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Introdução: A infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) é a principal causa de doença hepática em todo mundo. Aproximadamente 170 milhões de pessoas estão infectadas com o vírus. A resposta imune contra o VHC conduz a secreção de citocinas e ativação e proliferação de células T efetoras para atuarem nos hepatócitos infectados e assim iniciam o processo inflamatório no fígado. Objetivo: o estudo teve como objetivo caracterizar a resposta imune e estimar a frequência do polimorfismo do TNF-α -308 G/A em pacientes com hepatite C crônica atendidos na Fundação de Medicina Tropical Doutor Heitor Vieira Dourado. Material e Métodos: Foram utilizadas amostras de 30 de pacientes com hepatite C e 28 amostras de indivíduos não infectados com o VHC. As análises dos linfócitos T e moléculas de adesão foram realizadas por citometria de fluxo. As citocinas séricas foram analisadas por citometria de fluxo utilizando o kit CBA. A caracterização do polimorfismo de TNF-α- 308 foi obtida por PCR-RFLP. A fibrose foi determinada após análise histológica de biópsia hepática de acordo com o escore METAVIR. Resultados: Os pacientes com hepatite C apresentaram porcentagem de linfócitos T regulatórios (T regs) e citocinas aumentadas quando comparados ao grupo controle. Na fibrose ≥F3 (N=10) foi caracterizada relevante frequência (100%) de indivíduos com alta produção de IL-2 e baixa frequência (50%) de indivíduos com alta produção de IL-10 e na fibrose ≤F2 foi caracterizada relevante frequência (85%) de indivíduos com alta produção de IL-4 e frequência (55%) de indivíduos com alta produção de IL-10. Conclusão: Os linfócitos T efetores são regulados pelos linfócitos T regs. Na fibrose ≥F3 foi caracterizado um perfil de citocinas Th1 enquanto na fibrose ≤F2 um perfil de citocinas Th2. A baixa produção de IL-10 foi associada com uma atividade fibrogênica aumentada em pacientes com hepatite C.

Introduction: Hepatitis C virus (HCV) infection is the major cause of liver disease worldwide. Approximately 170 million more people are infected with the virus . The immune response against HCV leads to secretion of cytokines and activation and proliferation of effector T cells to act in infected hepatocytes and thus initiate the inflammatory process in the liver. Objective: This study aimed to characterize the immune response and to estimate the frequency of polymorphism of TNF - α -308 G / A in patients with chronic hepatitis C treated at the Tropical Medicine Foundation Dr. Heitor Vieira Dourado. Material and Methods: In this study we used samples from 30 patients with hepatitis C virus infection and 28 samples from individuals not infected with HCV . The analysis of T lymphocyte and adhesion molecules were performed by flow cytometry. The cytokine levels were assessed by flow cytometry using the CBA kit. The characterization of TNF- α -308 polymorphism was obtained by PCR-RFLP. The fibrosis was determined after histological analysis of liver biopsy according to the METAVIR score. Results: Our data revealed that percentage of regulatory T lymphocytes (T…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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A insuficiência cardíaca (IC) acomete aproximadamente 2% da população mundial. A cardiopatia isquêmica é responsável por 2/3 da IC, a qual, quando estabelecida, implica limitações físicas, repetidas internações hospitalares, piora da qualidade de vida e aumento da morbimortalidade. As alternativas terapêuticas variam desde o tratamento farmacológico até o transplante cardíaco. Modernas estratégias de reperfusão e avançadas condutas farmacológicas têm propiciado um aumento na sobrevida dos pacientes com cardiopatia isquêmica, porém nenhuma estratégia de tratamento recupera o dano aos cardiomiócitos e à vasculatura perdida; é nesse sentido que o conceito de medicina regenerativa utilizando células-tronco (CT) para o reparo de tecidos pode tornar-se realidade. A mobilização e implante autólogo de CT hematopoéticas CD34+ podem melhorar a função e perfusão. Um total de 15 pacientes com cardiopatia isquêmica grave, inelegíveis para outra alternativa terapêutica, receberam células autólogas CD34+ coletadas de sangue periférico (SP), previamente mobilizadas com fator de estimulação de colônias de granulócitos (G-CSF). As CT coletadas de SP foram implantadas no miocárdio utilizando duas vias (intracoronariana e seio coronariano). Realizou-se em todos os pacientes uma avaliação clínica, laboratorial e exames complementares de imagem para avaliar função, perfusão e voltagem do ventrículo esquerdo. Após 4 meses de seguimento pós-implante, todos os pacientes foram reavaliados. Dos 15 pacientes incluídos, dois foram a óbito durante o seguimento (pós-implante tardio). As diferentes variáveis analisadas no seguimento de 4 meses mostraram uma melhora na classe funcional (p = 0,014), escore de angina (Canadian Cardiovascular Society) (p = 0,006), teste da caminhada de 6 minutos (p = 0,005) e qualidade de vida (p = 0,003). A fração de ejeção analisada por ecocardiograma e ressonância magnética mostrou uma discreta melhora, porém sem significância estatística (p = 0,062 e p = 0,0397); a cintilografia do miocárdio mostrou uma melhora da viabilidade, porém sem significância (20,79 para 27,14%; p = 0,390); a atividade elétrica do ventrículo esquerdo realizada através do mapeamento eletroanatômico não mostrou alterações significativas (p = 0,767). O implante de CT CD34+ no miocárdio utilizando duas vias simultâneas é seguro. No seguimento de 4 meses os pacientes apresentaram uma melhora em relação à sintomatologia e qualidade de vida, porém sem melhora significativa na função, perfusão e voltagem do ventrículo esquerdo

Heart failure (HF) affects approximately 2% of the world population. Ischemic cardiomyopathy accounts for two-thirds of cases of HF, which, when established, leads to physical limitations, multiple hospital admissions, declining quality of life, and increasing morbidity and mortality. Therapeutic alternatives range from pharmacological treatment to heart transplantation. Modern reperfusion strategies and advanced pharmacotherapeutic management have contributed to increase the survival of patients with ischemic…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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A hepatite C é um grande problema de saúde pública atual, com aproximadamente 170 milhões de pessoas infectadas no mundo todo. O HCV é um agente infeccioso altamente imunogênico levando ao desenvolvimento de uma intensa resposta imune humoral e celular. Entretanto, cerca de 80% dos pacientes evoluem para uma doença crônica, podendo desenvolver cirrose hepática ou câncer. A infecção das células pelo HCV rapidamente desencadeia eventos sinalizadores intracelulares que levam à produção de citocinas e a mudanças no padrão de expressão de moléculas de adesão celular, propiciando uma barreira à replicação e à disseminação viral. O objetivo do presente estudo foi caracterizar a expressão de moléculas de adesão e o perfil de citocinas em sangue periférico de doadores de sangue da Fundação HEMOAM infectados pelo vírus da hepatite C. Para isso, foram analisadas amostras de sangue de 50 indivíduos que apresentaram reatividade nos teste da triagem sorológica para HCV e, como controle negativo, foram analisadas 53 amostras de doadores de sangue saudáveis. Para fenotipagem dos leucócitos quanto a expressão de moléculas de adesão celular as amostras foram marcadas com anticorpos monoclonais e analisadas por citometria de fluxo. A quantificação da concentração sérica das citocinas de perfil Th1, Th2 e Treg foi realizada por ELISA. A prevalência de infecção por HCV na população de doadores de sangue da Fundação HEMOAM, residentes em Manaus, no período de agosto/2009 a julho/2010, foi de 0,1%, sendo mais prevalente no grupo de primodoadores, quando comparado aos doadores de repetição. Foi observado que a expressão das moléculas de adesão celular em leucócitos no sangue periférico é influenciada pela infecção por HCV, o que resulta em alterações no padrão de recrutamento de leucócitos para o fígado e, consequentemente, altera o curso da doença. Há evidências de que a resposta imune contra o HCV, na população de doadores de sangue, apresente uma polarização para o perfil Th1, caracterizada por uma alta concentração de IL-12 e IL-10 no sangue periférico. A concentração de citocinas no sangue periférico de doadores infectados pelo HCV apresentou correlação com o padrão de expressão de moléculas de adesão celular dos leucócitos. Contudo, nossos resultados reforçam a importância da relação entre as moléculas de adesão celular, a produção de citocinas e a infecção pelo HCV.

Hepatitis C is a major public health problem today, with approximately 170 million people infected worldwide. HCV is a highly immunogenic infectious agent leading to the development of an intense humoral and cellular response. However, about 80% of patients progress to a chronic disease may develop cirrhosis or liver cancer. The HCV infection of cells rapidly triggers intracellular signaling events leading to cytokine production and changes in the pattern of expression of cell adhesion molecules, providing a barrier to replication and viral spread. The aim of this study was to characterize the expression of adhesion molecules and cytokine profile in peripheral…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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As células-tronco mesenquimais (CTM) apresentam potencial regenerativo não somente pela sua plasticidade, mas também pela sua capacidade de modular a resposta imunológica com efeitos imunossupressores e secreção de um largo espectro citocinas. O G-CSF é um potente fator de crescimento celular e tem a capacidade de mobilizar as CTs para o sangue periférico permitindo fácil obtenção destas células. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de diferentes doses de G-CSF na cinética de mobilização das CTHs e CTMs para o sangue periférico e no perfil de citocinas produzidas in vitro por essas células. Foram utilizados 6 grupos com 12 camundongos fêmeas Swiss, grupo controle e 5 grupos de doses 1, 2, 3, 4 e 5 de G-CSF. As CTHs e CTMs mobilizadas foram identificadas por meio de marcadores celulares específicos por citometria de fluxo. As amostras de CTHs e CTMs, de sangue periférico (SP) e medula óssea (MO) foram cultivadas in vitro e as citocinas foram dosadas nos sobrenadantes destas culturas pela técnica de Cytometric Bead Array (CBA). O pico de CTMs mobilizadas ocorreu com 4 doses na MO e com 5 doses de G-CSF no SP. As CTHs atingiram o pico com 2 doses de G-CSF na MO e com 4 doses no SP. Houve uma maior mobilização de CTMs do que CTHs, porém essa razão CTM/CTH ainda foi maior na MO. As culturas de MO das doses 3, 4 e 5 de G-CSF apresentaram células aderentes fibroblastóides, enquanto que foram observadas nas culturas de sangue de 2 e 3 doses de G-CSF. Houve uma maior produção das citocinas IL-6, TNF-α na fase inicial do cultivo das CTs, tanto MO quanto SP. O IFN-γ apresentou-se elevado na fase inicial, porém atingiu um pico no final do cultivo. As citocinas IL-2, IL-4, IL-17A e IL-10 tiveram um comportamento semelhante atingindo pico de concentração na fase tardia do cultivo. Na análise da frequência de altos produtores de citocinas para cada dose administrada de G-CSF in vivo, observou-se um comportamento semellhante das citocinas das culturas de MO e SP. A maioria das citocinas produzidas nas culturas de 5 doses tanto de MO quanto de SP apresentaram diferença significativa com relação a doses inferiores de G-CSF. Esse estudo sugeriu uma possível influência do G-CSF não somente na mobilização, como já é conhecido, mas também na produção de várias citocinas inflamatórias e anti-inflamatótrias, podendo possivelmente atuar no estímulo da diferenciação e modulação das CTMs.

The mesenchymal stem cells (MSCs) have regenerative potential by its plasticity and ability to modulate the immune response with immunossupressive effects and secretion of a broadspectrum cytokines. The G-CSF is a potent cell growth factor and has the ability to mobilize SCs into peripheral blood. The aim of this study was to evaluated the influence of different doses of G-CSF on the kinetics at HSC and MSCs mobilization into peripheral blood and the G-CSF effect on the cytokine profile produced by these cells in vitro. We used six groups of 12 female Swiss mice, control group and five doses groups 1, 2, 3, 4 and 5 of G-CSF. The HSCs and MSCs…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 070.717.068-08, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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Diversas alternativas terapêuticas vêm sendo empregadas na terapia de paciente com doenças cardíacas. Nos últimos anos, a terapia celular emergiu como uma nova estratégia para doenças cardíacas isquêmicas representando a mais promissora abordagem para tratamento destas doenças. A literatura sugere que o uso de fator de crescimento celular direciona as CTH para o miocárdio e facilita o seu implante e diferenciação no local, porém poucos estudos pré-clínicos e clínicos foram feitos para esta citocina. O objetivo proposto neste estudo foi caracterizar o papel do G-CSF no remodelamento cardíaco em modelo experimental de infarto induzido, em camundongos implantados ou não com CTH. Foi realizada a obtenção de CTH do sangue periférico, com prévia mobilização com G-CSF em camundongos isogênicos e as células foram implantadas em diferentes grupos experimentais. As citocinas TGF-β, IL-6 foram dosadas pela técnica de Enzume Linked Immunosorbant Assay (ELISA) e as citocinas IL-2, MCP-1, TNF-α, IL-10, IL-12, IFN-γ por Cytometric Bead Array (CBA). A análise histopatológica do tecido cardíaco foi realizado através da coloração de Hematoxilina-Eosina (HE) e Tricrômio de Malori. Na dosagem das citocinas observou-se que a concentração do TGF-β diminuiu no soro dos grupos experimentais (IAM, IAM-PBS, IAM-CTH-GCSF e IAM-GCSF) quando comparado ao grupo controle SHAM, (p=0,0470). A concentração da IL-6 apresentou aumento nos grupos IAM-PBS e IAM-CTH-G-CSF em relação aos grupos SHAM e IAM-G-CSF (p=0,6053). Observou que a IL-12 aumentou no grupo IAM-PBS, no tecido cardíaco em relação aos grupos SHAM, IAM-CTH-GCSF e IAM-GCSF e o IFN-γ diminuiu nos grupos IAM-CTH-G-CSF e IAM-GCSF. Dados da análise histopatológica não demonstraram nenhuma alteração no grupo SHAM. Por outro lado nos grupos infartados, sem nenhum tratamento (IAM) e IAM-PBS, foram identificadas, áreas de ectasia vascular, desorganização no sentido das fibras cardíacas, cicatrização transmural, discretas angiogênese e necrose, com pouco infiltrado inflamatório. Os grupos IAM-CTH e IAM-CTH-G-CSF apresentaram uma angiogênese moderada, áreas de cicatrização, discreta fibrose, infiltrado inflamatório com predomínio de macrófagos, plasmócitos e histiócitos, com discreta fibrose, ectasia vascular e desorganização da matriz extra-celular. No grupo IAM-G-CSF foi observado uma moderada angiogênese, com acentuado infiltrado inflamatório, característico de plasmócitos, áreas de calcificação e extensas áreas de fibrose. O G-CSF parece ter um importante papel no remodelamento cardíaco no modelo experimental estudado

Several therapeutic alternatives have been employed in the therapy of patients with heart disease. In recent years, cellular therapy has emerged as a new strategy for ischemic heart disease and represents the most promising approach to treating these diseases. The literature suggests that the use of cell growth factor directs the HSC to the myocardium and facilitates the implantation and differentiation of the cells at the implant site, but few preclinical and clinical data were…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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Introdução: Alterações imunológicas e morfológicas na musculatura esquelética são associadas com piora da capacidade funcional após infarto do miocárdio, somado às modificações centrais. Um melhor entendimento dos mecanismos centrais e periféricos envolvidos na insuficiência cardíaca é necessário para desenvolvimento de estratégias terapêuticas específicas, como a utilização de células tronco (CT) ou fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF) para diminuir ou prevenir atrofia muscular presente nesta síndrome, além das mudanças imunológicas deletérias. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração de células tronco ou/e fator estimulador de colônia de granulócitos nas modificações cardíacas e mudanças teciduais periféricas após a indução de infarto do miocárdio experimental. Metodologia: Em camundongos Balb/C foi induzida a ligadura da artéria coronária esquerda. Os animais do grupo Controle foram submetidos ao procedimento cirúrgico sem a ligadura da artéria. Uma semana após o procedimento, os animais foram submetidos a tratamento com PBS (IM+PBS), G-CSF (IM+G-CSF) ou G-CSF associado à CT hematopoética (IM+GCSF+ CT). Os animais foram observados por um período de quatro semanas, sendo então realizada análise ecocardiográfica, teste de esforço e coleta de tecidos (coração, pulmão, diafragma, fígado e músculo periférico) para análise de citocinas e mudanças estruturais. Resultados: Os resultados demonstram que todos os tratamentos propostos foram capazes de diminuir a área de infarto, de maneira mais evidente após a administração de G-CSF. Por outro lado, o G-CSF induziu a pior resposta no teste de esforço (menor distancia total percorrida e velocidade final alcançada). A análise das citocinas teciduais esqueléticas demonstrou aumento da frequência de altos produtores de citocinas pró-inflamatórias como TNF-α, IL-6, IL-12, IFN-γ, IL1-β e IL-4 em camundongos infartados, resultando em desequilíbrio no balanço anti/pró-inflamatório da resposta imune. Os tratamentos propostos apresentaram comprometimento negativo durante o uso de G-CSF isolado e resultados satisfatórios quando associado ao uso das CTs. Conclusão: Concluiu-se que a utilização de G-CSF sozinho parece ser responsável por ampliar o processo inflamatório em animais infartados conduzindo a uma diminuição da capacidade funcional do músculo esquelético, o qual reflete em desempenho inferior no teste de esforço. Em contraste, a utilização de G-CSF, em associação com CT hematopoiéticas parece ter um efeito benéfico no processo inflamatório modulando a resposta e refletindo em menor efeito deletério na síndrome da insuficiência cardíaca.

Background: Immunologic and skeletal muscle morphology changes are associated with functional capacity impairment after myocardial infarction (MI), added central modifications. A better understanding of the hemodynamic and peripheral mechanism involved in heart failure is necessary to develop specific therapeutic strategies, as stem cells (SC) or granulocyte…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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O processo de instalação da leishmaniose no hospedeiro é determinado por uma complexa associação entre fatores relacionados à virulência do parasito e a resposta imune do hospedeiro. Fatores como a espécie parasitária, sua virulência e tropismo, além da condição genética e imunológica do hospedeiro desencadeiam diferentes formas clínicas na Leishmaniose tegumentar Americana (LTA). Em decorrência disso, é de suma importância compreender os mecanismos da resposta imune contra o protozoário, os tipos celulares, as citocinas e o perfil da resposta envolvida nesse processo, uma vez que, esses fatores podem conferir certa resistência ao parasito e/ou impedir o desenvolvimento de nova infecção. Foram avaliados 33 pacientes com LTA, causada por Leishmania (Viannia) guyanensis, L. (V.) naiffi e L. (Leishmania) amazonensis. A espécie predominante encontrada foi L. (V.) guyanensis representando 73% dos casos. A análise comparativa do perfil celular e das citocinas avaliadas pelas técnicas da Citometria de fluxo e ELISA nos pacientes infectados foi significativamente maior do que nos indivíduos sem infecção (controle). Aparentemente, a infecção causada por L. (V.) guyanensis, induz maior concentração de citocinas pró-inflamatórias (IL-2 e INF-γ) do que infecção causada por L. (L.) amazonensis, o mesmo não foi observado na infecção por L. (V.) naiffi. Verificou-se variação na concentração das citocinas e no percentual celular nas amostras dos pacientes infectados antes do início do tratamento com antimonial pentavalente quando comparado ao grupo controle e ao término do tratamento. O percentual de linfócitos T CD4+ antes do tratamento foi maior do que linfócitos T CD8+. Menor porcentagem de células T regulatórias foi observada antes do tratamento. Esses resultados indicam que existe influência da resposte imune na modulação da infecção por Leishmania e que infecções causadas por L. (V.) guyanensis apresentam resposta mais exacerbada do que a infecção causada pelas outras espécies aqui estudadas.

The installation process of leishmaniasis in the host is determined by a complex association between factors related to virulence of the parasite and the host immune response. Factors such as parasite species, its virulence and tropism, besides the genetic condition and host immune trigger different clinical forms in American cutaneous leishmaniasis (ACL). As a result, it is of paramount importance to understand the mechanisms of the immune response against the parasite, cell types, cytokines and response profile involved in this process, since these factors may confer some resistance to the parasite and/or prevent the development reinfection. 33 patients with ACL caused by Leishmania (Viannia) guyanensis, L. (V.) naiffi and L. (Leishmania) amazonensis. The predominant species found was L. (V.) guyanensis representing 73% of cases. The comparative analysis of the cellular and cytokine profile evaluated by the techniques of flow cytometry and ELISA in infected patients was significantly higher than in individuals without infection…

Advisors/Committee Members: Franco, Antônia Maria Ramos, CPF:83100016734, cnpq.br%2F2708503544273002%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2708503544273002, Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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Introdução: A malária é causada pelo protozoário do gênero Plasmodium, com imunopatogênese diferenciada, relacionado aos fatores biológicos do parasita e do hospedeiro. De acordo com a OMS, ocorrem cerca de 300 a 500 milhões de novos casos e um milhão de mortes por ano. O processo patogênico é iniciado com a inoculação dos esporozoítos pelo vetor nos tecidos subcutâneos e a liberação das formas merozoítas na circulação. Vários mecanismos de defesa são associados e resultam no processo inflamatório e de resistência do indivíduo ao patógeno. Objetivos: O presente estudo tem como objetivo avaliar a resposta imune celular e determinar a frequência alélica do polimorfismo dos receptores do tipo Toll-4 em indivíduos com malária, da cidade de Coari-AM. Material e Métodos: Para este estudo foram coletadas amostras de 77 pacientes infectados com P. vivax e 58 amostras de indivíduos não infectados. A imunofenotipagem foi realizada pela técnica de citometria de fluxo e as dosagens de citocinas por ELISA e CBA. A determinação das frequências alélicas dos polimorfismos do TLR-4 foi obtida por PCR-RFLP. As análises estatísticas foram realizadas com o programa GraphPad Prism 5.0. Resultados: Os resultados revelaram que os pacientes apresentaram quadros de leucopenia e trombocitopenia, aumento significativo no percentual de monócitos, linfócitos T CD4+ e células T regulatórias, além do aumento nas citocinas IL-5, IL-6, IL-8, IL-10 e IFN-y nos pacientes com malária em comparação com os controles. Em relação aos polimorfismos Asp299Gly e Thr399Ile do TLR-4, foi observada frequência em heterozigose de 10% e 5% nos pacientes com malária, respectivamente. Conclusão: Em conclusão, nossos dados sugerem processo de exacerbação da resposta imune, com perfil próe anti-inflamatório atuante, sem influência direta dos polimorfismos na imunopatogênese da doença.

Introduction: Malaria is caused by protozoa, genus Plasmodium, with immunopathogenesis differentiated, related to biological factors to the parasite and the host. According to WHO, there are about 300 to 500 million new cases and one million deaths per year. The pathogenic process initiates by sporozoite inoculation by the vector in the subcutaneous tissues releases merozoites into the circulation forms. Several defense mechanisms are associated with the inflammatory process and the individual's resistance to the pathogen. Objectives: The aim of this study is to evaluate the cellular immune response and determine the frequency of allelic polymorphism of Toll-Like Receptor-4 in patients with malaria, the city of Coari-AM. Material and Methods: For this study, samples were collected from 77 patients infected with P. vivax and 58 samples from uninfected individuals. Immunophenotyping was performed by flow cytometry and levels of cytokines by ELISA and CBA. The determination of the allele frequencies of the polymorphisms of TLR-4 was obtained by PCR-RFLP. Statistical analyzes were performed with the GraphPad Prism 5.0. Results: The results revealed leukopenia and thrombocytopenia,…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Heckmann, Maria Izabel Ovellar, 34544402204, cnpq.br%2F3966973724148793%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/3966973724148793.

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Introdução: A hepatite C é um problema de saúde pública que afeta mais de 150 milhões de pessoas no mundo. É uma doença de prognóstico muito variável que pode evoluir para cura ou para o desenvolvimento de hepatite C crônica, cirrose hepática, carcinoma hepatocelular e morte. A identificação de regiões polimórficas que interferem nas concentrações de citocinas é algo que tem sido estudado para justificar a suscetibilidade de determinados indivíduos em desenvolver hepatite C crônica.Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência dos polimorfismos de IL28B (rs8103142) , -308TNFα, -174IL6 e -1082IL10 sobre o perfil de citocinas TH1, TH2 e TH17, em amostras de pacientes com Hepatite C crônica antes do início do tratamento e candidatos a doadores de sangue. Métodos: As técnicas empregadas neste estudo foram: Citometria de Fluxo para a dosagem de citocinas, PCR-RFLP e qPCR para determinação dos polimorfismos. Resultados: No total de 116 indivíduos foram estudados, sendo 69 HCV+ e 47 controles. Foi observado maior prevalência em relação ao sexo masculino, em ambos os grupos, com média de idade acima de 40 anos para os HCV+. O genótipo de maior frequência para IL28B foi o CT, seguido do CC e TT, em ambos os grupos. Para o TNFα, o genótipo GG foi o de maior prevalência, tanto nos pacientes como nos controles. Foi observada diferença estatística significativa para o genótipo GA entre pacientes HCV+ e controles. Para -174IL6, o genótipo GG foi o mais prevalente nos dois grupos estudados, seguido de GC. O genótipo CC não foi encontrado no grupo controle. O genótipo AA foi o mais prevalente para a -1082IL10, em pacientes HCV+ e controles, seguido de AG e GG. As citocinas IL-2, IL-6, IFN-y, IL-17A, apresentaram-se aumentadas nos pacientes HCV+ quando comparado aos controles. A concentração de IL-10 foi maior em indivíduos do grupo controle em relação aos pacientes HCV+. Pacientes com genótipo GA para -308TNFα apresentaram concentrações mais elevadas de TNF-α em comparação com indivíduos controles. Também foi observado que pacientes HCV+ com os genótipos GG e GC para IL-6 apresentaram uma maior concentração de IL-6 em relação aos controles, Não foram observadas associações significativas entre as frequências genotípicas de IL10 e as concentrações de citocinas em pacientes HCV+. Conclusão: Os resultados sugerem uma possível influência dos polimorfismos de TNF-α e IL-6 sobre a produção e liberação de citocinas.

Introduction: Hepatitis C is a public health problem that affects over 150 million people worldwide. It is a very variable disease prognosis that may progress to healing or the development of chronic hepatitis C, liver cirrhosis, hepatocellular carcinoma and death. Identification of polymorphic regions that influence the concentrations of cytokines is something that has been studied to justify the susceptibility of certain individuals in developing hepatitis C crônica. Objective: The aim of this study was to evaluate the influence of polymorphisms: IL28B (rs8103142), -308TNFα, -174IL6 and -1082IL10 on the…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Sadahiro, Aya, 12841245845, cnpq.br%2F8658798733544812%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/8658798733544812.

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Introdução: A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) apresenta-se na forma tanto aguda quanto crônica e na maioria das vezes é assintomática, apresenta diversos fatores de risco que podem variar entre os grupos populacionais e a definição de infecção ainda é um desafio, refletindo em bancos de sangue onde pode ser detectada pelos marcadores anticorpo contra o HCV (anti-HCV) e NAT HCV (detecção de ácidos nucléicos do HCV). Objetivo: Traçar o perfil epidemiológico e as características moleculares da infecção pelo HCV em candidatos a doação de sangue do Hemocentro de Roraima. Métodos: Candidatos anti-HCV positivo ou indeterminado foram selecionados mediante o comparecimento de coleta de 2ª amostra como de rotina. Foi coletado resultados da triagem da doação de sangue e 2ª amostra. E coletado nova (3ª amostra) amostra para quantificação de RNA HCV pela plataforma Abbott RealTimeTM HCV Assay e aplicado questionário epidemiológico. Resultados: O grupo de candidatos a doação de sangue foi constituído por jovens entre 18-29 anos (63,6%), predomínio de do sexo masculino (72,7%), solteiros (50,0%), todos procedentes da capital Boa Vista, e cerca de 54,5% não eram doadores de primeira vez, com evidências de exposição a fatores de risco (procedimentos cirúrgicos, compartilhamento de objetos de higiene, entre outros); 21 candidatos a doação de sangue obtiveram resultados positivo ou indeterminado para anti-HCV e 1 resultado com NAT HCV detectável na triagem da doação. No teste de 2ª amostra para anti-HCV, 12 foram reagentes, 9 não reagentes e 1 indeterminado e NAT de 2ª amostra indetectável. Em nenhuma amostra foi possível detectar RNA HCV. Conclusão: Sugere-se que estes doadores se encontram com carga viral baixa sendo impossível a detecção ou clearence plasmático ou resultados anti-HCV provenientes da triagem da doação de sangue podem ser falso-positivos

Introduction: Hepatitis C infection (HCV) is presented as both acute and chronic and most often is asymptomatic, it presents several risk factors that may vary across population groups and the definition of infection is still a challenge reflecting in blood banks which can be detected by the marker antibody against HCV (anti-HCV) and HCV NAT (detection of HCV nucleic acids). Objective: To trace the epidemiological profile and the molecular characteristics of HCV infection in candidates for blood donation the Blood Center of Roraima. Methods: positive or indeterminate anti-HCV candidates were selected by the 2nd sample collection attendance as routine. It was collected results of the screening of blood donation and 2nd sample. And new sample collected for quantification of HCV RNA by Abbott RealTimeTM HCV Assay platform and applied epidemiological questionnaire. Results: Candidates for blood donation had the characteristics, young people aged 18-29 years (63.6%) of males (72.7%), single (50.0%), from the capital Boa Vista, and 54.5% were repeat donors, with evidence of exposure to risk factors (surgical procedures, hygiene objects sharing, etc.); 21 candidates to blood…

Advisors/Committee Members: Marie, Adriana Malheiro Alle, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Silva, Kátia Luz Torres, Vallinoto, Antonio Carlos.

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A infecção causada pelo vírus da hepatite B (VHB) tem uma distribuição mundial e representa um importante problema de saúde pública. A hepatite B ainda configura um risco na terapia transfusional tendo em vista o potencial de transmissão parenteral. Na triagem sorológica para o VHB são utilizados marcadores que detectam o antígeno de superfície do vírus (HBsAg) e o anticorpo contra o antígeno do core (anti-HBc). A hepatite B oculta (caracterizada pela presença de DNA do VHB, em amostras HBsAg negativas), tem sido um desafio na triagem sorológica de doadores de sangue do interior do Estado do Amazonas onde existem mais de 22% de doações reativas para o marcador anti-HBc de forma isolada. Além disso, estudos conclusivos sobre a frequência da hepatite B oculta são escassos no Estado do Amazonas. Sendo a região de alta prevalência da infecção do VHB, faz-se necessária a investigação da frequência da hepatite B oculta. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença da hepatite B oculta em amostras anti-HBc positivas com ou sem a presença do marcador anti-HBs na triagem sorológica de doadores de sangue oriundo das Unidades de Coletas Transfusionais (UCT’s) nas regionais de saúde do Alto Solimões e Amazonas, no período de junho/2011 a junho/2012. Foram utilizados métodos sorológicos qualitativos e quantitativos dos marcadores para a infecção e moleculares para detecção, quantificação da carga viral e genotipagem do VHB. A prevalência do anti-HBc total reativo no interior do Estado do Amazonas entre os doadores de sangue foi de 22, 19 %. Foram analisadas 112 amostras anti-HBc reativas e HBsAg negativas, destas, 04 foram positivas para o DNA-VHB. A maior frequência dos doadores de sangue com sorologia reativa para hepatite B oriundos das regionais Alto Solimões e Amazonas apresentam o perfil sorológico anti-HBc e anti-HBs reativos e não são doadores de primeira vez. A prevalência de heptatite B oculta encontrada em doadores oriundos das regionais de saúde Alto Solimões e Amazonas foi de 3,57%. A presença do marcador anti-HBs em títulos elevados (acima de 100 mUI/ml) não foi associada à ausência da hepatite B oculta em doadores de sangue das regionais de saúde Alto Solimões e Amazonas. Não houve associação entre a carga viral encontrada e o perfil sorológico para hepatite B dos doadores de sangue DNA VHB positivos. Não foi possível descrever os genótipos das amostras positivas para o DNA VHB. O risco da IOB pode ser comprovado nos Países onde a técnica de detecção de ácido nucleico (NAT) foi implantada e também através dos resultados deste estudo. A ocorrência de infecção oculta pelo vírus da hepatite B leva ao questionamento do algorítimo atualmente estabelecido para triagem de doadores de sangue na região Amazônica. Seria possível também estabelecer novas estratégias para contemplar segurança transfusional, escassez de sangue no interior do estado e grande descarte de hemocomponentes.

The infection caused by the hepatitis B virus (HBV) has a worldwide distribution…

Advisors/Committee Members: Silva, Kátia Luz Torres, 41317530225, cnpq.br%2F5785470863950566%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/5785470863950566, Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Sadahiro, Aya, Cavalheiro, Norma de Paula.

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A infec??o causada pelo v?rus da hepatite B (VHB) tem uma distribui??o mundial e representa um importante problema de sa?de p?blica. A hepatite B ainda configura um risco na terapia transfusional tendo em vista o potencial de transmiss?o parenteral. Na triagem sorol?gica para o VHB s?o utilizados marcadores que detectam o ant?geno de superf?cie do v?rus (HBsAg) e o anticorpo contra o ant?geno do core (anti-HBc). A hepatite B oculta (caracterizada pela presen?a de DNA do VHB, em amostras HBsAg negativas), tem sido um desafio na triagem sorol?gica de doadores de sangue do interior do Estado do Amazonas onde existem mais de 22% de doa??es reativas para o marcador anti-HBc de forma isolada. Al?m disso, estudos conclusivos sobre a frequ?ncia da hepatite B oculta s?o escassos no Estado do Amazonas. Sendo a regi?o de alta preval?ncia da infec??o do VHB, faz-se necess?ria a investiga??o da frequ?ncia da hepatite B oculta. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presen?a da hepatite B oculta em amostras anti-HBc positivas com ou sem a presen?a do marcador anti-HBs na triagem sorol?gica de doadores de sangue oriundo das Unidades de Coletas Transfusionais (UCT?s) nas regionais de sa?de do Alto Solim?es e Amazonas, no per?odo de junho/2011 a junho/2012. Foram utilizados m?todos sorol?gicos qualitativos e quantitativos dos marcadores para a infec??o e moleculares para detec??o, quantifica??o da carga viral e genotipagem do VHB. A preval?ncia do anti-HBc total reativo no interior do Estado do Amazonas entre os doadores de sangue foi de 22, 19 %. Foram analisadas 112 amostras anti-HBc reativas e HBsAg negativas, destas, 04 foram positivas para o DNA-VHB. A maior frequ?ncia dos doadores de sangue com sorologia reativa para hepatite B oriundos das regionais Alto Solim?es e Amazonas apresentam o perfil sorol?gico anti-HBc e anti-HBs reativos e n?o s?o doadores de primeira vez. A preval?ncia de heptatite B oculta encontrada em doadores oriundos das regionais de sa?de Alto Solim?es e Amazonas foi de 3,57%. A presen?a do marcador anti-HBs em t?tulos elevados (acima de 100 mUI/ml) n?o foi associada ? aus?ncia da hepatite B oculta em doadores de sangue das regionais de sa?de Alto Solim?es e Amazonas. N?o houve associa??o entre a carga viral encontrada e o perfil sorol?gico para hepatite B dos doadores de sangue DNA VHB positivos. N?o foi poss?vel descrever os gen?tipos das amostras positivas para o DNA VHB. O risco da IOB pode ser comprovado nos Pa?ses onde a t?cnica de detec??o de ?cido nucleico (NAT) foi implantada e tamb?m atrav?s dos resultados deste estudo. A ocorr?ncia de infec??o oculta pelo v?rus da hepatite B leva ao questionamento do algor?timo atualmente estabelecido para triagem de doadores de sangue na regi?o Amaz?nica. Seria poss?vel tamb?m estabelecer novas estrat?gias para contemplar seguran?a transfusional, escassez de sangue no interior do estado e grande descarte de hemocomponentes.

The infection caused by the hepatitis B virus (HBV) has a worldwide distribution…

Advisors/Committee Members: Silva, Katia Luz Torres, 41317530225, cnpq.br%2F5785470863950566%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/5785470863950566, Malheiro, Adriana, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Sadahiro, Aya, Cavalheiro, Norma de Paula.

▼ Introdução: A hepatite C é uma doença que atinge milhões de pessoas em todo o mundo. A estimativa global da infecção atinge cerca de 3% da população mundial. Com a introdução dos Antivirais de Ação Direta (DAAs) surge uma nova era livre de interferon. Os DAAs apresentam excelente eficácia, podendo curar mais de >90% das pessoas com infecção por hepatite C. Contudo, a compreensão das interações entre o HCV e o hospedeiro nos intriga a buscar informações quanto à restauração imunológica pós-tratamento livre de interferon. Objetivo: Caracterizar a resposta imune celular, o perfil de citocinas e quimiocinas em pacientes com hepatite C crônica, tratados com DAAs. Material e Método: Foram coletadas amostras de sangue periférico de pacientes diagnosticados com Hepatite C crônica (HCV+), antes e após o tratamento e de candidatos à doação de sangue (CN). Foi realizada imunofenotipagem das subpopulações de células a resposta imune inata e adaptativa e quantificação das concentrações séricas das citocinas e quimiocinas plasmáticas por Citometria de Fluxo. Resultados: Foram coletadas 82 amostras de pacientes HCV+ atendidos pela Fundação FMT-HVD e 50 Candidatos a doadores de sangue oriundo da Fundação HEMOAM. A média de idade foi maior no grupo de pacientes em relação ao grupo controle (p<0.0001). Foi observado predomínio do sexo masculino no grupo controle e feminino nos pacientes HCV+. O genótipo do HCV predominante na população estudada foi o genótipo 1, seguido dos genótipos 3, 2 e 4 e apenas um paciente apresentou coinfecção pelos genótipos 1/2 do HCV. Observou-se que a maioria dos pacientes HCV+ apresentou fibrose <F2. Estes pacientes apresentaram níveis séricos elevados das transaminases ALT e AST. Enquanto que os níveis de plaquetas (p<0.0001) e leucócitos totais (p<0.0001) apresentaram-se diminuídos quando comparados ao grupo controle. Os pacientes tratados com DAAs apresentaram RVS >90% independentemente do genótipo. Os pacientes com hepatite C apresentaram os monócitos ativados circulantes diminuídos após o tratamento quando comparados com o grupo controle. Enquanto as células dendríticas plasmocitóides e mieloides, células NKT e TCD4+ apresentaram-se diminuídas antes do tratamento, estas populações encontram-se aumentadas no grupo de pacientes naives pós-tratamento quando comparados com controle e pacientes experimentados. Já os Linfócitos TCD8+ e Linfócitos B1 apresentaram-se reduzidos após o tratamento. As células NK, Linfócitos T regulatórios e Linfócitos B parecem não sofrer alterações importantes na população estudada. Além disso, pode-se observar que as citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-10, IL-4 e IL-17A permaneceram aumentadas nos pacientes experimentados mesmo após o tratamento. As quimiocinas IL-8, MIG e IP-10 apresentaram-se aumentadas antes e após o tratamento tanto nos pacientes naives quanto os experimentados, quando comparados ao grupo controle. Conclusão: Ao final deste trabalho podemos concluir que o tratamento livre de interferon é bem tolerado e apresenta elevada taxa de resposta virológica… Advisors/Committee Members: Marie, Adriana Malheiro Alle, 07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Victoria, Marilu Barbieri, cnpq.br%2F0379575219138679%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/0379575219138679, Levi, Jose Eduardo, cnpq.br%2F6216061943429311%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/6216061943429311, Oliveira, Cintia Mara Costa de, cnpq.br%2F8188087361251251%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/8188087361251251, br%22%29&pagesize-30">[email protected]br.

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A medula óssea é o principal local descrito como reserva de subpopulações de células-tronco adultas, incluindo as células-tronco hematopoiéticas (CTH) e células-tronco mesenquimais (CTM). Diferentes fatores estimulam potencialmente a mobilização dessas células para o sangue periférico. O G-CSF e o AMD3100 têm demonstrado agir na interrupção do eixo de retenção CXCR4/SDF-1α estimulando a mobilização de CTH e CTM para a corrente sanguínea. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do G-CSF e do AMD3100 na mobilização de CTH e CTM para o sangue periférico e no perfil de citocinas produzidas in vitro por essas células. Foram utilizados 5 grupos com 09 camundongos machos, BALB-c. As CTH e CTM mobilizadas foram identificadas por meio de marcadores celulares específicos por citometria de fluxo. As amostras de CTH e CTM, de sangue periférico (SP) e medula óssea (MO) foram cultivadas in vitro e as citocinas foram dosadas nos sobrenadantes destas culturas pela técnica de citometria de fluxo CBA (Cytometric Bead Array System). As análises estatísticas foram realizadas com o programa GraphPad Prism 5.0. Os resultados demonstraram uma mobilização estatisticamente significativa de CTH nos camundongos tratados com PBS e que receberam 01 dose de AMD3100, e no grupo dos animais que foram tratados com G-CSF diariamente, por 04 dias consecutivos. Em relação às CTM, foi observada uma mobilização estatisticamente significativa apenas no grupo dos animais tratados com G-CSF. As culturas de medula óssea que receberam ou não estímulo (G-CSF) in vitro apresentaram células aderentes, com morfologia fibroblastóides. Nas culturas de sangue periférico, observou-se que as células apresentaram essa mesma morfologia quando foram estimuladas com G-CSF. No perfil de citocinas, houve uma maior produção de IL-6, TNF-α, IFN-γ e IL-10 na fase inicial do cultivo das CT que foram estimuladas com G-CSF, tanto em culturas da MO quanto do SP. As citocinas IL-2 e IL-4 encontraram-se mais elevadas em alguns grupos nas fases tardias do cultivo. IL-17A apresentou concentrações distintas, mantendo sua produção estável nos diferentes grupos e dias de cultivo. Dessa maneira, pode-se sugerir que, o AMD3100 induz uma rápida mobilização de células CD34+ para a circulação e o G-CSF participa direta ou indiretamente no processo de mobilização de subpopulações de CT da medula óssea para o sangue periférico, na diferenciação de CTM, e no processo de modulação e produção de citocinas.

The bone marrow is the mean site described as reserve subpopulations of adult stem cells, including hematopoietic stem cells (HSC) and mesenchymal stem cells (MSC). Different factors potentially stimulate mobilization of these stem cells into peripheral blood. The G-CSF and AMD3100 have been shown to act by disrupting CXCR4/SDF-1α retention axis, stimulating mobilization of HSC and MSC to the bloodstream. The aim of this study was to evaluate the influence of G-CSF and AMD3100 in HCS and MSC mobilization to the peripheral blood and in the cytokine profile produced by these cells in…

Advisors/Committee Members: Marie, Adriana Malheiro Alle, 070.717.068-08, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Leon, Elisa Brosina de, 000.973.970-08, cnpq.br%2F0202938688575304%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/0202938688575304, Leon, Elisa Brosina de, Passos, Leny Nascimento da Motta, Anibal, Fernanda de Freitas.

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A anaplasmose bovina é uma enfermidade causada por uma rickettsia denominada Anaplasma marginale (A. marginale) transmitida por carrapatos e a doença se caracteriza por anemias, febre, perda de peso, diminuição da produção de leite, aborto e morte nos animais. A doença causa perdas econômicas na produção de gado e por isso estratégias para o desenvolvimento de vacinas é imprescindível para minimizar seu impacto. Neste estudo uma proteína recombinante de A.marginale foi produzida a partir de uma estratégia inovadora de utilizar DNA sintetico para codificar os epítopos dos principais antígenos de A.marginale. Após a clonagem em pGEM e subclonagem em pHT43, a proteína quimérica foi expressa em Escherichia coli contendo epítopos dos antigenos OMP7/9 (outer membrane protein 7/9) e MSP1a (major surface protein 1a). A antigenicidade foi comprovada pela reatividade da proteina recombinante com soro de bezerro com anaplasmose, e a imunogenicidade e proteção vacinal foi comprovada em camundongos Balb/c. Com uma fórmula composta com adjuvante oleoso (MSP1a/OMP7/9+ISA), animais receberam três (3) doses vacinais e desafiados com 3x105cel/mL de A. marginale UFMG2. Os animais imunizados não apresentaram variação de peso corporal nem sinais clínicos da doença, porém houve redução significativa da carga bacterêmica nos vacinados (p<0,0008) comparados com grupos placebos. Além disso, não houve alterações hematológicas como aumento no número de monócitos (p<0,005), neutrófilos (p<0,05) e leucocitose (p<0,05), verificadas nos controles infectados. As avaliações deste trabalho demonstraram a importância da proteína recombinante MSP1a/OMP7/9 na melhoria da resposta imunológica de Balb/c e sua potencial aplicabilidade na produção de vacinas recombinantes.

The bovine anaplasmosis is a disease characterized by severe anemia, fever, weight loss, decreased milk production, abortion and death in the animals. It is caused by A. marginale and transmitted by ticks, leading severe economic losses in cattle production and hence strategies for developing vaccines are essential to minimize its impact. In this study, a chimeric protein was produced by synthetic DNA, carrying sequences of predicted epitopes from OMP7, OMP9 and MSP1a, and used as vaccine emulsified with ISA adjuvant. After three doses, Balb/c mice were challenged with 3x105cel/mL A. marginale UFMG2 to assess proctetion of compound MSP1a/OMP7/9+ISA. There were not body weight alterations neither clinical signs were observed in immunized mice. Bacteremia count showed drastic reduction and discrete alteration on erythrocyte morphology (spherocytes) in vaccined mice 56th day after challenge. No alteration was observed in hematologic data in relation to infected control mice. The evaluation obtained in this study showed the importance of the MSP1a /OMP7/9 protein in the immune response of the Balb/c and your applicability potential in the recombinant vaccine production.

Não informada

Advisors/Committee Members: Nogueira, Paulo Afonso, 11933446897, cnpq.br%2F8053450182210137%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/8053450182210137, Mariúba, Luis André Morais, 75852055204, cnpq.br%2F4784959431673419%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/4784959431673419, Nogueira, Paulo Afonso, 11933446897, cnpq.br%2F8053450182210137%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/8053450182210137, Malheiro, Adriana, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, Costa de Oliveira, Cintia Mara, cnpq.br%2F8188087361251251%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/8188087361251251, Silva, Maria Luana Cristiny Rodrigues, cnpq.br%2F3710737267112719%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/3710737267112719, Ramasawmy, Rajendranath, cnpq.br%2F3420417277915974%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/3420417277915974.

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A cobra coral aquática, Micrurus surinamensis, apresenta ampla distribuição na Amazônia. Seu veneno é neurotóxico para mamíferos e principalmente para peixes, alimento preferencial no seu habitat. Estudos básicos sobre as propriedades biológicas e potencial biotecnológico das toxinas do veneno dessa espécie são necessários, com o intuito de obter subsídios para a aplicação clínica, na soroterapia e/ou desenvolvimento de novas drogas. Neste trabalho, foram estudadas a toxinas do veneno de M. surinamensis por técnicas proteômicas, onde foram observados os efeitos neurotóxicos e as atividades biológicas do veneno, e avaliada a potência do soro antielapídico contra essas atividades. Utilizando-se eletroforese uni e bidimensional foram detectadas proteínas com massas moleculares de 7-70 kDa, 42 spots com massas moleculares de 12-70 kDa e pI 4-7, 38 spots com massas moleculares de 12-17 kDa e pI 7-11. O veneno apresentou, in vitro, baixa atividade PLA2, que foi 100% inibida pelo soro antielapídico produzido no Instituto Butantan. Utilizando a técnica de zimograma não foi observada atividade proteolítica. Segundo o método de recalcificação in vitro, o plasma humano mostrou-se incoagulável com 80 μg do veneno, sugerindo a presença de toxinas inibidoras da cascata de coagulação. No entanto, testes in vivo (em camundongos) não revelaram a presença de hemorragia sistêmica ou sangue incoagulável. A DL50 do veneno avaliada em camundongos, por via intravenosa, foi de 700 μg / kg. Ao inocular o veneno na região intracerebral, os animais manifestaram, segundos após a inoculação, sintomas como dificuldade respiratória, ptose palpebral uni e bilateral, pulos enérgicos, seguidos por períodos de imobilidade, espasmos nas patas posteriores e coceira compulsiva. Alguns apresentaram, com 4 μg do veneno, convulsão e morte instantânea. Estudos de interação competitiva toxinaanticorpo, realizados por western blotting, evidenciaram maior quantidade de anticorpos para as neurotoxinas de 14 kDa, porém, menor quantidade de anticorpos para as neurotoxinas < 10 kDa. A potência do soro antielapídico, do Instituto Butantan, para o veneno de M. surinamensis foi de 0,35 mg/mL, inferior ao do veneno de M. frontalis (1,5 mg/mL). Contudo, a maioria dos constituintes protéicos do veneno de M. surinamensis são toxinas com baixa massa molecular, principalmente de aproximadamente 7 kDa; o veneno é altamente neurotóxico para mamíferos (camundongos), afetando tanto o sistema nervoso periférico como o central; o soro antielapídico nacional mostrou, in vivo, baixa eficácia quanto à neutralização dos sintomas neurotóxicos causados pelo veneno. Devido à baixa potência do antiveneno, sugerem-se maiores estudos moleculares e clínicos para a inclusão ou não do veneno de M. surinamensis na produção dos soros antielapídicos.

Micrurus surinamensis, the aquatic coral snake species, has distribution in Amazonian rain forest. Your venom is neurotoxic to mammals and mainly fishes, principal natural feed. Studies about biological properties and biotechnological…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é caracterizado por uma ampla diversidade genética. Dois tipos de HIV são reconhecidos atualmente: HIV-1 e HIV-2. O HIV-1, responsável pela maioria dos casos de aids no mundo, é dividido em três grupos denominados M (Major), O (Outlier) e N (Non-M/Non-O). Para o grupo M, nove subtipos foram identificados até o momento: A-D, F-H, J, K. Além desses subtipos, o HIV-1 também tem sido classificado em formas recombinantes circulantes (CRFs) e formas recombinantes únicas (URFs). No Brasil, um complexo padrão de distribuição desses subtipos tem sido descrito em suas diferentes regiões geográficas. Buscando esclarecer a distribuição dos subtipos de HIV-1 predominantes na cidade de Manaus, este estudo teve como objetivo analisar amostras de sangue de indivíduos candidatos a doadores de sangue que apresentaram resultados positivo ou indeterminado para HIV-1, na triagem sistemática para doação de sangue da Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (HEMOAM). Na ocasião da coleta, os doadores registraram a sua autorização através da assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido e responderam a um questionário utilizado para investigação de dados epidemiológicos. O DNA proviral extraído das amostras com resultados indeterminado/positivo no Wersten Blot foi submetido a uma Reação em Cadeia da Polimerase em duas etapas (Nested PCR) para a confirmação da infecção pelo HIV-1. Os produtos amplificados (regiões gag, pol e env) das 31 amostras reativas por PCR foram seqüenciados e analisados por métodos filogenéticos usando o programa Phylip. Todas as amostras indeterminadas para o teste confirmatório apresentaram padrão de amplificação negativo. Das amostras reativas para HIV-I no teste confirmatório e PCR, observou-se predominância do sexo masculino (77,4%) e de doadores de primeira vez (67,7%). Entre os doadores de repetição, 60 % apresentaram soroconversão em até 20 meses. Do total de amostras, identificou-se a predominância do subtipo B (87,1%), seguida do subtipo C (6,5%), F (3,2%) e recombinante BF (3,2%). As seqüências de aminoácidos de 19 isolados foram analisadas para a caracterização da variabilidade genética da região da alça V3. Dentre os isolados do subtipo B, o tetrapeptídeo mais prevalente foi o GPGR (68,4%), seguido pelo variante brasileiro B GWGR (15,8%). A ocorrência do Subtipo C na região Norte, ainda não foi relatada na literatura. As análises de similaridade dos isolados do subtipo C nesse estudo demonstraram maior semelhança destes com outros isolados brasileiros, em relação a isolados de outras partes do mundo. Nossos resultados contribuem para uma melhor compreensão das características dos isolados do HIV-1 circulantes no Brasil, informações que poderão ser utilizados em benefício do diagnóstico, tratamento, controle da doença e preparação de vacinas.

The Human Immunodeficiency Virus (HIV) is characterized by a wide genetic diversity. Two types of HIV are recognized at present: HIV-1 and HIV-2. The HIV-1, responsible for most of the cases of AIDS in…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

▼ A epidemia mundial da AIDS teve início em 1981, nos Estados Unidos, e pós a introdução dos anti-retrovirais os pacientes infectados com HIV/AIDS passaram a ter uma sobrevida maior surgindo um novo desafio, a co-infecção com o vírus da hepatite C (HCV), a qual já é a principal causa de morte nestes indivíduos. O HCV foi descoberto em 1989 e sua principal via de transmissão, a parenteral, é comum ao HIV, com isso aumentando a prevalência da co-infecção HIV/HCV e estando atualmente, mais de 30% dos infectados pelo HIV também infectados pelo HCV. Existem poucos estudos sobre co-infecção HIV/HCV no Amazonas e o presente estudo oferece uma oportunidade de avaliar a associação destes vírus. O trabalho é do tipo descritivo de uma série de casos e tem o objetivo de estudar as implicações clínicas e imunobiológicas da co-infecção HIV/HCV em uma população de pacientes atendidos na Fundação de Medicina Tropical do Amazonas (FMTAM), no período de 2000 a 2007. Este estudo encontrou uma freqüência de pacientes co-infectados HIV/HCV de 4,4% (n=70), com uma média de crescimento anual de 3,6% dos casos. Destes 72,9% eram do sexo masculino, 47,1% tinham entre 30|- 40 anos. Destes 80% possuíam o primeiro grau completo, 50% recebiam até um salário mínimo e 55,7% eram naturais da cidade de Manaus sendo que 94,3% também procedentes da capital. Dos pacientes estudados, 68,6% eram heterossexuais e em 84,3% dos pacientes encontrou-se a promiscuidade sexual como fator de risco. No período do estudo 34,3% dos pacientes foram à óbito. Dos indivíduos co-infectados, apenas 25,7% (n=18/70) comparecerem ao ambulatório de hepatites virais da FMTAM para coleta de material biológico. Nestes pacientes (n=18) a média da AST foi 61,5±61 U/L, da ALT 62,2±37 U/L e a relação AST/ALT foi 0,88±0,33 U/L. Quanto aos lipídeos 38,9% apresentaram colesterol total >200mg/dL, 83,3% apresentaram HDL ≤ 40 mg/dL, 77,8% tinham triglicerídeos >150 mg/dL e 33,3% tinham glicemia >110 mg/dL. Dos pacientes incluídos 83,3% usavam esquema HAART sendo que 100% destes faziam uso de inibidor da protease no esquema. Ao aplicar o escore FIB-4 para predizer fibrose verificou-se que 77,8% ficou com ponto de corte <1,45 e 22,2% com ponto de corte >3,25. Quanto às células T CD4+ 72,2% tinham <500 cls/mm3 com uma mediana de 271 cls/mm3, quanto ao T CD8+ 88,9% tinham ≥215 cls/mm3 com uma mediana de 794,5 cls/mm3. A razão CD4+ /CD8+ foi 0,32 cls/mm3. Quanto à carga viral do HIV e do HCV verificou-se uma mediana de 16.911 cópias /mL e de 543.209 cópias/mL, respectivamente. Nesta população 88,9% apresentaram o genótipo 1 do HCV e 94,4% apresentaram o sub-tipo B do HIV. Destes, 83,3% apresentavam Child-Pugh A sendo que 61,1% apresentavam fígado normal na ultra-sonografia. Ao dosar as citocinas IL4, IL6, IL8, IL10, IL12 e IFN-γ nestes pacientes verificou-se que apenas a IL6 (p= <0,001) apresentou significância estatística principalmente quando correlacionada ao logaritmo da carga viral do HCV (0,031). Os resultados encontrados neste estudo, apesar da baixa prevalência, apresentam crescimento… Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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A hepatite por vírus C (HCV) representa um grande problema de saúde pública devido à alta prevalência da infecção na população, que varia de 0,3 a 14,5%. A hepatite C é considerada uma doença transmitida principalmente pelo sangue e seus derivados, sendo o principal agente etiológico das hepatites pós transfusionais do mundo. A doença crônica, com poucas manifestações clínicas, ocorre em 80% dos indivíduos. Consequentemente, a hepatite C é frequentemente diagnosticada quando o indivíduo se submete aos testes de triagem sorológica em bancos de sangue. O diagnóstico laboratorial específico da hepatite C é realizado pela pesquisa de anticorpos anti-HCV, no teste ELISA e no Immunoblot. O perfil da resposta imunológica desenvolvida pelos indivíduos infectados pelo HCV, envolve a resposta de células T helper 1, mediada pela ativação de linfócitos TCD4+, tão bem como os linfócitos TCD8+, produção de IL-12 e IFN-, parece ser uma resposta extremamente importante para clearence viral. O objetivo este estudo foi avaliar a resposta imunológica humoral e celular de doadores de sangue que apresentaram sorologia reativa para hepatite C. No período de setembro de 2005 a novembro de 2006 foram convidados 100 doadores de sangue que apresentaram sorologia positiva para hepatite C e 100 doadores saudáveis a participar voluntariamente do estudo. Nossos resultados demonstraram que pelo teste complementar Immunoblot RIBA, 46% apresentaram resultados indeterminados, 36% foram reativos e 18% negativas. Das amostras negativas 61,11% (n=11) tiveram reação fracamente positiva, das indeterminadas 76% (n=35) tiveram razão DO/cutoff inferior a 2 e 50% (n=18) das reativas tiveram essa razão superior ou igual a 3. Não observamos diferenças estatísticas significante entre os valores encontrados de ALT, sendo que os mesmos permaneceram dentro dos valores de normalidade. Entre as populações de linfócitos ativados, a população de LTCD3+/CD4+ apresentou diferença estatística significante, na qual o grupo com diagnóstico confirmado por immunoblot (HCV+/BLOT R) apresentou menor número de células em relação aos outros grupos (Soronegativos, HCV+/BLOT NR, HCV+/BLOT IND). Avaliando as sub-populações de leucócitos ativados observamos diferenças estatísticas significantes entre as populações de neutrófilos CD69+ e monócitos CD69+, mas não encontramos diferença significante entre as populações de linfócitos CD69+ e eosinófilos CD69+. Desta forma concluímos que a infecção pelo HCV induz a alterações celulares que podem estar evoluindo para clearence viral ou para cronificação da infecção. No entanto para definirmos tal perfil, novos estudos serão necessários.

Hepatitis C virus represents a serious problem on public health, because or the high prevalence in the population, estimate from 0.3% to 14.5%. Hepatitis C is usually transmitted by blood and derivations, and the main etiologic agent of transfusion in the world. The chronic disease, with few clinical manifestations, occurs on 80% of the patients. Furthermore, the hepatitis C, is usually…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

▼ A hepatite C é um grande problema de saúde pública atual com aproximadamente 180 milhões de pessoas infectadas no mundo todo. O HCV é um vírus RNA de fita simples, pertencente à família flaviviridae O HCV é um agente infeccioso altamente imunogênico levando ao desenvolvimento de uma intensa resposta imune humoral e celular. No entanto cerca de 80% dos pacientes evoluem para uma doença crônica, podendo desenvolver cirrose hepática ou câncer. Apenas 15-20% dos pacientes infectados apresentam ¨clearance¨ viral e evoluem para a cura. Os mecanismos pelo qual o HCV evade-se do sistema imunológico ainda não são totalmente conhecidos, mas a polarização da imunidade através da produção de citocinas parece ser uma das principais causas. Pacientes infectados pelo HCV podem apresentar várias manifestações extra-hepáticas como fadiga, depressão e distúrbios do sono. As manifestações neurológicas podem envolver o sistema nervoso periférico na forma de polineuropatias ou o sistema nervoso central como encefalopatia agudo-subaguda, acidente vascular cerebral e um comprometimento subcortical. O acometimento neurológico pode ocorrer pela própria replicação do vírus no tecido nervoso, ou indiretamente pela resposta imunológica do paciente. Estas alterações podem levar ao comprometimento da qualidade de vida, talvez secundárias as queixas de sono. O sono é um estado fisiológico-comportamental que se associa com o sistema imune e com várias citocinas como IL1, IL2, IL-6, TNF-á e IFN-ã. Pouco se sabe sobre as manifestações neurológicas, incluindo o sono, a resposta imune e o perfil de citocinas entre estes pacientes. Desta forma o objetivo do presente estudo é avaliar as manifestações neurológicas como os distúrbios do sono, a resposta imune celular e o perfil de citocinas, o genótipo viral entre esses pacientes HCV + da Fundação de Medicina Tropical do Amazonas. Para a avaliação da resposta imune celular foi utilizado a fenotipagem dos leucócitos do sangue periférico e para a avaliação das citocinas Th1 e Th2 e inflamatórias o ELISA. As alterações neurológicas foram avaliadas por um questionário clínico criado para o estudo. A qualidade do sono foi avaliada pelo Questionário de Pittsburg (PSQI) e de fadiga pela escala FSS. Nossos resultados mostraram que as manifestações extra-hepáticas são muito freqüentes entre eles a fadiga, artralgias e mialgias. As queixas de sono foram tão freqüentes quanto às demais com 72,4% entre os pacientes. Os pacientes tiveram uma média de PSQI de 6,21 e de FSS de 3,16. Pacientes HCV positivos apresentam uma maior ativação de linfócitos T CD8+ e marcação para CD69+, alem de níveis elevados de citocinas IL-6, IL-12 e IL-8 do que controles saudáveis. Os pacientes com Hepatite C com queixas de sono apresentam mais fadiga e níveis aumentados de IL-4 e IL-6 podendo corresponder como um marcador de sono ruim nestes pacientes. O genótipo 1 foi o mais freqüente, seguido do genótipo 3 e do genótipo 2 na nossa região. O genótipo 1 tendeu a uma maior secreção de citocinas supressoras Th2, além de maiores níveis… Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, CPF:07071706808, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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Os pacientes hemofílicos já foram vítimas de inúmeras infecções veiculadas pelo sangue por meio de transfusões sanguíneas e a hepatite C é uma das infecções a que os hemofílicos estão sujeitos, principalmente aqueles que receberam combinados de fatores de coagulação antes dos anos 90, período no qual este vírus ainda não tinha sido identificado. O HCV pode causar complicações a estes pacientes, como o aumento da mortalidade e o aumento de casos de carcinoma hepatocelular. O objetivo deste estudo foi estimar a soroprevalência do HCV, associar a resposta imune e relacionar ao genótipo e carga viral nos pacientes hemofílicos atendidos na Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas – HEMOAM. Participaram do estudo 78 pacientes hemofílicos, que procuraram a Fundação HEMOAM no período de janeiro a dezembro de 2008. Todos os participantes são do sexo masculino e apresentaram idade entre 2 e 52 anos. Nenhum dos pacientes estudados apresentou reatividade nos exames sorológicos para HIV, HTLV, doença de Chagas ou Sífilis. No entanto, 30,8% apresentaram reatividade para anticorpos anti-HCV e 19,2% para anti-HBc. As concentrações das transaminases (AST e ALT) dos pacientes anti-HCV reativos foram maiores dos que os anti-HCV não reativos. A ALT mostrou ainda correlação significativa com a carga viral do HCV nesses pacientes. Na avaliação da resposta imunológica celular, podemos verificar um aumento dos linfócitos TCD8+ nos hemofílicos anti-HCV reativos, no entanto, os leucócitos ativados CD69+ não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. A análise das citocinas séricas mostrou um aumento de IL-4 nos hemofílicos anti-HCV reativos e de IFN-γ sendo que quando comparamos estas citocinas com a carga viral do HCV nesses pacientes, somente a IL-4 apresentou correlação. As concentrações IL-10 apesar de não terem apresentado diferença entre os grupos estudados, elas apresentaram correlação com a carga viral do HCV indicando que este aumento está relacionado com a proliferação viral do HCV nesses pacientes. Podemos concluir deste estudo, que as chances dos hemofílicos contraírem infecções veiculadas pelo sangue diminuíram, principalmente após 1990. Os hemofílicos infectados pelo HCV apresentam um quadro de hepatite C crônica e o aumento das transaminases relacionada com a carga viral do HCV nesses pacientes indicam a necessidade de submeter estes pacientes a um tratamento. As concentrações mais elevadas de IFN-γ nos hemofílicos com anti-HCV reativos não se mostraram eficientes na resolução da infecção.

The hemophiliac patients were already victims of infections transmitted by the blood, mainly through sanguine transfusions. The hepatitis C is one of the infections that the hemophiliacs are subject, especially those that received combined of coagulation factors before the nineties (period in which this virus still had not been identified). The HCV is responsible for increase of the mortality and the cases of hepatocellular carcinoma. The objective of this study was to esteem the seroprevalence of HCV, to associate…

Advisors/Committee Members: Malheiro, Adriana, 070.717.068-08, cnpq.br%2F2627415957053194%22%29&pagesize-30">http://lattes.cnpq.br/2627415957053194.

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FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas

Advisors/Committee Members: Passos, Luiz Fernando, 36997510744, http://lattes.cnpq.br/4230544141006141, Marie, Adriana Malheiro Alle, ., http://lattes.cnpq.br/2627415957053194, [email protected].