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Células Mononucleares do sangue periférico (CMSP) oriundas de 28 pacientes que residem em áreas endêmicas para Leishmania braziliensis foram estudados. Destes, 10 encontravam-se na fase ativa da doença e 18 curados clinicamente para as lesões de leishmaniose. As células foram cultivadas frente à antígenos de 6 espécies de Leishmania: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.) lainsoni (LlAg), L. (V.) naiffi (LnAg), L. (L.) amazonensis (LaAg), L. (L.) chagasi (LcAg) e antígeno de concanavalina A como mitógeno. Os resultados foram expressos em índices de estimulação (IE). Temendo uma possível degradação protéica, os antígenos foram preparados com PBS e com PBS tampão antiproteolítico e o perfil eletroforético foi analisado através de SDS-PAGE. Os sobrenadantes das culturas foram estocados para os ensaios de ELISA para detecção de IFN-γ. A análise do perfil eletroforético dos antígenos de diferentes espécies de Leishmania demonstrou um padrão distinto e heterogêneo e aparentemente, não foi observada degradação assim que os antígenos foram preparados e 10 meses de estoque. Entretanto bandas parecem ser compartilhadas entre as espécies, que podem estar associadas a uma conservação de antígenos entre as espécies de Leishmania. A resposta proliferativa dos linfócitos (RPL) dos pacientes da forma ativa foi mais intensa para LbAg (1710,3), seguido de LnAg (177,6), LaAg (16,89,8) e LlAg (1410,1), e menos intenso para LgAg (11,46,6). Quando os IE obtidos para LbAg foram comparadas com outras espécies observou-se diferenças para LgAg (p<0.004) e LlAg (p<0.03). Não foram encontrados diferenças no perfil protéico dos extratos antigênicos produzidos com e sem inibidores de protease. Os estímulos obtidos de CMSP de indivíduos curados clinicamente não demonstraram diferenças quando comparados com aqueles da fase ativa da doença. O índice de estimulação (médiadesvio padrão) frente estímulos antigênicos pouco variou entre as espécies: LbAg - 22,222,2, LnAg - 15,911,5, LgAg - 20,720,6, LlAg - 14,710,1, LaAg - 15,1114,5 e L. chagasi - 13,78). A produção de IFN-γ quantificada nos sobrenadantes das culturas frente aos antígenos totais e solúvel mostrou níveis da citocina mais elevados quando utilizou-se antígenos total de L. guyanensis (568,1544,5; mediana: 518,5 pg/mL) quando comparadas às outras espécies analisadas. Porém quando analisadas o antígeno solúvel, podemos observar que tanto para os antígenos da espécie L. braziliensis quanto para L. naiffi, a fração total obteve os maiores índices de estímulos quando comparadas com a fração solúvel. Estes estudos sugerem que há uma reatividade cruzada entre as espécies dos subgêneros Viannia e Leishmania.

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from twenty-eight (28) from endemic areas by specie L. Braziliensis were studied. Ten (10) patients with active fase and eighten (18) clinic cured were studied. The cells were cultured with six antigens from Leishmania species: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.)…

Advisors/Committee Members: Silvia Amaral Gonçalves da Silva, Eduardo Fonseca Pinto, Alda Maria Da Cruz, Léa Cysne Finkelstein.

▼ Leishmania amazonensis é um dos principais agentes etiológicos em um amplo espectro de formas clínicas de leishmanioses e apresenta uma ampla distribuição geográfica nas Américas, que coincide com áreas comuns de transmissão de outras espécies de Leishmania. Neste trabalho, a eficácia protetora induzida pela imunização com o polímero formado por dois peptídeos sintéticos selecionados pelas técnicas de Phage Display e Spot synthesis foi avaliada em camundongos BALB/c contra a infecção desafio com L. amazonensis. Os peptídeos foram selecionados utilizando anticorpos da classe IgG purificados a partir de um pool de amostras de soro de cães com leishmaniose visceral. Foram obtidos três clones de bacteriófagos expressando peptídeos de interesse que apresentaram maior especificidade em relação aos anticorpos IgGs purificados. Os peptídeos sintéticos foram sintetizados pelo método de Spot synthesis em membranas de celulose e testados em experimentos de screening. Dois peptídeos (denominados de 11H e 12A) foram reconhecidos pela técnica de Spot synthesis e foram sintetizados nas suas formas solúveis; após, foram conjugados covalentemente com glutaraldeido, originando um polímero de aproximadamente 30 kDa e nesta forma, usados como imunógeno. A imunização com o polímero foi capaz de induzir uma elevada resposta imune Th1 antes da infecção. Após o desafio, uma produção elevada de IFN-?, baixos níveis de IL-4, IL-10 e anticorpos específicos ao parasita foram observados nestes animais. Em contraste, camundongos dos grupos controle exibiram baixos níveis de IFN ? e níveis elevados de IL-4, IL-10 e anticorpos antiparasita. Dessa forma, o polímero dos dois peptídeos mostrou-se como um bom candidato à vacina contra a Leishmaniose Tegumentar Americana. Advisors/Committee Members: Carlos Delfin Chavez Olortegui, Rubens Antonio Carneiro, STELLA MARIA BARROUIN MELO.

▼ O gênero Leishmania é responsável por um grupo de parasitoses que podem variar desde lesões auto-limitadas até severa injúria de tecido. Estes protozoários são parasitos obrigatoriamente intracelulares, tendo o macrófago como célula hospedeira. Durante o processo de fagocitose os macrófagos utilizam a maquinaria presente em seu citoesqueleto, a qual compreende a participação de miosinas e actinas, para a formação do fagossoma. Estas proteínas estão envolvidas em processos como citocinese, tráfego intracelular de organelas e vesículas, podendo interferir com a penetração do parasito. Alguns trabalhos vêm sendo realizados visando analisar a expressão, localização e o papel de miosina e de actina em Leishamania. Estudos associados à participação destas proteínas motoras em processo vitais para a biologia do parasito podem auxiliar na compreensão de seu ciclo e permitir a geração de conhecimentos que apontem novos alvos para intervenções terapêuticas. Uma vez que a miosina é necessária no transporte intracelular, alguns estudos tentam analisar a expressão e a localização intracelular de miosinas na Leishmania. Estudos mostram a presença de atividades cinásicas do tipo CK2 em diversos tripanossomatídeos, ligadas ao crescimento celular, morfologia e infectividade de promastigotas para macrófagos. Desta maneira, como objetivo desta tese temos o estudo da participação das miosinas, actina e CK2 na infectividade da Leishmania braziliensis. Além disso, investigamos a influência destas proteínas na produção de citocinas pelos macrófagos e em sua atividade microbicida. Lipoxina, latrunculina, nocodazol e TBB promoveram uma inibição de, pelo menos, 50% no crescimento de L. braziliensis. A CK2 secretada pelo parasito foi purificada de seu sobrenadante através de coluna de HPLC e a fração 44 mostrou ser a fração correspondente a esta enzima. A lipoxina e o TBB promoveram a inibição da atividade desta enzima ao contrário da latrunculina que forneceu aumento dessa atividade. O pré-tratamento dos parasitos ou dos macrófagos com lipoxina, latrunculina, nocodazol e TBB promoveram uma inibição de cerca de 50% no índice de associação entre Leishmania e macrófagos não-ativados ou ativados por LPS e IFN-γ. Latrunculina e TBB aumentaram a produção de NO em macrófagos não ativados e não infectados enquanto que em macrófagos ativados à exceção do TBB, todas as drogas diminuíram a produção de NO. A liberação de IL-10 foi diminuída após tratamento com todas as drogas em macrófagos não ativados em ausência de promastigotas e ativados em presença do parasito. Para a produção de TNF-α há uma redução significativa em macrófagos ativados não infectados tratados com latrunculina, nocodazol e TBB. Quando ativados e infectados, os macrófagos tratados com lipoxina tiveram a produção dessa citocina aumentada, ao contrário do TBB em que houve redução. Quando avaliamos a integridade da actina verificamos que todos os compostos foram capazes de influenciar a distribuição dessa proteína, levando a uma redução no índice de associação. Ao… Advisors/Committee Members: Alexandre Ribeiro Bello, Verônica Salerno Pinto, Claudia Masini d'Avila Levy, Silvia Amaral Gonçalves da Silva, Patrícia Maria Lourenço Dutra, David William Provance Junior.

▼ As leishmanioses estão entre as mais importantes endemias brasileiras e encontram-se entre as doenças mais negligenciadas no mundo. O arsenal terapêutico disponível é restrito, tóxico, caro e em algumas situações ineficazes, devido ao surgimento de cepas resistentes do parasito. No Brasil são registrados anualmente mais de 20 mil casos de leishmaniose tegumentar e a Leishmania braziliensis é a principal espécie causadora das formas clínicas cutânea e mucosa. Estudos prévios mostraram que o flavonóide quercetina tem ação terapêutica pela via oral em camundongos infectados com L. amazonensis. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade do flavonóide quercetina sobre Leishmania braziliensis in vitro e in vivo usando hamsters como modelo experimental. O efeito antiparasitário da quercetina foi avaliado sobre o crescimento in vitro das formas promastigotas e sobre amastigotas intracelulares em macrófagos peritoneais de camundongos e hamsters. O efeito da quercetina sobre macrófagos foi avaliado pela dosagem de óxido nítrico pelo método de Griess nos sobrenadantes das culturas e espécies reativas de oxigênio (EROs) intracelular através do H2DCFDA. In vivo a atividade terapêutica da quercetina foi estudada em grupos de hamsters infectados com L.braziliensis na pata, tratados com quercetina pela via oral (2mg/ 5X / semana) após 7 dias de infecção durante oito semanas.A ação terapêutica foi analisada através do tamanho da lesão. A resposta imune foi avaliada durante o tratamento, pela resposta de hipersensibilidade tardia (DTH) ao antígeno total de L. braziliensis. A quercetina não apresentou atividade sobre o crescimento de promastigotas em cultura em nenhuma das concentrações testadas. Em amastigotas intracelulares quercetina apresentou ação dose dependente em macrófagos de camundongos e hamsters inibindo 45% e 54% e 25% e 48 %, respectivamente nas concentrações de 50 e 100g/ml após 48h de tratamento. O pré - tratamento dos macrófagos de camundongos e hamsters com quercetina foi capaz de inibir o crescimento de amastigotas intracelulares em 57, 58 e 74% e 49, 50, e 58% respectivamente, nas concentrações de 25, 50 e 100 g/ml, apresentado ação inibitória significativa em todas as concentrações testadas. Não houve alteração na produção de NO pelos macrófagos, entretanto macrófagos pré tratados com a quercetina por 24 horas antes da infecção apresentaram um aumento significativo na produção de EROs, quando comparados aos controles. Macrófagos tratados antes e depois da infecção, apresentaram diminuição da produção de EROs. In vivo, a quercetina foi capaz de controlar o tamanho das lesões a partir da terceira semana de tratamento em relação ao controle não tratado ( P< 0,05). Os animais tratados com quercetina apresentaram maior resposta intradérmica aos antígenos de L. braziliensis. Esses dados mostram que a quercetina tem atividade sobre L. braziliensis, inibindo amastigotas intracelulares in vitro e sendo capaz de controlar o tamanho das lesões em hamsters infectados quando administrada pela via… Advisors/Committee Members: Alexandre Ribeiro Bello, Silvia Amaral Gonçalves da Silva, Roberta Olmo Pinheiro, Eduardo Fonseca Pinto.

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Os fibrócitos foram inicialmente identificados pelo seu recrutamento rápido para os tecidos lesionados e por atuar diretamente na resposta imune através do reconhecimento, apresentação antigênica e produção de citocinas e quimiocinas. Segundo Grab (2004) fibrócitos podem participar da resposta imune na leishmaniaose e por isso no presente estudo propomos analisar a resposta celular e apresentação antigênica dos fibrócitos na infecção por L. (L.) amazonensis. Para os experimentos in vivo camundongos C57BL/6 e knockout para o receptor TLR-2 foram inoculados na derme auricular com 105 formas promastigotas de L. (L.) amazonensis e 1, 7, 15 dias após a infecção as regiões de inóculo e os linfonodos foram retirados e processados para citometria de fluxo. Para os experimentos in vitro fibrócitos foram obtidos de mononucleares do sangue periférico de camundongos C57BL/6. Os fibrócitos foram avaliados quanto às suas características morfológicas e fenotípicas, infecção, expressão de MHC-II/B7-1/B7-2 e ativação de linfócitos T CD4+. As análises na região de inóculo mostraram o aumento no percentual de fibrócito na derme de camundongos após 15 dias de infecção tanto em animais C57BL/6 quanto em animais KO TLR-2. Neste sítio, os fibrócitos produziram citocinas e expressaram MHC-II, B7-1 e B7-2 podendo participar da resposta imune. As análises no linfonodo mostraram a existência de um alto percentual de fibrócitos nos animais controle, contudo, após infecção este percentual foi reduzido. Após infecção verificamos que os fibrócitos de animais WT C57BL/6 foram capazes de produzir as citocinas IL-4, IL-10 e IFN- durante o primeiro dia. Entretanto, na ausência de TLR-2 os fibrócitos presentes no linfonodo produziram TNF-α e IFN- que podem estar relacionadas com a ativação celular e aumento da capacidade de apresentação antigênica destas células durante a infecção. No linfonodo verificamos que os fibrócitos podem participar da apresentação antigênica após a infecção por L. (L.) amazonensis. Contudo, nos linfonodos de animais WT C57BL/6 observamos a redução significativa no percentual destas células expressando MHC-II e B7-1, o que pode estar relacionada a presença do TLR-2. Nos ensaios in vitro fibrócitos de camundongos C57BL/6 apresentaram alta capacidade endocítica, eliminaram os parasitas nas primeiras 24 horas de infecção, expressaram MHC-II/B7-1/B7-2 e foram capazes de ativar linfócitos T CD4+. Com isso, nossos resultados sugerem que os fibrócitos podem atuar na resposta celular e na apresentação antigênica durante a infecção por L. (L.) amazonensis, contudo estas funções podem ser moduladas pela participação do TLR-2 e pelo microambiente onde estes se encontram.

Fibrocytes were initially identified by their fast recruitment to the injured tissues and by acting directly on the immune response through recognition, antigen presentation and production of cytokines and chemokines. According to Grab et al., 2004 fibrocytes may participate in the immune response to leishmaniasis and therefore, in this study we…

Advisors/Committee Members: Jorge José de Carvalho, Alessandra Alves Thole, Silvana Allodi, Suzana Côrte-Real Faria.

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As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania spp que afetam 98 países. No Brasil, no ano de 2013, foram relatados 3.253 casos de leishmaniose visceral e 18.226 casos de Leishmaniose Tegumentar Americana. O tratamento de primeira escolha continua sendo realizado com antimoniais pentavalentes, e em casos de insucessos os fármacos de segunda escolha são a pentamidina e a anfotericina B. Tais medicamentos causam intensos efeitos adversos e ultimamente têm surgido cepas resistentes aos mesmos. Em áreas endêmicas têm sido cada vez mais comum o surgimento da co-infecção Leishmania com Mycobacterium tuberculosis. O tratamento para a tuberculose com pirazinamida (PZA) e isoniazida (INZ), controla a leishmaniose. Esses dados sugerem atividade anti-leishmania da PZA e da INZ. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade in vitro da INZ e da PZA e seus compostos derivados (série G e série R, respectivamente) sobre Leishmania (Viannia) braziliensis. As moléculas foram testadas em monocamadas de macrófagos peritoneais de camunongos infectados com L. (V) braziliensis durante 48h. Todas as moléculas testadas inibiram o índice de infecção de forma dose dependente em comparação aos controles. As moléculas da série R foram mais ativas do que a PZA, porém o resultado foi significativo somente para a R02 (p < 0,005). Apenas a molécula R05 (76,64M) foi relativamente tóxica para macrófagos. Os compostos mais ativos foram R02, G01 e G02, cujos índices de seletividade foram 14,31, 19 e 30, respectivamente. A dosagem de nitrito foi feita em sobrenadantes de monocamadas de macrófagos peritoniais infectados e tratados com as substâncias nas concentrações 10 e 100M. A G01 e a G02 estimularam a produção de NO2 nas duas concentrações, entretanto o resultado foi estatisticamente significativo para a G02 em 100M (p < 0,0001), a G05 só estimulou óxido nítrico na maior concentração. Todos os compostos da série R estimularam NO2, contudo, o resultado foi estatisticamente significativo para a R03 e R05 a 100M (p < 0,001). Adicionalmente, foi realizado uma análise preditiva in sílico de parâmetros farmacocinéticos das moléculas mais ativas in vitro, utilizando o software admetSAR. Os dados obtidos mostraram que de forma semelhante às suas moléculas originais a G01, G02 e R02 apresentaram alta capacidade de serem absorvidas pelo trato gastrointestinal, baixo potencial hepatotoxico e carcinogênico. Juntos, esses dados demonstram que essas moléculas são seletivamente tóxicas para o parasito com potencial para serem testadas pela via oral em estudos em modelo experimental de infecção.

Leishmaniasis are a group of diseases caused by protozoan of genus Leishmania spp affecting of 98 countries. In Brazil, in the year 2013 were 3.253 reported cases of visceral leishmaniasis and 18.226 cases of cutaneous leishmaniasis. The first choice of treatment is still performed with pentavalent antimonials and in cases of failures drugs of second line of treatment are pentamidine and anfotericin B. These drugs cause…

Advisors/Committee Members: Silvia Amaral Gonçalves da Silva, Patrícia Maria Lourenço Dutra, Wallace Pacienza Lima, Wânia Ferraz Pereira Manfro.

▼ Resumo: Os polissacarideos arabinogalactana (ARAGAL) de A. colubrina (angico branco), galactomanana (GMPOLY) do liquen R. celastri, duas preparacoes de galactomananas (GALMAN-A e GALMAN-B) de sementes de M. scabrella (bracatinga), xiloglucana obtida de sementes de H. courbaril (jatoba) e os complexos destes polimeros com oxovanadio (IV/V) nomeados (ARAGAL:VO, GMPOLY:VO, GALMAN-A:VO e GALMAN-B:VO, XGJ:VO) foram avaliados in vitro quanto a citotoxicidade, a ativacao de macrofagos para a producao de oxido nitrico e interleucinas (IL-1ƒÀ, IL-6, IL-10 e TNF-ƒ¿) e atividade leishmanicida. Os complexos afetaram de forma significativa a viabilidade celular. ARAGAL:VO foi altamente toxico, promovendo ~98% de perda de viabilidade celular com 100 ƒÊg/mL. Os complexos ARAGAL:VO, GMPOLY:VO e XGJ:VO nao alteraram a producao de oxido nitrico. ARAGAL e ARAGAL:VO, ambos na concentracao de 10 ƒÊg/mL aumentaram os niveis de IL-1ƒÀ em ~360% e ~560%, respectivamente. GMPOLY e GMPOLY:VO na concentracao de 25 ƒÊg/mL promoveram um aumento nos niveis desta interleucina de ~660% e ~1050%, respectivamente, enquanto que XGJ e XGJ:VO promoveram estimulo equivalente de ~500% na concentracao de 25 ƒÊg/mL. GALMAN-B promoveu um aumento de aproximadamente 2 vezes na producao de IL-1ƒÀ, quando comparado com GALMAN-A na mesma concentracao (25 ƒÊg/mL), enquanto que os niveis de IL-1ƒÀ produzidas por macrofagos apos o tratamento com as preparacoes de galactomananas (GALMAN-A e -B) complexadas com oxovanadio (IV/V) foram equivalentes variando de ~450% a ~630% na concentracao de 25 ƒÊg/mL. Para a IL-6 tambem foram observadas diferencas de efeitos para os tratamentos. As formas complexadas ARAGAL:VO (10 ƒÊg/mL) e GMPOLY:VO (25 ƒÊg/mL) promoveram uma aumento de duas vezes nos niveis de IL-6 alcancando ~540% e ~790%, respectivamente, quando comparado com as mesmas concentracoes das formas livres. XGJ e XGJ:VO, ambos na concentracao de 25 ƒÊg/mL promoveram um aumento nos niveis de IL-6 de ~200%. GALMAN-A e -B apresentaram perfis diferentes quanto aos niveis de IL-6. Somente GALMAN-B promoveu um aumento nos niveis desta interleucina de ~490% na concentracao de 25 ƒÊg/mL. As formas complexadas na mesma concentracao aumentaram os niveis de IL-6 de ~450% e ~630% para GALMAN-A:VO e GALMAN-B:VO, respectivamente. Somente GALMAN-B e GALMAN-B:VO aumentaram a producao de IL-10 de forma equivalente em ~390% na concentracao de 25 ƒÊg/mL. Nenhum dos polimeros assim como seus complexos alterou a producao de TNF-ƒ¿ por macrofagos peritoneais. Todos os polissacarideos e seus complexos com oxovanadio exibiram efeito leishmanicida contra as formas amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis. A intensidade de efeito foi similar ao observado para o GlucantimeR que promoveu uma inibicao de ~60% na concentracao de 300 ƒÊg/mL do antimonial. Os polissacarideos e seus complexos com oxovanadio (IV/V) avaliados neste trabalho promoveram ativacao de vias em macrofagos que podem estar diretamente envolvidas no intenso efeito leishmanicida, tambem evidenciado neste estudo. Advisors/Committee Members: Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Bioquímica, Noleto, Guilhermina Rodrigues.

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Orientadora: Profª Drª Iara de Messias Reason

Co-orientadora: Profª Drª Edna Aoba Yassui Ishikawa

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa: Curitiba, 17/06/2011

Bibliografia: fls.56-67

Área de concetração em doenças infecciosas

Resumo: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença endêmica em vários estados do Brasil. O agente etiológico é o protozoário Leishmania (L.) infantum chagasi e o principal vetor é o flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. Estudos epidemiológicos têm utilizado a PCR convencional para mensurar a taxa de infecção de flebotomíneos, como estratégia para aumentar a sensibilidade diagnóstica. Entre as principais vantagens deste método destaca-se a sensibilidade e especificidade, independente do número, estágio e localização de Leishmania no trato digestivo do vetor. Nesse sentido, o presente trabalho objetivou comparar genes com diferentes números de cópias para detectar L. chagasi em área endêmica para LV da Amazônia oriental, no município de Barcarena, estado do Pará. Foram realizadas capturas de 280 fêmeas de flebotomíneos Lu. longipalpis utilizando armadilhas de luz tipo CDC, no período de novembro de 2003 a fevereiro de 2004. O DNA foi extraído a partir do inseto inteiro, sem dissecção prévia, utilizando SDS e KOAc e empregado em reações de PCR para os genes de Leishmania: mini-exon, DNA do cinetoplasto (kDNA) e subunidade ribossomal 18S (SSU-rRNA). Foram empregados os seguintes iniciadores: D1 (5'-CCAGTTTCCCGCCCCG-3') e D2 (5'-GGGGTTGGTGTAAAATAG-3') que amplificam 780pb do gene kDNA; R221 (5'-GGTTCCTTTCCTGATTTACG-3') e R332 (5'-GGCCGGTAAAGGCCGAATAG-3') que amplificam 600pb do gene da subunidade menor do ribossomo (SSU-rRNA); S1629 (5'-GGGAATTCAATAWAGTACAGAAACTG-3') e S1630 (5'-GGGAAGCTTCTGTACTWTATTGGTA-3') que amplificam 400pb do gene mini-exon. A amplificação do gene da subunidade 28S rRNA (Lu1- 5'-TGAGCTTGACTCTAGTTTGGCAC3' e Lu2 5'-AGATGTACCGCCCCAGTCAAA-3') de Lu. longipalpis foi utilizado como controle para a extração do DNA do vetor, amplificando um fragmento de aproximadamente 370pb. Do total de 280 amostras de fêmeas Lutzomyia longipalpis, 24 (8,6%) apresentaram resultados positivos para o gene kDNA; 20 (7,1%), para o gene mini-exon; e 15 (5,3%) para o gene SSU-rRNA. Assumindo o resultado da taxa de infecção natural para o kDNA, a sensibilidade dos testes para os genes mini-exon e SSU-rRNA foi de 83,3% e 63%, respectivamente. A taxa de infecção foi considerada elevada e preocupante, visto que 62,5% dos vetores infectados foram coletados no intradomicílio; 37,5%, no peridomicílio. Os dados demonstram a importância da PCR como ferramenta para investigação da epidemiologia molecular da leishmaniose visceral para a estimativa de risco de transmissão da doença em área endêmica, com maior confiabilidade para o uso do DNA do cinetoplasto do parasita como marcador.

Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic disease in the majority of states in Brazil. The causative agent of VL the…

Advisors/Committee Members: Messias, Iara José Taborda de, 1958-, Ishikawa Edna Aoba Yassui, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna.

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Tese de doutoramento, Bioquímica (Regulação Bioquímica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010.

Leishmaniasis, caused by a Leishmania parasite belonging to the Trypanosomatidae family, are diseases affecting humans and other mammals. The most severe form of the disease is lethal if untreated, currently existing no vaccines or efficient therapies. The identification of new therapeutic targets is presently based on exploiting the biochemical differences between the parasite and the host. One of the main biochemical characteristics distinguishing trypanosomatids from other eukaryotic cells is the functional replacement of glutathione by trypanothione. In trypanosomatids, the glyoxalase system, comprising the enzymes glyoxalase I and glyoxalase II, depends on trypanothione to eliminate methylglyoxal, a toxic compound formed non-enzymatically during glycolysis. Hence, this is an excellent model system to understand trypanothione-dependent enzymes specificity at a kinetic and molecular level. The methylglyoxal metabolism in L. infantum study would not be complete without an account of aldose reductase, a NADPH-dependent enzyme also catabolising this toxic compound. This project includes an eclectic structural and biochemical study of the main enzymes involved in methylglyoxal catabolism, contributing for the knowledge of these complex parasites. Additionally, these enzymes’ activities complement each other in such a way that they can be synergistically exploited in the quest for new anti-leishmanial drug targets. The glyoxalase I gene from Leishmania infantum (LiGLO1) was isolated and cloned into an expression vector for bacteria. The recombinant protein was over-expressed in E. coli, purified and kinetically characterised. LiGLO1 showed to preferentially use the hemithioacetal derived from trypanothione, although it can also catalyse the same reaction with the glutathione-derived hemithioacetal. The recombinant protein was crystallised and its structure solved by molecular replacement, using the glyoxalase structure from L. major as a search model. Although the LiGLO1 structure is very similar to the L. major GLO1, as expected by its high homology, the metal observed at the active site is different. While LmGLO1 requires nickel for its activity, like glyoxalase I from prokaryotes, it was shown both by ICP and anomalous diffraction that LiGLO1 contains zinc in the active site, as its eukaryotic homologues. On the other hand, LiGLO1 has significant structural differences relatively to the human glyoxalase I enzyme. The glyoxalase II gene from L. infantum (LiGLO2) was also isolated and cloned in a bacterial expression vector. The recombinant protein was over-expressed in E. coli, purified and kinetically characterised, confirming its specificity towards trypanothione-derived thiolesters. LiGLO2 was crystallised and its structure solved by molecular replacement, using the glutathione-dependent human glyoxalase II structure as a search model, for its high sequence homology with the structurally unknown L.…

Advisors/Committee Members: Cordeiro, Carlos, 1966-, Silva, Marta Filomena de Sousa, 1975-.

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Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015

O óxido nítrico (NO) tem um grande impacto nos seres vivos. No Homem, o NO participa em vários processos fisiológicos, como a regulação da pressão sanguínea, a neurotransmissão e a resposta imune. Nestes processos, o NO funciona como uma molécula sinalizadora. No entanto, em níveis mais elevados, este radical pode ter efeitos tóxicos nas células, fazendo parte da resposta de defesa contra mcirorganismos patogénicos. De facto, há um consenso de que, nas infeções por Leishmania e Trypanosoma cruzi, o NO produzido pelos macrófagos infetados medeia a morte dos parasitas. Em parasitas do género Leishmania, o NO é ainda importante na interação entre o parasita e o hospedeiro. Para além disso, sabe-se atualmente que a concentração de NO produzido pelos parasitas varia ao longo do seu ciclo de vida, sendo tanto maior quanto maior é a sua infetividade. Assim, o NO assume um papel importante no estabelecimento da infeção por Leishmania. O enzima sintase do óxido nítrico (NOS, EC: 1.14.13.39), que catalisa a reação de formação de NO a partir de L-arginina, é, portanto essencial para o parasita. Atualmente, sabe-se que não existe homologia de sequência entre o NOS de Leishmania infantum (LiNOS) e de humano. Neste sentido, o LiNOS surge como um potencial alvo terapêutico para o combate da leishmaniose visceral, doença pela qual o parasita é responsável. Neste projeto foi demonstrado, pela primeira vez, que o LiNOS expresso nativamente forma um homotetrâmero. Foi ainda possível concluir que o tetrâmero de LiNOS é estabilizado na presença de heme e de tetrahidrobiopterina. Através da análise da sequência da proteína em estudo, foi prevista a existência de uma região desordenada entre os resíduos 210 e 270 e de um segmento transmembranar entre os resíduos 424 e 446. Na análise das regiões desordenadas do LiNOS, foi também identificado um local de ligação a montante e/ou a jusante desta região, sendo esta ligação potencialmente estabelecida com a caveolina. A estrutura tridimensional do monómero de LiNOS foi ainda prevista por homologia, tendo sido possível prevê-la para a maioria da sequência (resíduos 95-584). Os resultados obtidos permitiram gerar informação crucial para dirigir os próximos passos experimentais no sentido da sua elucidação total, assim como de outros aspetos relacionados com a função.

Nitric oxide (NO) exerts a great impact on living beings. On human cells, NO participates in several physiological processes, such as blood pressure regulation, neurotransmission and immune response. In these processes, NO works as a signaling molecule. However, when in higher levels, this radical can exert toxic effects on cells as part of the immune response against pathogenic microorganisms. In fact, that is a consensus that, in infections by Leishmania and Trypanosoma cruzi, NO produced by infected macrophages mediates parasite death. In Leishmania genus parasites, NO is also important for the parasite-host interaction.…

Advisors/Committee Members: Silva, Marta Sousa, Cordeiro, Carlos, 1966-.

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Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2013

O parasita Leishmania infantum, endémico nos países mediterrânicos, incluindo Portugal, é o causador da leishmaniose visceral, uma doença letal se não for tratada e para a qual não existem vacinas humanas. Tendo um ciclo de vida complexo, estes parasitas regulam a expressão e a função de proteínas através de modificações pós-traducionais (PTMs), extremamente importantes no seu desenvolvimento e infecção, nomeadamente a S-nitrosilação. Este trabalho teve dois objectivos principais. O primeiro foi a identificação do nitrosoproteoma da Leishmania infantum. Este objectivo foi conseguido utilizando duas abordagens proteómicas: a identificação por peptide mass fingerprint (PMF) por MALDI-FT-ICR e a análise por cromatografia líquida nano e espectrometria de massa (nanoLC-MS). O segundo objectivo foi a identificação dos processos metabólicos em que a nitrosilação pelo óxido nítrico poderá estar envolvida, de forma a perceber qual a importância desta modificação pós-traducional em L. infantum. No total foram identificadas 137 proteínas diferentes, 8 por MALDI-FT-ICR e 134 por nanoLC-MS. De salientar que apenas 3 proteínas identificadas por MALDI-FT-ICR não foram identificadas através de nanoLC-MS. De entre os vários processos celulares identificados, que contêm proteínas nitrosiladas, podemos destacar como mais relevantes os processos de folding proteíco, a resposta ao stress e o metabolismo dos glúcidos. No que diz respeito ao folding proteico, a S-nitrosilação das proteínas de choque térmico Hsp70 e Hsp83, bem como da proteína dissulfito isomerase, poderá modelar a sua função como chaperone. Em relação à resposta ao stress, é interessante a S-nitrosilação do triparedoxina peroxidase e do glioxalase I, enzimas envolvidos no stress oxidativo e carbonílico, respectivamente. A modificação destes enzimas pelo NO poderá inibir a sua actividade enzimática. Por fim, em relação ao metabolismo de glúcidos, a S-nitrosilação do GAPDH poderá exercer um papel fundamental no controlo do fluxo glicolítico o enolase poderá ter um papel importante no scavange do NO produzido pelo hospedeiro na fase de amastigota.

The parasite Leishmania infantum, endemic from the Mediterranean region, including Portugal, it’s the leading cause of visceral leishmaniasis, a lethal condition if untreated and for which there are no human vaccines. Due to their complex life cycle, these parasites use posttranslational modifications (PTM), e.i. S-nitrosylation, to regulate the expression and function of proteins being these extremely important in the parasite’s development and infection capacity. One of the two main objectives of this project was the Leishmania infantum nitrosoproteome identification. This objective was accomplished using two proteomic approaches: identification by peptide mass fingerprint (PMF) through MALDI-FTICR and analysis through nanoscale liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (nanoLC-MS). The second…

Advisors/Committee Members: Silva, Marta Sousa, Gomes, Ricardo Jorge dos Anjos, 1979-.

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Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2012

A leishmaniose é uma doença que ameaça cerca de 350 milhões de pessoas a nível mundial. O tipo mais grave da doença é a leishmaniose visceral, causada pelo parasita Leishmania infantum, com incidência na bacia do Mediterrâneo e América latina. Não existem ainda vacinas humanas nem tratamentos eficazes para a leishmaniose, o controlo desta doença é insuficiente e a área afectada pelo parasita tem aumentado. Consequentemente, a identificação de novos alvos terapêuticos eficazes assume uma elevada importância. Este projecto teve como principal objectivo caracterizar o sintase do óxido nítrico (NOS) de Leishmania infantum a nível estrutural, funcional e cinético ao longo do ciclo de vida do parasita, e o seu potencial como alvo terapêutico dada a relevância deste enzima em processos celulares vitais. Demonstrou-se pela primeira vez a presença de um NOS constitutivo dependente do cálcio activo nos diferentes estadios do ciclo de vida de Leishmania infantum. Foi descoberto que a sua actividade é regulada pelo cofactor tetrahidrobiopterina (BH4). Apesar da expressão do NOS não variar entre promastigotas e amastigotas, observou-se que a actividade do enzima é mais elevada em promastigotas em fase exponencial de crescimento do que em promastigotas em estado estacionário e amastigotas, evidenciando assim que o NO endógeno desempenha um importante papel importante na infectividade dos parasitas. Após otimização das condições de produção de NOS recombinante, elucidou-se pela primeira vez a estrutura quaternária do NOS de um tripanosomatídeo. O NOS de Leishmania infantum é um homotetrâmero enquanto os NOS de mamíferossão homodímeros. Observou-se ainda que o enzima do parasita não necessita de cofactores para formação da estrutura quaternária, sendo no entanto estabilizado pela ligação do heme e do BH4. Este enzima é destabilizado termicamente e por exposição ao NO, similarmente ao enzima de mamíferos. As diferenças estruturais e de sequência entre o NOS do parasita e as isoformas de mamíferos sugerem que este enzima seja um potencial alvo terapêutico em tripanosomatideos.

Leishmaniasis is a disease that threatens 350 million people worldwide. The most serious type of the disease is the visceral leishmaniasis, caused by Leishmania infantum in the Mediterranean sea and Latin America. There are no human vaccines nor efficient treatment methods for the disease, the control of the infected animals is inefficient, and the area affected by the parasite is expanding. Therefore, the discovery of new therapeutic targets is extremely important. Our aim was to characterize kinetic, functional and structurally the nitric oxide synthase (NOS) from Leishmania infantum, during the parasite’s life cicle, accessing the potential of the NOS as a therapeutic target, due to its great importance for the cell. We showed for the first time the existence of a calcium-dependent constitutive NOS, which is active during the different…

Advisors/Committee Members: Silva, Marta Sousa, Cordeiro, Carlos, 1966-.

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Orientadora: Dra. Guilhermina Rodrigues Noleto

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 26/02/2010

Bibliografia: fls.71-79

Resumo: O tratamento atual para Leishmanioses é feito principalmente com antimoniais pentavalentes há mais de 60 anos. Além de resistência do parasita, estes medicamentos apresentam alta toxicidade. Frente à capacidade de polissacarideos de ativar macrófagos para executar atividade microbicida, o que inclui a atividade leishmanicida, esta foi avaliada in vitro para a arabinogalactana neutra ARAGAL, obtido de Anandethera columbrina, e para polissacarídeos sulfatados obtidos de macroalgas marinhas, Go3 (heteroraminana sulfatada), Iota-Gy (galactana kappa-iota-nu-carragenana) e EHW-I (galactana iota-nu-carragenana). Os compostos Go3, Iota-Gy e EHW-I inibiram a produção de ânion superóxido na ausência e presença de PMA 1 g/mL e apresentaram atividade captadora da mesma espécie reativa de forma dose dependente, chegando, na concentração 10 g/mL a 33% de captação com o Go3, 44% com o Iota-Gy e 55% com o EHW-I. Apresentaram ainda aumento da produção de óxido nítrico alcançando a 10 g/mL aproximadamente 110% de ativação em relação ao controle negativo para Go3, 71% para Iota-Gy e 81% para EHW-I. Houve diminuição da atividade fagocítica para Go3 e EHW-I, Iota Gy não exibiu efeito para esta atividade. A morfologia foi bastante alterada por estes compostos. ARAGAL, Go3, Iota-Gy e EHWI foram então avaliados quanto a atividade leishmanicida em macrófagos peritoneais de camundongos infectados com Leishmania (Leishmania) amazonensis. O polissacarídeo ARAGAL apresentou atividade leishmanicida nas concentrações 10, 25 e 50 g/mL, inibindo 88% do crescimento da Leishmania (Leishmania) amazonensis na concentração mais baixa. O polissacarídeo Go3 apresentou atividade a partir da concentração 5 g/mL chegando a 55% de inibição em 10 g/mL. Iota-Gy iniciou sua atividade já em 2,5 g/mL e atingiu 50% de inibição em 10 g/mL. EHW-I exibiu o efeito leishmanicida mais intenso em todas as concentrações, atingindo 98% de inibição em 10 g/mL. Os resultados obtidos neste trabalho colocam as moléculas testadas em evidência para investigações futuras visando o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos contra leishmanioses.

The current treatment against Leishmaniasis is mainly done using pentavalent antimonials for over 60 years. Beyond parasits resistance, this medications are highly toxic. Faced with the capacity of olysaccharides activating macrophages to stimulate the microbicidal activity, that includes the leishmanicidal activity, it was evaluated in vitro to the neutral arabinogalactan ARAGAL, obtained from Anandethera columbrina, and to sulfated polysaccharides obtainded from seaweeds, Go3 (sulfated heterorhamnan), Iota-Gy (galactan kappa-iota-nu-carrageenan) and EHW-I (galactan iotanu- carrageenan). The compounds Go3, Iota-Gy and EHW-I inhibited the superoxide anion production in the absence or presence…

Advisors/Committee Members: Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica), Noleto, Guilhermina Rodrigues.

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Orientadora : Iara Taborda de Messias Reason

Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde, Programa de Pós-Graduaçao em Ciencias Farmaceuticas. Defesa: Curitiba, 2005

Inclui bibliografia

Área de concentraçao: Análises clínicas

Resumo: A Leishmania (Viannia) braziliensis, é o agente causador da leishmaniose cutânea mucosa, doença endêmica em algumas regiões do Brasil, que representa um grande problema de saúde pública para o país. A ativação do complemento na superfície de promastigotas de Leishmania é um importante fator para a infectividade do parasita em hospedeiros mamíferos, permitindo o seu ataque e invasão de macrófagos via receptores do complemento. A Lectina Ligante da Manose (MBL), possui a capacidade de ativar o complemento e também atua como uma eficiente opsonina. Neste estudo investigou-se a interação de MBL purificada com a superfície de promastigotas da L. braziliensis e a deposição de MBL, C1q, C4 e C3 na superfície do parasita após interação com soro humano normal (SHN), não imune. Foi também avaliada a influência das vias clássica, alternativa e das lectinas no efeito lítico do complemento sobre os parasitas. Observou-se que tanto a MBL do soro como o complexo MBL-MASP purificado ligam-se à superfície da L. braziliensis, através de ensaios de imunofluorescência e de inibição utilizando-se anticorpo monoclonal anti-MBL humana e microscopia confocal. A ligação da MBL demonstrou ser específica para manose presente na superfície do parasita. Foi também observado que a deposição da MBL na superfície da L. braziliensis não alterou o efeito lítico do complemento sobre os parasitas. Deposição de C1q, C4 e C3 foi observada após incubação do parasita com SHN. Ácido etilenodiamino tetraacetico (EDTA), mas não ácido etileno glicol-bis ?-aminoetileter N,N,N,N-tetraacético (EGTA) inibiram a deposição de C3 na superfície do parasita, indicando o envolvimento da via alternativa neste processo. Esses resultados indicam que a MBL pode ligar-se a L. braziliensis através de carboidrato específico na superfície do parasita e fornece evidências para um mecanismo de ativação do complemento independente de anticorpo. Palavras Chave: Leishmania (Viannia) braziliensis, MBL, complemento, lectina-ligante da manose, via clássica, via alternativa.

Leishmania (Viannia) braziliensis (L.braziliensis) is the causative agent of mucocutaneous leishmaniasis, a disease that presents high endemicity in some regions of Brazil that represents a major public health problem for the country. Activation of complement on the surface of Leishmania promastigotes appears to be an important factor for parasite infectivity in the mammalian host, allowing their attachment and invasion of macrophages via complement receptors. Mannan-binding lectin (MBL) is a well-known complement activator and an efficient opsonine. In this study, we have investigated whether serum and purified MBL bind to live promastigotes of L. braziliensis and evaluated the deposition of MBL, C1q, C4 and C3 on the parasite…

Advisors/Committee Members: Messias, Iara José Taborda de, 1958-, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas.

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A doença de Chagas é uma doença tropical infecciosa e negligenciada responsável por um grande número de pessoas infectadas e em risco de infecção, principalmente nas regiões pobres da América Latina. No momento, apenas duas drogas, Benzonidazol e Nifurtimox, estão disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, mas são ineficazes por apresentarem baixa taxa de cura. O Megazol é um importante representante da classe dos nitroimidazóis e é uma alternativa promissora devido ao seu potencial tripanocida com um perfil superior de ação quando comparado ao tratamento disponível. No entanto, o Megazol não é utilizado clinicamente uma vez que possui atividade mutagênica e carcinogênica relatada. O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos) desenvolveu três análogos do Megazol: PTAL 05-02 (3-amino-5-(1-metil-5-nitro-1H-imidazol-2-il)-1H-1,2,4-triazol), PAMT 09 (2-amino-N-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-5-(trifluorometil)-1H-1,2,4-triazol) e PTAL 04-09 (1-(1-metil-4-nitro-1H-imidazol-5-il)-1H-pirazol). O objetivo deste trabalho é apresentar novas moléculas análogas do Megazol com atividade tripanocida, desenvolvidas a partir de estratégias racionais de desenvolvimento de substâncias bioativas ao manter o perfil farmacodinâmico do Megazol enquanto tenta diminuir ou remover o efeito genotóxico. Testes genotóxicos na avaliação segura de novas substâncias bioativas foram utilizados, de acordo com as diretrizes da OECD. O teste da Salmonella/microssoma foi utilizado na avaliação mutagênica e citotóxica, utilizando linhagens de Salmonella enterica sorovar Typhimurium, deficientes e supercompetentes na síntese de enzimas nitroredutase e acetiltransferase. O análogo PAMT 09 não foi mutagênico em nenhuma concentração e linhagem utilizada. Os análogos PTAL 05-02 e PTAL 04-09 foram mutagênicos, na ausência de S9 mix, para a linhagem TA98/1,8-DNP6. Na avaliação de citotoxicidade, os três análogos foram citotóxicos, independente de metabolização exógena S9 mix. O teste do micronúcleo, utilizando células de macrófago de rato, foi realizado para a avaliação genotóxica dos análogos do Megazol. Os três análogos foram capazes de induzir a formação de micronúcleos e apresentaram efeito citotóxico.

Chagas disease is an infectious neglected tropical disease responsible for a large number of infected people and at risk for infection, mainly in poor areas of Latin America. At the moment, there are just two drugs, Benzonidazol and Nifurtimox, available for the Chagas disease treatment, but they are ineffective since they have low cure rates. Megazol is an important representative of nitroimidazole class and it is a promising alternative because of its trypanocidal activity with a superior profile of action compared to the available treatment for Chagas disease. However, Megazol is not used clinically since its mutagenic and carcinogenic activity was reported. The Institute of Pharmaceutical Technology (Farmanguinhos) has designed 3 analogues from Megazol: PTAL 05-02 (2-amine-5-(1-methyl-5-nitro-1H-imidazole-2-yl)-1H-1,2,4-triazole),…

Advisors/Committee Members: Alexandre Ribeiro Bello, Israel Felzenszwalb, Marcia Cristina Paes, Claudia Alessandra Fortes Aiub, Alcione Silva de Carvalho.

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Orientador : Marco Aurélio Krieger

Dissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2005

Inclui bibliografia

O estudo genômico funcional da interação patógeno-hospedeiro é de grande importância para a compreensão dos mecanismos moleculares que regem o desencadeamento das doenças infecciosas, sendo os eventos iniciais da interação entre patógenos e seus hospedeiros passos potencialmente decisivos para a definição do curso da doença subseqüente. Além de fatores diretamente ligados ao patógeno como patogenicidade e virulência, fatores concernentes ao hospedeiro, tais como seu estado geral de saúde e constituição genética, são extremamente importantes para a determinação do tipo e/ou severidade da doença. Isso é especialmente válido para infecções por parasitas do gênero Leishmania, cuja principal célula hospedeira é o macrófago. As várias espécies desses parasitas têm a capacidade de desencadear diversos quadros clínicos da leishmaniose em um hospedeiro, assim como a infecção por uma única espécie pode ocasionar respostas bastante distintas em diferentes hospedeiros. Com o objetivo de descrever as diferenças genéticas entre macrófagos de duas linhagens diferentes de camundongos isogênicos, uma suscetível (CBA/J) e outra resistente (C57BL/6) à infecção por L. amazonensis, e de avaliar o possível impacto dessas diferenças na seqüência da infecção e no fenótipo de resistência ou suscetibilidade a esse parasita, foi utilizada a tecnologia GeneChip®_ (Affymetrix). Essa tecnologia consiste em uma plataforma de microarranjos de sondas oligonucleotídicas para varredura em larga escala dos transcritos produzidos por uma célula, sendo avaliados os perfis de expressão de mais de 12000 genes murinos simultaneamente. Os macrófagos das duas linhagens foram comparados entre si e dessa comparação foram selecionados 202 genes diferencialmente expressos. Desses genes, vários já foram descritos como tendo algum papel na resposta imune, tanto na ativação quanto na inibição das funções dos macrófagos e outras células de defesa, e podem apontar caminhos para futuras investigações sobre seus papéis na resistência ou suscetibilidade das células à infecção. Entre eles estão os genes que codificam receptores de quimiocinas e citocinas como CCR5 e IL-10R, quimiocinas como CCL3 e CCL4, fator C1q do complemento, receptores de prostaglandinas, várias proteínas da família p200 de proteínas induzidas por IFN-g, além de proteínas relacionadas ao citoesqueleto, adesão celular e fagocitose, entre outras. Também foram comparados macrófagos infectados dessas duas linhagens com controles não-infectados. Nesse caso, vimos padrões bastante complexos de mudanças na expressão gênica das células infectadas, especialmente na linhagem CBA/J onde não foi possível selecionar genes com expressão diminuída na infecção com significância estatística. Esse trabalho mostra uma visão preliminar das diferenças genéticas entre duas linhagens de…

Advisors/Committee Members: Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular, Krieger, Marco Aurelio.