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1. Farache, Dorian. Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly.

Degree: Docteur es, Biologie cellulaire et moléculaire, 2016, Université Toulouse III – Paul Sabatier

Les microtubules sont des composants hautement dynamiques du cytosquelette. La tubuline gamma est localisée au centrosome. Elle y forme le complexe de nucléation des microtubules, le gamma-TuRC, en association avec les protéines GCPs 2-6. Les GCPs 2-6 forment une famille de protéines caractérisée par deux domaines conservés appelés GRIP1 et 2. De par sa structure, le gamma-TuRC sert de moule pour la nucléation des microtubules. Le gamma-TuRC est constitué de plusieurs sous-complexes : les gamma-TuSCs qui sont composés d'une GCP2 et d'une GCP3 qui interagissent entre elle par leur domaine amino-terminal, chacune liant une tubuline gamma via leur domaine carboxy-terminal. Les gamma-TuSCs s'assemblent latéralement pour former une structure à un tour d'hélice, les deux extrémités de l'hélice se recouvrant. La structure atomique de GCP4 s'intègre particulièrement bien dans structure du gamma-TuSC de levure, obtenue en microscopie électronique, à la place de GCP2 et 3 suggérant une forte conservation structurale entre les GCPs. GCP4, 5 et 6 pourraient donc être partie intégrante de l'hélice. Durant ma thèse j'ai étudié la position relative des GCP4, 5 et 6 au sein du gamma-TuRC. Pour cela j'ai développé des approches d'échange de domaines et de mutagénèse. J'ai également mis en place des stratégies de FLIM-FRET et d'immunoprécipitation. J'ai ainsi montré que c'est le domaine N-terminal des GCPs qui définit leur identité, les domaines C-terminaux étant échangeables. J'ai également mis en évidence, au sein du gamma-TuRC, des interactions latérales entre GCP4 et GCP5 semblables à celles établies par GCP2 et GCP3 dans les gamma-TuSC. J'ai également pu isoler un complexe contenant GCP4, 5, 6 et la tubuline gamma indépendamment du gamma-TuRC. J'apporte ainsi les premières preuves expérimentales soutenant l'idée que GCP4, 5 et 6 sont partie intégrante de l'hélice du gamma-TuRC et qu'elles y forment un sous complexe qui occupe une position bien définie.

Microtubules are highly dynamic components of the cytoskeleton. gammatubulin is found at the centrosome where it forms a microtubule nucleation complex together with GCPs 2-6, the gamma-TuRC. GCPs 2-6 form a conserved family of proteins characterised by two conserved domains called GRIP1 and 2. The gamma-TuRC functions as a structural template for microtubule nucleation. The gamma-TuRC is composed of smaller subcomplexes called gamma-TuSC. Each gamma-TuSC is composed by one GCP2, one GCP3 and two gamma?tubulins. GCP2 and GCP3 interact via their N-terminal domain and bind gamma tubulin through their C-terminal domain. Several gamma-TuSCs can assemble laterally to form a one-turn helix with the two ends overlapping. The atomic structure of GCP4 fits almost perfectly in the place of GCP2 and GCP3 within the gamma-TuSC envelope obtained by electron microscopy suggesting a strong structural conservation among GCPs. Hence, GCP4, 5 and 6 may be part of the helix. During the course of my thesis, I studied the relative position of GCPs 4, 5, 6 within the gamma-TuRC. To this aim, I…

Advisors/Committee Members: Merdes, Andreas (thesis director), Haren, Laurence (thesis director).

Subjects/Keywords: Tubuline; Mitose; Microtubule; Fuceau mitotique; Nucléation; Centrosome; Gamma complex proteins

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APA (6th Edition):

Farache, D. (2016). Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly. (Doctoral Dissertation). Université Toulouse III – Paul Sabatier. Retrieved from http://www.theses.fr/2016TOU30231

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Farache, Dorian. “Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly.” 2016. Doctoral Dissertation, Université Toulouse III – Paul Sabatier. Accessed December 06, 2019. http://www.theses.fr/2016TOU30231.

MLA Handbook (7th Edition):

Farache, Dorian. “Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly.” 2016. Web. 06 Dec 2019.

Vancouver:

Farache D. Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly. [Internet] [Doctoral dissertation]. Université Toulouse III – Paul Sabatier; 2016. [cited 2019 Dec 06]. Available from: http://www.theses.fr/2016TOU30231.

Council of Science Editors:

Farache D. Etude des fonctions de GCP4, 5 et 6 dans l'assemblage du complexe de nucléation des microtubules : Investigating the function of GCPs 4, 5, 6 in the Gamma-tubulin ring complex assembly. [Doctoral Dissertation]. Université Toulouse III – Paul Sabatier; 2016. Available from: http://www.theses.fr/2016TOU30231

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