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1. Neire Moura de Gouveia. Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp.

Degree: 2008, Federal University of Uberlândia

Capítulo II: As alfa-amilases (α-1,4-D-glicano-4-glicanohidrolases, EC 3.2.1.1) são enzimas responsáveis pela digestão de carboidratos e são encontradas na saliva e no suco pancreático. As seqüências primárias das alfa-amilases salivar (HSA) e pancreática (HPA) exibem 99% de similaridade estrutural o que sugere que a HSA pode ser um alvo de estudos experimentais de inibição da digestão de carboidratos uma vez que potenciais inibidores teriam comportamentos similares para HPA e HSA. Desse modo, pelas vantagens da coleta não invasiva da saliva em relação ao suco pancreático obteve-se no presente estudo, uma fração denominada HSA-CTI. Com esta preparação verificou-se o efeito inibitório sobre a atividade enzimática da HSA-CTI a partir de preparações do extrato bruto da casca de Pouteria sp. Amostras de saliva foram congeladas por 48h, centrifugadas e o sobrenadante foi sujeito a cromatografia de troca iônica em coluna de Q-Sepharose equilibrada com 25mM de tampão Tris-HCl, pH 8,0 contendo 5mM de EDTA e 5mM de EGTA. A coluna foi lavada com o mesmo tampão de equilíbrio e eluída com um gradiente de NaCl (0-1M). Realizou-se dosagem protéica, SDS-PAGE, Western blotting e medida da atividade amilásica das frações obtidas. A fração HSA-CTI não interagiu com a coluna, sendo assim preparada por liofilização e armazenada em congelador até o momento dos ensaios de inibição. Preparações aquosa por maceração (EAP-C), aquosa por decocção (EADP-C), hidroalcóolica (EHP-C) e etanólica (EEP-C) do extrato da casca (10mg/mL em DMSO) foram testados pré-incubando por 10 e 30min a 37C com a fração HSA-CTI (1:10). Somente o polipeptídeo de 56kDa presente nesta fração exibiu reação cruzada com o anticorpo anti-HSA. O extrato EHP-C mostrou-se mais efetivo em inibir a atividade da HSA-CTI. Estes resultados indicam que a HSA-CTI pode ser obtida por um método rápido de cromatografia podendo ser utilizada em ensaios de inibição a partir de extratos vegetais. O extrato de Pouteria sp. apresentou como potencial candidato para estudos de fracionamento e descoberta de novas substâncias com atividade sobre estas enzimas. Capítulo III: Alguns estudos preliminares sobre extratos de plantas do gênero Pouteria (Sapotaceae) abordam seu potencial em inibir a alfa-amilase humana. Estes estudos de inibição podem implicar na descoberta de novas fontes para reduzir a hiperglicemia pós-prandial, importante no tratamento de diabetes e obesidade. Os componentes ativos de Pouteria são ainda na maioria desconhecidos, por isso, o presente estudo fracionou e investigou as substâncias presentes no extrato hidroalcóolico de Pouteria sp. com potencial inibitório sobre a alfa-amilase salivar in vitro. O extrato foi fracionado em coluna Sephadex-LH 20 equilibrada com metanol lavada com água, seguido por acetona. Todas as frações (POUN) foram testadas quanto ao potencial em inibir a alfa-amilase in vitro. As frações POUN2 e 3 foram injetadas em HPLC semipreparativo coluna Supelcosil LC-18 fase móvel metanol:água e analisadas em HPLC analítico coluna Supelcosil LC-18 fase… Advisors/Committee Members: Milton Vieira Coelho, Paulo Sérgio Pereira, Foued Salmen Espindola.

Subjects/Keywords: Human salivary amylase; Amylase inhibition; Ion exchange chromatography; Tannin; Phytochemistry investigation; Pouteria sp.; Amilase salivar humana; Inibição amilase; Cromatografia de troca iônica; Taninos; Investigação fitoquímica; GENETICA; Plantas medicinais; Enzimas

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Gouveia, N. M. d. (2008). Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp. (Thesis). Federal University of Uberlândia. Retrieved from http://www.bdtd.ufu.br//tde_busca/arquivo.php?codArquivo=2251

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Gouveia, Neire Moura de. “Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp.” 2008. Thesis, Federal University of Uberlândia. Accessed October 25, 2020. http://www.bdtd.ufu.br//tde_busca/arquivo.php?codArquivo=2251.

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Gouveia, Neire Moura de. “Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp.” 2008. Web. 25 Oct 2020.

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Gouveia NMd. Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp. [Internet] [Thesis]. Federal University of Uberlândia; 2008. [cited 2020 Oct 25]. Available from: http://www.bdtd.ufu.br//tde_busca/arquivo.php?codArquivo=2251.

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Council of Science Editors:

Gouveia NMd. Produção de uma fração concentrada em alfa-amilase salivar humana (HSA) como alvo para descoberta de novos inibidores e fracionamento do extrato hidroalcóolico da casca de Pouteria sp. [Thesis]. Federal University of Uberlândia; 2008. Available from: http://www.bdtd.ufu.br//tde_busca/arquivo.php?codArquivo=2251

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