> de vagina/colo uterino, exame de colposcopia e citologia cervical, exame clínico e coleta de esfregaç<em class="hilite">oem> de mucosa oral. A pesquisa do HPV e HHV-8 foi realizada através da reaçã<em class="hilite">oem> da cadeia de polimerase (PCR) com a utilizaçã<em class="hilite">oem> dos primers MY09 e MY11 e primers KS1 e KS2. Resultados: Foi amplificado HPV-DNA a partir de esfregaç<em class="hilite">oem> de pênis (P) de 22/31 (71%); 18/31 (58,1%) das amostras de vagina/colo (V) e 17/31 (54,8%) mucosa oral (B). Com relaçã<em class="hilite">oem> ao HHV-8, foi amplificado DNA em 1/31 (3,2%) indivíduos avaliados (P), 0/31 (0%) (V) e 3/31 (9,7%) (B). Observamos que entre <em class="hilite">oem> mesmo casal nã<em class="hilite">oem> houve amplificaçã<em class="hilite">oem> do HHV-8-DNA em mais de um sítio estudado. De todos os casos positivos para HPV (P, V e B) e HHV-8 (P e B) foi observada associaçã<em class="hilite">oem> significante (p=0,030). Conclusã<em class="hilite">oem>: Pode haver uma co-infecçã<em class="hilite">oem> entre <em class="hilite">oem> HPV e HHV-8 em diferentes sítios. Nã<em class="hilite">oem> foi observado a transmissã<em class="hilite">oem> sexual em casais heterossexuais nã<em class="hilite">oem>-infectados pelo HIV, devendo existir outras rotas de transmissã<em class="hilite">oem> neste grupo estudado <em>Advisors/Committee Members: LEÃ<em class="hilite">Oem>, Jair Carneiro (advisor).em>

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Acinetobacter baumannii é um patógeno oportunista, geralmente resistente a muitos antimicrobianos, que causa surtos de infecções hospitalares. Assim, a sua habilidade de formar biofilme pode explicar a capacidade de sobreviver no ambiente hospitalar e em utensílios médicos. <em class="hilite">Oem> objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade de duas cepas clínicas de A. baumannii obtido de hospitais de Porto Alegre, Brasil (abC e abH) e uma cepa controle ATCC 19606 (abA) formar biofilme e realizar a análise transcricional dos genes possivelmente envolvidos na produçã<em class="hilite">oem> e manutençã<em class="hilite">oem> do biofilme: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. A capacidade de formaçã<em class="hilite">oem> de biofilme foi avaliada pelo método cristal violeta em superfície plástica a 25°C e 37°C nos meios LB, LB + 1% glicose, urina pura e LB + 10% sangue de carneiro. A análise transcricional foi feita por real time PCR. A cepas AbH, AbC e AbA foram fortes formadoras de biofileme em LB e LB+glicose à 25 e 37°C. Em LB+sangue, as cepas AbH e AbA foram fortes formadoras e AbC foi fraca formadora de biofilme. Em urina, a cepa AbH foi moderadamente formadora, AbC e AbA foram fracas formadoras de biofilme. Os genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI de AbA, csdA de AbH e <em class="hilite">oem> operon IscRSU foram superexpressos em biofilme; os genes eagg de AbH, pilZ e csuAB foram inibidos e os genes bfmRS, eal, eagg de AbA, csdA de AbA e abaI de AbH nã<em class="hilite">oem> possuíram uma variaçã<em class="hilite">oem> significativa na expressã<em class="hilite">oem> durante <em class="hilite">oem> biofilme. Portantanto, a regulaçã<em class="hilite">oem> positiva dos genes wspR, pgaA, ompA, bap, csdA e do operon IscRSU é um indício de sua importância na formaçã<em class="hilite">oem> e manutençã<em class="hilite">oem> do biofilme por esse patógeno.

Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen which causes a wide range of nosocomial infections, being usually multirresistent to drugs. Their ability to form biofilm can explain the feature of surviving inside hospital environment and on medical devices. The aim of the present study was to evaluate the ability of two clinically isolated MDR A. baumannii strain, obtained from a general hospital of Porto Alegre, RS, Brazil (AbH and AbC), and the reference ATCC 19606 strain (AbA), to form biofilm and to analyze the relative expression of genes putatively involved in biofilm formation: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. The biofilm formation capability was evaluated by the crystal-violet staining method on plastic surfaces at 25°C and 37°C using the broth LB, LB + 1% glucose, pure urine and LB + 10% sheep blood. The trancritional profiling of the genes was analyzed through real time PCR methodologies. The strains AbH, AbC e AbA were strong biofilm producers in LB e LB+glucose at 25 and 37°C. In the broth LB+blood, the strains AbH and AbA were strong biofilm producers and AbC was week biofilm producer. In urine, the strain AbH was moderated producer, AbC and AbA were week biofilm producers. The genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI from AbA, csdA from AbH and the operon IscRSU were overexpressed in biofilm; the genes eagg de AbH, pilZ e csuAB were…

<em>Advisors/Committee Members: Frazzon, Ana Paula Guedes.em>

▼ <em class="hilite"><em class="hilite">Oem>em> objetivo desse trabalho foi detectar a carga viral do citomegalovírus (CMV) e presença de periodontite em pacientes renais crônicos submetidos a hemodiálise. Estudo epidemiológico e observacional, composto por um grupo caso que envolvia pacientes em hemodiálise provenientes do Hospital das Clínicas da UFPE e do Hospital Maria Lucinda. <em class="hilite">Oem> grupo controle foi composto por pacientes que realizaram primeira consulta para triagem na clínica de Estomatologia da UFPE, sendo saudáveis para doença renal crônica. A detecçã<em class="hilite">oem> do CMV foi feita pela técnica de reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase em tempo real. <em class="hilite">Oem> diagnóstico periodontal foi estabelecido através da avaliaçã<em class="hilite">oem> da profundidade de sondagem, perda de inserçã<em class="hilite">oem> clínica, presença de placa visível e de sangramento a sondagem. Foram avaliados 109 pacientes (Caso: n=54; Controle: n=55) com idade média de 46,5  12,8 anos, variando dos 18 aos 78 anos, na qual a maioria (56%) era do sexo feminino. Todos os pacientes do grupo controle foram negativos para CMV, enquanto 29 pacientes do grupo caso (53,9%) apresentaram-se positivos. Nã<em class="hilite">oem> foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos quanto à presença de placa visível (p=0,249), grau (p=0,960) e extensã<em class="hilite">oem> (p=0,763) da periodontite. Entretanto, <em class="hilite">oem> sangramento a sondagem foi significativamente menor (p<0,001) nos pacientes do grupo caso. Quando os pacientes em hemodiálise foram subdivididos quanto ao tempo de tratamento (até 12 meses; 1 a 2 anos; mais de 2 anos) também nã<em class="hilite">oem> foram encontradas diferenças estatisticamente significativas quanto ao grau de periodontite (p=0,060) e presença de CMV (p=0,588). Nã<em class="hilite">oem> houve diferença estatisticamente significativa entre os 2 grupos quanto a presença de periodontite, entretanto, <em class="hilite">oem> CMV foi positivo apenas nos pacientes em hemodiálise. <em>Advisors/Committee Members: CARVALHO, Alessandra de Albuquerque Tavares (advisor), GUEIROS, Luiz Alcino Monteiro (advisor), http://lattes.cnpq.br/6182433161973022 (advisor).em>

▼ Abstract: Among the coccidia that parasites passerines, the genus Isospora is the most prevalent and are described in more than 50 species around the world. While Cryptosporidium is the most common cause of parasitic infections in domestic and wild birds, and have been reported in more than 30 species of avian hosts worldwide. This research aims to determine the occurrence of Isospora spp. and Cryptosporidium in Brazilian captives canaries (Serinus canaria), participating in national ornithology championships. The occurrence of Isospora was determined by the presence of sporulated oocysts in the birds feces, obtained by sucrose concentration and observed under optical microscopy. For the molecular analysis four new primers were designed for performing nested PCR. The occurrence of Cryptosporidium was determined from swabs of various organs in sick and dead animals; and from asymptomatic and sick animal feces. For oocysts microscopic concentration was used centrifugal sedimentaton technique with ether, followed by Ziehl Neelsen modified staining for oocysts visualization in optical microscopy. For molecular analysis were performed nested PCR and real-time PCR duplex specific for C. galli and avian genotype III. From 394 fecal samples, 59.13% were positive for coccidia and 44.6% were Isospora. Sequence analysis of 34 samples showed 100% of homology with Isospora in 23 samples, and three samples were different from those sequences in GenBank. The sick canaries showed higher frequency for the Cryptosporidium genus than asymptomatic, but there was no specificity of clinical signs associated with the genus, genotypes and species, only unspecific. Avian genotype I predominated in all groups and its site of infection may be the cloaca of the bird by the evidence presented in the paper. Regardless of this outcome, the same Cryptosporidium species and genotypes are present in the population of asymptomatic, sick and dead canaries: C. galli, avian genotype I, III and V <em>Advisors/Committee Members: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS (CRUESP), Guaraldo, Ana Maria Aparecida, 1951-2015 (advisor), Franco, Regina Maura Bueno, 1958- (coadvisor), Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia (institution), Programa de Pós-Graduaçã<em class="hilite">oem> em Biologia Animal (nameofprogram), [Coorientador], Regina Maura Bueno Franco (committee member), Kawazoe, Urara (committee member), Cury, Márcia Cristina (committee member), Nakamura, Alex Akira (committee member), Fiuza, Vagner Ricardo da Silva (committee member).em>

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As mulheres, no período da gestaçã<em class="hilite">oem>, passam por diversas alterações fisiológicas, imunológicas, hormonais e anatômicas em seu corpo, alterações estas que as deixam vulneráveis a algumas infecções. Um dos patógenos que frequentemente infecta mulheres e que pode ter considerável impacto sobre gestantes é a bactéria Chlamydia trachomatis (CT), cuja infecçã<em class="hilite">oem> é geralmente silenciosa e pode trazer sérias consequências para a mãe e <em class="hilite">oem> feto, tais como <em class="hilite">oem> parto prematuro, gravidez tubária e aborto espontâneo. <em class="hilite">Oem> rastreamento rotineiro dessa bactéria em mulheres em idade fértil e em gestantes tem sido realizado em alguns países desenvolvidos, mas ainda nã<em class="hilite">oem> no Brasil. <em class="hilite">Oem> objetivo desta pesquisa foi estudar a infecçã<em class="hilite">oem> por CT em gestantes atendidas nas Unidades Básicas de Saúde do Município de Coari, Amazonas, Brasil, e verificar possíveis associações entre a presença de CT e variáveis clínico-epidemiológicas. Trata-se de um estudo descritivo e transversal, com gestantes atendidas nessas unidades durante a consulta de pré-natal, entre julho de 2016 e març<em class="hilite">oem> de 2017. As gestantes responderam um questionário contendo dados sócio-demográficos, comportamentais e clínicos. <em class="hilite">Oem> diagnóstico da CT foi realizado pela técnica de reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de urina e cérvico-vaginais. De um total de 164 gestantes selecionadas, 100 foram incluídas no estudo. A média de idade foi de 22,87 anos (DP= 6,24). A taxa de prevalência da infecçã<em class="hilite">oem> por CT encontrada foi de 18% (18/100). A prevalência da CT nas amostras de urina foi de 15% (IC95%: 8,65 – 23,53) e nas amostras cérvico-vaginais foi de 11% (IC95%: 5,62 – 18,83). A prevalência da CT foi encontrada nas gestantes com média de idade de 21,15 anos (DP=4,65), e foi maior nas que tiveram <em class="hilite">oem> início da atividade sexual antes dos 15 anos de idade, e nas primigesta, no entanto, somente associada com as que tiveram mais de dois parceiros nos últimos 12 meses (p= 0,022) e as que apresentaram queixa ginecológica “dor após a relaçã<em class="hilite">oem> sexual” (p= 0,05). Este estudo mostrou uma alta prevalência (18%) da infecçã<em class="hilite">oem> causada por CT entre gestantes do município de Coari/AM, e reforça a necessidade do rastreio dessa infecçã<em class="hilite">oem> durante <em class="hilite">oem> pré-natal nessa populaçã<em class="hilite">oem>.

Women in the gestation period undergo several physiological, immunological, hormonal and anatomical changes in their body, changes that leave them vulnerable to some infections. One of the pathogens that frequently infects women and which may have a considerable impact on pregnant women is the bacterium Chlamydia trachomatis (CT), whose infection is generally silent and can have serious consequences for the mother and fetus, such as premature birth, tubal pregnancy, and spontaneous abortion. The routine screening of this bacterium in women of childbearing age and in pregnant women has been carried out in some developed countries, but not yet in Brazil. The objective of this study was to study CT infection in pregnant women attended at the Basic Health Units of the Municipality of Coari, Amazonas, Brazil, and to verify possible associations…

<em>Advisors/Committee Members: Rocha, Danielle Albuquerque Pires, 00955917450, http://lattes.cnpq.br/2849749532255452, [email protected].em>

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A leishmaniose tegumentar é uma zoonose que ocorre endemicamente em 88 países, caracterizando-se como um grave problema de saúde pública nos países tropicais e subtropicais. Estima-se que <em class="hilite">oem> número de pessoas infectadas por Leishmania seja de cerca de 12 milhões e que ocorram entre 700 mil a 1,2 milhões de novos casos anualmente. <em class="hilite">Oem> Brasil apresenta a maior prevalência de leishmaniose tegumentar na América, sendo que já foram identificadas seis espécies como causadoras de leishmanise tegumentar: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi. Apesar de termos diferentes espécies causadoras de leishmaniose tegumentar no Brasil e com diferentes formas clínicas, a discriminaçã<em class="hilite">oem> das espécies de Leishmania responsáveis por determinada lesã<em class="hilite">oem> ainda é um desafio. Utilizando as técnicas qPCR, HRM e PCR multiplex, com pares de oligonucleotídeos contruídos e direcionados para <em class="hilite">oem> gene alvo hsp70, propomos uma alternativa para os ensaios utilizados atualmente para a identificaçã<em class="hilite">oem> de Leishmania e diferenciaçã<em class="hilite">oem> dos subgêneros Leishmania e Viannia em cultura de promastigota. A identificaçã<em class="hilite">oem> do subgênero Leishmania obtida nos nossos resultados em amostras de cepas referência e em amostras de isolados de pacientes com suspeita de leishmaniose tegumentar atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas, correspondem ao obtido por PCR-RFLP direcionada para <em class="hilite">oem> alvo kDNA com a enzima de restriçã<em class="hilite">oem> HaeIII realizada num estudo anterior. No entanto, este estudo permitiu a identificaçã<em class="hilite">oem> do subgênero em apenas um passo, <em class="hilite">oem> que contribui para a reduçã<em class="hilite">oem> do tempo, custo e manuseio de amostras. Diante desses resultados, sugere-se a validaçã<em class="hilite">oem> da técnica em DNA de amostras de amastigotas de lesões tegumentares de pacientes diagnosticados com esta doença

The cutaneous leishmaniasis is a zoonotic disease that is endemic in 88 countries, characterized as a serious public health problem in tropical and subtropical countries. It is estimated that the number of people infected by Leishmania to be about 12 million, occurring between 700 thousand to 1.2 million new cases annually. Brazil has the highest prevalence of cutaneous leishmaniasis in America and six species have been identified as causes of cutaneous leishmaniasis: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) guyanensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (V.) shawi. Although we have different species that cause cutaneous leishmaniasis in Brazil and with different clinical forms, discrimination against Leishmania species responsible for certain injury is still a challenge. Using the techniques qPCR, HRM and multiplex PCR with oligonucleotide engineer to the target gene hsp70, propose an alternative to the currently used assays for Leishmania identification and Leishmania and Viannia subgenus differentiation in parasite promastigote culture. The identification of Leishmania subgenus obtained…

<em>Advisors/Committee Members: Lindoso, José Angelo Lauletta.em>

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A hanseníase é doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium leprae (M. leprae) que afeta principalmente a pele e nervos periféricos e pode causar incapacidades físicas as quais evoluem, potencialmente, para deformidades físicas permanentes. <em class="hilite">Oem> paciente hanseniano pode ser classificado como paucibacilar e multibacilar, sendo as formas paucibacilares de difícil diagnóstico. Novos métodos moleculares de alta sensibilidade e especificidade como PCR em Tempo Real qPCR, tem contribuído para diagnóstico da hanseníase, principalmente nos casos de difícil diagnóstico. Este estudo foi desenvolvido na Fundaçã<em class="hilite">oem> de Dermatologia Tropical e Venereologia Alfredo da Matta, Manaus – Amazonas, no período de març<em class="hilite">oem> de 2014 a agosto de 2015, e teve <em class="hilite">oem> intuito de validar a técnica de qPCR na detecçã<em class="hilite">oem> de M. leprae em biópsias cutâneas de pacientes com suspeita clínica de hanseníase e submetidos a exame histopatológico. As amplificações por qPCR a partir de uma sequência específica do gene 16S de M. leprae foram realizadas em 180 amostras, das quais, 82 eram biópsias frescas e 98 biópsias parafinadas. Das biópsias frescas, foram analisadas 65 amostras, entre as quais estã<em class="hilite">oem> 9 amostras de pacientes com outras dermatoses, 12 amostras clinicamente inconclusivas e 38 amostras de pacientes com hanseníase. Destes, 68,5% (26/38) foram positivos no teste molecular para a hanseníase e 33,3% (3/9) foram positivas para outras dermatoses. A sensibilidade foi de 68,5%, especificidade de 66,70%, com valor preditivo positivo de 89,7% e valor preditivo negativo de 33,3%. Entre as biópsias parafinadas, foram analisadas somente 61 amostras dos pacientes com hanseníase, as quais 73,8% foram positivas. Nestas amostras, <em class="hilite">oem> teste molecular apresentou sensibilidade de 73,8%. Além disso, <em class="hilite">oem> número de genomas foi estimado nos dois grupos de biópsias e variou de 8,53 (em uma biópsia parafinada) a 2.060.230 (em uma biópsia fresca). Os dados sugerem claramente que <em class="hilite">oem> qPCR confirmam a diferença entre pacientes MB e PB tanto em biópsias frescas quanto em biópsias parafinadas sendo que as quantidades de genomas percentualmente e quantitativamente foi maior em pacientes MB no grupo de amostras frescas quando comparado ao grupo de amostras parafinadas. Curiosamente, os dados quantitativos nas amostras de pacientes PB embora apresentem menor número de genomas, tem também um percentual maior de positividade. A despeito de ajustes necessários para melhorar a eficiência da reaçã<em class="hilite">oem>, os resultados nos mostram que <em class="hilite">oem> teste pode ser útil, em especial nos casos inconclusivos e de difícil diagnóstico, como nas formas paucibacilares quando <em class="hilite">oem> número de genomas for alto (maior que 50) que diminui <em class="hilite">oem> risco de falsos positivos.

Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae (M. leprae) that affects the skin and peripheral nerves and can cause physical disabilities which evolve to permanent physical deformities. The leprosy patient can be classified as paucibacillary and multibacillary and paucibacillary forms difficult to diagnose.…

<em>Advisors/Committee Members: Cortez, Carolina Chrusciak Talhari, http://lattes.cnpq.br/4041028384017266, Frota, Maria Zeli Moreira, http://lattes.cnpq.br/0827847750398440, Ramasawmy, Rajendranath, http://lattes.cnpq.br/3420417277915974.em>

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Dissertaçã<em class="hilite">oem> de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

A columbofilia é um desporto com elevado número de praticantes em Portugal que tem merecido a atençã<em class="hilite">oem> dos médicos veterinários. Os pombos-correio sã<em class="hilite">oem> como atletas de alta competiçã<em class="hilite">oem> e, como tal, devem apresentar-se em ótimas condições físicas de forma a prestarem as melhores performances. Vários agentes de natureza viral têm sido identificados em pombos. Alguns deles, como adenovírus, herpesvírus e circovírus, desempenham um papel determinante na síndrome da doença dos pombos jovens. Esta síndrome apresenta como principais sinais clínicos, vómito, diarreia, depressã<em class="hilite">oem>, poliúria e penas eriçadas, e pode causar <em class="hilite">oem> fracasso desportivo dos animais atingidos. Admite-se que seja uma doença de natureza multifatorial e ainda nã<em class="hilite">oem> foi possível estabelecer em concreto a sua etiologia. Manifesta-se também em situações de stresse, como por exemplo, transporte de longas duraçã<em class="hilite">oem> e distância e em temperaturas elevadas. Neste trabalho sã<em class="hilite">oem> abordadas, como nota introdutória, algumas temáticas que merecem destaque na columbofilia, nomeadamente a sua história, <em class="hilite">oem> desenho do pombal, a nutriçã<em class="hilite">oem>, <em class="hilite">oem> stresse fisiológico, a orientaçã<em class="hilite">oem> dos pombos, <em class="hilite">oem> “doping”, a reproduçã<em class="hilite">oem> e as doenças mais comuns. <em class="hilite">Oem> estudo aqui descrito consistiu numa abordagem por PCR “multiplex” a amostras de DNA extraídas a partir de zaragatoas cloacais de borrachos, participantes no “derby” 2014 organizado pela ACD Porto. Foram analisadas 36 amostras, selecionadas aleatoriamente de entre os 287 pombos pertencentes a cerca de 80 columbófilos participantes no referido “derby”. A metodologia seguida foi a proposta por Freick e colaboradores (2008) e, após a eletroforese em gel de agarose, todas as amostras foram consideradas negativas. Embora nã<em class="hilite">oem> tenha sido detetado material genético de qualquer dos 3 agentes em estudo (herpesvírus tipo 1 do pombo, adenovírus aviário e circovírus do pombo), nã<em class="hilite">oem> podemos excluir a importância destes vírus nas doenças desta espécie, nomeadamente na etiologia da síndrome da doença dos pombos jovens, até porque a metodologia mais apropriada seria a deteçã<em class="hilite">oem> de anticorpos no soro sanguíneo, impraticável neste tipo de aves em estudo. Apesar de nã<em class="hilite">oem> ser <em class="hilite">oem> objetivo principal deste trabalho, é importante referir que este ano, no “derby” organizado pela ACD Porto, verificou-se que 100% dos pombos testados (45) estavam parasitados com Trichomonas.

Pigeon racing is a sport with a high number of practitioners in Portugal that has attracted the attention of veterinarians. Racing pigeons are like top athletes and, as such, must be in excellent physical condition in order to provide the best performances. Several viral agents have been identified in pigeons. Some of these agents, such as adenoviruses, herpesviruses and circoviruses play a decisive role in the young pigeon disease syndrome. This syndrome presents vomiting, diarrhea, depression, polyuria and ruffled feathers as main clinical signs, and can cause failure of the affected animals. The young pigeon disease syndrome is a multifactorial…

<em>Advisors/Committee Members: Alegria, Nuno Francisco Fonte Santa, Viegas, Carlos Alberto Antunes, Paulos, Carlos Humberto Pereira de Magalhães.em>

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A Mancha marrom é uma das principais doenças do trigo, causada pelo fitopatógeno Bipolaris sorokiniana, responsável por grandes perdas econômicas no cultivo do trigo em todo mundo. Este fungo apresenta uma grande diversidade morfológica, fisiológica e genética. <em class="hilite">Oem> objetivo do trabalho foi utilizar marcadores moleculares e fenotípicos para avaliar a variabilidade genética em isolados monopóricos e polispóricos de Bipolaris sorokiniana de sementes de trigo oriundos do Brasil e outros países. A caracterizaçã<em class="hilite">oem> molecular envolveu as metodologias URP-PCR, PCR-RFLP, REP-PCR, BOX-PCR, ERIC-PCR assim como testes isoenzimáticos e de patogenicidade. A análise de patogenicidade revelou que isolados polispóricos sã<em class="hilite">oem> mais severos para as sementes que para as partes aéreas das plantas quando comparados com os monospóricos. A caracterizaçã<em class="hilite">oem> isoenzimática e molecular através das técnicas URP-PCR, PCR-RFLP, REP-PCR, BOX-PCR, ERIC-PCR exibiram uma grande diversidade intra-populacional. REP-PCR e ERIC-PCR revelaram maior diversidade entre os isolados, com uma similaridade inferior a 70%. No entanto, as amplificações realizadas com <em class="hilite">oem> BOX-PCR apresentaram um perfil com uma maior similaridade. Com os resultados obtidos a partir das amplificações com BOX-PCR um par de primers foi desenhado a partir de um fragmento comum a todos os isolados e que foi capaz de amplificar um produto único ao gênero Bipolaris sp. entre as amostras testadas. Com a realizaçã<em class="hilite">oem> de mais ensaios com outros microrganismos é possível que <em class="hilite">oem> mesmo possa ser utilizado como um marcador deste gênero. A técnica de PCR-RFLP utilizando as enzimas HaeIII, HinfI, HhaI, EcoRI e HindIII apresentaram perfis de restriçã<em class="hilite">oem> com variaçã<em class="hilite">oem> no número de fragmentos e no peso molecular. Uma possível explicaçã<em class="hilite">oem> para à variabilidade observada em todas as técnicas utilizadas pode ser atribuída à condiçã<em class="hilite">oem> multinucleada das células de B. sorokiniana bem como a heterocariose, que pode levar a recombinaçã<em class="hilite">oem> mitótica e ao polimorfismo.

The brown spot is a major disease of wheat caused by the pathogen Bipolaris sorokiniana, responsible for large economic losses in wheat cultivation worldwide. This fungus has a wide morphological, physiological and genetic diversity. The main objective of this work was to characterize monosporic and polisporic B. sorokiniana isolates of wheat seeds from Brazil and other countries. Pathogenicity tests were conducted to evaluate the feasibility of virulence genes as well as different molecular methodologies were tested as: URP-PCR, PCR-RFLP, REP-PCR, BOX-PCR, ERIC-PCR and isoenzyme patterns of the isolates. The pathogenicity assay reveals that the polysporic isolates caused a more severe disease to seeds than to aerial parts of the plants when compared to single spore isolates. Isoenzyme and molecular characterization through the URP-PCR, PCR-RFLP, REP-PCR, BOX-PCR, ERIC-PCR techniques showed a large intra-population diversity among the isolates. REP and ERIC-PCR revealed greater diversity among the isolates with a similarity below 70%. However, the amplification…

<em>Advisors/Committee Members: Van der Sand, Sueli Terezinha.em>

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A amplificaçã<em class="hilite">oem> in vitro de DNA, utilizando reaçã<em class="hilite">oem> em cadeia da polimerase (PCR), tem sido estudada como uma alternativa aos tradicionais métodos de detecçã<em class="hilite">oem> de micro-organismos contaminantes em tanques de armazenagem de biodiesel. Neste sentido, objetivou-se padronizar um método rápido e eficaz para detecçã<em class="hilite">oem> de Paecilomyces variotii utilizando-se a técnica de PCR e avaliar <em class="hilite">oem> desenvolvimento de P. variotii em amostras contendo diesel puro (B0), mistura diesel/biodiesel (B7) e biodiesel puro (B100). Em sistemas contendo meio mínimo mineral e misturas diesel/biodiesel, após 60 dias, verificou-se que <em class="hilite">oem> micro-organismo desenvolveu biomassa significativamente superior em B7 e B100 quando comparados a B0. A técnica de PCR foi capaz de detectar um mínimo de 103 esporos/mL de P. variotii em suspensã<em class="hilite">oem> com água, correspondente a 0,0144 ng de DNA/μL, e demonstrou ausência de reações inespecíficas frente aos fungos Aspergillus fumigatus e Pseudallescheria boydii. Entretanto, <em class="hilite">oem> método mostrou-se ineficaz para detecçã<em class="hilite">oem> de P. variotii em amostras contendo diesel, biodiesel ou misturas de diesel/biodiesel.

The in vitro amplification of DNA using polymerase chain reaction (PCR), has been studied as an alternative to traditional methods for detecting microorganisms contaminating biodiesel storage tanks. In this sense, the aim of this study was to standardize a fast and effective method for detection of Paecilomyces variotii using the PCR technique and evaluate the development of P. variotii in samples containing pure diesel (B0), blend diesel/biodiesel (B7) and pure biodiesel (B100). In systems containing mineral minimal medium and diesel/biodiesel blends after 60 days, it was found that the microorganism biomass developed significantly higher in B7 and B100 when compared to B0. The PCR technique was able to detect a minimum of 103 spores/mL of P. variotii in suspension with water, corresponding to 0,0144 ng DNA/μL, and showed no nonspecific reactions against the fungi Aspergillus fumigatus and Pseudallescheria boydii. However, this method proved to be ineffective for the detection of P. variotii in samples containing diesel, biodiesel or diesel/biodiesel blends.

<em>Advisors/Committee Members: Simonetti, Amauri Braga.em>