A resposta imune inata na fase aguda da malária resulta em um estado imunológico que é profundamente alterado podendo proteger o hospedeiro contra uma forma grave da doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a dinâmica celular das subpopulações de Linfócitos T (CD3+CD4+ e CD3+CD8+), Linfócitos B (CD5+CD19+ e CD5-CD19+) , NK (CD3+CD16+CD56+ e CD16+CD56+) e células T reguladoras (CD4+CD25+FoxP3+) em pacientes infectados pelo Plasmodium vivax segundo critérios de exposição previa de malária e níveis de hemoglobina e plaqueta. Durante maio e novembro (2012), amostras de sangue periférico de pacientes infectados exclusivamente pelo P. vivax com malária não complicada foram separadas em: Grupo 1 (Primo-infectado); Grupo 2 (Última infecção < 7 meses) e Grupo 3 (Última infecção mais de 7 meses). Infecções mistas e co-infecções com dengue foram excluídas por PCR. A expressão moléculas de Adesão (CD31 e CD54) e molécula de memória (CD45RO e as citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-α e IFN-Ɣ, foram analisadas por Citometria de Fluxo. Os dados hematológicos mostraram que os pacientes com malária vivax apresentaram diminuídas as porcentagens de linfócitos (p <0.0001) em relação aos controles. Dos setenta e um pacientes, 36 foram Primo infectado; 16 tiveram malária < 7 meses e 19 há mais 1 ano. Foi observado diferenças significativas nas imunofenotipagens em relação ao aos pacientes com malária Recente (< 7 meses) em relação aos outros históricos. Esses pacientes apresentaram diminuídas quantidade de Linfócitos B1 (p=0.042) e T-CD8-CD69 (p=0.027).Foi também observada a Plaquetopenia acentuada nos pacientes primo infectados com correlação diretamente proporcional com as subpopulações de CD4 e CD8 ativados e expressão PECAM-1 em linfócitos T-CD8. Diferenças acentuadas no perfil de citocinas puderam de ser observadas com as citocinas TNF-α em relação com IL-10 e IL-6 e a redução no numero de algumas subpopulações linfocitárias nos pacientes cuja ultima malária ocorreu < 7 meses Estes resultados seriam indicativos de imunocompensação da resposta imune contra formas graves da doença nestes indivíduos com historia recente de malária, e o estado não imune de pacientes do Primo infectadopoderia contribuir para a alteração da contagem de plaquetas comportando-se como um fator de risco para o desenvolvimento de Plaquetopenia na malária.

The innate immune response in the acute phase of malaria results in an immune state that is profoundly altered can protect the host against a grave form of disease. The aim of this study was to evaluate the dynamics of cellular subpopulations of T lymphocytes (CD3+CD4+ e CD3+CD8+), B lymphocytes (CD5+CD19+ e CD5-CD19+) , NK (CD3+CD16+CD56+ e CD16+CD56+) and regulatory T cells ((CD4+CD25+FoxP3+) in patients infected with Plasmodium vivax according to exposure criteria provided malaria and hemoglobin and platelets. During May and November (2012) Peripheral blood samples from patients infected exclusively by P. vivax with uncomplicated malaria were separated into: Group 1 (Primo-infected), Group 2…

Tradicionalmente, o diagnóstico confirmatório da malária é feito pelo exame microscópico do sangue. Logo, o diagnóstico da doença pode ser complicado com a falta de pessoas ou equipamentos necessários para a obtenção de um diagnóstico confiável e rápido. Por esta e outras razões, métodos rápidos, práticos e sensíveis vêm sendo desenvolvidos, como, por exemplo, as fitas imunocromatográficas. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema em fluxo lateral para o diagnóstico de malária causada por Plasmodium falciparum. Logo, anticorpos policlonais e monoclonais contra a proteína HRP2 (“Histidine rich protein 2”) de Plasmodium falciparum foram produzidos utilizando para isso uma proteína recombinante desta fusionada a uma cauda de glutationa-S-transferase (rHRP2-GST, obtida em trabalhos anteriores). Após a obtenção dos hibridomas, apenas 20 responderam contra a proteína rHRP2-GST, e dentre estes apenas 4 apresentaram alguma reatividade contra a proteína nativa. O anticorpo monoclonal que melhor reagiu a este ultimo ELISA e em um ensaio de imunofluorescencia foi utilizado em um sistema de fluxo lateral padronizado nesta tese. Para esta padronização, foi montado primeiramente um sistema em fluxo lateral em formato competitivo seguido de um sistema em sanduíche utilizando anticorpos policlonais anti-rHRP-GST. Nos ensaios utilizando hemácias parasitadas por P. falciparum, foram obtidos resultados positivos (detecção da infecção na fita imunocromatográfica) usando os anticorpos policlonais. O sistema apresentou estabi l idade dentro do período de teste, demonstrando assim que possivelmente, em um ambiente de produção controlado, este sistema em fluxo lateral poderia permanecer estável por um tempo satisfatório para sua comercialização.

Traditionally, confirmatory diagnosis of malaria is made by microscopic examination of blood. Therefore, the diagnosis of the disease may be complicated by the lack of people or equipment necessary to obtain a fast and reliable diagnosis, especially in areas of difficult access. For these and other reasons, rapid, practical and sensitive methods have been developed, such as immunochromatographic strips. Therefore, this work aimed to develop a lateral flow system for the diagnosis of malaria caused by Plasmodium falciparum. So, polyclonal and monoclonal antibodies against the protein HRP2 (Histidine rich protein 2) of Plasmodium falciparum were produced using a recombinant protein that it fused to a glutathione-S-transferase (rHRP2-GST, obtained in previous work). After hibridomas production, only 20 responded against the protein rHRP2-GST, and of these only four showed some react ivity against the native protein. The monoclonal antibody that reacted better on this last ELISA test and in an immunofluorescence was used on a lateral flow system standardized here. For this standardization, the system was first mounted in lateral flow competitive format followed by a sandwich system using polyclonal anti-rHRP2-GST. In assays using red blood cells parasitized by P. falciparum,…

Introdução: A malária é um problema de saúde pública amplamente distribuída nas regiões tropicais e subtropicais no mundo. No Brasil, a doença ainda apresenta elevados números de casos, no qual o Plasmodium vivax (P. vivax) é responsável pela maior parte de diagnóstico. Nos últimos anos, esses casos vêm se apresentando de forma complicada, tornando-se este um motivo de preocupação, pois está espécie apresenta ampla distribuição geográfica, dessa maneira torna-se necessário o controle da infecção. Uma das alternativas para controle da infecção seria o desenvolvimento de uma vacina. No entanto, um dos grandes problemas para seu desenvolvimento é a incompreensão das respostas imunológicas contra os antígenos candidatos. Dentre os antígenos candidatos, a “proteína 1” de superfície do merozoíto (MSP-1) de Plasmodium tem se destacado, pois estudos demonstram que anticorpos contra as diferentes regiões de MSP-1 conferem proteção clínica em indivíduos que residem em áreas endêmicas. O objetivo desta trabalho foi caracterizar a resposta imune humoral contra antígenos recombinantes de regiões variavéis e conservada da PvMSP-1 em indivíduos que residem em áreas endemicas no estado do Amazonas. Material e métodos: Para tanto, foram produzidas três proteínas recombinantes, duas correspondente a região variável (bloco 2) e uma da conservada (bloco do ICB1) da PvMSP-1 (utilizando sequencias identificadas em trabalhadores anteriores, e selecionadas por bioinformática como os epítopos de células B). Tais proteínas foram expressas e purificadas utilizando genes sintéticos otimizados para expressão em Escherichia coli. A reatividade de soros de pacientes sintomáticos e assintomáticos contra estas proteínas, juntamente com a proteína ICB2-5 de PvMSP-1 (obtida em trabalhos anteriores), foi avaliada por ELISA indireto. Resultados e Conclusão: A expressão e purificação das proteínas recombinantes foram realizadas com êxito. A análise sorológica contra os antígenos recombinantes demonstrou maior nível de anticorpos contra a proteína ICB2-5 para ambas as aéreas (Rio Pardo e Manaus). Em relação à resposta de anticorpos IgG contra às três proteínas (P1, P2 e P3), foi observado que a proteína P2 foi a mais reconhecida nos soros de pacientes sintomáticos de Manaus e Rio Pardo, enquanto que a P3 foi a mais reconhecida nos assintomáticos. Em análise a resposta de subclasses observou-se que o IgG3 foi o mais prevalente contra ICB2-5. Em relação às três proteínas o nível de reatividade foi baixo para as subclasses, porém quando as frequências de soros respondedores IgG3 e IgG2 foram reunidas in silico(ICB2- 5+P1+P2+P3). Estas superaram os resultados nos níveis de reconhecimento da ICB2-5 sozinha, sugerindo que o desenvolvimento de um repertório de proteínas recombinantes correspondentes ao Bloco 2 é capaz de expandir o espectro de soros reagentes.

Introduction: Malaria is a public health issue distributed in tropical and subtropical regions worldwide. In Brazil, the disease still has a high number of cases in…

A anaplasmose bovina é uma enfermidade causada por uma rickettsia denominada Anaplasma marginale (A. marginale) transmitida por carrapatos e a doença se caracteriza por anemias, febre, perda de peso, diminuição da produção de leite, aborto e morte nos animais. A doença causa perdas econômicas na produção de gado e por isso estratégias para o desenvolvimento de vacinas é imprescindível para minimizar seu impacto. Neste estudo uma proteína recombinante de A.marginale foi produzida a partir de uma estratégia inovadora de utilizar DNA sintetico para codificar os epítopos dos principais antígenos de A.marginale. Após a clonagem em pGEM e subclonagem em pHT43, a proteína quimérica foi expressa em Escherichia coli contendo epítopos dos antigenos OMP7/9 (outer membrane protein 7/9) e MSP1a (major surface protein 1a). A antigenicidade foi comprovada pela reatividade da proteina recombinante com soro de bezerro com anaplasmose, e a imunogenicidade e proteção vacinal foi comprovada em camundongos Balb/c. Com uma fórmula composta com adjuvante oleoso (MSP1a/OMP7/9+ISA), animais receberam três (3) doses vacinais e desafiados com 3x105cel/mL de A. marginale UFMG2. Os animais imunizados não apresentaram variação de peso corporal nem sinais clínicos da doença, porém houve redução significativa da carga bacterêmica nos vacinados (p<0,0008) comparados com grupos placebos. Além disso, não houve alterações hematológicas como aumento no número de monócitos (p<0,005), neutrófilos (p<0,05) e leucocitose (p<0,05), verificadas nos controles infectados. As avaliações deste trabalho demonstraram a importância da proteína recombinante MSP1a/OMP7/9 na melhoria da resposta imunológica de Balb/c e sua potencial aplicabilidade na produção de vacinas recombinantes.

The bovine anaplasmosis is a disease characterized by severe anemia, fever, weight loss, decreased milk production, abortion and death in the animals. It is caused by A. marginale and transmitted by ticks, leading severe economic losses in cattle production and hence strategies for developing vaccines are essential to minimize its impact. In this study, a chimeric protein was produced by synthetic DNA, carrying sequences of predicted epitopes from OMP7, OMP9 and MSP1a, and used as vaccine emulsified with ISA adjuvant. After three doses, Balb/c mice were challenged with 3x105cel/mL A. marginale UFMG2 to assess proctetion of compound MSP1a/OMP7/9+ISA. There were not body weight alterations neither clinical signs were observed in immunized mice. Bacteremia count showed drastic reduction and discrete alteration on erythrocyte morphology (spherocytes) in vaccined mice 56th day after challenge. No alteration was observed in hematologic data in relation to infected control mice. The evaluation obtained in this study showed the importance of the MSP1a /OMP7/9 protein in the immune response of the Balb/c and your applicability potential in the recombinant vaccine production.

Não informada

As comorbidades respiratórias em pessoas infectadas pelo vírus HIV tendem a desenvolver complicações associadas às coinfecções oportunistas. Este estudo teve como objetivo avaliar os aspectos morfológicos e funcionais das plaquetas de pacientes com HIV / AIDS com comorbidades respiratórias. Neste estudo, foi demonstrado que pacientes HIV/AIDS coinfectados com tuberculose (Tb) mostraram alteração plaquetária e tiveram maior chance de risco de óbito. A análise de marcadores inflamatórios mostrou que os níveis de IL-6 foram elevados e associados ao óbito (p=0.028), comorbidades (neurológicas e digestivas), manifestações hematológicas (p=0.0094) e contagem de células T CD4+ (p=0.0105). As alterações na contagem de plaquetas nos pacientes HIV/AIDS com comorbidade respiratória foram ou por plaquetopenia (p=0.0059) e ou plaquetocitose (p=0.022).. A análise morfológica mostrou duas subpopulações de plaquetas CD41+DHE+ (reticuladas) e CD41+DHE- (maduras). As plaquetas dos pacientes com HIV-Tb responderam ao estimulo com adrenalina aumentando o número de eventos sugerindo fragmentação desta subpopulação. Apesar de ainda não estar claro o mecanismo envolvido nestas complicações, a inflamação e as alterações nas respostas de plaquetas parecem ser importantes fatores associados à progressão da infecção pelo HIV e óbito.

Respiratory comorbidities is major causes of hospital admission among people living with HIV worldwide, and their outcome is poor when associated with opportunistic coinfections. This study aimed to evaluate the morphological and functional aspects of the platelets of HIV/AIDS patients with respiratory comorbidities. In this study, tuberculosis coinfected HIV/AIDS (HIV/AIDS-TB) patients showed a higher risk of death, higher IL-6 levels was associated with death (p=0.028), comorbidities (neurological and digestive), hematological manifestations (p=0.0094) and CD4+T cell counts (p=0.0105). Platelet abnormalities observed in HIV/AIDS-TB were due either thrombocytopenia (p=0.0059) or thrombocytosis (p=0.022). Morphological analysis showed different behavior of two subpopulations of CD41+/DHE+ (reticulated) and CD41+/DHE- (mature) platelets when they were stimulated with adrenaline. The mature platelets of HIV/AIDS-TB responded increasing the number of events suggesting fragmentation of this subpopulation. Although the mechanism involved in these complications is unclear, inflammation and changes in platelet responses appear to be important factors associated with progression of HIV infection and death.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior

Sem dificuldade, processo totalmente autoexplicativo.

A malária ou paludismo é uma doença parasitária de grande relevância mundial que, provocada por protozoários do gênero Plasmodium¸ é responsável por altos índices de morbidade e mortalidade, sobretudo nas regiões tropicais do planeta. O protozoário P. falciparum é o parasita relacionado aos casos mais graves da doença tendo sido mais intensamente estudado, no entanto, o P. vivax é geograficamente o parasita mais amplamente distribuído, responsável por 80 a 300 milhões de casos estimados, incluindo casos graves e mortes. Em regiões endêmicas, a exposição freqüente aos parasitas leva ao surgimento de indivíduos portadores de malária assintomática, cujo o desenvolvimento de uma imunidade natural os protegem dos sintomas clínicos da doença. Um dos antígenos capazes de gerar resposta imune específica é a proteína 1 de superfície do merozoíto (MSP1), conhecida por seu papel na invasão celular do hospedeiro. Neste estudo, nós analisamos a resposta imune contra as porções N e C terminais da MSP1 da espécie P.vivax em 312 soros de uma população proveniente de um assentamento rural localizado na região do rio Pardo, no Estado do Amazonas. 47 (15,06%) dos indivíduos foram diagnosticados com infecção malárica. Houve correlação entre o número de infecções anteriores e o tempo de residência na região (p=0,000), idade e presença de infecção (p=0,026) e número de infecções anteriores o tempo desde o último episódio malárico (p=0,000). Não foi observada correlação entre idade e número de infecções anteriores (p=0,388). 159 (51,0%) apresentaram IgG total contra a porção C-terminal (ICB-10) e 92 (29,5%) contra a porção N-terminal (ICB2-5) da proteína MSP1 (p=0,000). Não houve relação entre a presença de anticorpos IgG total contra o fragmento ICB2-5 (p=0,747) ou contra o fragmento ICB-10 (p=0,515) e proteção clínica quando efetuada análise de sobrevida com acompanhamento dos indivíduos por 360 dias. Porém, quando avaliado o período de 9 meses, a presença de IgG3 contra ICB2-5 foi relacionada à proteção clínica (p=0,039). Adicionalmente, indivíduos que não tiveram infecção malárica no período de 360 dias de seguimento, apresentaram níveis de IgG3 contra ICB2-5 significativamente maiores (p=0,003) que os indivíduos que tiveram episódio de infecção. Nossos dados sugerem que a presença de IgG3 contra a porção N-terminal da proteína MSP1 constitui-se como marcador soro-epidemiológico de proteção clínica em indivíduos provenientes de regiões endêmicas.

Plasmodium vivax is geographically the most widely distributed, accounting for 80 to 300 million estimated cases, including severe cases and deaths. In endemic areas, frequent exposure to parasites leads to the emergence of individuals with asymptomatic malaria, which develops a natural immunity that protects against the clinical symptoms of the disease. This immune status is important to evaluate malaria vaccine candidates. One of the antigens that can generate specific immune response is the merozoite surface protein-1 (MSP-1), known for its role in host cell invasion. We analyzed the…