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Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.

A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagens de L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioria das proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60. Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem…

Advisors/Committee Members: Murta, Silvane Maria Fonseca, Babá, Elio, Sá, Renata Guerra, Cuervo, Patrícia, Nahum, Laila Alves, Soares, Rodrigo Pedro Pinto, Murta, Silvane Maria Fonseca.

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Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.

A infecção por Leishmania infantum pode ser assintomática ou sintomática (calazar), podendo neste caso, haver manifestação de formas graves e até óbito, mesmo em casos adequadamente tratados com drogas antiparasitárias. Na leishmaniose visceral por L. infantum, o hospedeiro não gera uma resposta imunológica eficaz. CXCL10 é uma quimiocina indutora da produção de IFN-\03B3 e, portanto, associada à resposta imunológica celular de perfil Th1, considerada necessária para o controle da infecção por L. infantum. Com a perspectiva de contribuir para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas, o trabalho objetivou investigar in vitro e in vivo se o tratamento com CXCL10 confereria proteção contra a infecção. In vitro, macrófagos RAW 264.7 foram infectados com L. infantum e tratados ou não com 20, 50 e 100 ng/mL de CXCL10 para avaliação da carga parasitária, produção de NO, IL-4 e IL-10 após 24 e 48 horas do tratamento. In vivo, camundongos BALB/c foram infectados com L. infantum e tratados ou não com CXCL10 (5 \03BCg/kg; I.P) após 1, 3 e 7 dias Após 1, 7, 23 e 45 do início do tratamento foi verificado o número de parasitos em baço e fígado, a produção das citocinas IFN- \03B3, IL-4, TGF- \03B2 e IL-10 por esplenócitos, o fenótipo e a freqüência das populações de células Treg Foxp3+ e Foxp3- produtoras de IL-10 e o efeito de CXCL10 na polpa branca do baço. In vitro, CXCL10 reduziu carga parasitária, não dependente de NO, e inibiu a liberação das citocinas IL-4 e IL-10. In vivo, CXCL10 foi capaz de reduzir a carga parasitária tanto no fígado quanto no baço, quatro semanas após a infecção. Também induziu IFN-\03B3 após 23 dias de tratamento, correlacionando-se com a redução da carga parasitária, e reduziu IL-10 e TGF-\03B2. Após tratamento, houve decréscimo de células Treg produtoras de IL-10 intracelular e observou-se também que CXCL10 foi capaz de controlar a hiperplasia no baço durante a fase aguda da infecção. Este estudo sugere um papel protetor de CXCL10 contra L. infantum, mediado por IFN-\03B3, não dependente de NO, com supressão de células Treg IL-10+ e preservação da microarquitetura do baço. Esses dados podem fornecer informações para o desenvolvimento de novas abordagens para futuras intervenções terapêuticas para a leishmaniose visceral

Leishmania infantum infection may be asymptomatic or symptomatic (kalazar), in which case there may be severe manifestations and even death, even in cases adequately treated with antiparasitic drugs. In visceral leishmaniasis by L. infantum, the host does not generate an effective immune response. CXCL10 is a chemokine that induces the production of IFN-\03B3 and, therefore, is associated with the Th1 profile cellular immune response…

Advisors/Committee Members: L Barbosa, Helene Santos, Teixeira, Maria Jania.

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Submitted by BRENO FERNANDO MARTINS DE ALMEIDA null ([email protected]) on 2016-08-24T16:15:27Z No. of bitstreams: 1 Tese Breno Fernando Martins de Almeida.pdf: 1340633 bytes, checksum: f17f36b6fa9e92677cc444151820f455 (MD5)

Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto ([email protected]) on 2016-08-26T13:45:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_bfm_dr_araca_par.pdf: 683960 bytes, checksum: 82d290469779a1f14a43f4cebcfef021 (MD5)

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença crônica que causa imunossupressão nos animais doentes, principalmente por prejudicar a resposta imunológica celular, diminuindo a proliferação linfocitária e a capacidade fagocítica das células de defesa. Recentemente, a enzima heme oxigenase-1 (HO-1) vem ganhando destaque por estar envolvida na regulação da resposta imune celular em algumas condições patológicas, sendo uma enzima induzível por condições de estresse, como o estresse oxidativo que sabidamente ocorre na LVC. Nesse contexto, esse trabalho teve por objetivo determinar o papel da HO-1 na LVC, determinando sua concentração e expressão em cães infectados e saudáveis, correlacionando-a com o estresse oxidativo, carga parasitária e IL-10. Objetivou-se também avaliar o efeito da indução e inibição da enzima sobre a resposta linfoproliferativa de células de linfonodo de cães doentes e sobre a taxa de infecção macrofágica por promastigotas de Leishmania infantum, determinando as citocinas envolvidas. Os cães com LVC apresentaram marcante estresse oxidativo e aumento da concentração e expressão de HO-1, obtendo-se correlação positiva entre HO-1e estresse oxidativo e IL-10 de acordo com o tecido analisado. A inibição de HO-1 aumentou a taxa de proliferação celular na presença de antígeno solúvel de L. infantum, enquanto a indução de HO-1 diminuiu a taxa de proliferação antígeno-específica e aumentou a taxa de infecção macrofágica e o número de amastigotas por macrófago. Conclui-se que o aumento do metabolismo da HO-1 observado na LVC está associado ao estresse oxidativo presente nesses cães e pode ser um dos mecanismos envolvidos na inibição da resposta linfoproliferativa e perpetuação da infecção, com inibição da atividade microbicida macrofágica.

Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a chronic disease that causes immunosuppression by reducing the cellular response of infected animals, impairing the cell proliferation and the phagocytic ability of defense cells. Recently, heme oxygenase-1 (HO-1) has been highlighted for being involved in regulation of cell response in certain pathological conditions, and for being an enzyme that can be induced by stress conditions, such as oxidative stress, that is known to occur in CVL. In this context, this study aimed to determine the role of…

Advisors/Committee Members: Universidade Estadual Paulista (UNESP), Lima, Valéria Marçal Felix de [UNESP], Ciarlini, Paulo César [UNESP].

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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

A leishmaniose é uma das principais doenças negligenciadas, com uma incidência de 1,3 milhões de casos anuais em humanos, dos quais se estima que resultem 20 mil a 30 mil fatalidades. O objectivo deste estudo foi avaliar a eficácia de 12 fluoroquinolonas, 2 isoflavonas e 1 aminocumarina na inibição do crescimento e efeito citotóxico de promastigotas de Leishmania infantum cultivados axenicamente. Os parasitas foram obtidos de animais diagnosticados com leishmaniose e cultivados em meio RPMI-1640 enriquecido com hemina, aminoácidos essenciais e urina humana, de acordo com uma adaptação dos métodos descritos na bibliografia, e incubados num dispositivo de baixo custo, construído para o efeito. As subculturas em fase logarímica foram tratadas durante 7 dias com 5 concentrações dos compostos. O grupo de controlo foi tratado com 3 concentrações de antimoniato de n-metilglucamina. Os efeitos foram medidos através da alteração da absorvência do meio de cultura após reacção de conversão de MTS, e por observação (microscopia óptica) de alterações morfométricas dos promastigotas. Nos testes a Balofloxacina, a Gemifloxacina e a Clinafloxacina mostraram os efeitos mais marcantes e LC50 menores. Os resultados sugerem o interesse no desenvolvimento de futuros testes in vitro e in vivo.

ABSTRACT - Leishmaniasis is one of the major neglected diseases, with an incidence of 1,3 million human cases annualy, of which an estimated 20.000 to 30.000 outcome in death. The aim of this study was to investigate the efficacy of 12 fluoroquinolones, 2 isoflavones and 1 aminocumarine in inhibiting the growth and possible cytotoxic effect on axenically grown Leishmania infantum promastigotes. The parasites were obtained from animals diagnosed with leishmaniasis and maintained in RPMI-1640 medium, supplemented with hemin, essential amino acids and human urine, in an adaptadion of methods previously described, and incubated in a purpose-built low cost device. Subcultures in log-phase were treated for 7 days with 5 fluoroquinolones concentrations. The control group was treated with 3 concentrations of meglumine antimoniate.. The effects were measured using the change in absorbance of the culture medium after MTS conversion reaction, and by optical microscopy observation of the morphometric changes in the promastigote population. In tests, Balofloxacine, Gemifloxacine and Clinafloxacine showed the most marked effects and lower LC50. The results suggest the interest in developing future tests in vitro and in vivo.

Advisors/Committee Members: Sampaio, Isabel Maria Soares Pereira da Fonseca de, Ferreira, Fernando António da Costa.

▼ Neste trabalho avaliamos alguns aspectos relacionados ao perfil de resposta imune celular associado à infecção por Leishmania chagasi e à cura após tratamento etiológico eficaz da leishmaniose visceral (LV), através do estudo do perfil de citocinas plasmáticas, dos níveis de óxido nítrico (NO) circulantes, e do perfil de expressão de citocinas intracelulares na ausência de estimulação exógena e após estímulo antigênico específico in vitro com antígeno solúvel de Leishmania (LSA). Nossos resultados sugerem a ocorrência de uma ativação exacerbada e disfuncional do sistema imune nos pacientes com LV clássica, caracterizada pela presença de níveis elevados de citocinas inflamatórias como IL-8, IFN-., TNF-a e IL-6, com concomitante expressão de IL-10. O aumento de citocinas inflamatórias pode estar associado a alterações fisiopatológicas observadas na doença ativa. Já, a presença da IL-10, pode ser importante para a sobrevivência e persistência do parasito no interior dos macrófagos. Esta hipótese é reforçada pela observação nestes indivíduos de uma baixa freqüência de monócitos expressando TNF-a e níveis basais de NO plasmático. Por outro lado, indivíduos com LV assintomática se assemelham aos indivíduos não infectados, apresentando níveis basais de expressão de citocinas e de NO plasmático. Nossas análises demonstraram ainda que nos indivíduos curados há aumento da expressão de citocinas intracelulares por células da imunidade inata e adaptativa, quando comparado aos indivíduos não infectados. Nesse contexto, é importante destacar o grande número de células NK, linfócitos T e B TNF-a+ e linfócitos T IFN-.+, o que poderia contribuir para a ativação de mecanismos leishmanicidas relevantes mediados por macrófagos. Observamos ainda, um número elevado de neutrófilos IL-4+ e linfócitos T IL-4+ e IL-5+, o que por sua ação reguladora, poderia contribuir para o desencadeamento de mecanismos de controle da infecção por Leishmania. No entanto, cabe ressaltar que o papel dessas citocinas, especialmente IL-4, tem sido revisto, sendo a sua participação na inibição da resposta leishmanicida, vinculada à presença de altos níveis de IL-10. Após estímulo in vitro, observamos diferenças interessantes entre indivíduos assintomáticos e pacientes portadores da LV clássica. Nossos dados demonstraram que as células da imunidade inata e adaptativa de indivíduos com LV clássica, responderam à estimulação com LSA, aumentando a expressão das citocinas IL-4 e IL-10 e diminuindo a expressão de TNF-a, IFN-., IL-12 e IL-5. Em conjunto, esses dados sugerem que o estímulo antigênico favorece o estabelecimento de uma resposta imune do tipo 2, favorecendo a sobrevivência do parasito e o desenvolvimento da doença. Em indivíduos assintomáticos, a estimulação com LSA induziu um aumento na expressão tanto de citocinas tipo 1, IFN-. e IL-12, quanto de citocinas tipo 2, IL-4 e IL-10, produzindo um perfil misto de expressão de citocinas, que levaria ao estabelecimento de uma resposta imune balanceada, predominantemente tipo 0. Este perfil de resposta pode ser… Advisors/Committee Members: Olindo Assis Martins Filho, Rodrigo Corrêa de Oliveira.

▼ O objetivo deste estudo foi contribuir para o conhecimento dos parasitas presentes nos carnívoros silvestres da região de Évora em Portugal. Foram executadas 30 necropsias parasitárias a animais mortos por atropelamento num raio de 104 km, entre Évora, Estremoz e Montemor-O-Novo. Foi colhido material para pesquisa parasitológica, paralelamente foram colhidas e conservadas por congelação 38 amostras de tecido de pavilhões auriculares para pesquisa de Leishmania infantum por qPCR, das cinco principais espécies de carnívoros silvestres em Portugal: Meles meles (texugo euroasiático), Martes foina (fuinha), Genetta genetta (gineta), Herpestes ichneumon (sacarrabos) e Vulpes vulpes (raposa-vermelha). Dos animais necropsiados 73,33% encontravam-se parasitados, 50% com ectoparasitas, 63,33% com parasitas gastrointestinais e 13,33% com parasitas pulmonares. Nas amostras para a pesquisa de L. infantum não foram observados resultados positivos. Concluiu-se serem necessários mais estudos aumentando o volume de amostras de forma a oferecer resultados estatisticamente representativos da diversidade parasitológica nos carnívoros silvestres da região; Abstract: Nosoparasitologic study in wild carnivores in the region of Evora The aim of this study was to increase knowledge of parasites present in wild carnivores of the Evora region in Portugal. Thirty parasitic necropsies were executed on roadkill animals over a distance of 104 km between Évora, Estremoz Montemor-O-Novo. Material for parasitological research was collected, as well as 38 tissue samples from ear tissue, preserved by freezing for Leishmania infantum research by qPCR, from the five main species of wild carnivores in Portugal: Meles meles (Eurasian badger), Martes foina (beech marten), Genetta genetta (genet), Herpestes ichneumon (Egyptian mongoose) and Vulpes vulpes (red fox). 73.33% of the animals necropsied were parasitized, 50% with ectoparasites, 63.33% with gastrointestinal parasites and 13.33% with lung parasites. Positive results were not observed on the samples for L. infantum research. The study found the need for larger samples volumes in order to provide statistically representative results of the parasitological diversity in wild carnivores in the region. Advisors/Committee Members: Padre, Ludovina Neto.

▼ Feline infection by L. infantum has been reported in areas where canine leishmaniosis is endemic, including Mediterranean countries, Portugal, Brazil, and Iran. The epidemiologic importance of feline infection by the parasite remains obscure due to the relatively low number of properly designed epidemiological surveys, their conflicting results, and the limited body of scientific evidence on the propensity of infected cats to transmit L. infantum to sandflies. Based on current evidence, it seems that cats residing in endemic areas become more or less commonly infected by L. infantum, usually without presenting clinical signs or laboratory abnormalities, because of their innate resistance. However, a minority of the infected cats may present skin lesions (mainly ulcers and nodules), ocular and/or systemic signs (especially peripheral lymphadenomegaly, splenomegaly, hepatomegaly, and kidney disease) that can be accompanied by laboratory abnormalities, including anemia, hyperglobulinemia, azotemia, increased activity of ALP, ALT and AST, and proteinuria. In the context of epidemiological investigations, feline infection by L. infantum is usually diagnosed using molecular (PCR) and serological tests, whereas cytology, histopathology and culture can be additionally employed when there is suspicion of the disease. The aims of this study are to estimate the frequency of the infection in clinically healthy and sick cats, to identify the responsible Leishmania species, to investigate the parasitic load of infected cats, to explore the diagnostic sensitivity and specificity of cytology and serology (IFAT and ELISA), and to investigate possible associations between the infection and the signalment, living conditions, period of sampling, infection by other agents and presence of clinical signs or laboratory abnormalities. A total of 100 cats, older than 1 year, from Thessaly and Macedonia, Greece, were included and they were allocated into two groups: group A included 50 clinically healthy cats and group B included 50 cats with skin lesions, ocular and/or systemic signs. After history and physical examination, sampling of blood, urine, feces, rectal mucosa scrapes, lymph node aspirates, skin biopsies, bone marrow aspirates, and conjunctival smears was performed. Laboratory examinations included: a) PCR in blood, skin biopsies, bone marrow, and conjunctiva; b) identification of Leishmania species through nucleotide sequence analysis of PCR products; c) real-time PCR in conventional PCR-positive samples; d) cytology of buffy coat, rectal mucosal scrapes, lymph node aspiration smears, impression smears from skin biopsies, smears from the lesional skin of group B cats, bone marrow, and conjunctival smears; e) serology, including IFAT for IgG and IgM against Leishmania spp. and ELISA for IgG; f) hematology; g) serum biochemistry; h) urinalysis including urine protein/creatinine ratio; i) serology for FeLV, FIV, FCV, T. gondii and B. henselae, j) fecal parasitology; k) various additional diagnostic examination in group B cats in an…

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Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-10-02T14:23:38Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)

Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-10-03T16:36:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Laiana Arlego Barbosa. Estudo da necroptose...2019.pdf: 2171988 bytes, checksum: 0566884a75d51dfd90f4988f36329d52 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (Fapesb) pela bolsa e financiamento, e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.

A Leishmaniose é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania e é considerada um problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Apresenta um amplo espectro de formas clínicas, sendo a Leishmaniose Visceral (LV) a mais grave. No Brasil, a LV tem como agente etiológico a Leishmania infantum, sendo caracterizada por febre alta, perda de peso, hepatoesplenomegalia, anemia, leucopenia e hemorragia nos casos mais graves. Os neutrófilos têm demonstrado ter um papel importante na imunopatogênese da Leishmaniose, sobretudo na LV. Sabe-se que diferentes vias de morte celular podem ser ativadas em neutrófilos, influenciando o curso da infecção por diferentes patógenos. A necroptose, uma via de morte regulada, é canonicamente ativada em ausência de caspase 8, possui características pró-inflamatórias e tem sido descrita no contexto de doenças infecciosas e não infecciosas. OBJETIVO: O objetivo geral desse trabalho foi avaliar o efeito da indução da via de morte por necroptose na infecção de neutrófilos humanos e murinos por L. infantum. MATERIAIS e MÉTODOS: Inicialmente, analisamos os níveis séricos de Lactato Desidrogenase (LDH), enzima característica de dano celular/tecidual, em pacientes com LV, e observamos altos níveis em comparação aos controles saudáveis. Usando o sistema in vitro de infecção de neutrófilos humanos e murinos com inibidores de caspase, evidenciamos a ativação da via de morte por necroptose com o envolvimento de RIPK1, RIPK3 e MLKL. Em seguida, foi testado o papel da necroptose na carga parasitária de neutrófilos humanos in vitro. RESULTADO: O pré-tratamento com inibidores de caspases, seguido da infecção, aumentou os níveis de LDH, a expressão de RIPK3 e MLKL em neutrófilos humanos, ao passo que diminuiu a viabilidade dos parasitas. Esse efeito foi revertido pela Necrosulfonamida (NSA), inibidor farmacológico da MLKL. Em neutrófilos murinos infectados por…

Advisors/Committee Members: Menezes, Juliana Perrone Bezerra de, Tavares, Natalia Machado, Prates, Deboraci Brito, Prates, Deboraci Brito.

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Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2016-02-04T15:41:20Z No. of bitstreams: 1 Rayssa Maria de Araujo Carvalho Estudo da coinfecção...2015.pdf: 2144928 bytes, checksum: 48b23a40107abab111363e306597b10d (MD5)

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Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil

Universidade Federal da Bahia, Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil

A Erliquiose Monocítica Canina (EMC) e a Leishmaniose Visceral Canina (LVC) são duas doenças, transmitidas por vetores, com ampla distribuição mundial. Os agentes causadores dessas doenças são Ehrlichia canis e Leishmania infantum, respectivamente. Enquanto a EMC é transmitida por carrapatos, principalmente Rhipicephalus sanguineus, a Leishmania é inoculada no hospedeiro através do inseto-vetor da subfamilia Phlebotominae. A maioria dos sinais físicos são comuns às duas enfermidades, o que dificulta o diagnóstico clínico e o tratamento, especialmente em áreas endêmicas. Poucos são os estudos relacionados à coinfecção da erliquiose e leishmaniose caninas no Brasil. No Piauí, particularmente em Teresina, ainda não se tem dados concretos sobre a prevalência dessas afecções.Os sinais físicos variam com a severidade da infecção, a resposta imune do hospedeiro e a presença de coinfecção. Assim, buscamos avaliar cães, independente dos sinais físicos, atendidos no hospital universitário e clínicas particulares da cidade de Teresina, Piauí quanto a frequência de erliquiose e leishmaniose caninas no período de março de 2012 a setembro de 2014, independente de sexo, raça, idade e suspeita clínica, excetuando os cães que vinham apenas para vacinação. Foi realizado exame clínico e colhidas amostras sanguíneas para exame hematimétrico, bioquímico, parasitológico e molecular. Dos 664 cães avaliados para E. canis, 22,9% tiveram o DNA amplificado somente para esta bactéria. No caso de Leishmania infantum, houve amplificação de DNA em 29,1% dos 664 cães, sendo que, destes, 80 (12,1%) estavam coinfectados com E.canis. Anemia e trombocitopenia foram as principais alterações hematológicas observadas em cães infectados tanto com E. canis, como com L. infantum e coinfectados. As principais alterações bioquímicas nos cães com infecção apenas por L. infantum, assim como nos coinfectados, foram hipoglobulinemia e hiperproteinemia. Já nos monoinfectados por E. canis a hipoalbuminemia e a uremia foram as principais alterações. Perda de peso, úlceras, apatia, conjuntivite, palidez nas mucosas, alópecia e linfoadenomegalia…

Advisors/Committee Members: Mendonça, Ivete Lopes de, Gondim, Luis Fernando Pita, Fraga, Deborah Bittencourt Mothé, dosSantos, Washington Luis Conrado, Barral, Aldina Maria Prado, Barral, Aldina Maria Prado.

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Submitted by Aline Aparecida Correa Leal null ([email protected]) on 2016-07-06T20:05:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Aline.pdf: 987503 bytes, checksum: 0a84ea183c1d8a475ce3c7718a981c87 (MD5)

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Leishmania são protozoários intracelulares obrigatórios que infectam células fagocitárias de mamíferos ocasionando a leishmaniose visceral canina (LVC). Por apresentarem um intenso parasitismo cutâneo, os cães infectados possuem papel chave na transmissão da doença. Para sobreviver no hospedeiro, as leishmanias são capazes de desenvolver mecanismos de escape por alterações das respostas de células fagocitárias, tais como o NO e o ROS responsáveis pela morte intracelular do parasita. A HO-1 também pode estar envolvida na regulação da resposta imune, porém seu papel na leishmaniose visceral canina ainda não está claro. A produção excessiva de NO, ROS e HO-1 pode ser prejudicial e estar relacionada com a apoptose e desregulação imunológica na LVC. Assim o este estudo teve a finalidade de investigar os níveis de ROS, NO e atividade HO-1 em células mononucleares do sangue periférico e leucócitos do baço e sua correlação com a apoptose celular. Para isso foram utilizadas células mononucleares sanguíneas e leucócitos de baço de cães infectados e saudáveis. As células foram isoladas e cultivadas durante 24 horas, na sequencia foram incubadas com sondas para NO ou ROS e foi determinada a apoptose celular. Todos as análises foram realizadas por citômetria de fluxo. Após a lise das células em cultura, a atividade HO-1 foi determinada no lisado celular por método colorimétrico. O metabolismo oxidativo estava reduzido e a taxa de apoptose dos mononucleares sanguíneos aumentada, por influência do ROS. Os níveis de ROS e NO estavam diminuídos nos leucócitos do baço de cães infectados, e maior taxa de apoptose celular foi observada nos leucócitos de baço de cães infectados. A atividade da HO-1 obtida estava reduzida tanto nos monucleares do sangue como nos leucócitos do baço dos animais infectados, quando comparados aos animais saudáveis, porém não mostrou correlação com a apoptose. Concluímos que os mecanismos indutores de apoptose diferem nos sítios de infecção, ou seja, no baço os reativos de oxigênio e de nitrogênio estão envolvidos com a inibição do processo de morte celular, no entanto a atividade de hemooxigenase pode ter influência na apoptose.

Leishmania are obligate intracellular protozoan that infects phagocytic mammalian cells causing canine visceral leishmaniasis (CVL). Because they have an intense cutaneous parasitism,…

Advisors/Committee Members: Universidade Estadual Paulista (UNESP), Lima, Valeria Marçal Felix de [UNESP].

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Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2017-06-07T17:37:34Z No. of bitstreams: 1 Valter dos Anjos Almeida Alterações na medula...2017.pdf: 4995398 bytes, checksum: 0a35ce89ed673cf501c263ddacb50492 (MD5)

Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2017-06-07T17:47:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Valter dos Anjos Almeida Alterações na medula...2017.pdf: 4995398 bytes, checksum: 0a35ce89ed673cf501c263ddacb50492 (MD5)

Made available in DSpace on 2017-06-07T17:47:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valter dos Anjos Almeida Alterações na medula...2017.pdf: 4995398 bytes, checksum: 0a35ce89ed673cf501c263ddacb50492 (MD5) Previous issue date: 2017

CNPq, CPqGM, FIOCRUZ, CAPES e CYTED

Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil

INTRODUÇÃO: cães com leishmaniose visceral frequentemente apresentam uma ampla variedade de anormalidades hematológicas. Objetivo: neste estudo, objetivou-se associar os distúrbios hematológicos com a distribuição das linhagens celulares e o perfil de expressão de citocinas na medula óssea de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. MATERIAL E MÉTODOS: após obtenção do diagnóstico e exames clínico-laboratoriais, as amostras foram coletadas e analisadas por microscopia convencional. Feito isso, foram utilizadas técnicas de biologia molecular para detecção de L. infantum e verificação da expressão de citocinas que podem influenciar na diferenciação celular na medula óssea. RESULTADOS: diante das análises, a infecção por Leishmania foi detectada por ELISA em 47/58 (81,0%) e por cultura esplênica em 18/57 (31,6%). A maioria dos cães com cultura esplênica positiva apresentou detecção do DNA de L. infantum na medula óssea (p=0,0004) acompanhado por histiocitose (p=0,0046). Destes animais, os que também possuíam desorganização esplênica apresentaram diminuição de hemácias (p=0,0066), acompanhado pela menor quantidade de células da linhagem eritróide na medula óssea em relação aos com cultura negativa e baço organizado (p=0,0127). Essas alterações foram acompanhadas pela elevação da expressão gênica IFN-γ (p=0,0015) e TNF (p=0,0091) nos cães que possuíam L. infantum na medula óssea. CONCLUSÕES: desta maneira, cães com cultura esplênica positiva apresentam alterações de parâmetros hematológicos referentes a anemia e leucocitose com neutrofilia que são acompanhadas de hipoplasia eritróide e estão associadas a mudanças nas expressões de citocinas no microambiente medular, como o aumento de IFN- γ e TNF.

INTRODUCTION: dogs with visceral leishmaniasis often have a wide variety of hematological abnormalities. Objective: this study aimed to associate hematological disorders with the distribution of cell lineages and the profile of cytokine expression in the bone marrow of dogs naturally infected by Leishmania infantum. MATERIAL AND METHODS: after obtaining the diagnosis and the clinical laboratory tests, samples were collected and analyzed by…

Advisors/Committee Members: Lima, Valéria Marçal Felix de, Larangeira, Daniela Farias, Brodskyn, Claudia Ida, Damasceno, Karine Araújo, dosSantos, Washington Luis Conrado, dosSantos, Washington Luis Conrado.

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Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2013-11-07T16:33:35Z No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5)

Made available in DSpace on 2013-11-07T16:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lairton Souza Borja Estudo da Correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes...pdf: 1237856 bytes, checksum: 9bc0086e1a2811c6ba645a2fc3b31e9f (MD5) Previous issue date: 2013

Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.

No Novo Mundo, a leishmaniose visceral (LV) é causada pela Leishmania infantum, que tem como vetor o inseto flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. Os cães são considerados o principal reservatório urbano da infecção. Devido ao fato do controle da LV se basear, principalmente, no controle da leishmaniose visceral canina (LVC), é importante estudar o papel dos cães na transmissão da infecção. Foi demonstrado que cães apresentando diferentes apresentações clínicas da LV, inclusive os assintomáticos transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. Nenhum estudo sistemático avaliou a associação direta entre a carga parasitária em diferentes tecidos e a transmissão do parasito. A hipótese desse estudo é que cães com baixa carga parasitária na pele e no sangue não transmitem a infecção ao vetor flebotomíneo. O objetivo deste estudo foi analisar se há correlação entre a carga parasitária de cães com diferentes apresentações clínicas da LV e a transmissão ao vetor Lutzomyia longipalpis. Foram selecionados 35 cães de dois canis, locazidos em area endêmica (n=23) e não endêmica (n=12) para LV. Os animais foram classificados de acordo com o número de sinais clínicos em: assintomáticos (sem sinais; n=12), oligossintomáticos (1-3 sinais; n=15) e polissintomático (<3 sinais; n =8). Todos os 35 cães foram positivos em pelo menos um dos testes diagnósticos: ELISA (n=8), cultura de aspirado esplênico (n=9) e qPCR (n=35) dos tecidos avaliados. Diferentes tecidos (sangue periférico, aspirado esplênico e biópsia de pele) foram coletados para quantificação do DNA do parasito pela qPCR. Para avaliar a capacidade de transmissão dos cães, foi realizado xenodiagnóstico, seguido de determinação da carga parasitária em cada flebótomo utilizando qPCR. Finalmente, a capacidade de transmissão de Leishmania foi estimada pela determinação, após o xenodiagnóstico, da infectividade de cães ao flebótomo, da taxa de infecção de flebótomos, e da carga parasitária transmitida aos flebótomos. Baixa carga parasitária na pele e no sangue foi detectada em aproximadamente 85% dos cães assintomáticos. A infectividade de cães ao flebótomo variou de 60 a 90%, e foi similar entre animais apresentando diferentes números de sinais clínicos. Foi identificado que o maior percentual (51%) de cães transmite parasitos a um pequeno número de flebótomos (de 1 a 5 em 30 flebótomos…

Advisors/Committee Members: Fraga, Deborah Bittencourt Mothé, Dias, Edelberto Santos, Melo, Stella Maria Barrouin, Veras, Patrícia Sampaio Tavares, Veras, Patrícia Sampaio Tavares.

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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

A leishmaniose é uma doença parasitária de caráter zoonótico, causada por protozoários do género Leishmania spp. cuja transmissão ocorre principalmente por via vetorial, através de insetos flebotomíneos infetados. O cão apresenta-se como o principal hospedeiro reservatório de infeção para o Homem, no entanto outras espécies também podem ser afetadas como outros canídeos selvagens, roedores e gato. A leishmaniose canina encontra-se disseminada por várias regiões, especialmente na bacia do Mediterrâneo, algumas regiões da Ásia e da América Central e do Sul. Esta dissertação inclui a descrição de três casos clínicos acompanhados durante o período de estágio curricular (Novembro 2014 a Março 2015) na Clínica veterinária VetPóvoa, em Coimbra e Hospital veterinário Abros em Ourense, Espanha. Os três animais apresentaram uma ampla diversidade de sinais clínicos nomeadamente lesões cutâneas ulceradas, perda de peso, onicogrifose, febre e artropatia. O diagnóstico foi realizado principalmente através da análise dos sinais clínicos manifestados e de testes serológicos quantititativos realizados em laboratório externo. O protocolo terapêutico instituído consistiu na combinação de antimoniato de meglumina com alopurinol e a eficácia do mesmo diferiu entre os três animais. Os animais foram também sujeitos à monitorização do tratamento após o seu término no sentido de avaliar a recorrência dos sinais clínicos.

Leishmaniosis is a zoonotic parasitic disease, caused by protozoa of the generus Leishmania spp, which transmission occurs mainly by the bite of an infected phlebotomine “sandfly” insect. The dog is the main reservoir host for human infection, but other species can be affected like wild dogs, rodents or cat. Canine leishmaniosis (LCan) is found widespread, but it’s found especially in mediterranean basin, some Asian regions and in South and Central America. This study refers and describes three case reports of dogs with clinical leishmaniosis that were observed during the curricular practice period (from November 2014 to March 2015) in Clínica Veterinária VetPóvoa, in Coimbra, Portugal, and Hospital Veterinário Abros in Ourense, Spain. The three dogs showed a large range of clinical signs, including ulcered skin lesions, wheight loss, fever, onicogriphosis and arthropathy. The diagnosis was established by the analises of clinical signs and the results of quantitative serologic tests, executed in an extern laboratory. The therapeutic protocol used in all cases was the administration of meglumine antimoniate with allopurinol. After the end of therapeutic protocols the animals were monitored due the recurrence of the clinical signs.

Advisors/Committee Members: Cardoso, Luís, Almeida, Ricardo.

▼ Dogs are the primary reservoirs of the parasites of the genus Leishmania. The immune response induced by infection with Leishmania infantum in these animals is not completely understood, and few studies have investigated the correlation between the expression of cytokines and chemokines and clinical manifestations of animals with canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum (rural municipality of Mossoro, Rio Grande do Norte, Brazil) with the expression levels of cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-17), iNOS, chemokines (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL17, CCL20, CCL24, CCL26, CXCL9, CXCL10), chemokine receptors (CXCR3, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8), and parasitism in the liver and spleen using real-time PCR. Initially, we conducted seroepidemiological survey of dogs from 12 rural settlements from Mossoró-RN, totaling 398 dogs examined. The positivity of dogs for the parasite was determined by reativity in two serological tests (ELISA and IFA). All rural localities showed dogs positive for L. infantum, with positivity varying between 6,6% and 49% of the animals examined by location, totalizing 27% of dogs from all settlements. Subsequently, Twenty-one dogs were clinically evaluated and classified as asymptomatic (n = 11) or symptomatic (n = 10). The infection was confirmed by performing imprint in the spleen, and observation of amastigotes. Splenomegaly, weight loss and onychogryphosis were the most frequent clinical signs. In the liver, levels of mRNA expression of cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-17), iNOS and chemokines (CCL1, CCL17, CCL26, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8 and) were lower in symptomatic animals than in asymptomatic animals. In comparison with uninfected animals, symptomatic dogs had lower levels of expression of almost all molecules tested. In addition, the parasitic load was observed high and low symptomatic hepatic inflammation in animals when compared to asymptomatic. In conclusion, the decreased expression of cytokines, chemokines and chemokine receptors result in poor migration and activation of leukocytes, hindering control of parasitism and leading to the development of the disease. Advisors/Committee Members: Guedes, Paulo Marcos da Matta (advisor), 02351506731 (advisor), http://lattes.cnpq.br/5445410844075357 (advisor).

▼ Leishmaniasis is a complex of diseases with no preventable or therapeutic vaccine available. There is only a small set of drugs for treatment of these diseases, which evolve with distinct clinical outcomes from skin ulcers, to mucosal involvement or visceralization. The type of clinical presentation usually is associated with the infecting species of Leishmania. Leishmania infantum is the visceralizing species, causing visceral leishmaniasis, in Latin America, Europe and northern Africa and was introduced in the Americas by Europeans during colonization. Visceral leishmaniasis used to be a sporadic disease found in rural areas Northeast of Brazil, however with urbanization, outbreaks have been reported in periurban areas of major cities. L. infantum infection can evolve with control of the parasite without apparent clinical symptoms, with only a minority developing symptomatic disease. The reasons why one evolve with selfresolution and others develop full blown disease is not entirely understood, but seems to include host genetic susceptibility, comorbidity, sand fly exposure and potentially genetic variation in the infecting Leishmania species. Our ongoing study, have shown structural genome variations in several clinical Leishmania isolates obtained from people infected in the State of Rio Grande do Norte. Despite the different clinical patterns, the isolates´ genomes showed a high identity degree to each other, even the ones isolated from the 90 compared with the latest. However, the few found changes were sufficient for the isolation of the distinct groups by a principal component analysis, showing that the isolates from more recent years are more homogeneous among the population. Phylogenetic analyzes using Bayesian reconstruction methods have been made and supported the grouping patterns already seen in the foregoing results. Moreover by an Expanded Bayesian Skyline Plot it was possible to observe the growth of the genomic population of L. infantum compared with the 1990s. Changes were observed in the number of chromosome copies in all strains, but only chromosome 31 is presented as exclusively trisomic. This work presents evidence on patterns of L. infantum isolated genomes relating them to clinical characteristics of their hosts. Advisors/Committee Members: Lima, João Paulo Matos Santos (advisor), 79332021368 (advisor), http://lattes.cnpq.br/3289758851760692 (advisor), Jerônimo, Selma Maria Bezerra (advisor), 15603016434 (advisor), http://lattes.cnpq.br/7120263570947836 (advisor).

▼ As leishmanioses são doenças parasitárias causadas por protozoários do género Leishmania, transmitidas pela picada de flebótomos fêmeas e que causam uma elevada morbilidade e mortalidade em África, América Latina, Ásia, e na Região Mediterrânica. A vigilância da prevalência das leishmanias e dos respectivos vectores, nas regiões endémicas e envolventes, são cruciais para prever o risco de introdução e disseminação de novas espécies de Leishmania que poderão dar origem a novos focos de doença(s). A monitorização da infecção por Leishmania nos flebótomos é importante para a compreensão da eco-epidemiologia e avaliação de programas de controlo. Por outro lado, a transmissão de Leishmania pode envolver um elevado número de hospedeiros vertebrados que podem ser identificados através da análise das refeições hemáticas dos vectores. A Região do Algarve é considerada um foco endémico de leishmaniose(s), humana e canina, desde a década de 1980. O principal objectivo deste estudo foi actualizar a distribuição, a abundância relativa, a densidade e outros aspectos vectoriais das espécies flebotomínicas na Região Algarvia para uma possível aplicação na vigilância epidemiológica. De Maio a Novembro de 2007, foram capturados 1595 flebótomos, de ambos os sexos, através de armadilhas luminosas tipo CDC, em 175 biótopos. Foram identificadas quatro espécies flebotomínicas: Phlebotomus perniciosus, P. ariasi, P. sergenti e Sergentomyia minuta. Após identificação realizaram-se PCRs com alvo no (i) kDNA e na região ITS-1 para detecção da presença de DNA de Leishmania nos flebótomos e (ii) gene do citocromo B mitocondrial para análise das refeições hemáticas. A presença de uma fêmea de P. perniciosus infectada com L. infantum (taxa de infecção total de 0,12%) demonstrou que o Algarve continua a ser um foco de leishmaniose. A presença de P. sergenti e P. papatasi (esta última, encontrada em estudos anteriores) poderão constituir indicadores de risco de introdução/disseminação de L. tropica e L. major devido à mobilidade de turistas e imigrantes (e outros) de áreas endémicas para esta região. A realização, pela primeira vez em Portugal, de uma técnica de biologia molecular para estudo das preferências hemáticas, demonstrou ser uma ferramenta útil, que no futuro poderá eventualmente contribuir para verificar se os vectores apresentam capacidade de adaptação a novos hospedeiros vertebrados. Advisors/Committee Members: Afonso, Maria Odete.

▼ Abstract According to the World Health Organization (WHO), Leishmaniasis’ endemic areas have spread and the prevalence of the disease has increased, as well as the number of reported cases. Europe is one of the most affected continents concerning the risk of re-emergency of this zoonosis. Feline Leishmaniasis (FeL) was for the first time described in Algeria, 1912. The significance of the cat as a reservoir of Leishmania and not simply an alternative host seems to be gaining ground, mainly because: i) cats can present increased seropositivity between serology analysis; ii) cats can be infected during some months and thus are available for sand flies; iii) cats transmit the Leishmania agent in a competent form. Furthermore, cats have behavioral characteristics that contribute to the infection by Leishmania infantum, and as such, FeL has been reported worldwide. When clinical signs of FeL are present, they are usually cutaneous, with unspecific dermatological changes, that frequently occur in other feline diseases and if not diagnosed can contribute to an underestimation of the actual occurrence of the disease in cats. The low seroprevalence titers along with the commonly asymptomatic infection in cats can further contribute to the underestimation of FeL occurrence. This work aims to bring up to date the current status of FeL infection worldwide. It comprises a review of the most recent case reports and surveillance studies. Although currently limited, the most relevant and recent information on the parasite, vector, epidemiology, pathology, and immune response is presented, as well as available diagnostic and treatment strategies. The knowledge of the epidemiological and immunopathological features of FeL, in some aspects so different from the Canine Leishmaniasis (CanL), can be used as a tool in an attempt to prevent infection and decrease the hazard that FeL can embody for both humans and cats. Advisors/Committee Members: Duarte, Sofia Alexandra Giestas Cancela, Sousa, Sérgio Eduardo Ramalho.

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Exportado OPUS

Made available in DSpace on 2019-08-12T15:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_ali_final_fcatalografica.pdf: 1891204 bytes, checksum: f35635a9ecfdcab26c2f4ea8278757c0 (MD5) Previous issue date: 20

Leishmania (Ross, 1903) é um parasito protozoário de grande importância médica e veterinária. A Leishmaniose Visceral (LV), também conhecida como Calazar, é caracterizada por febre alta, substancial perda de peso, esplenomegalia, hepatomegalia e anemia. Pode levar à morte se não tratada. A espécie causadora da doença no Brasil é L. infantum (L. chagasi). A LV era, primariamente, uma zoonose caracterizada como doença eminentemente rural. Nos últimos anos, vem se expandindo para áreas urbanas de médio e grande porte e se tornou crescente problema de saúde pública no Brasil. O cão é identificado como reservatório de L. infantum, devido a sua susceptibilidade para a infecção e pelo alto parasitismo na pele. O controle epidemiológico da LV no Brasil envolve a eliminação de cães soropositivos, uso de inseticida nas casas e regiões do peridomicílio e o tratamento sistemático de casos humanos. Os testes sorológicos usados freqüentemente para triagem dos cães são: o Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e o Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Contudo, essas técnicas apresentam limitações quanto à reprodutibilidade e especificidade. Durante os últimos anos, nosso grupo vem desenvolvendo um estudo proteômico de L. infantum para a busca de novos antígenos para métodos diagnósticos que sejam mais específicos e capazes de detectar tanto a fase aguda quanto a crônica da infecção. Esse ensaio nos permitiu identificar, dentre outras, proteínas hipotéticas com potencial uso no diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) que foram utilizadas para a realização do presente projeto. Foram selecionadas duas proteínas hipotéticas (C8 e C1) que foram produzidas de forma recombinante, utilizando como vetor o plasmídeo Pet-TeV e como sistema de expressão Escherichia coli, cepa BL-21. Após a purificação por cromatografia de afinidade, as proteínas foram utilizadas como antígenos no teste sorológico para LV por ELISA. No ELISA com soros caninos, o antígeno C8 apresentou sensibilidade de 75% e especificidade de 90%, enquanto o antígeno C1 apresentou sensibilidade de 80% e especificidade de 60%. Por outro lado, no ELISA com soros humanos, os antígenos não foram eficientes para diferenciar pacientes positivos de negativos. Além disso, por estarmos trabalhando com proteínas não caracterizadas de Leishmania, foram produzidos anticorpos policlonais em coelhos para serem utilizados posteriormente em ensaios de expressão e localização celular.

Leishmania (Ross, 1903) is a protozoan parasite of major medical and veterinary importance. Visceral Leishmaniasis (VL), also known as kala-azar, is characterized by high fever, substantial weight loss, splenomegaly, hepatomegaly and anemia. Can lead to death if unt reated. The species causing the disease in Brazil are L. infantum (L. chagasi). The VL was primarily…

Advisors/Committee Members: Helida Monteiro de Andrade, Celia Maria Ferreira Gontijo, Maria Aparecida Gomes.

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As nanocápsulas são sistemas vesiculares em que a substância é confinada em uma cavidade preenchida com óleo ou emulsão e rodeada por uma membrana polimérica única. A influência da modificação da solubilidade, tamanho, composição química e característica superficial de nanocápsulas sobre a sua biocompatibilidade e biodistribuição no organismo já é bem conhecida. No entanto, o efeito dessas propriedades sobre o sistema imunológico ainda foi pouco explorado. Diante disso, este estudo objetivou avaliar o efeito de nanocápsulas com diferentes características superficiais (nanocápsulas poliméricas derivadas do ácido lático - PLA, nanocápsulas de PLA revestida com polietilenoglicol - PLA-PEG e nanocápsulas de PLA revestida com quitosana - PLA-QUI) sobre a resposta imune de células J774.A1 e sobre a infecção por Leishmania infantum. Os resultados obtidos demonstraram que essas nanocápsulas apresentam atividade moduladora sobre a produção de NO, TNF-α e IL-10. Na presença do soro fresco de camundongos BALB/c, essa atividade pôde ser observada em concentrações mais baixas das nanocápsulas. Além disso, os experimentos de pré-tratamento das células J774.A1 com as nanocápsulas mostraram que essas apresentaram a capacidade de promover alteração na resposta imune das células J774.A1 frente a um determinado estímulo. A análise por microscopia confocal mostrou que as nanocápsulas de PLA e PLA-PEG foram internalizadas pelas células J774.A1, tanto na presença como na ausência de soro. Essas nanocápsulas induziram aumento significativo da produção de IL-10 com consequente diminuição na produção de TNF-e NO. A quantificação por cromatografia líquida de alta eficiência demonstrou que as nanocápsulas de PLA foram mais internalizadas pelas células J774.A1 do que as nanocápsulas de PLA-PEG e PLA-QUI. A…

Advisors/Committee Members: Rezende, Simone Aparecida.

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Submitted by Oliveira Flávia ([email protected]) on 2014-02-06T15:07:10Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaSecretoma.pdf: 3573370 bytes, checksum: 25bd23152c05fd47823556ff923120ab (MD5)

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As leishmanioses constituem um grupo heterogêneo de doenças que abrangem áreas tropicais e subtropicais, sendo endêmicas em 88 países com aproximadamente 12 milhões de infectados e 350 milhões de pessoas expostas ao risco. Por ano, cerca de 1.500.000 casos de leishmaniose tegumentar e 500.000 casos de leishmaniose visceral (LV) são relatados. Os cães, os principais reservatórios domésticos, são considerados o principal elo na cadeia de transmissão da LV. A partir da disponibilidade dos dados de sequenciamento dos genomas de algumas espécies de Leishmania (L. major, L. infantum e L. braziliensis), ferramentas na área da proteômica podem ser empregadas para a identificação de novas proteínas com potencial para o diagnóstico, prognóstico e/ou o desenvolvimento de vacinas contra a leishmaniose. O foco do presente estudo constituiu a caracterização molecular do secretoma da espécie L. infantum, utilizando-se de uma abordagem proteômica. Promastigotas em fase log de crescimento foram submetidos ao cultivo sob duas condições experimentais. A primeira, nas condições normais de cultivo de promastigotas (pH 7.2 e temperatura de 26ºC) e, para a segunda, utilizando condições para mimetizar o microambiente de um fagolisossomo (pH 5.5 e temperatura de 35ºC). A homogeneidade do secretoma foi avaliada a partir da contagem de parasitos viáveis, durante diferentes tempos de cultivo, empregando marcação por iodeto de propídeo e citometria de fluxo. A técnica de marcação revelou que durante 8h de cultivo a percentagem de parasitos viáveis manteve-se aproximadamente 94%. A fração do sobrenadante de cultura, obtido durante 6h em pH 7.2, foi submetida à digestão em solução utilizando tripsina. Os peptídeos resultantes foram separados usando cromatografia de fase reversa e detectados para fragmentação a partir de uma interface acoplada ao espectrômetro de massas operando via electrospray. Após busca de homologia em bancos de dados foram identificadas 135 proteínas, as quais foram classificadas em 9 categorias funcionais e 1 hipotética. Dados sobre abundância relativa permitiram concluir que o secretoma de L. infantum está representado por basicamente três categorias (1) metabolismo de nucleotídeos, (2) metabolismo de carboidratos e (3) outros processos. Sessente e três proteínas foram submetidas à análises de bioinformática para predição de sinais moleculares indicativos de…

Advisors/Committee Members: Borges, William de Castro.

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Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.

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O presente estudo avaliou a utilização do extrato aquoso de própolis verde (EAPV) e de sua associação ao antimoniato de meglumina livre ou encapsulado em lipossomas para o tratamento da leishmaniose visceral (LV) em modelo murino. In vitro, avaliou-se o efeito do EAPV e de sua associação com o antimoniato de meglumina livre sobre a viabilidade de células J774-A1. O EAPV não apresentou toxicidade nas concentrações testadas e foi capaz de reduzir o efeito tóxico do antimoniato de meglumina livre. Para o experimento in vivo, camundongos BALB/c isogênicos foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum (cepa C43). Após duas semanas de infecção, os animais foram divididos em sete grupos (n=8) e tratados com: (1) dose única de tampão fosfato por via intraperitoneal (ip), (2) dose única de antimoniato de meglumina livre (AM) (30 mg/Kg) ip., (3) dose única de lipossomas vazios ip, (4) dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/Kg) ip., (5) dose diária de EAPV (500 mg/kg/dose) durante 14 dias via oral; (6) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao AM (30 mg/kg) ip. e (7) associação do EAPV (esquema terapêutico igual ao grupo 5) ao antimoniato de meglumina lipossomal (30 mg/kg) ip. Duas semanas após o tratamento, os animais foram eutanasiados e avaliou-se a carga parasitária no fígado e baço pelo método de diluição limitante. Além disso, foi realizada análise do perfil de células do baço por citometria de fluxo, toxicidade cardíaca, hepática e renal pela dosagem de marcadores bioquímicos (CKMB, TGO/ALT, TGP/ASP, creatinina) e a histopatologia do fígado e baço. O tratamento com EAPV reduziu a carga parasitária no fígado (44%), mas não no baço. Além disso, verificou-se uma redução na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina encapsulado em lipossoma no fígado e baço de aproximadamente 41%. Não foi observada diminuição na carga parasitária após tratamento com antimoniato de meglumina livre em nenhum dos órgãos…

Advisors/Committee Members: Rezende, Simone Aparecida.

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Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.

Submitted by Maurílio Figueiredo ([email protected]) on 2015-01-28T20:16:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImplicaçõesEvoluçãoClínica.pdf: 2277060 bytes, checksum: a62590db278a8868aadbea6ad2834333 (MD5)

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A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose de grande impacto na saúde pública sendo a pele o principal ponto de contato de organismos do gênero Leishmania com os hospedeiros invertebrados. O objetivo desse trabalho foi avaliar a carga parasitária, o processo inflamatório e as alterações da matriz extracelular na pele de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum apresentando diferentes formas clínicas da doença. Para isso, foram utilizados 35 cães sem raça definida, provenientes da região de Belo Horizonte, MG. Esses animais foram divididos em três grupos, de acordo com a presença de sinais clínicos, como assintomáticos (n=11, CA), oligossintomáticos (n=12, CO) e sintomáticos (n=12, CS), além de oito animais controle. Posteriormente estes animais foram distribuídos em novos grupos, de acordo com a intensidade do parasitismo cutâneo, sendo classificados em baixo parasitismo (n=12, BP), médio parasitismo (n=11, MP) e alto parasitismo (n=12, AP). Após exame clínico verificou-se que os sinais clínicos mais frequentes, sugestivos de LVC, foram as dermatites (47, 2%), seguidas por linfadenopatia (36, 1%) e emagrecimento (33,3%). Quanto à carga parasitária, verificou-se que essa foi maior nos grupos CS e CO quando comparada a CA. Infiltrado inflamatório foi presente em todos os grupos clínicos, porém esse foi maior nos grupos CA, CO e CS quando comparados ao grupo controle. Ainda, a inflamação foi maior no grupo CS quando comparado aos grupos CA e CO. Ao avaliar esse mesmo parâmetro nos grupos com distintos graus de parasitismo, foi verificado maior inflamação em cães com BP e MP quando comparados aos cães controle. Além disso, cães com MP e AP possuíam maior processo inflamatório que cães com BP. A avaliação da matriz extracelular demonstrou redução de colágeno total nos grupos infectados quando comparados ao grupo controle e nos grupos CO e CS em relação ao grupo CA. Animais com AP e MP apresentaram diminuição da área de…

Advisors/Committee Members: Carneiro, Cláudia Martins.

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Submitted by P??s Imunologia ([email protected]) on 2017-03-14T18:58:18Z No. of bitstreams: 1 disserta????o Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5)

Approved for entry into archive by Delba Rosa ([email protected]) on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 disserta????o Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5)

Made available in DSpace on 2017-04-24T13:08:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta????o Ananda Isis Lima de Marinho.pdf: 1076899 bytes, checksum: 21e99adf683c19eda3cf6952ccc97d03 (MD5)

CNPq

Nas infec????es parasit??rias alguns fatores est??o associados com a susceptibilidade do hospedeiro, dentre eles o sexo, a idade, condi????o gen??tica, fatores ambientais e o estado imunol??gico. Diferen??as entre os sexos s??o observadas em diversas infec????es. Acredita- se que isto ocorra devido a a????es de horm??nios sexuais, podendo afetar os diferentes tipos de resposta imune. A Leishmaniose ?? um grave problema de sa??de p??blica apresentando aumento da preval??ncia e afetando grande parte da popula????o mundial. No Brasil ?? end??mica e o Nordeste ?? a regi??o mais afetada. A forma visceral ?? a mais grave podendo levar o indiv??duo a ??bito se n??o tratada. Objetivamos determinar se existe diferen??a entre sexos no modelo experimental de LV. Hamsters (Mesocricetus auratus) machos e f??meas foram infectados com L. infantum/chagasi atrav??s da inje????o intrad??rmica e comparados com animais controles, ap??s 5 meses de infec????o. Ap??s eutan??sia sangue, ba??o e f??gado foram coletados para as an??lises de carga parasit??ria, histol??gicas e de par??metros bioqu??micos. As f??meas infectadas apresentaram um maior tamanho de ba??o que os machos infectados. Por??m, foram os machos que apresentaram maior carga parasit??ria. As altera????es bioqu??micas foram maiores nas f??meas, podendo estar relacionadas ??s altera????es histol??gicas observadas no f??gado das mesmas. As f??meas infectadas apresentaram concentra????es s??ricas inferiores de estradiol quando comparadas com f??meas n??o infectadas. Essa redu????o n??o foi detectada nos machos. Nossos resultados indicam que existem diferen??as entre sexos na LV experimental. A determina????o de diferen??as entre os sexos nas respostas ??s infec????es ?? de fundamental import??ncia na escolha da melhor abordagem terap??utica para o tratamento das enfermidades, incluindo as leishmanioses.

In parasitic infections some factors are associated with the susceptibility of the host, including sex, age, genetic condition, environmental factors and immune status. Gender differences are observed in various infections. It is believed it occurs due to sex hormones, which may affect different types of immune responses. Leishmaniasis is a serious public health problem presenting increased prevalence and affecting much of the world population. In Brazil it is endemic and the Northeast is the most affected region. The visceral form is the most…

Advisors/Committee Members: Baccan, Gyselle Chrystina, Costa, Silvia Lima, Silva, Robson Amaro Augusto da.

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CNPQ

O Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) é um ectoparasita de cães domésticos e possui grande importância médica e veterinária por está associado à transmissão de inúmeros patógenos, entre eles existe a suspeita do mesmo está associado à transmissão da Leishmania infantum. O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune inata celular e humoral através da caracterização morfológica e ultraestrutural de hemócitos, avaliação da dinâmica hemocitária no 1º, 2º e 5º dia após infecção (dpi) com L. infantum, fagocitose com 1º dpi, atividade da fenoloxidase no 1º, 2º e 5º dpi, produção de óxido nítrico no 1º, 2º e 5º dpi, expressão gênica da denfesina e Glutationa S-transferase em Rh. sanguineus no tempo 0 e no 1º, 2º, 5º e 7º dpi, além de avaliar a permanência do parasita no tempo 0 e nos dias 1, 2, 5 e 7 após a infecção com L. infantum (dpi). Foram identificados cinco tipos celulares, prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos e adipohemócitos na hemolinfa do Rh. sanguineus. A partir da contagem total e diferencial dos hemócitos circulantes na hemolinfa de fêmeas de Rh. sanguineus a média do número total de hemócitos no grupo inoculado com L. infantum apresentou-se significantemente elevado (P < 0.001), no 1° e 2° dpi em relação ao grupo controle. Na contagem diferencial de hemócitos observou-se que a percentagem de plasmatócitos e granulócitos no grupo infectado, aumentou significantemente no 1°, 2° e 5° dpi (P < 0.001). Nos ensaios de fagocitose observou-se que plasmatócitos e granulócitos foram capazes de realizar fagocitose de partículas de látex e promastigotas de L. infantum, no 1dpi. A produção de NO aumentou significativamente (P < 0.05) no 2° e 5° dpi e a atividade da PO apresentou aumento significativo (P < 0.05) no 5° dpi. A expressão do gene 18S ribossomal de L. infantum teve um aumento significativo (P < 0.05) no 2°, 5° e 7° após a infecção em relação ao tempo 0. A expressão da GST foi maior no 1º e 2º dpi e o gene defensina foi maior apenas no 5º dpi. Embora não existam estudos sobre a resposta do Rh. sanguineus frente a infecção com L. infatum, estes resultados sugerem, que após a infecção com L.infantum a resposta imune celular e humoral em Rh. sanguineus é ativada, porém mais estudos são necessários para avaliar o impacto dessa resposta no combate a infecção.

The Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) is an ectoparasite of domestic dogs and has great medical and veterinary importance for being associated with the transmission of many pathogens, among them there is a suspicion of it is association with the transmission of Leishmania infantum. The aim of this study was to evaluate the innate cellular and humoral immune response by morphological and ultrastructural characterization of hemocytes, hemocyte dynamics evaluation, phagocytosis, phenoloxidase activity, nitric oxide production at the 1st, 2nd and 5th dpi, gene expression of denfesina and Glutathione S-transferase in Rh . sanguineus and on days 1, 2, 5 and 7 after infection with L. infantum and to evaluate…

Advisors/Committee Members: SANTOS, Fábio André Brayner dos.

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Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.

A leishmaniose visceral americana é uma zoonose que afeta os seres humanos e outras espécies de animais domésticos e silvestres. É causada pelo protozoário Leishmania (L.) chagasi e sua transmissão ocorre através de picadas do inse to Lutzomyia longipalpis . No Brasil, esta doença continua sendo um desafio importante em questões de Saúde Pública, uma vez que está em processo de expansão em várias regiões, ocorrendo casos humanos e caninos tanto na área rural quanto em áreas urbanas. A partir de um segundo caso de l eishmaniose v isceral canino (LVC), notificado no bairro de São Bento da Lagoa, Itaipuaçu, município de Maricá, Rio de Janeiro, foi realizado um inquérito epidemiológico, através de busca ativa, em 145 cães. Os cães foram sub metidos ao exame clínico e sedados para coleta de sangue, de fragmentos cutâne os e punção de medula óssea . Para a realização dos exames sorológicos, foram utilizadas as técnicas de imunofluorescência indireta, ELISA e o teste imunocromatográfico rápido . O diagnóstico parasitológico foi realizado através da cultura parasitológica, histopatologia e imunohistoquímica de fragmentos cutâneos. Com o material obtido do aspirado de medula óssea foi realizada a cultura parasitológica e técnica de imunohistoquímica a través do fixador \201Ccell block\201D. Na avaliação sorológica, 15,1 % foram positivos na imunofluorescência indireta, 12,2 % no ELISA e 6,3 % n o teste imunocromatográfico rápido Seis cães (4,1%) foram positivos em pelo menos um dos tes tes parasitológicos. Leishma nia sp. foi isolada através da cultura parasitológica em amostras de pele íntegra e medula óssea de dois animais e em um fragmento de lesão, apresentando uma prevalência de 1,4%. Estas amostras foram caracterizadas como Leishmania chagasi . Dentre os animai s soro r reatores e ou com resultado parasitológico positivo, apenas dois animais apresentaram sinais clínicos compatíveis com LVC. A detecção de casos autóctones de LVC em Itaipuaçu e a alta prevalência de cães sororeatores, confirma a circulação desse para sita nesta região e faz um alerta para o risco de sua expansão no estado do Rio de Janeiro.

American visceral leishmaniasis is a zoonotic disease that affects humans and other species of domestic and wild animals. It is caused by the protozoan Leishmania (L.) chagasi and its transmission occurs through bites of vector sandfly Lutzomyia longipalpis. In Brazil, this disease remains as a major challenge in public health issues, as it is in expanding process in several regions, leading to the occurrence of human and canine cases, both in rural and urban areas. After the occurrence of the second case of canine visceral…

Advisors/Committee Members: Figueiredo, Fabiano Borges, Madeira, Maria de Fátima.

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CAPES

A Leishmania infantum corresponde à espécie responsável pela forma mais grave dessa infecção, denominada de Leishmaniose Visceral (LV). Afeta o sistema esplênico e hepático e, quando não tratados, pode levar a óbito em 95% dos casos. Não há vacina humana disponível e o tratamento preconizado é o mesmo há mais de 60 anos, os antimoniais pentavalentes e anfotericina B. Efeitos colaterais, via de administração e tempo de tratamento reforça o abandono do tratamento que, dessa forma, possibilita o desenvolvimento de cepas resistentes. Compostos heterocíclicos da classe tiossemicarbazona, tiazól e piridina são estruturas privilegiadas (atuando como fármacos primários) em muitos compostos que são úteis no tratamento de várias doenças, principalmente doenças infecciosas tropicais. No presente trabalho, avaliamos a ação leishmanicida in vitro de novos compostos da classe tiossemicarbazona, tiazól e piridina contra as formas promastigotas de L. infantum, a citotoxicidade e níveis de óxido nítrico sobre macrófagos J774. Os compostos mais promissores das classes tiossemicarbazona, tiazól e piridina, seguiram para a análise contra a forma amastigota de L. infantum, citotoxicidade e níveis de óxido frente a macrófagos peritoneais, alterações ultraestruturais e os possíveis alvos intracelulares no parasito. Observou-se que o composto JW-16.2, GT-14 e TAP-01, respectivamente às classes citadas acima, se mostraram como os mais potentes das classes testadas. Os compostos testados apresentaram atividade leishmanicida, in vitro, contra as formas evolutivas de L. infantum, baixa citotoxicidade às células de mamíferos testadas, induziu a produção de ON em relação às células controles de macrófagos não infectados e reduziram a sobrevivência de amastigotas. Por análises qualitativa e quantitativa, confirmando a ação leishmanicida, o composto JW-16.2 também apresentou núcleo picnótico, além de alterações ultraestruturais tais como encurtamento do corpo celular, vacuolização do citoplasma e corpos eletrodensos conforme foi encontrado nos demais compostos analisados. Formas promastigotas tratadas com os compostos e marcadas com iodeto de propídio não apresentaram alteração de suas membranas plasmáticas, porém quando marcadas com rodamina 123, células tratadas com o composto GT-14 apresentaram discreta diminuição de células marcadas, refletindo despolarização da mitocôndria. Mediante o presente estudo, os compostos JW-16.2, GT-14 e TAP-01 possuem atividade leishmanicida e devem formar o alicerce para futuros estudos experimental e clínicos na busca de novos quimioterápicos.

Leishmania infantum corresponds to the species responsible for the most severe form of this infection, called Visceral Leishmaniasis (LV). It affects the splenic and hepatic system and, when left untreated, can lead to death in 95% of cases. There is no human vaccine available and the recommended treatment is the same for more than 60 years, pentavalent antimonials and amphotericin B. Side effects, route of administration and treatment time reinforce the…

Advisors/Committee Members: http://lattes.cnpq.br/7464633588638483, SANTOS, Fabio André Brayner dos, LEITE, Ana Cristina Lima.

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Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.

As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania e sua transmissão ocorre através da picada de fêmeas de flebotomíneos principalmente dos gêneros Phlebotomus no Velho Mundo, e Lutzomyia no Novo Mundo. Lutzomyia longipalpis é o principal vetor da leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi nas Américas. As Leishmanias são organismos digenéticos, com um ciclo de desenvolvimento em hospedeiros vertebrado e invertebrado. Apesar de alguns trabalhos descreverem moléculas de Leishmania que participam da interação com o inseto vetor, pouco se sabe sobre os genes do parasita expressos dentro do tubo digestivo do inseto. Nosso objetivo foi caracterizar genes expressos por L. i. chagasi durante a infecção em L. longipalpis. Neste sentido, investigamos genes do parasita que são potencialmente importantes para sobrevivência e estabelecimento da infecção no inseto. Para avaliar a expressão dos genes de interesse utilizamos amostras de insetos coletados em diversos horários subsequentes à infecção artificial e parasitas em fases de crescimento exponencial e estacionário do parasita crescido em meio de cultura. Através de PCR quantitativo obtivemos resultados de expressão de alguns genes envolvidos com: interação com o tubo digestivo do inseto como os genes codificantes para proteína flagelar FLAG1/SMP1 e quitinase; diferenciação e proliferação do parasita, como genes de transportadores de glicose (GTs), poliubiquitina, proteína pequena hidrofílica associada ao retículo endoplasmático (SHERP), proteína de membrana dos kinetoplastídeos-11 (KMP-11), xantina fosforribosiltransferase (XPRT), aminoácido permease 3 (AAP3) e peroxirredoxina; e modulação da resposta imune do hospedeiro vertebrado, como os genes de caseína cinase 1 (CK1), fator de elongação1-alfa (EF1-alfa) e glicoproteína 63 (GP63) Uma hora pós-infecção a L. i. chagasi expressa abundantemente FLAG1/SMP1, GTs, AAP3 e GP63; em 6h apenas EF1-alfa tem expressão aumentada; 72h pós-infecção, os genes GTs, SHERP, AAP3 e EF1- alfa são mais expressos; em 144h há aumento da expressão de poliubiquitina, SHERP, GP63 e do receptor de LDL (LDL-R); em 168h observamos o aumento da expressão de EF1-alfa e diminuição de XPRT. Além disso, investigamos o papel da microbiota do inseto na expressão dos genes do parasita. Com intuito de reduzir ou eliminar a microbiota, insetos foram infectados e tratados com antibiótico. Resultados preliminares mostram modulação principalmente de genes envolvidos com diferenciação, metabolismo de açúcar e aminoácidos. Avaliamos também o papel do LDL-R na infecção do inseto utilizando parasitas transfectadas que superexpressam o gene e observamos que não houve diferença. Nossos dados revelam…

Advisors/Committee Members: L Traub Cseko, Yara Maria.

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Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, Brasil

A leishmaniose visceral (LV) é causada no Brasil pela Leishmania (Leishmania) infantum. A fase ativa da LV é caracterizada por uma imunossupressão parasito-específica acompanhada de baixos níveis de células T CD4+. Apesar disso, uma intensa ativação celular e resposta pró-inflamatória são observadas. Em outras doenças deficientes de célula T, tais como o HIV-1/AIDS, o lipopolissacarídeo (LPS), provavelmente oriundos da translocação microbiana são um componente crucial na ativação imune. Resultados recentes do nosso grupo mostraram que o LPS, juntamente com os antígenos parasitários, estão envolvidos na ativação das células T e na produção de citocinas pró-inflamatórias nos pacientes com LV. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar os níveis plasmáticos de LPS na LV experimental, assim como a influência do tratamento específico anti-Leishmania e/ou o tratamento com antibiótico para bactérias Gram-negativas na evolução clínica desses animais e nos níveis do LPS plasmático. Além disso, avaliou-se a ocorrência da ativação celular e o desenvolvimento da resposta humoral ao longo do acompanhamento e dos diferentes tratamentos. Para isso, foram utilizados 117 golden hamsters (Mesocricetus auratus), que foram divididos em oito grupos: sem infecção (G1), infectado com L. infantum (G2), infectado e tratado com o antimonial pentavalente e/ou com o antibiótico amicacina (G3, G4 e G5, respectivamente). Três grupos sem infecção tratados com os fármacos propostos também foram incluídos (G6, G7 e G8) Na avaliação clínica realizou-se a pesagem dos animais, bem como do fígado e do baço. Os aspectos físicos dos animais infectados e as alterações macroscópicas do intestino delgado também foram avaliados. A carga parasitária esplênica também foi quantificada pelo imprint. Os níveis plasmáticos do LPS foram avaliados através de um kit comercial. As dosagens do anticorpo IgG total anti- Leishmania foram realizada no soro dos animais pela técnica de ELISA. A avaliação do grau de comprometimento do sistema imune dos hamsters foi feita através da quantificação do percentual de células T CD4+ e o grau de ativação celular pela molécula CD25, através da citometria de fluxo. Os hamsters com LV apresentaram parâmetros laboratoriais e imunológicos similares aos da LV humana, exceto pela ausência de sinais clínicos visíveis característicos dessa infecção. Os animais apresentaram um aumento de peso progressivo ao longo dos 101 dias pós-infecção (dpi), mas este foi condizente com seu crescimento e idade. Os tratamentos propostos não influenciaram no peso…

Advisors/Committee Members: Costa, Filipe Anibal Carvalho, Almeida, Vinicius Cotta de, Silva, Silvia Amaral Gonçalves da, Calabrese, Katia da Silva, Lindoso, Jose Ângelo Lauletta, Cruz, Alda Maria da, Oliveira, Joanna Reis Santos de.

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Submitted by Nuzia Santos ([email protected]) on 2016-04-11T16:10:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5)

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Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.

O município de Belo Horizonte e sua região metropolitana ilustram o mais sério exemplo de expansão da leishmaniose visceral no sudest e do Brasil. O município e o parque Estadual do Sumidouro localizam-se no bioma cerrado, segundo ma ior bioma terrestre da América do Sul. Os objetivos deste projeto foram: estudar a variação sazonal da fauna flebotomínica no DS Venda Nova (Belo Horizonte) e no PES; descrever os padrões de riqueza e diversidade fauna flebotomínica nas formações vegetais do PES e no DS Venda Nova; de terminar a taxa de infecção natural de fêmeas capturadas; est udar a variação morfológica das populações de Lu. longipalpis coletadas nos diferentes ambientes; aval iar os impactos das ações de controle realizadas no DS Venda Nova nas taxas de oc orrência sazonal e dens idade das populações de flebotomíneos. Foram realizadas coletadas mensais no pe ríodo de agosto de 2011 a agosto de 2013. Os insetos foram identificados de acordo com Galati 2003. As fêmeas coletadas não ingurgitadas foram submetidas à extração de DNA e reações de PCR e de PCR-RFLP para a averiguação da infecção natural por espécies de Leishmania. Para comparação das localidades de estudo foi utilizada análise descritiva e índices ecológicos. Para a comparação morfológica trinta casais (quinze proveni ente do DS Venda Nova e quinze do PES) da espécie Lu. longipalpis foram medidos, e foram comparados tantos as médias como as variâncias dos caracteres entre os grupos. As ações de contro le da LV no DS Venda Nova realizadas nos período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013 foram analisadas descritivamente e relacionadas à curva sazonal de Lu. longipalpis . A riqueza, a diversidade e a equitabilidade da fauna de flebotomíneos foram marcadamente dife rentes entre o DS Venda Nova e o PES. Na área urbana foram coletados 2.247 espécimes pertencentes a cinco gênero s e oito espécies, a curva de acumulação de espécies atingiu a satu ração na 19º amostragem. No DS Venda Nova a curva de variação sazonal foi delineada principalmente por Lu. longipalpis e 95,3% dos espécimes pertenciam a esta espécie. Lu. longipalpis apresentou taxas de infecção natural de 1,01% para Leishmania infantum e 1,77% para …

Advisors/Committee Members: Andrade Filho, José Dilermando, Gontijo, Célia Maria Ferreira, Andrade Filho, José Dilermando, Shimabukuro, Paloma Helena Fernandes, Carvalho, Fabiano Duarte, Brazil, Reginaldo Peçanha, Morais, Maria Helena Franco, Souza, Carina Margonari de, Gontijo, Célia Maria Ferreira.

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Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil

Os achados clínicos da leishmaniose visceral canina (LVC), assim como os da leishmaniose visceral humana (LVH) são variáveis e inespecíficos. Apesar da LVC se apresentar como uma doença que pode ser fatal e crônica, existem poucos estudos descrevendo as alterações clínicas e histopatológicas destas infecções. Desta forma, evidenciando a necessidade de obtenção de dados que pudessem contribuir nesses estudos, o objetivo deste trabalho foi estudar as alterações clínicas e oculares presentes em 25 cães com leishmaniose visceral provenientes da localidade Cidade Operária, São Luís - Maranhão/Brasil através da realização de avaliação clínica, testes oftalmológicos (Schirmer e colírio fluoresceína) além de dosagens hematológicas e bioquímicas, isolamento e caracterização do parasito em amostras de medula óssea, baço e humor aquoso, além de PCR. Os resultados mostraram que linfoadenopatia foi o sintoma mais frequente, seguido de caquexia, alopecia, lesão de pele, onicogrifose e hepatoesplenomegalia. As manifestações clínicas oculares observadas com maior frequência foram: presença de algum tipo de secreção e conjuntivite, seguido de blefarite, uveíte e opacidade de córnea. Oito animais foram positivos no teste de Schirmer e sete no colírio de fluoresceína indicando a presença de ceratoconjuntivite seca e úlcera de cornea, respectivamente As alterações hematológicas mais frequentes foram anemia e trombocitopenia, aumento sérico de proteínas totais e globulina e a diminuição de albumina. A alteração mais frequente observada em todos os animais foi a presença de infiltrado inflamatório do tipo plasmocitário. A análise histopatológica dos olhos dos cães mostrou lesões nas pálpebras, esclera, glândulas e musculatura retrorbital. Tendo a presença do parasito sido evidenciada em 16% dos animais. Estes resultados mostram que as manifestações oftalmológicas estão presentes em animais com LVC e podem ocorrer concomitantemente com outros sinais sistêmicos da doença. É importante considerar a leishmaniose como uma doença sistêmica, a qual afeta diferentes órgãos e sistemas. Sugerimos assim, que em áreas endêmicas, este agravo deve ser incluído como diagnóstico diferencial de cães…

Advisors/Committee Members: Roque, André, Silva, Ana Lúcia Abreu, Machado, Marcelo Pelajo, Almeida, Renato Porrozzi de, Silva, Valmir Laurentino, Calabrese, Katia da Silva, Cardoso, Flávia de Oliveira.