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You searched for +publisher:"University of São Paulo" +contributor:("Augusto, Elisabeth de Fatima Pires"). Showing records 1 – 2 of 2 total matches.

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1. Aguiar, Marcelo Antonio. Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator.

Degree: Mestrado, Biotecnologia, 2010, University of São Paulo

O interesse em células de inseto para a produção de proteínas complexas se deve a sua maior facilidade de cultivo e ao padrão equivalente de glicosilação quando comparado aos sistemas com células de mamíferos. O objetivo deste trabalho foi identificar fatores que limitam ou inibem a produção da glicoproteína do vírus rábico (GPV) expressa na membrana citoplasmática de células de Drosophila melanogaster transfectadas, quando cultivadas em biorreator de bancada agitado e bubble-free, operado em modo descontínuo. Avaliaram-se as influências de oxigênio dissolvido (5 < pO2 <80%), da glicose (1 < GLC0 < 15g/L) e da glutamina (0.6 < GLN0 < 7g/L). Essas variáveis afetaram de forma diferenciada o crescimento celular (produção de células e velocidades específicas-µX), o metabolismo celular (fatores de conversão - YX/GLC, YX/GLN, YLAC/GLC, YALA/GLC, YNH4/GLN, YALA/GLN), assim como a expressão da proteína recombinante (concentração, teor celular e produtividade). O aumento do pO2 reduziu em 9 vezes o crescimento celular mas aumentou o teor celular de GPV em 1,4 vezes. Baixos valores de GLC0 e GLN0, claramente, limitaram o crescimento, de modo que incrementos na concentração desses substratos, até valores intermediários, aumentaram µX,MAX em 3 vezes e 2,5 vezes, respectivamente, e a produção de células em 11 vezes e 3 vezes, respectivamente. O teor celular de GPV máximo não foi afetado pela GLC, mas aumentou em 100% para valores de GLN0 igual ou superiores a 3,5 g/L. As concentrações de lactato produzidas foram consideradas baixas (inferiores a 0,8 g/L) para exercer qualquer efeito de inibição sobre o crescimento ou a expressão da proteína. Por sua vez, as concentrações de amônio parecem inibir tanto a produção de GPV (NH4+~50mg/L) quanto o crescimento celular (NH4+~80mg/L). A condição de cultivo com de 30% de pO2, 10 g/L de GLC0 e 3,5 g/L de GLN0 resultou nos maiores valores de produtividade (9,1 µg/L.h) e de concentração de GPV (1,2 mg/L). O metabolismo de GLC e GLN apresentou grande interdependência, com alterações em GLC0 afetando o metabolismo de GLN e vice-versa. Assim, em condições de excesso de GLC0, as células apresentaram um metabolismo mais ineficiente com reduções nos fatores YX/GLC (2,3 vezes) e YX/GLN (4,6 vezes) e maior geração de subprodutos, caracterizada por incrementos nos valores de YALA/GLC (51%), YLAC/GLC (11%) e YNH4/GLN (15%). O metabolismo da GLN apresentou resposta característica de substrato em excesso para toda a faixa de valores ensaiada, com redução de 25 vezes no valor de YX/GLN e inesperadamente também uma redução na geração de subprodutos de 7 vezes para YNH4/GLN e 12 vezes para YALA/GLN. O efeito sobre o metabolismo da GLC foi mais acentuado para valores mais elevados de GLN0, com redução de 3,6 vezes para YX/GLC e incrementos de 70% para YALA/GLC e para YLAC/GLC. Os resultados sugerem ainda que a célula utiliza duas vias para metabolizar a glutamina: glutaminólise, em condição de limitação em GLC; ou glutamato sintase - NADH-GOGAT, em condição de excesso em GLC.… Advisors/Committee Members: Augusto, Elisabeth de Fatima Pires.

Subjects/Keywords: Bioreactor; Biorreator; Célula de inseto; Drosophila melanogaster S2; Drosophila melanogaster S2; Glicoproteína do vírus rábico; Insect cell; Metabolism; Metabolismo; Proteína recombinante; Rabies virus glycoprotein; Recombinant protein

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APA (6th Edition):

Aguiar, M. A. (2010). Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator. (Masters Thesis). University of São Paulo. Retrieved from http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29042010-104842/ ;

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Aguiar, Marcelo Antonio. “Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator.” 2010. Masters Thesis, University of São Paulo. Accessed September 24, 2020. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29042010-104842/ ;.

MLA Handbook (7th Edition):

Aguiar, Marcelo Antonio. “Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator.” 2010. Web. 24 Sep 2020.

Vancouver:

Aguiar MA. Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator. [Internet] [Masters thesis]. University of São Paulo; 2010. [cited 2020 Sep 24]. Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29042010-104842/ ;.

Council of Science Editors:

Aguiar MA. Estudo cinético de células de Drosophila melanogaster  transfectadas para a produção da glicoproteína da raiva em biorreator. [Masters Thesis]. University of São Paulo; 2010. Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-29042010-104842/ ;

2. Andrade, Cássia Maria Ramaciotti de. Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator.

Degree: PhD, Biotecnologia, 2013, University of São Paulo

A utilização de células humanas para a produção do fator VIII de coagulação recombinante (rFVIII) visa obter padrões de glicosilação equivalentes aos encontrados na proteína normal. O objetivo do trabalho foi obter um processo de produção do rFVIII em biorreator em perfusão, devido à sua labilidade térmica. Foram realizados estudos preliminares em Spinner e biorreator utilizando uma linhagem de rHeLa, cujos resultados embasaram os estudos com a linhagem produtora rSkHep. Foram utilizados microcarregadores nos cultivos com esta linhagem devido à dificuldade de adaptação da mesma à suspensão. Ensaios preliminares identificaram a melhor condição de cultivo com 3 g/L Mic e 1 cel/mic e, a partir destes valores, realizou-se um ensaio em perfusão, com tempo de residência de 24 h, no qual as variáveis controladas foram mantidas constantes durante três tempos de residência. A concentração de rFVIII obtida foi semelhante 2 UI/ mL.

The interest in using human cells for the recombinant coagulation factor VIII (rFVIII) lies in obtaining glycosylation patterns similar to the ones found in the normal protein. The objective of this work was to obtain a process for rFVIII production in bioreactor, in perfusion mode, due to the thermal lability of the protein. Using a recombinant HeLa cell line adapted to suspension growth a group of studies in a bioreactor in batch mode were performed. These results were the basis for the studies performed with the producing cell line rSkHep. Microcarriers (micc) were used due to the harshness to adapt the cell line to suspension and to serum-free medium. Preliminary tests identified the best culture condition with 3 g micc/L and 3 cell/micc and, from its values, it was performed a bioreactor study in perfusion mode, with a residence time of 24 hours. The controlled variables were kept constant for three residence times. The maximum rFVIII concentration obtained was 2 UI/mL.

Advisors/Committee Members: Augusto, Elisabeth de Fatima Pires.

Subjects/Keywords: Blood clotting factors; Cellular metabolism; Fatores de coagulação sanguínea; Metabolismo celular; Plasma; Plasma; Proteínas recombinantes; Recombinant proteins

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APA (6th Edition):

Andrade, C. M. R. d. (2013). Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator. (Doctoral Dissertation). University of São Paulo. Retrieved from http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06112013-105355/ ;

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Andrade, Cássia Maria Ramaciotti de. “Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator.” 2013. Doctoral Dissertation, University of São Paulo. Accessed September 24, 2020. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06112013-105355/ ;.

MLA Handbook (7th Edition):

Andrade, Cássia Maria Ramaciotti de. “Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator.” 2013. Web. 24 Sep 2020.

Vancouver:

Andrade CMRd. Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator. [Internet] [Doctoral dissertation]. University of São Paulo; 2013. [cited 2020 Sep 24]. Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06112013-105355/ ;.

Council of Science Editors:

Andrade CMRd. Desenvolvimento de processo de produção de fator VIII recombinante em biorreator. [Doctoral Dissertation]. University of São Paulo; 2013. Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06112013-105355/ ;

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