▼ 

Considerando as controvérsias sobre a eficácia do tratamento específico com Benznidazol (Bz) na prevenção ou redução das lesões cardíacas crônicas, este projeto propôs avaliar a influência do tratamento específico na evolução da cardiopatia chagásica, utilizando como modelo experimental cães infectados por cepas do Trypanosoma cruzi sensíveis e resistentes ao Bz. As avaliações imunopatológicas e clínicas foram realizadas utilizando: (i) a avaliação da área ocupada pela inflamação e pela fibrose no músculo cardíaco (ii) avaliação dos níveis de expressão mRNA para citocinas no tecido cardíaco; (iii) avaliação da resposta proliferativa e morte por apoptose de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e quantificação da produção de citocinas no sobrenadante das CMSP dos animais ao longo da infecção; (iv) avaliação das possíveis interferências do tratamento com Bz sobre a evolução clínica da cardiopatia experimental, através da detecção das alterações eletrocardiográficas, em cães chagásicos tratados e não tratados. Nossos resultados mostraram que o tratamento específico induziu 100% de cura nos animais infectados pela cepa Berenice-78, e que não houve cura parasitológica entre os infectados pelas cepas VL-10 e AAS. O tratamento específico, de maneira geral, preveniu as lesões cardíacas dos animais curados, bem como as alterações eletrocardiográficas. De forma interessante, entre os animais não curados foi observado um padrão de resposta variável de acordo com a população do T. cruzi. Nos animais infectados pela cepa AAS foi detectada redução significativa do processo inflamatório e da fibrose no tecido cardíaco acompanhado de ausência de alterações eletrocardiográficas. De forma diferente, entre os animais infectados pela cepa VL-10, o tratamento não foi eficaz em reduzir tanto as lesões cardíacas quanto as alterações eletrocardiográficas. Os parâmetros imunológicos avaliados durante as fases aguda e crônica da infecção foram marcadamente influenciados tanto pela cepa do parasito quanto pelo tratamento específico. Foi possível correlacionar a intensidade das lesões cardíacas e a produção de imunoglobulinas (IgG, IgG1, IgG2) no soro e de citocinas (TNF-, IFN- e IL-10) no sobrenadante de CMSP, além da expressão de mRNA dessas citocinas no tecido cardíaco dos animais submetidos ou não à quimioterapia com o Bz. De forma geral, nossos resultados contribuirão para uma melhor compreensão do benefício do tratamento específico na evolução clínica e nos mecanismos imunopatológicos envolvidos na doença de Chagas.

Based on the divergences concerning the efficacy of anti-Trypanosoma cruzi treatment with Benznidazol (Bz) in the prevention and reduction of cardiac chronic lesions, the aim of this study was evaluate the influence of Bz in the evolvement of the Chagas cardiopathy using dog models infected with Bz-resistent and susceptible strains of parasites. Clinical and immunopathology parameters were performed through evaluation of the: (i) inflammation and fibrosis area in cardiac muscle; (ii) mRNA…

Advisors/Committee Members: André Talvani, Egler Chiari, Silvana Maria Elói Santos, Marta de Lana, Sandra Aparecida Lima de Moura, Maria Terezinha Bahia.

▼ Os macrófagos são as células preferenciais para a infecção e a proliferação de parasitas do gênero Leishmania. A sobrevivência do parasita e o desenvolvimento da infecção são resultado direto da evasão do parasita dos mecanismos microbicidas do hospedeiro. As formas amastigotas de Leishmania (L) amazonensis isoladas de lesões em camundongos expõem o fosfolipídio fosfatidilserina (PS) na face externa da sua membrana plasmática, um fenômeno descrito como Mimetismo Apoptótico. O reconhecimento deste fosfolipídio pelo macrófago induz a internalização do parasita por um mecanismo de macropinocitose, a produção de citocinas anti-inflamatórias IL-10 e TGF-β e inibe a produção de óxido nítrico (NO), contribuindo para o aumento da infectividade do parasita e sua proliferação na célula hospedeira. A exposição de PS na superfície das amastigotas pode ser modulada pelo hospedeiro: amastigotas isoladas de lesões em camundongos BALB/c expõem mais moléculas de PS na superfície que aquelas isoladas de camundongos C57BL/6. Neste trabalho demonstramos que amastigotas purificadas de macrófagos de camundongos BALB/c e C57BL/6 infectados in vitro não apresentam diferenças significativas na exposição de PS na superfície, sugerindo que as diferenças observadas no modelo in vivo são dependentes de uma ativação diferencial dos macrófagos no hospedeiro. Amastigotas isoladas de lesão em camundongos BALB/cnu/nu expõem menos PS na superfície que aquelas isoladas de lesões em camundongos BALB/c, indicando um papel das citocinas produzidas pelas células T na modulação da exposição de PS pelo parasita. Durante o processo de diferenciação de promastigota para amastigota no interior do vacúolo parasitóforo ocorre aumento na exposição de PS na superfície externa da membrana do parasita. Neste período, observamos indução de macropinocitose nos macrófagos infectados e fusão das vesículas macropinocíticas com o vacúolo contendo os parasitas, sugerindo que a exposição de PS pela amastigota intracelular pode sinalizar, via membrana do vacúolo parasitóforo, para maior aporte de nutrientes no vacúolo. Este processo é inibido após a alcalinização do vacúolo com cloroquina. A exposição de PS pela amastigota intracelular também induz a síntese de TGF-β e inibe a produção de NO pelos macrófagos infectados. Estes resultados reforçam a hipótese de sinalização por este fosfolipídio a partir da membrana do vacúolo parasitóforo, modulando a atividade microbicida e favorecendo o crescimento do parasita no interior dos macrófagos. Amastigotas com alta exposição de PS na superfície apresentam esta molécula organizada em forma de agregados na membrana, preferencialmente localizados na região posterior do parasita. Esta região é onde acontece a adesão do parasita à membrana do vacúolo parasitóforo e a presença dos agregados de PS pode favorecer o reconhecimento e a sinalização pelo parasita a partir da membrana desta organela. Nossos resultados demonstram que a exposição de PS representa um importante mecanismo de virulência para as formas amastigotas de L.… Advisors/Committee Members: Marcello André Barcinski.

▼ Nosso grupo vem estudando a infecção experimental de cães pelo Trypanosoma cruzi ao longo dos últimos 30 anos. Semelhante ao observado em humanos, no modelo canino verifica-se um infiltrado inflamatório predominantemente constituído por células mononucleares durante a fase aguda da doença. A identificação destas células é uma estratégia importante para a compreensão dos mecanismos imunopatológicos desencadeados pelo parasito ao longo da infecção. Neste contexto, fez-se necessário a padronização de reações imuno-histoquímicas para caracterização do fenótipo das principais células presentes no infiltrado inflamatório (linfócitos T CD4 + e T CD8 + , macrófagos CD14 + e neutrófilos). As células envolvidas na infecção experimental aguda de cães por formas tripomastigotas metacíclicas ou sanguíneas da cepa Berenice-78 do T. cruzi foram quantificadas por análise morfométrica, no parênquima e no foco inflamatório, tanto no átrio direito quanto no septo interventricular. Observou-se que em ambos os fragmentos cardíacos, o processo inflamatório foi maior no grupo infectado por formas tripomastigotas sanguíneas. A quantificação do fenótipo celular mostrou que os linfócitos T CD4 + são predominantes no foco inflamatório nos animais infectados por ambas as formas, tanto no átrio direito quanto no septo interventricular. No átrio direito, os linfócitos T CD8 + foram observados em maior quantidade nos grupos infectados em relação ao grupo controle. Já os macrófagos CD14 + prevalecem apenas no grupo infectado por formas tripomastigotas metacíclicas em relação ao grupo controle. No septo intraventricular, os linfócitos T CD8 + e os macrófagos CD14 + encontram-se em elevado número no grupo infectado por formas tripomastigotas metacíclidas em relação ao grupo controle e ao grupo infectado por formas tripomastigotas sanguíneas. Os neutrófilos estão presentes em menor número em relação às demais células analisadas, mas são encontrados em maior número no átrio direito de ambos os grupos infectados. O quadro histopatológico mais preservado observado no grupo infectado por formas tripomastigota metacíclico pode estar diretamente relacionado à interação entre os linfócitos T CD8 + e os macrófagos CD 14 + , pois estas são potentes produtoras de interleucina-12, uma citocina que estimula a produção de interferon-gama pelos linfócitos T CD8 + . Esta citocina é fundamental para o processo de resistência à infecção pelo T. cruzi durante a fase aguda por estimular a síntese de óxido nítrico pelos macrófagos. A quantificação celular realizada de modo aleatório evidenciou melhor as diferenças entre os grupos. Contudo, a quantificação focal do processo inflamatório distinguiu melhor as porcentagens das populações e subpopulações celulares. Os resultados obtidos mostraram que as formas infectantes, tripomastigotas metacíclicas ou sanguíneas, apresentam perfil celular distinto no átrio direito e no septo intrerventricular, sendo a resposta elaborada durante a infecção com as formas tripomastigotas metacíclicas mais eficiente e menos lesiva ao… Advisors/Committee Members: Marcelo Vidigal Caliari, Ricardo Gonçalves, Claúdia Martins Carneiro.

▼ 

A hanseníase é uma doença infecciosa caracterizada por apresentar diferentes formas clínicas que estão associadas com o tipo de resposta imune ao Mycobacterium leprae. Polimorfismos genéticos presentes no primeiro íntron de IFN- podem apresentar importante papel na regulação da resposta imune, podendo resultar em consequências funcionais na transcrição do gene. Estudos anteriores identificaram a presença de cinco polimorfismos na região promotora de IL12RB2, sendo que estes polimorfismos poderiam suprimir fatores de transcrição na expressão de IL12R2, afetando o desenvolvimento da resposta imune celular. No presente estudo investigamos uma possível associação do SNP +874, do microssatélite de IFN- e de polimorfismos presentes na região promotora de IL12RB2 com a susceptibilidade à hanseníase ou com desenvolvimento das formas clínicas em pacientes dos Estados da Amazônia Legal brasileira. O sequenciamento nucleotídico foi realizado em 118 pacientes com hanseníase e 114 indivíduos controles, assim como a imunofenotipagem de células T CD4 +, CD8 + e CD69 + pela citometria de fluxo. Entre pacientes com hanseníase e indivíduos controles, assim como entre pacientes PB e MB não foram observadas diferenças significativas entre os genótipos estudados nos polimorfismos de IL12RB2. Os polimorfismos - 1035, -1023 e -464 apresentam uma correlação absoluta (p<0,0001) havendo combinação de um mesmo genótipo nas respectivas posições. O microssatélite com 16 repetições foi significativamente associado com pacientes PB quando comparado aos pacientes MB (p = 0,019). Indivíduos homozigóticos ao alelo +874 A apresentaram maiores níveis de IFN- e maior média de células T CD4 + e CD69 +. Nossos dados sugerem que polimorfismos presentes no primeiro íntron de IFN- e da região promotora de IL12RB2 não estão associados com a susceptibilidade à hanseníase. No entanto, o genótipo +874 A/A e 16 repetições de CA de IFN- podem estar relacionados à alta resposta imune celular observada nestes pacientes, sendo também mais frequentemente encontrados em pacientes PB.

Leprosy is an infectious disease characterized by different clinical forms that are associated with the type of immune response against Mycobacterium leprae. Polymorphisms present in the first intron of IFN- may have an important role in the regulation of the immune response, which could have functional consequences for gene transcription. Later studies identified the present of five polymorphisms in the IL12RB2 promoter region, this polymorphisms will may transcriptional factor suppress IL12R2 expression affect the development of cellular immune response. In the present study we investigated a possible association of the +874 T/A SNP and IFN-, microsatellite and polymorphisms present in the IL12RB2 promoter region associated with susceptibility to leprosy or with development of clinical forms in patients from brazilian Legal Amazon states. Nucleotide sequencing was performed with samples from 118 leprosy patients and 114 controls…

Advisors/Committee Members: Paula, Lúcia de, 26241709879, http://lattes.cnpq.br/5181076287139121, Naveca, Felipe Gomes, 07512955740, http://lattes.cnpq.br/3396741165569463.

▼ 

A Via Alternativa é a principal via de ativação do sistema complemento (SC), sendo o Fator H (FH) um de seus principais reguladores. No presente estudo, nós investigamos os mecanismos moleculares pelo qual o paciente com a mutação Arg127His no FH possui deficiência do SC. Para isto, utilizamos fibroblastos de paciente e individuo normal estimulados com IFN-g e verificamos que as células do paciente eram capazes de produzir FH, contudo a maior parte das proteínas estava retida no retículo endoplasmático (RE). Em paralelo, transfectamos células Cos-7 com plasmídeos contendo a mutação CG453T® CA453T e observamos que a mutação foi responsável pelo retardo na secreção de FH. Apesar da mutação reduzir a secreção de FH, observamos que a capacidade de FH atuar como co-factor não foi afetada. Assim, avaliamos se o uso de chaperonas químicas poderia induzir a secreção da proteína e observamos que houve aumento na secreção de FH nos fibroblastos. Desta forma, propomos o uso desses fármacos como alternativa de tratamento para melhorar a sobrevida do paciente.

Factor H (FH) is one of the most important regulatory proteins of the alternative pathway of the complement system (CS). In this study, we investigated the consequences of FH Arg127His mutation to the secretion ratio of this protein by skin fibroblasts in vitro. We stimulated the FH synthesis from patient and normal control with IFNg when we observed that the patient cells were able to synthetize FH, however this mutant protein was mainly retained at the endoplasmic reticulum. In parallel, we transfected Cos-7 cells with plasmids containing CG453T® CA453T mutation and observed that the mutation was responsible for the delay in the FH secretion. Although the mutation reduced the FH secretion, we observed that the FH function was not affected. Thus, we evaluated whether the treatment with chemical chaperones could release FH to the culture supernant. We observed that patients fibroblasts treated increased the secretion of FH. In conclusion, we suggest the use of these chemical chaperones as a potential alternative therapeutic to improve the patients survival.

Advisors/Committee Members: Isaac, Lourdes.

▼ 

CD4 count is the major surrogate marker for defining the best time to start antiretroviral therapy in HIV infected patients, as well as for defining the duration of prophylaxis against opportunistic infection. Its high cost, however, limits the use of this technique in resource-limited settings. Total lymphocyte count (TLC) has been evaluated as a substitute marker for CD4 count. The objective of this study is to evaluate the capability of TLC to be used as a substitute marker for CD4 count in order to detect patients who need prophylaxis against opportunistic infection (CD4 <200 cells/mm3), and those with CD4 <350 cells/mm3 (Brazilian limit to define AIDS). We evaluated TLC and CD4 of 1174 HIV-infected patients, in HUPES, from May/2003 to September/2004. CD4 counts were performed by flow cytometry, and TLC by an automated hematological counter. A total of 1510 subjects were evaluated. The CD4 count range was 4 to 2531 cells/mm3), and the TLC range 300 to 6200 cells/mm3. The best TLC limit to estimate a CD4 <200 cells/mm3 was ≤ 1700 cells/mm3 (SE= 76.3%; SPE= 65.2%, NPV= 93.1%), but the PPV was only 31.1%. The same findings were observed for the limit of <350 cells/mm3, but we find a worst sensitivity (SE= 59.4%, SPE= 96.6%, PPV= 57.3% and NPV= 79.4%). Altogether, these results indicates that although a statistical correlation exists between TLC and the CD4+ T cell count, the TLC is not a good predictor of the CD4+ T cell count. TLC would not be a safe marker for a CD4+ T cell count in HIV-infected patients, but could be used as an surrogate to monitoring the need to perform CD4 cell count.

A contagem de células T CD4+ é o principal marcador imunológico usado para definir o momento adequado para início da terapia antiretroviral e profilaxia para infecções oportunistas em pacientes portadores do vírus HIV. Seu alto custo limita o uso desta técnica em muitos locais no mundo. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilidade da TLC em substituir a contagem de células T CD4+ como marcador imunológico para detectar os pacientes com necessidade de profilaxia contra infecções oportunistas (CD4 <200 cel/mm3), e aqueles com CD4 <350 cel/mm3 (limite brasileiro que define AIDS). Nós analisamos a TLC e contagem de células T CD4 de 1174 pacientes infectados pelo HIV provenientes do HUPES durante o período de maio/2003 a setembro/2004. A contagem de células T CD4+ foi realizada por citometria de fluxo e a contagem total de linfócitos por contador hematológico automatizado. Foram analisadas um total de 1510 amostras. A contagem de células T CD4+ teve valor mínimo de 4 cel/mm3 e valor máximo de 2531 cel/mm3, TLC teve mínimo de 300 cel/mm3 e máximo de 6200 cel/mm3. O melhor valor de TLC, capaz de predizer CD4 <200 cel/mm3, foi ≤ 1700 cel/mm3 (SE=76,3%; SPE=65,2%, NPV=93,1%), mas PPV de somente 31,1%. Resultados semelhantes foram encontrados para contagem de células T CD4+ <350 cel/mm3, entretanto observou-se menor sensibilidade (SE= 59,4%, SPE=96,6%, PPV= 57,3% e NPV= 79,4%). Estes resultados indicam que apesar da forte…

Advisors/Committee Members: Eduardo Martins Netto, Theolis Costa Barbosa Bessa, Carlos Roberto Brites Alves.

▼ 

A ativação dos fagócitos é crítica para a defesa contra vários patógenos, por isso a importância de estudos que desenvolvam alternativas para a ativação dessas células. Nosso estudo visou investigar os efeitos do BAY 41-2272 na ativação de fagócitos. Para este propósito avaliamos a fagocitose, liberação de superóxido e atividade microbicida. Foram usados PBMC, neutrófilos e a linhagem celular THP-1, cultivadas na presença ou ausência de BAY 41-2272 (1mM ou 3mM) por 1h ou 48h a 37°C. A liberação de superóxido foi avaliada pelo ensaio da redução do citocromo c inibido especificamente pela superóxido dismutase; a fagocitose foi analisada através da co-cultura com partículas de Zymosan e contagem das células com partículas englobadas; e a atividade microbicida foi mensurada por meio da co-cultura com E. coli enteropatogênica seguida pela contagem das CFU formadas pelas bactérias recuperadas dos fagócitos. Além disso, fizemos a dosagem de IL-12, IFN-g e TNF-a e a análise da expressão gênica do gene CYBB. Todos os tipos celulares responderam aos tratamentos. Os PBMC, neutrófilos e THP-1 tratados com BAY 41-2272 produziram significativamente mais superóxido (cerca de 50% mais), e apresentaram significativamente maior atividade fagocítica (cerca de 54% mais), microbicida (cerca do dobro) comparados ao grupo controle não tratado, além de produzir TNFa. Ainda, o tratamento com o fármaco aumentou a expressão do gene da gp91phox nas THP-1 e PBMC. BAY 41-2272, especialmente na dose de 3mM, mostrou um grande potencial na ativação dos fagócitos em vários aspectos. Este potencial pode ser explorado na busca por novas terapias destinadas ao controle de infecções, principalmente no caso das imunodeficiências.

Phagocyte activation is critical role for host defense against several pathogens, so that studies developing alternatives for activating these cell are very important. We investigated the effects of BAY 41-2272 on phagocytes activation. For this purpose we evaluated several aspects indicating cellular activation, as phagocytosis, superoxide release and microbicidal activity. We used PBMC, neutrophils and THP-1 cell lineage cultured or not with BAY 41-2272 (1mM and 3mM) for 1h or 48h at 37°C. Superoxide release was tested by superoxide dismutase-inhibitable cytochrome c reduction assay; phagocytosis was evaluated through co-culture with zymosan particles and counting of ingested particles; and microbicidal activity was measured through co-incubation with enteropathogenic E. coli followed by counting of CFU from recovered bacteria from phagocytes. We analyzed the IL-12, IFN-g and TNF-a cytokine production and gp91phox gene expression. All cell types showed a response to treatments. PBMC, PMN and THP-1 treated with BAY 41-2272 produced significantly more superoxide (about 50% more), and presented significantly more phagocytic (about 54% more), microbicidal (about twice) activity than control group and production more TNF-a than control group. The expression of CYBB gene was more expressed on treated cells than control. BAY…

Advisors/Committee Members: Condino Neto, Antonio.

▼ 

Tese de mestrado. Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010

As células estaminais são células indiferenciadas, capazes de se auto-renovar e de se diferenciar, sob determinadas condições, em células provenientes de linhagens múltiplas. Existem dois tipos principais de células estaminais: embrionárias e adultas. Apesar das células estaminais embrionárias possuirem um maior espectro de diferenciação, problemas éticos relacionados com o manuseamento destas tem substituido o seu uso pelas células adultas. As células estaminais mesenquimais (mesenchymal stem cells- MSC) constituem uma população de células estaminais adultas, que apesar de raras, são facilmente isoladas e cultivadas a partir de diversos tecidos, em particular da medula óssea (bone marrow- BM), possuindo uma elevada capacidade de expansão ex-vivo. Em cultura, estas são células aderentes e fusiformes e identificadas através da presença de marcadores de superfície específicos, tais como CD105, CD73, CD44, CD90, CD71 e Stro-1. As MSC tem vindo a ser alvo de grande interesse cientifico, nos últimos anos, devido às suas características particulares. Em primeiro lugar, são capazes de diferenciar-se numa vasta gama de linhagens celulares: condrócitos (células da cartilagem), osteócitos (células de osso, tendão ou ligamentos), adipócitos (células de gordura) e miócitos (células de músculo). Para além disso, possuem capacidades imunomodulátorias, reduzindo as probabilidades de rejeição em transplantes alogénicos e secretam substâncias bioactivas (actividade trófica) tais como citocinas e factores de crescimento que inibem mecanismos de respostas imunes e promovem o enxerto conjunto com células estaminais hematopoiéticas (hematopoietic stem cells- HSC). Alguns autores sugerem ainda que estas células possuem capacidades migratórias para tecidos danificados ou cancerígenos, após administração intravenosa. Deste modo, as MSC constituem uma excelente e potential ferramenta em áreas como a medicina regenerativa e terapia génica. Recentemente, surgiram diversos estudos que reportam o efeito benéfico das MSC na cura de doenças como a do enxerto contra hospedeiro (graft vs host disease- GvHD) e osteogenesis imperfecta, em crianças, onde se observou uma melhoria na formação e crescimento ósseo após infusão com MSC. As MSC têm sido também transfectadas eficientemente com genes terapêuticos, nomeadamente com BMP-2 (codificante para uma proteína morfogénica óssea) de modo a promover a formação de osso, com interferão-beta para facilitar a entrega da respectíva proteína e como terapia coadjuvante na cura de doenças como o Parkinson ou no tratamento de danos na espinal medula. Consequentemente, é imperativo um conhecimento mais aprofundado das características das MSC assim como da tecnologia necessária à sua manipulação. Nos últimos anos, o uso de metodologias baseadas em vectores virais provou ser uma forma eficiente de transfectar células estaminais. Contudo, estes vectores podem ser patogénicos, podendo despoletar…

Advisors/Committee Members: Madeira, Teresa Catarina Páscoa, Rodrigues, Maria Gabriela, 1965-.

▼ 

Células Mononucleares do sangue periférico (CMSP) oriundas de 28 pacientes que residem em áreas endêmicas para Leishmania braziliensis foram estudados. Destes, 10 encontravam-se na fase ativa da doença e 18 curados clinicamente para as lesões de leishmaniose. As células foram cultivadas frente à antígenos de 6 espécies de Leishmania: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.) lainsoni (LlAg), L. (V.) naiffi (LnAg), L. (L.) amazonensis (LaAg), L. (L.) chagasi (LcAg) e antígeno de concanavalina A como mitógeno. Os resultados foram expressos em índices de estimulação (IE). Temendo uma possível degradação protéica, os antígenos foram preparados com PBS e com PBS tampão antiproteolítico e o perfil eletroforético foi analisado através de SDS-PAGE. Os sobrenadantes das culturas foram estocados para os ensaios de ELISA para detecção de IFN-γ. A análise do perfil eletroforético dos antígenos de diferentes espécies de Leishmania demonstrou um padrão distinto e heterogêneo e aparentemente, não foi observada degradação assim que os antígenos foram preparados e 10 meses de estoque. Entretanto bandas parecem ser compartilhadas entre as espécies, que podem estar associadas a uma conservação de antígenos entre as espécies de Leishmania. A resposta proliferativa dos linfócitos (RPL) dos pacientes da forma ativa foi mais intensa para LbAg (1710,3), seguido de LnAg (177,6), LaAg (16,89,8) e LlAg (1410,1), e menos intenso para LgAg (11,46,6). Quando os IE obtidos para LbAg foram comparadas com outras espécies observou-se diferenças para LgAg (p<0.004) e LlAg (p<0.03). Não foram encontrados diferenças no perfil protéico dos extratos antigênicos produzidos com e sem inibidores de protease. Os estímulos obtidos de CMSP de indivíduos curados clinicamente não demonstraram diferenças quando comparados com aqueles da fase ativa da doença. O índice de estimulação (médiadesvio padrão) frente estímulos antigênicos pouco variou entre as espécies: LbAg - 22,222,2, LnAg - 15,911,5, LgAg - 20,720,6, LlAg - 14,710,1, LaAg - 15,1114,5 e L. chagasi - 13,78). A produção de IFN-γ quantificada nos sobrenadantes das culturas frente aos antígenos totais e solúvel mostrou níveis da citocina mais elevados quando utilizou-se antígenos total de L. guyanensis (568,1544,5; mediana: 518,5 pg/mL) quando comparadas às outras espécies analisadas. Porém quando analisadas o antígeno solúvel, podemos observar que tanto para os antígenos da espécie L. braziliensis quanto para L. naiffi, a fração total obteve os maiores índices de estímulos quando comparadas com a fração solúvel. Estes estudos sugerem que há uma reatividade cruzada entre as espécies dos subgêneros Viannia e Leishmania.

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from twenty-eight (28) from endemic areas by specie L. Braziliensis were studied. Ten (10) patients with active fase and eighten (18) clinic cured were studied. The cells were cultured with six antigens from Leishmania species: Leishmania: L. (V.) braziliensis (LbAg), L. (V.) guyanensis (LgAg), L. (V.)…

Advisors/Committee Members: Silvia Amaral Gonçalves da Silva, Eduardo Fonseca Pinto, Alda Maria Da Cruz, Léa Cysne Finkelstein.

▼ 

Os métodos convencionais para o diagnóstico da tuberculose (TB) pleural possuem várias limitações, assim métodos mais sensíveis e específicos são necessários. O objetivo deste estudo foi avaliar uma metodologia de hibridização em microplaca e uma técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real para a detecção de DNA de Mycobacterium tuberculosis em amostras de líquido pleural, fragmento de pleura e soro. Adicionalmente, foi avaliada a utilidade da PCR em tempo real em paralelo com a cultura do líquido pleural para o diagnóstico de TB pleural. Foram avaliados 161 pacientes com derrame pleural e submetidos à toracocentese e biópsia pleural. O padrão-ouro para definição de um caso de TB pleural baseou-se na combinação de baciloscopia, cultura, exame histopatológico e critérios clínicos. Cento e sete dos 161 pacientes com derrame pleural receberam diagnóstico de TB pleural. Os resultados da metodologia de hibridização em microplaca não foram satisfatórios, assim foi desenvolvida uma técnica de PCR em tempo real. Nas amostras de líquido pleural, a PCR em tempo real mostrou uma sensibilidade de 46% (IC 95%, 36%-56%) com especificidade de 100%, enquanto a cultura obteve uma sensibilidade de 29% (IC 95%, 20%- 38%). A PCR em tempo real realizada em associação com a cultura no líquido pleural apresentou uma sensibilidade de 60% (IC 95%, 50%-70%). Para as amostras de fragmento pleural, a PCR em tempo real mostrou uma sensibilidade de 42% (IC 95%, 26%-59%) e especificidade de 100%, para este tipo de amostra o exame histopatológico apresentou a maior sensibilidade (90% - IC 95%, 84%- 96%). Nas amostras de soro a PCR em tempo real foi positiva em apenas dois pacientes, os quais também apresentaram resultado positivo nos outros tipos de amostras. Estes resultados indicam que a PCR em tempo real realizada no líquido pleural pode ser uma forma útil para obter um diagnóstico de TB pleural mais rápido, específico e com um procedimento menos invasivo para coleta das amostras.

Conventional tests for pleural tuberculosis (TB) have several limitations and more sensitive and specific methods are needed. The aim of this study was to evaluate microwell hybridization and real-time PCR (polimerase chain reaction) for detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in pleural fluid, pleural tissue and serum. Additionally, the utility of real-time PCR in parallel with culture in pleural fluid for the diagnosis of pleural TB was assessed. One hundred sixty one patients with a pleural effusion submitted to a thoracentesis and pleural biopsy were evaluated. The gold-standard for case definition of pleural TB were the combination of acid-fast bacilli, culture, histopathologic examination and clinical parameters. One hundred seven of the 161 patients with pleural effusion received diagnosis of pleural TB. Results of microwell hybridization were not satisfactory, thus we developed a real-time PCR assay. In pleural fluid specimens, real-time PCR showed a sensitivity of 46% (CI 95%, 36%-56%) with specificity of 100%, while the sensitivity…

Advisors/Committee Members: Zaha, Arnaldo.

▼ O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago de bovinos, amplamente distribuído nos rebanhos da América, Ásia, África e Oceania. O uso de acaricidas é o principal método para o controle do carrapato, porém o custo das drogas e da mão-de-obra requerida para aplicar o tratamento, o aparecimento crescente de carrapatos resistentes a vários acaricidas, a permanência de resíduos químicos nos alimentos e a poluição ambiental decorrente do seu uso tornam importante o desenvolvimento de outras formas de controle. O desenvolvimento de um método de controle imunológico como uma alternativa para o controle químico depende da identificação de moléculas antigênicas que geram uma resposta imune protetora. Como bovinos desenvolvem resistência ao carrapato durante sucessivas infestações, a análise da resposta imune desenvolvida por bovinos infestados pode tornar-se de grande importância na busca por antígenos protetores. ELISA e Western Blot foram utilizados para investigar o padrão de respostas de anticorpos de seis bovinos infestados doze vezes com R. microplus (seis infestações pesadas seguidas por seis infestações leves) contra extratos de glândula salivar, intestino e larva. Durante infestações pesadas foram observados níveis maiores de IgGs reconhecendo extratos protéicos de glândula salivar, intestino e larva, e uma diminuição no número e no peso de carrapatos que completam o ciclo parasitário. O padrão mudou iniciando na sétima infestação, mostrando uma diminuição nos níveis de IgG, e um aumento inicial seguido por uma significante diminuição na proporção de carrapatos que completam o ciclo parasitário. O número de moléculas reconhecidas em Western Blot foi maior pelos soros das infestações pesadas do que das infestações leves, embora uma grande variação nos perfis detectados pode ser visto entre os bovinos. Esses resultados indicam que níveis de anticorpos contra o carrapato não estão necessariamente relacionados de forma direta com níveis de resistência. Além disso, infestações pesadas e leves parecem modular de forma diferente a magnitude da resposta humoral e possivelmente os mecanismos imunes na aquisição natural de resistência ao carrapato. Advisors/Committee Members: Carlos Alexandre Sanchez Ferreira.

▼ De acordo com a hipótese da vigilância imunológica, o sistema imune é relevante no controle do crescimento tumoral. Entretanto, a resposta imune não é capaz de barrar a progressão de todos os tumores. Uma possível explicação para isso é a tolerização das células imunes proporcionada pelo ambiente imunossupressor gerado por tumores, favorecendo seu desenvolvimento e diminuindo a eficácia da resposta imune contra o tumor. O presente estudo visou analisar a formação de respostas imunes anti-tumorais in vivo, bem como identificar mecanismos capazes de reverter a tolerância induzida pelo tumor à resposta imune. Para realizar este trabalho foram usados três sistemas experimentais: (1) injeção subcutânea de tumor B16F10 para análise da resposta imune policlonal, (2) injeção subcutânea de B16OVA (OVA257-264 SIINFEKL) com transferência adotiva de células OT-I para o estudo da geração de resposta de células T CD8+ e (3) construção e injeção subcutânea de uma linhagem de B16F10 expressando um antígeno restrito ao MHC classe II (B16EaRFP) com transferência adotiva de células TEa para o estudo da geração de resposta anti-tumoral de células T CD4+. Com estes modelos experimentais foi observada diminuição de células no infiltrado peritumoral e da celularidade nos linfonodos drenantes (LND) à medida que o tumor B16F10 cresce, sugerindo uma interrupção do trânsito de células imunes do sítio tumoral para o LND. A expressão de CD86 nas células dendríticas (DCs) nos linfonodos diminui com o crescimento tumoral. Com a elevação da freqüência precursora de células T CD8+ anti-tumorais no sistema B16OVA, o crescimento tumoral foi retardado mas não barrado por completo. A melhora significante da resposta contra o tumor foi obtida com a injeção intratumoral de um ligante de TLR-4, o lipopolissacarideo de E.coli (LPS), mas apenas quando foi injetado via intratumoral, após o estabelecimento do tumor in vivo. O sistema B16EaRFP revelou que a acessibilidade do antígeno às células dendríticas é importante na estimulação da resposta T CD4+ anti-tumoral, resultando em maior proliferação de células TEa em resposta ao tumor lisado versus o tumor vivo. Quando as células tumorais foram induzidas a necrose e apoptose e injetadas subcutaneamente, houve maior porcentagem de células CD11c +YAe+ CD86+. Observou-se maior proliferação de células TEa nos linfonodos drenantes no grupo de camundongos injetados com células tumorais mortas por necrose, com um pico nove dias após a injeção tumoral, mas já apresentando contração após três dias. A divisão das células TEa também diminui gradualmente ao longo do tempo, sugerindo que nos três casos há apresentação limitada de antígeno. A diferenciação das células TEa em fenótipo de memória foi observada nos três tratamentos, com mais ênfase nos animais que receberam tumor induzido a necrose e apoptose. Contudo, as células TEa não foram capazes de fornecer ajuda para interromper o crescimento tumoral quando o B16EaRED foi injetado vivo. Em conjunto, os resultados sugerem que a diminuição da apresentação de antígeno e de… Advisors/Committee Members: Cristina Bonorino.

▼ 

O processo de morte por apoptose pode ser dividido em duas vias: intrínseca e extrínseca. A sinalização via FAS (extrínseca) pode ocorrer independente (células Tipo I) ou dependente da mitocôndria (células Tipo II). É importante considerar que: 1) Resultados prévios mostraram que doses subletais de CHX foram capazes de sensibilizar células Tipo I e Tipo II à apoptose e de converter células Tipo II em Tipo I; 2) Um dos mecanismos envolvidos pode ser o recrutamento de FAS para as \"balsas lipídicas\"; 3) A PGE2 ativa PKA pelo aumento de cAMP via EP2 e EP4, que fosforila ezrina, envolvida nesse processo; 4) A PGE2 pode induzir apoptose em linhagens celulares e sensibilizá-las a esse processo. Assim, formulamos a hipótese de que a PGE2 poderia, assim como a CHX, sensibilizar certas células à apoptose e converter células Tipo II em Tipo I. Esse efeito não foi observado em células DO11.10 nas quais a apoptose foi induzida por CD95L solúvel e em células Tipo I e Tipo II, nas quais a apoptose foi induzida pelo anticorpo agonista anti-FAS.

The death process by apoptosis can be divided into two pathways: intrinsic and extrinsic. The signaling by FAS (extrinsic) may occur in a mitochondrial independent (Type I cells) or dependent (Type II cells) manner. It is important to consider that: 1) Previous results demonstrated that sub-lethal doses of CHX were able to sensitize type I and type II cells to apoptosis and to convert type II cells into type I; 2) One of the mechanisms involved can be FAS recruitment to \"lipid rafts\"; 3) PGE2 activates PKA by increasing cAMP via EP2 and EP4, which phosphorylates of Ezrin, involved in this process; 4) PGE2 can induces apoptosis in cell lines and can to sensitize them to this process. So, we hypothesized that PGE2 could, similarly to CHX, sensitize certain cells to apoptosis and convert type II cells into type I. This effect was not observed in DO11.10 cells in which apoptosis was induced by soluble CD95L and in type I and type II cells, in which apoptosis was induced by agonist anti-FAS antibody.

Advisors/Committee Members: Mendes, Joao Gustavo Pessini Amarante.

▼ As moléculas HLA (Human Leucocyte Antigens) são proteínas codificadas por genes altamente polimórficos localizados na região do MHC (Major Histocompatibility Complex) no braço curto do cromossomo 6 humano. Elas estão envolvidas em processos de resposta imunológica, sendo responsáveis pela apresentação de antígenos aos linfócitos T. O sistema HLA é altamente informativo em estudos de genética de populações, devido ao seu elevado polimorfismo e ao forte desequilíbrio de ligação entre loci próximos. Entre diferentes populações podemos observar variação tanto na freqüência, como na presença de alelos e haplótipos em determinados grupos. Portanto, o conhecimento de alelos HLA é uma ferramenta importante para os estudos da origem das populações. Além disso, sua determinação contribui para a compreensão de mecanismos associados à suscetibilidade ou resistência a determinadas doenças e em processos de alocação de órgãos para transplante. A investigação da compatibilidade HLA entre doador e receptor é determinante no sucesso do transplante. No Brasil a elevada taxa de miscigenação dificulta a busca por um doador compatível. Informações sobre a diversidade desses alelos na nossa população nos permitem estimar a chance de um paciente em lista encontrar um doador com uma melhor compatibilidade imunológica. No Brasil, existem estudos prévios de freqüência HLA, porém, no Rio Grande do Sul, essa informação é muito escassa. Nesse trabalho a distribuição das freqüências alélicas, fenotípicas e haplotípicas de HLA A, B e DRB1 foi determinada utilizando uma amostra de 5000 doadores voluntários de medula óssea cadastrados no REDOME (Registro Brasileiro de Doadores Voluntários de Medula Óssea). Os indivíduos estudados residem no estado do Rio Grande do Sul e foram classificados com base no grupo étnico (4428 caucasianos, 324 mestiços e 248 negros). A tipagem HLA foi realizada pelo método de PCR-SSO aliado à tecnologia Luminex. Na amostra total foram identificados 21 grupos alélicos HLA-A, 33 HLA-B and 13 HLA-DRB1. Os grupos alélicos mais freqüentes para cada locus foram: A*02, B*35 e DRB1*13. Os haplótipos mais freqüentes foram: A*01 B*08 DRB1*03 nos caucasianos e mestiços, e A*02 B*15 DRB1*04 nos negros. As freqüências alélicas foram comparadas com amostras de diferentes regiões brasileiras. Na maioria das comparações não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas. Foram observadas maiores diferenças na comparação entre os grupos da nossa amostra, mostrando a contribuição HLA dos diferentes grupos étnicos. Esses dados oferecem informações para o conhecimento da diversidade HLA na população do Rio Grande do Sul e na busca por um doador mais compatível para transplante Advisors/Committee Members: Cristina Bonorino.

▼ 

O estresse psicossocial é um importante mecanismo de ativação dos sistemas nervoso, endócrino e imune muitas vezes levando à exacerbação de diversas doenças inflamatórias crônicas, assim como é um fator de risco importante para diversos transtornos de humor. A exposição ao estresse pode ser mais danosa quando esta ocorre cedo no desenvolvimento e pode resultar em alterações na reatividade/responsividade ao estresse na vida adulta. Diversos estudos vêm demonstrando alterações neuroimunoendócrinas importantes na patofisiologia dos transtornos de humor. Estudos prévios do nosso grupo e outros têm observado um perfil pró‐inflamatório periférico e uma maior ativação linfocitária em pacientes com transtorno bipolar (TB). Os objetivos da tese são: 1) analisar os efeitos do estresse no desenvolvimento através do protocolo de separação materna em modelo animal; 2) analisar parâmetros neuroimunoendócrinos em resposta ao estresse em pacientes com TB tipo 1 eutímicos, utilizando‐se um protocolo de estresse laboratorial, o Trier Social Stress Test (TSST). Dados do presente trabalho demonstram que a exposição ao estresse na infância (em modelo animal) resulta em ativação imune, caracterizada por aumento nos níveis plasmáticos de citocinas pró‐inflamatórias (interleucina 1‐β) perifericamente. Uma possível consequência dessa ativação imune é a perda de neurônios contendo parvalbumina, importantes para o desenvolvimento de comunicação serotoninérgica. A inflamação periférica serviu como marcador para os danos neuronais observados, pois quando houve a administração de interleucina‐10 (IL‐10, principal citocina anti‐inflamatória) foi possível reverter os danos neuronais e a inflamação periférica. Neste trabalho, os pacientes com TB apresentaram respostas simpáticas e neuroendócrinas (cortisol) muito reduzidas após o estresse agudo quando comparados aos controles saudáveis. Ao nível basal, os pacientes com TB apresentaram uma redução na porcentagem de células T regulatórias (Treg), aumento na porcentagem das células T ativadas (CD4+CD25+) e aumento na sinalização celular através de uma maior fosforilação de ERK1/2 e NF‐κB corroborando para um estado de ativação celular. Além disso, observamos uma incapacidade em reduzir a ativação imune em resposta ao estresse, caracterizada pelo aumento ainda maior na porcentagem de células T ativadas e concomitante redução nas células Treg em pacientes TB. Tal incapacidade em controlar a resposta imune ao estresse pode ser explicada não apenas pelos baixos níveis de cortisol secretado, mas também a uma maior insensibilidade aos glicocorticoides no TB. Concluímos que os indivíduos com TB possuem alterações no eixo HPA que resultam em reduzida reatividade endócrina ao estresse assim como incapacidade de modular corretamente as respostas imunes.

Psychosocial stress has important role in activating endocrine, immune and central nervous systems. Stress exacerbates many chronic inflammatory conditions and is an important risk factor for several…

Advisors/Committee Members: Moisés Evandro Bauer.

▼ 

O fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) é uma das principais citocinas hematopoiéticas envolvidas na defesa do sistema imune contra agentes infecciosos, estimulando e regulando a proliferação, sobrevivência e diferenciação das células precursoras de neutrófilos na medula óssea. É uma molécula que possui uma sequência de 174 aminoácidos, com peso molecular de aproximadamente 18,8 kDa. Como estratégia de prevenção da neutropenia, o G-CSF (ou filgrastima) é utilizado clinicamente com sucesso em pacientes com câncer, cujo tratamento requer altas doses de quimioterapia, tanto em adultos como em crianças. Além disso, o G-CSF pode ser utilizado para reforçar o sistema imunológico em pacientes com HIV, pneumonia, infecções decorrentes da diabetes, leucemia e neutropenia febril. Atualmente, a filgrastima não é produzida no Brasil, consequentemente, todo medicamento adquirido pelo governo é importado. Tendo em vista sua ampla aplicação clínica, a produção em larga escala do G-CSF se faz necessária para suprir a demanda do mercado nacional e diminuir os custos com importação desse biofármaco. Neste trabalho um protocolo para a produção desta proteína foi desenvolvido, utilizando técnicas de DNA recombinante por meio de experimentos de superexpressão e cultivo em biorreator, solubilização e purificação da G-CSF recombinante. A proteína foi expressa em células Escherichia coli C41(DE3) em cultivos de batelada alimentada em biorreactor, utilizando indução com IPTG e uma estratégia de alimentação linear ascendente, que nos permitiu obter um alto percentual de estabilidade plasmidial, baixo acúmulo de acetato no meio de cultivo, uma biomassa de aproximadamente 31 g/ L e elevados níveis de expressão da proteína em forma de corpos de inclusão, que foram solubilizados utilizando ureia 2 M e pH alcalino. A proteína recombinante foi purificada obtendo-se aproximadamente 1,22 mg de proteína recombinante homogênea por grama de células úmida, correspondendo a um rendimento volumétrico de 151,5 mg de rhG-CSF por litro de meio de cultura. Uma análise por espectrometria de massa também foi realizada, confirmando a identidade da proteína recombinante. Nosso trabalho mostra uma estratégia simples e eficaz para obter hG-CSF recombinante, contribuindo e estimulando a futura produção de um biossimilar nacional.

The granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is a major hematopoietic cytokine involved in the immune defense against infectious agents, stimulating and regulating the proliferation, survival and differentiation of neutrophils precursor cells in the bone marrow. The G-CSF molecule has a 174 amino acids sequence, with a molecular weight of approximately 18.8 kDa. As a strategy for neutropenia prevention, G-CSF (or filgrastim) has been successfully used in cancer patients whose treatment requires high doses of chemotherapy, in both adults and children. Moreover, this biopharmaceutical may be used to strengthen the immune system in patients with HIV, pneumonia, infections resulting from diabetes, leukemia and febrile…

Advisors/Committee Members: Diógenes Santiago Santos.

▼ 

Pelo fato da periodontite ser uma doença inflamatória e infecciosa, a resposta imune pode resultar em uma mudança na população leucocitária presente na saliva, quando comparada a resposta de indivíduos periodontalmente saudáveis. Até o presente, a imunofenotipagem por citometria de fluxo não havia sido utilizada para investigar padrões imunológicos em amostras de saliva provenientes de indivíduos com processos bucais inflamatórios. O objetivo do presente estudo foi avaliar, pela técnica de citometria de fluxo, a frequência de linfócitos T, linfócitos B, células natural killer bem como a frequência da população de leucócitos na saliva de indivíduos com ou sem periodontite crônica. Paralelamente, foram determinados, por Dot-ELISA, os títulos das imunoglobulinas totais das classes A, G e M presentes na saliva destes indivíduos, além da detecção de sete patógenos periodontais, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Prevotella intermedia, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus e Prevotella nigrecens, pela PCR. Pela técnica de imunofenotipagem foi observado que os pacientes com periodontite crônica apresentaram maior frequência de leucócitos - p=0,0007 (50,43% ± 5,1) e de linfócitos B - p=0,0059 (50,93% ± 6,1) em relação aos indivíduos sem doenças bucais (22,69% ± 0,19 e 13,9% ± 2,6, respectivamente). Um aumento não significativo nos títulos de IgG também foi observado nos indivíduos com periodontite crônica, além de maior frequência de patógenos periodontais. Estes resultados demonstram que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta eficaz para determinação do perfil leucocitário, proveniente de amostras de saliva de pacientes com periodontite crônica e indivíduos periodontalmente saudáveis.

Because periodontitis is an infectious and inflammatory oral disease, the immune response may cause the leukocyte population in saliva of individuals with this condition to be different from that of periodontally healthy individuals. To date, flow cytometric immunophenotyping has not been used to investigate immune patterns in saliva samples from individuals with inflammatory processes in the oral cavity. The objective of this study was to use flow cytometry technique to evaluate the frequency of T lymphocytes, B lymphocytes, natural killer cells and the total leukocyte population in the saliva of individuals with or without chronic periodontitis. In parallel, total IgA, IgG and IgM titers in saliva were determined by Dot-ELISA besides the detection of seven periodontal pathogens, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Prevotella intermedia, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus and Prevotella nigrecens, by PCR. Cell immunophenotyping revealed that patients with chronic periodontitis had a higher frequency of total leukocytes - p=0.0007 (50.43% ± 5.1) and B lymphocytes - p=0.0059 (50.93% ± 6.1) than individuals without oral diseases (22.69% ± 0.19 and 13.9% ± 2.6, respectively). A non-significant increase in IgG titers was also observed in subjects with chronic…

Advisors/Committee Members: Santos, Maria Cristina dos, 10646104802, http://lattes.cnpq.br/4923902785529755, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627.

▼ Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) presents three major forms: PCM-infection (PI); adult form (AF) and juvenile form (JF). The aim of this study was to compare the immunological response in these groups through the analysis of the kinectics of mRNA expression of some cytokines and chemokines (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-lO, IFN-y, TGF p, TNF-a, CXCLS, CXCL9 and CXCLlO) by RT-PCR, as well as, to characterize the phenotype of the cytokines producing cells by flow cytometry. The results showed that PI individuaIs express earlier and higher levels of mRNA for IFN-y, TNF-a, CXCL9 and CXCLIO when compared to JF patients and similar levels of CXCLlO and IFN-y and higher levels of CXCL9 and TNF -a when compared to AF ones. On the other hand, the mRNA expression ofTh2 cytokines (IL-4, IL-IO, IL-5 and TGF-P) was higher and earlier in JF and AF groups when compared to PI individuaIs. In relation to protein expression, we observed that PI group presents a higher percentage of cells producing IFN-y, TNF-a, IL-2, CXCL9 and CXCLIO when compared to both groups ofpatients. The production ofIFN-y was predominantIy done by CD3+CDS+ T cells, whereas IL-2 and TNF-a production was higher in CD3+CD4+ cells. Monocytes ofPI individuaIs also presented higher expression of CDSO and lower expression of CDS6 and CD54 when compared to JF and AF patients, and higher expression of HLA-DR and CDIIa only when compared to JF patients. These results indicate that the differential kinetic of mRNA expression of ThI or Th2 cytokines observed in the different forms of PCM may modulate the immunological response resulting in the different outcomes observed in this disease Advisors/Committee Members: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS (CRUESP), Blotta, Maria Heloisa de Souza Lima, 1953- (advisor), Blotta, Maria Heloisa Souza Lima (advisor), Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas (institution), -Yasuda, Maria Aparecida Shikanai (committee member), Calich, Vera Lucia Garcia (committee member), Verinaud, Liana Maria Cardoso (committee member), Trabasso, Plinio (committee member).

▼ 

Linfócitos T CD4+ tem a capacidade de diferenciação em várias subpopulações, como Th1, com habilidades distintas para o combate das infecções. Uma vez que estas células exerceram suas funções efetoras, é necessária a retração das populações para restauração da homeostase do sistema imunológico, o que pode acorrer por morte celular induzida por ativação (AICD). Baseado em dados obtidos anteriormente por nosso grupo de pesquisa, o presente estudo buscou investigar se a PGE2 protegeria linfócitos T CD4+ diferenciados in vitro, da mesma forma que protegeu hibridomas DO11.10 da AICD. Para isso, utilizamos linfócitos T CD4+ de baço total ou purificados de camundongo C57Bl/6 selvagem e polarizados para Th1, na presença de anti-CD3, anti-CD28 e citocina IL-12 por 4 dias. Observamos que, tanto em células CD4+ purificadas quanto CD4+ de baço total, as células Th1 não foram protegidas do processo de AICD pela PGE2, sugerindo que uma proteção não seja vantajosa quando a célula já se encontra em estágios avançados de seu ciclo, evitando o desenvolvimento de autoimunidades.

CD4+ T cells have the ability to differentiate into several subsets, such as Th1, with distinct abilities to fight infections. Once these cells exerted their effector functions, their elimination is necessary to restore the immune system homeostasis, which may occur by activation-induced cell death (AICD). Based on data previously obtained by our research group, this study aimed to investigate whether PGE2 protects in vitro differentiated CD4+ T cells, the same way that it protected DO11.10 hybridomas from AICD. To assess this, we used CD4+ T cells from total splenocytes or purified CD4+ T lymphocytes from C57Bl/ 6 wildtype mice, polarized to Th1 in the presence of anti-CD3, anti-CD28 and IL-12 for 4 days. We observed that the generated Th1 cells, in both conditions of purified CD4+ T cells or the ones from total splenocytes, were not protected from the process of AICD by PGE2, suggesting that this protection is not advantageous when these cells are already in advanced stages of their life cycle, thus avoiding the development of autoimmune diseases.

Advisors/Committee Members: Mendes, Joao Gustavo Pessini Amarante.

▼ 

A Asma vem apresentando taxas de prevalência crescentes em todo o mundo. Os objetivos deste trabalho são avaliar a presença de elementos celulares e humorais indicativos em sangue e colostro de mães asmáticas e saudáveis e no sangue de cordão umbilical de seus recém-nascidos (RN). Observamos menor produção de IgG pelas mães asmáticas. Células dendríticas de mães asmáticas possuem maior expressão de CD80 e CD86. Mães asmáticas possuem mais células de memória central. Linfócitos T CD4+ de mães asmáticas produzem níveis maiores IFN-g. Células CD3+ e CD4+ de mães asmáticas produziram mais IL-13. Mães saudáveis produziram maiores quantidades de IL-10. Concluímos que mães asmáticas possuem menores níveis de IgG e IgM, o que parece aumentar dos níveis de IgE, mães asmáticas possuem mais células de memória central, linfócitos T CD4+ produzem maiores quantidades de citocinas como IL-13 e IFN-g, células dendríticas de mães asmáticas possuem maior expressão das moléculas co-estimulatórias, assim como seus RNs possuem maior expressão de CD80. Células de mães asmáticas produzem níveis menores de IL-10, o colostro de mães atópicas não possui diferenças entre os parâmetros aqui estudados. O aleitamento materno deve ser indicado para mães asmáticas e seus filhos.

Asthma has been presenting higher prevalence rates worldwide. The objective of this work is to evaluate the presence of cellular elements and humoral indicative in blood and colostrums of healthy and asthmatic mothers and in cord umbilical blood of their newborn (NB). Lower production of IgG from asthmatic mothers was observed. Dendritic cells of asthmatic mothers have higher CD80 and CD86 expression. Asthmatic mothers have more central memory cells. TCD4+ lymphocyte of asthmatic mothers produce higher levels of IFN-g. CD3+ and CD4+ cells of asthmatic mothers produce higher quantity of IL-13. Healthy mothers produce higher quantity of IL-10. We conclude that asthmatic mothers have lower levels of IgG and IgM, and this seems to raise the IgE levels, asthmatic mothers have more central memory cells, CD4+ T lymphocyte and produce higher quantities of cytokines such as Il-13 and IFN-g. Dendritic cells of asthmatic mothers have higher expression of costimulatory molecules, as well as their NBs have higher expression CD80. Cells of asthmatic mothers produce lower levels of IL-10, the colostrums of atopic mothers does not have differences in the parameters here studied. The maternal breastfeeding must be indicated for asthmatic mothers and their of spring.

Advisors/Committee Members: Faria, Ana Maria Caetano de, Sampaio, Magda Maria Sales Carneiro.

▼ 

A estereologia é o padrão ouro dos métodos quantitativos, cuja eficácia é justificada por sua rigorosa amostragem sistemática uniforme e ao acaso em todos os níveis da análise quantitativa. Por possibilitar a obtenção de informações 3-D a partir de seções 2-D, a estereologia permite a identificação quantitativa de um órgão ou estrutura, mostrando-se uma ferramenta fundamental em estudos histopatológicos. A Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune que afeta uma parcela da população mundial, associadas a um risco elevado de morbidade e morte prematura devido a manifestações extra-articulares, com destaque para as doenças cardiovasculares. Apesar dos tratamentos disponíveis atualmente terem bons resultados no controle local da doença (articulações), apresentam um alto custo e efeitos colaterais, o que leva a um aumento na procura por tratamentos alternativos. O óleo de copaíba é um produto natural bastante utilizado na medicina popular amazônica não somente pelos seus diversos efeitos terapêuticos, mas também pelo seu baixo custo e fácil acesso. Portanto, a presente dissertação teve como objetivo avaliar, por meio da estereologia, a ação sistêmica do óleo de copaíba (Copaifera multijuga Hayne) num modelo animal de AR induzida por zymosan (Zy). Para tal, o Zy foi injetado na região do coxim plantar e na articulação do joelho da pata esquerda (fêmeas BALB/c, n= 36). Trinta minutos antes da indução, os animais foram tratados oralmente com solução veículo ou óleo de copaíba (300 ou 600 mg/kg) ou diclofenaco, conforme grupo experimental. Após 96 horas de experimentação, os animais foram anestesiados e eutanasiados. O sangue, o coração e o fígado foram coletados para análises bioquímicas e estereológicas, respectivamente. Não houve alteração no volume dos órgãos. O Zy causou alterações histológicas no fígado, mas não no coração. A copaíba levou a um aumento da vacuolização no citoplasma dos cardiomiócitos e reverteu o dano hepático causado pelo Zy. Em conclusão: (i) a estereologia é capaz de detectar mínimas alterações morfológicas nos alvos investigados; (ii) o Zy apresenta um efeito sistêmico no modelo de indução experimental de AR; (iii) a copaíba teve um efeito hepatoprotetor; (iv) estudos adicionais são necessários para estabelecer o real papel da copaíba no coração.

Stereology is the gold standard of quantitative methods, whose efficacy is justified by its rigorous uniform systematic sampling at random at all levels of quantitative analysis. By making it possible to obtain 3-D information from 2-D sections, stereology allows the quantitative identification of an organ or structure, proving to be a fundamental tool in histopathological studies. Rheumatoid Arthritis (RA) is an autoimmune disease that affects a portion of the world population, associated with a high risk of morbidity and premature death due to extra-articular manifestations, especially cardiovascular diseases. Although currently available treatments have good results in local disease control (articulation), they present a high cost and side…

Advisors/Committee Members: Costa, Oscar Tadeu Ferreira da, 308952602-63, http://lattes.cnpq.br/0929871269889509, Lopes, Antonio Luiz Ribeiro Boechat, http://lattes.cnpq.br/3558832059770794, Barcellos, Jose Fernando Marques, http://lattes.cnpq.br/9296854102700928, Santos, Maria Cristina dos, http://lattes.cnpq.br/4923902785529755, [email protected].

▼ 

The thymus is the primary lymphoid organ, responsible for normal T cell development in vertebrates. This is a highly complex process that includes cell proliferation, death, migration as well as T cell receptor gene rearrangements. It takes place within the thymic lobules and depends on several types of interactions between developing thymocytes and the thymic microenvironment. Along with differentiation, thymocytes migrate within the thymic parenchyma: bone marrow-derived precursors arriving in the organ migrate towards the sub-capsular cortex, and from this niche, differentiation progresses in parallel with migration from the cortex to the medulla of thymic lobules, where positively selected mature cells are located, before leaving the organ. Such oriented movements are tightly regulated by a number of interactions including those mediated extracellular matrix and by chemokines. Among the various chemokines, CXCL12 plays a major role in intrathymic T cell migration. More recently it was showed in our Laboratory that the semaphorin-3A (Sema-3A), a soluble member of the semaphorin family (well described in the nervous system as being important for axonal guidance) is also involved in human thymocyte migration, bearing a chemorepulsive and de-adhesive role. Herein, we studied the role of Sema-3A upon the CXCL12-driven migration of human thymocytes. We showed that, in addition to the proper chemorepulsive activity upon thymocyte subsets, Sema-3A is able to impair the chemoattraction (and even the chemorepulsion) triggered by CXCL12, thus acting as a physiological antagonist for this chemokine-driven migration. At least in part, this inhibitory effect of Sema-3A can be explained by their capacity to modify the phosphorylation status of intracellular signally proteins, including ERK-1/2, FAK and Zap-70. Also, Sema-3A partially block the conjoint effect of CXCL12 plus fibronectin upon thymocyte migration. Taken together, our results demonstrate the involvement of Sema-3A in the regulation of chemokine-driven human thymocyte migration. Moreover, they provide new clues for better understanding the complexity of cell migration, unraveling a novel physiological connectivity between distinct cell migration-related molecular interactions.

O timo é o órgão linfóide primário responsável pelo desenvolvimento normal das células T em vertebrados. Este é um processo altamente complexo que inclui proliferação celular, morte e migração, bem como eventos de rearranjo dos genes que codificam o receptor da célula T. Este processo ocorre no interior dos lóbulos tímicos e depende de diversos tipos de interações entre timócitos e células do microambiente tímico. Em paralelo à diferenciação, os timócitos migram no parênquima tímico: precursores derivados da medula óssea migram para a zona subcapsular e, deste local, a diferenciação dessas células progride em paralelo à migração através das regiões cortical e medular dos lóbulos tímicos; onde se localizam aqueles linfócitos que se diferenciaram e foram positivamente selecionados, antes de…

Advisors/Committee Members: Wilson Savino.

▼ 

Paracoccidioidomicose é adquirida pela via respiratória e a enzima indolamina-2,3-dioxigenase (IDO) e o catabolismo do triptofano estão envolvidos no controle da imunidade inata e adaptativa contra patógenos. Investigamos o papel da IDO na doença em animais suscetíveis (B10.A) e resistentes (A/J). Caracterizamos o efeito do tratamento com 1-Metil-DL-Triptofano (1MT) no fenótipo e comportamento de células dendríticas (DCs) e T reguladoras (Tregs) de A/J e B10.A quanto à expressão de IDO. IDO controla a carga fúngica de A/J e B10.A, reduzindo a imunidade de TCD4 e TCD8 e aumentando Tregs. Constatamos que IDO diminuiu a migração de DCs para o pulmão de A/J e B10.A e a inibição da atividade anti-inflamatória de IDO por 1MT tem um efeito deletério somente em B10.A cuja suscetibilidade é ligada à excessiva atividade pró-inflamatória. A infecção de A/J e B10.A parece induzir as funções catalítica e sinalizadora de IDO.Grande parte da função de IDO nos mecanismos imunorreguladores na paracoccidioidomicose se faz através da modulação da função de DCs em A/J e B10.A.

Paracoccidioidomycosis is acquired by the respiratory route and the enzyme indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO) and tryptophan catabolism are involved in the control of innate and adaptive immunity against pathogens. We investigated the role of IDO in the infection in susceptible (B10.A) and resistant (A/J) mice. We characterized the effect of treatment with 1-Methyl-DL-Tryptophan (1MT) in the behavior and phenotype of dendritic cells (DCs) and regulatory T cells (Tregs) from A/J and B10.A for expression of IDO. IDO controls the fungal load in A/J and B10.A, reducing the immunity of CD4 and CD8 T cells and Tregs increased. IDO decreased the migration of DCs to the lung of A/J and B10.A and inhibition of anti-inflammatory activity of IDO by 1MT has a deleterious effect only in B10.A whose susceptibility is linked to excessive proinflammatory activity. Infection of A/J and B10.A appears to induce catalytic functions of IDO. Much of the function IDO immunoregulatory mechanisms paracoccidioidomycosis is done by modulating the function of DCs in A/J and B10.A.

Advisors/Committee Members: Calich, Vera Lucia Garcia.

▼ 

Para serem apresentados pelo MHC I em células dendríticas, os antígenos são processados pelo imunoproteassomo. O objetivo do trabalho foi examinar o efeito de pró-oxidantes em DC para avaliação da proliferação de linfócitos T CD8+, com foco no sistema ubiquitina-proteassomo. Os resultados mostram que o sistema Xantina/Xantina Oxidase aumentou a proliferação de T CD8+ isolados de camundongos imunizados com DNA-HSP65 após a co-cultura destas células com DC tratadas com XaXO. O XaXO promoveu maior maturação de DC em relação ao LPS, assim como uma queda da atividade catalítica do IP, sugerindo que o aumento da proliferação de T CD8+ não está diretamente relacionado à atividade do IP. A incubação de DC com XaXO não alterou a expressão da unidade catalítica 20S, da unidade regulatória 19S ou da subunidade ⓹i. Observou-se aumento da expressão da unidade regulatória 11S e do conteúdo de proteínas ubiquitinadas. Sugere-se que 11S se acoplaria a 20S deslocando 19S, promovendo o acúmulo de proteínas ubiquitinadas e direcionando mais fragmentos para a apresentação antigênica.

To be presented in dendritic cells MHC I, antigens are processed by immunoproteasome. The aim of the study was to examine the effect of pro-oxidants in dendritic cell-induced T CD8+ lymphocyte proliferation with focus on ubiquitin-proteasome system. The co-culture of DC incubated with Xanthine/Xanthine Oxidase system and T CD8+ isolated from mice immunized with DNA-HSP65 promoted T CD8+ proliferation. XaXO incubation was more efficient in promoting DC maturation compared to LPS. In addition, XaXO incubation decreased IP catalytic activity in relation to LPS, suggesting that increased T CD8+ proliferation is not directly related to IP activity. XaXO incubation did not alter the expression of 20S catalytic subunit, 19S regulatory unit or ⓹i subunit. XaXO incubation increased 11S regulatory unit content as well as that of ubiquitinated proteins. We suggest that the DC incubation with XaXO increased 11S content favoring its coupling to 20S in detriment of 19S. This would increase ubiquitinated protein levels and direct more peptide fragments for antigen presentation.

Advisors/Committee Members: Demasi, Marilene.

▼ Despite of being a treatable disease, tuberculosis remains a major public health problem in various regions of the world. Cellular immunity is very important to defend the body against infection caused by Mycobacterium tuberculosis, mainly macrophages, natural killer cells, lymphocyte T CD4+ and CD8+. Nowadays the double-negative áâ e ãä lymphocytes have been evaluated for their role in the defense against intracellular pathogens. The aim of the present study was to investigate whether patients with non-advanced and advanced radiological presentations of pulmonary tuberculosis have any changes regarding the parameters of cellular immunity and on the pattern of cytokines produced by double negative ãä and áâ lymphocytes. A total of 20 patients with pulmonary tuberculosis were evaluated and they were classified as non-advanced radiological presentation (10 patients), advanced radiological presentation (10 patients) and 10 controls without tuberculosis. It was used two approaches in this study: the evaluation of ex-vivo and after in vitro culture. For the ex-vivo study, the markers CD4, CD8, áâ, , CD28, CD69 and HLA-DR were analyzed by flow cytometry in peripheral blood lymphocytes. For the IFN-, TNF-á and IL-10 cytokines determination, it was used the culture supernatant of mononuclear cells from peripheral blood stimulated with antigens of Mycobacterium tuberculosis. Statistical analysis of results showed a lower expression of double-negative ãä lymphocytes and increased expression of double-negative áâ lymphocytes in patients with advanced radiological presentation of tuberculosis when compared to patients with non-advanced radiological presentation. The expression of co-stimulatory molecule CD28 and activation markers CD69 and HLA-DR is increased in double-negative ãä cells of patients with non-advanced radiological presentation which shows a profile of prior activation of these cells in this radiographic appearance of the disease. In relation to the cytokines produced after antigen stimulation of leukocytes, it was observed that both cells produce higher levels of inflammatory cytokines IFN-ã and TNF-á in tuberculosis with non-advanced radiological presentation while producing higher levels of immunoregulatory cytokine IL-10 in advanced radiological presentation. Furthermore, the results show that the double negative ãä lymphocytes are better producers of IFN-ã while the double negative áâ lymphocytes are better producers of IL-10. These results showed that the double negative lymphocytes are activated in the bloodstream of patients with tuberculosis and that the evaluation of the expression of CD28, CD69, HLA-DR and the percentage of double negative ãä lymphocytes was able to differentiate both radiological presentations studied. Moreover, both cells exhibited a profile of inflammatory cytokines in non-advanced radiological presentation and immunoregulatory profile in advanced radiological presentation, which also allowed the differentiation between the two groups studied. This study innovatively analyzed the… Advisors/Committee Members: Maria das Gracas Carvalho, Maria das Gracas Carvalho, Silvana Spindola de Miranda, Tania Mara Pinto Dabes Guimaraes, Wania da Silva Carvalho, Lauro Mello Vieira, Vicente de Paulo C P de Toledo.

▼ 

Mesmo com o constante avanço no estudo da sibilância e asma, existem inúmeras controvérsias sobre a participação da exposição à endotoxina, background genético e ativação celular. Investigamos a participação da exposição à endotoxina ambiental e o papel do LPS no desenvolvimento dos fenótipos de sibilância e asma. Para tanto selecionamos crianças sibilantes e não sibilantes, e crianças asmáticas e não asmáticas, sendo seu sangue coletado e as PBMC cultivadas com LPS. O sobrenadante foi colhido para análise de citocinas por ELISA, e analisamos os polimorfismos nos genes de CD14 e TLR4 por PCR-RFLP. Não encontramos relação entre a exposição à endotoxina ambiental e o quadro de sibilância. Observamos que PBMC estimuladas ou não com LPS de crianças sibilantes e asmáticas produzem baixos níveis de IL-12 e IFN-γ quando comparado com crianças não sibilantes e não asmáticas. Os polimorfismos de TLR4 e CD14 não tiveram associação com sibilância ou asma. Nossos dados sugerem que não somente a polarização Th2 é importante para desenvolver essas patogenias, mas também uma diminuição na resposta Th1.

Although the great advance in the study of asthma and wheezing, there are numerous controversies about the involvement of endotoxin exposure, genetic background and cellular activation. We investigated the involvement of environmental endotoxin exposure and the role of LPS in the development of phenotypes wheezing and asthma. For experiments we selected wheezing and non-wheezing, and asthmatic and non-asthmatic children, and their blood collected and the PBMC cultured with LPS. The supernatant was collected for analysis cytokines by ELISA, and analyzed CD14 and TLR4 polymorphisms by PCR-RFLP. There was no relationship between environmental endotoxin exposure and the framework of wheezing. We observed that LPS-stimulated PBMC of wheezing and asthmatic children produce lower levels of IL-12 and IFN-γ when compared with non-wheezing and non-asthmatic children. The polymorphisms TLR4 and CD14 were not associated with wheezing or asthma. Our data suggest that not only Th2 polarization is important to develop these diseases, but also a decrease in Th1 response.

Advisors/Committee Members: Condino Neto, Antonio.

▼ 

Células dendríticas (DCs) são as responsáveis por orquestrar a resposta imunológica adaptativa através da estimulação de células T. Na imunoterapia do câncer, as DCs são um dos principais alvos de estimulação. Entretanto a maturação anormal destas pode interferir no resultado final da resposta imune. Neste estudo, analisaram-se os efeitos causados pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) na maturação de DCs. Nas DCs maturadas em presença de VEGF, utilizando-se citoquímica, constatou-se alterações morfológicas, como número reduzido de dendritos e citoplasma basofílico; a análise de expressão gênica global por microarranjos de DNA mostrou grande variação da expressão de genes relacionados com adesão celular e citoesqueleto. Na avaliação funcional verificou-se redução da capacidade das DCs de ativar linfócitos. Juntos esses resultados sugerem que células expostas ao VEGF seriam menos especializadas. A compreensão do impacto do VEGF em mecanismos de maturação celular contribui para o entendimento da supressão imunológica nos tumores que secretam VEGF.

Dendritic cells (DCs) are in charge of orchestrating the adaptive immune response through T cells activation. DCs are the main target in cancer cell immunotherapy. However, DCs inadequate maturation interferes in the outcome of the immune response. In this study, were analyzed the effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on DCs maturation. DCs matured in the presence of VEGF, showed morphologic alterations such as reduced number of dendrites and basophilic cytoplasm by cytochemistry. Global gene expression assessed by DNA microarrays demonstrated broad variation in the expression of cell adhesion and cytoskeleton regulation-related genes. Functional studies detected the reduced capacity of VEGF-exposed DCs in the activation of lymphocytes. All together these results suggest that cells exposed to VEGF are less differentiated, a possible mechanism involved in the immune suppression caused by VEGF secreting tumors.

Advisors/Committee Members: Moreira Filho, Carlos Alberto.

▼ INTRODUÇÃO: Sabe-se que experiências traumáticas na infância podem levar ao surgimento de distúrbios psiquiátricos na vida adulta, incluindo a depressão maior (DM). Contudo, ainda se desconhece o grau de alterações biológicas que eventos estressores traumáticos vivenciados na infância podem produzir em indivíduos com depressão. OBJETIVOS: Investigar parâmetros neuroendócrinos e imunológicos em mulheres adultas deprimidas, com sintomas de Estresse Pós- Traumático (TEPT) e história de abuso e negligência infantil (ANI). MÉTODOS: Trinta e oito mulheres com DM com ou sem história de abuso e negligência infantil e sintomas de TEPT e 19 mulheres saudáveis fizeram parte da coleta de dados desta tese. Os resultados deste trabalho foram divididos em 3 artigos científicos originais e uma revisão do tema. As avaliações incluíram dosagens de níveis salivares de cortisol e de sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEAS) por radioimunoensaio; a mitogênese induzida de linfócitos T de sangue periférico foi avaliada por ensaio colorimétrico, bem como a sensibilidade de linfócitos T a moduladores sintéticos (dexametasona) e naturais (epinefrina e sulfato de dehidroepiandrosterona); a secreção de citocinas de perfis Th1/Th2 (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-g) por células mononucleares foi identificada por citometria de fluxo; e os níveis plasmáticos de BDNF, além de TNF-a e seus receptores solúveis (sTNFR1 e sTNFR2), foram identificados por ELISA. RESULTADOS: Pacientes deprimidas com ou sem trauma infantil apresentaram níveis reduzidos e semelhantes de cortisol salivar e DHEAS em paralelo com proliferação reduzida de linfócitos T. As células mononucleares de sangue periférico das pacientes deprimidas foram menos sensíveis à dexametasona (DEX) ou epinefrina (EPI) e produziram níveis significativamente reduzidos de IL-2, IL-4 e TNF-a quando comparadas ao grupo de controles. As pacientes deprimidas apresentaram ainda níveis plasmáticos elevados de sTNFR1 e sTNFR2, além de redução dos 6 níveis de BDNF. CONCLUSÕES: Embora muitas alterações biológicas tenham sido identificadas nas mulheres com DM em relação ao grupo de mulheres saudáveis, poucas foram correlacionadas com história de abuso e negligência na infância. Sendo assim, de uma forma geral, conclui-se que a história de abuso e negligência na infância não impacta significativamente as alterações neuroendócrinas e imunológicas apresentadas por pacientes com depressão maior Advisors/Committee Members: Moisés Evandro Bauer.

▼ 

Introduction and Objectives: Studies have shown that helminth infections inhibit skinprick test to aeroallergen and modify the course of asthma, and that IL-10, produced in high levels during S. mansoni infection, is able to modulate the type 2 immune response involved in asthma pathology. The objectives of this study were to evaluate the source of IL-10, the cell phenotype and the expression of co-stimulatory molecules in asthmatics cells infected with S. mansoni and compare the results with those obtained from asthmatics infected with other helminths and uninfected asthmatics. Methods and Results: The T cell phenotype (CD3, CD4, CD8 and CD14), the cell activation (CD25 and HLA-DR), co-stimulatory molecules (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 and CD86), ex vivo, and the cytokine IL-10 was evaluated using the specific monoclonal antibodies by flow cytometry. PBMCs stimulated for 20 hours in vitro with allergen (Der p1) were evaluated regarding intracellular expression of IL-10. The results were expressed in percentage of positive cells (mean SD) and mean of intensity of fluorescence (MIF) for HLA-DR (mean SD). The frequency of CTLA-4 on CD4+ T cells in infected asthmatics was 0.49 0.39%, while in asthmatics infected with other helminths was 0.78 0.25% and in uninfected asthmatics was 0.89 0.56% (p<0.05). The expression of CD28 on CD4+ T cells and its ligand CD80 on monocytes were similar in the three groups, while the expression of CD86 differ between groups(95.90 3.47%, 89.66 6.35% and 95.28 4.93%, respectively, p <0.05). The expression of CD25 on CD4+ T cells also did not differ significantly between groups (7.45 2.84%, 6.84 2.36% and 7.84 3.38%, respectively). In asthmatic individuals infected with S. mansoni it was observed that CD4+ T cells were the main source of IL-10, being the CD4+CD25+ cells those that expressed higher proportion of this cytokine. The CD8+ T and CD14+ cells also represented important source of IL-10 in these patients. Conclusion: The major difference in the cell activation status between asthmatics with or without S. mansoni infection was the higher frequency of CD4+ T cells expressing CTLA-4, an activation marker, in uninfected asthmatics. The modulation of the immune system observed in asthmatics infected with S. mansoni involves complex mechanisms including production of cytokines as IL-10 and regulatory cells.

Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por outros helmintos e asmáticos não infectados. Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4,…

Advisors/Committee Members: Jorge Clarencio Souza Andrade, Régis de Albuquerque Campos, Maria Ilma Andrade Santos Araujo.

▼ 

Heme (Iron Protoporphyrin IX), a ubiquitous molecule present in organisms of all kingdoms, is composed of an atom of iron linked to the four ligand groups of porphyrin. As a prosthetic moiety on inactive apo-heme proteins, heme provides a wide range of biological functions determined in part by the polypeptide associated to it. Diseases of increased hemolysis or extensive cell damage can lead to high levels of free heme, as sickle cell anemia, malaria, hemorrhagic fevers, and sepsis. Heme induces oxidative stress and has several proinflammatory activities. A hallmark of the inflammatory response is the recruitment of leukocytes out of the vasculature to tissues. Heme seems to affect this process in several ways: a) inducing cell adhesion molecule expression on endothelial cells in vitro or in vivo; b) increasing vascular permeability; c) enhancing chemokine expression and secretion; d) inducing migration of leukocytes in vivo and in vitro. The mechanism by which heme activates cells of the innate immune system causing inflammation is not fully characterized. We have recently observed that heme activates macrophages through TLR-4. Considering that heme induces neutrophil migration in vitro, we hypothesize that heme has a direct chemotactic effect on this leukocyte through activation of a G protein coupled receptor. In the present work we show that heme induces neutrophil migration in vivo and in vitro and stimulates the secretion of the inflammatory cytokines, IL-6 and TNF-a, in a dose-dependent fashion. Blood, hemoglobin and diverse heme analogs are also able to induce neutrophil recruitment. In contrast, biliverdin and mesoporphyrins are not efficient to recruit neutrophil and mesoporphyrin treatment in vivo inhibits the heme-induced neutrophil migration. Finally, the chemotactic effect of heme was abolished by pertussis toxin treatment in vitro . Taken together, these results suggest that heme induces neutrophil chemotaxis by activation of a G protein coupled receptor.

Heme (Ferro Protoporfirina IX), uma molécula ubíqua presente em organismos de todos os reinos, é composta de um átomo de ferro ligado a um anel tetrapirrólico. Como grupamento prostético de apoproteínas inativas, o heme desempenha várias funções biológicas determinadas em parte pelo polipeptídeo associado a ele. Doenças de hemólise elevada ou dano celular extensivo podem levar a altos níveis de heme livre , como a anemia falciforme, malária, febres hemorrágicas e sepse. O heme induz estresse oxidativo e tem diversas propriedades próinflamatórias. Uma das principais características da resposta inflamatória é o recrutamento de leucócitos da vasculatura para os tecidos. O heme parece afetar este processo de muitas maneiras: a) induzindo a expressão de moléculas de adesão em células endoteliais in vitro ou in vivo; b) aumentando a permeabilidade vascular; c) aumentando a expressão e secreção de quimiocinas; d) induzindo a migração de leucócitos in vivo e in vitro. O mecanismo pelo qual o heme ativa as células do sistema imune inato causando inflamação…

Advisors/Committee Members: Rita Maria de Abreu Maia, Heloisa Werneck de Macedo, Marcelo Torres Bozza, Adriana Ribeiro Silva, Aurélio Vicente Graça-Souza.