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1. Alves, Késsia Caroline Souza. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).

Degree: 2018, Universidade Federal do Amazonas

Bacillus subtilis é uma bactéria Gram-positiva, não patogênica, que recebeu o status GRAS (Generally Regarded As Safe) pelo FDA Americano. Quando exposta à situação adversa o B. subtilis produz um tipo de célula morfologicamente distinta, denominada de esporo. Pesquisas têm destacado o potencial do uso de esporos como delivery vacinal, sendo estes capazes de estimular respostas imunes sistêmicas e localizadas, promovendo ainda elevação da resposta humoral quando coadministrado com antígenos acoplados ou integrados à superfície dos esporos. Atualmente, ainda não há uma vacina eficaz para o combate à malária e dentre os antígenos estudados, a proteína Pf-MSP1-19 de Plasmodium falciparum se mostra um dos mais promissores e elucidados candidatos vacinais. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar a resposta imune frente ao antígeno rPf-MSP1-19 de Plasmodium falciparum, presente na superfície dos esporos de Bacillus subtillis. Materiais e métodos: Para isso, foram realizados separação por renografina e quantificação por citometria de fluxo dos esporos de Bacillus subtillis recombinados com rPf-MSP1-19 e esporos Wild Type (WT), seguido pelo acoplamento químico da rPf-MSP1-19 à superfície dos esporos WT autoclavados. Com as ferramentas produzidas, camundongos Balb/c foram imunizados via oral e intraperitoneal e os soros obtidos avaliados por ELISA indireto. Resultados: Neste trabalho o acoplamento químico utilizando EDC e NHS se mostrou o melhor método para adsorção da proteína rPf-MSP1-19 à superfície de esporos. Uma nova abordagem para quantificação de esporos foi aplicada usando Citometria de Fluxo e Beads Trucount™ demonstrando maior potencial de eficiência e sensibilidade. Foi observado que houve a degradação da proteína rPfMSP1-19 quando expressa diretamente na superfície do esporo, pelo método recombinante. Quanto as imunizações orais, não foi possível obter resposta imune frente ao antígeno acoplados aos esporos quimicamente e nem a Bacillus subtillis recombinante. Entretanto as imunizações intraperitoneais induziram níveis elevados de IgG anti- rPf-MSP1-19 no grupo imunizado com rPf-MSP1-19 acoplada à superfície dos esporos WT autoclavados semelhante ao controle positivo. Sugerindo o uso de esporos de B. subtilis Wild Type autoclavados como alternativa de delivery e de adjuvante de antígenos para imunizações com fins experimentais, podendo no futuro ser aplicado em imunizações em humanos.

Bacillus subtilis is a Gram-positive, non-pathogenic bacterium that receive the status GRAS (Generally Regarded As Safe) by the American FDA. When exposed to the adverse situation B. subtilis produces a morphologically distinct cell type, called the spore. Research has highlighted the potential of use spores as vaccines delivery, which are capable of stimulate systemic and localized immune responses, promoting the elevation of humoral response when coadministered with antigens coupled or integrated to the surface of spores. Currently, there is still no effective vaccine to combat malaria and among…

Advisors/Committee Members: Mariúba, Luís André Morais, 75852055204, http://lattes.cnpq.br/4784959431673419, Costa, Allyson Guimarães da, http://lattes.cnpq.br/7531662673281014, Castro, Diogo Pereira de, http://lattes.cnpq.br/5143585130152199, [email protected].

Subjects/Keywords: Bacillus subtillis; Esporos; Malária; Pf-MSP1-19; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA

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APA (6th Edition):

Alves, K. C. S. (2018). Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). (Masters Thesis). Universidade Federal do Amazonas. Retrieved from https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Alves, Késsia Caroline Souza. “Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).” 2018. Masters Thesis, Universidade Federal do Amazonas. Accessed April 19, 2021. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856.

MLA Handbook (7th Edition):

Alves, Késsia Caroline Souza. “Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).” 2018. Web. 19 Apr 2021.

Vancouver:

Alves KCS. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). [Internet] [Masters thesis]. Universidade Federal do Amazonas; 2018. [cited 2021 Apr 19]. Available from: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856.

Council of Science Editors:

Alves KCS. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). [Masters Thesis]. Universidade Federal do Amazonas; 2018. Available from: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856

2. Alves, Késsia Caroline Souza. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).

Degree: 2018, Universidade Federal do Amazonas; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; UFAM; Brasil; Instituto de Ciências Biológicas

Submitted by Leonardo Gomes Remigio ([email protected]) on 2019-01-15T12:54:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Késsia Caroline Alves.pdf: 2407456 bytes, checksum: b59fa922600b667fa4c89adf5208eca3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)

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FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas

92 984291325

Bacillus subtilis is a Gram-positive, non-pathogenic bacterium that receive the status GRAS (Generally Regarded As Safe) by the American FDA. When exposed to the adverse situation B. subtilis produces a morphologically distinct cell type, called the spore. Research has highlighted the potential of use spores as vaccines delivery, which are capable of stimulate systemic and localized immune responses, promoting the elevation of humoral response when coadministered with antigens coupled or integrated to the surface of spores. Currently, there is still no effective vaccine to combat malaria and among the antigens studied, the Pf-MSP1-19 protein of Plasmodium falciparum is one of the most promising and elucidated vaccine candidates. Against the foregoing, the main objective of this study was to evaluate the immune response against Plasmodium falciparum rPf-MSP1-19 antigen, present on the surface of Bacillus subtilis spores. Methods: For this, renografin separation and quantification by flow cytometry of Bacillus subtilis spores recombined with rPf-MSP1-19 and Wild Type (WT) spores were performed, followed by chemical coupling of rPf-MSP1-19 to the surface of the autoclaved WT spores. With the tools produced, Balb / c mice were immunized orally and intraperitoneally and the sera obtained were evaluated by indirect ELISA. Results and conclusion: In this work the chemical coupling using EDC and NHS proved to be the best method for the adsorption of the rPf-MSP1-19 protein at spore surface. A new approach to spore quantification was applied using Flow Cytometry and Trucount ™ Beads demonstrating high efficiency and sensitivity. It was observed that there was degradation of the rPf-MSP1-19 protein when expressed directly on the spore surface by the recombinant method. As for oral immunizations, it was not possible to obtain immune response against the antigen coupled to the spores chemically and to recombinant Bacillus subtillis. However, intraperitoneal immunizations induced elevated levels of anti- rPf-MSP1-19 IgG in the group immunized with…

Advisors/Committee Members: [email protected], Mariúba, Luís André Morais, Costa, Allyson Guimarães da, Castro, Diogo Pereira de.

Subjects/Keywords: Bacillus subtillis; Esporos; Malária; Pf-MSP1-19; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA

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APA (6th Edition):

Alves, K. C. S. (2018). Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). (Masters Thesis). Universidade Federal do Amazonas; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; UFAM; Brasil; Instituto de Ciências Biológicas. Retrieved from https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Alves, Késsia Caroline Souza. “Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).” 2018. Masters Thesis, Universidade Federal do Amazonas; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; UFAM; Brasil; Instituto de Ciências Biológicas. Accessed April 19, 2021. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856.

MLA Handbook (7th Edition):

Alves, Késsia Caroline Souza. “Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19).” 2018. Web. 19 Apr 2021.

Vancouver:

Alves KCS. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). [Internet] [Masters thesis]. Universidade Federal do Amazonas; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; UFAM; Brasil; Instituto de Ciências Biológicas; 2018. [cited 2021 Apr 19]. Available from: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856.

Council of Science Editors:

Alves KCS. Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19). [Masters Thesis]. Universidade Federal do Amazonas; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; UFAM; Brasil; Instituto de Ciências Biológicas; 2018. Available from: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6856

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