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A shigelose é uma doença manifestada desde uma diarreia leve até uma severa disenteria. A habilidade de invadir células e provocar lesão na mucosa intestinal, bem como levar ao desequilíbrio na homeostase e modular a resposta inflamatória em nível intestinal tem sido atribuídos a diversos fatores de patogenicidade das Shigella spp. Neste trabalho, trinta e seis isolados de Shigella foram identificados a partir de um estudo etiológico de diarreia infantil em 1.500 crianças com idade entre zero a dez anos que deram entrada nos hospitais de Manaus (Zona Leste, Zona Sul e Zona Oeste) com quadro diarreico, no período entre agosto de 2007 a julho de 2009. Shigella flexneri foi à espécie mais frequente (65%), seguida por S. sonnei (20%), S. boydii (12,5%) e S. dysenteriae (2,5%). Entre os isolados, merece destaque o aparecimento de um isolado resistente (intermediária) à ciprofloxacina e 1 resistente (intermediária) à ceftriaxona, que são os antibióticos recomendados pela OMS. A tipagem molecular dos fatores de patogenicidade mostrou evidências sobre o potencial patogênico da subunidade shet-1B das Shigellas, podendo levar a complicações relacionadas à desidratação, de IpaH na febre e na lesão do intestino evidenciado pelo diarreia sanguinolenta. IpaBCD foram os fatores de virulência mais predominantes seguido de IpaH. E uma frequência maior de Shet-2+ em crianças febris em relação a não febris foi verificada. Este estudo vem contribuir com a pouca literatura que existe em relação aos fatores de patogenicidade de isolados de Shigella selvagens com quadro diarreico com ou sem shigelose e consolidar a importância de encontrar caminhos para bloquear a toxicidade destes principais fatores de patogenicidade

Shigellosis is a disease manifested from mild diarrhea to severe ysentery. The ability to invade cells, cause injury and imbalance in the homeostasis to the intestinal mucosa and modulate the inflammatory response has been attributed to several factors of pathogenicity of Shigella spp. In this study, thirty-six isolates of Shigella were identified from an etiologic study of childhood diarrhea in 1,500 children aged 0-10 years who were admitted to hospitals in Manaus (East-South-and-West Zones) between August 2007 and July 2009. Shigella flexneri was the most common (65%), followed by Shigella sonnei (20%), Shigella boydii (12.5%) and Shigella dysenteriae (2.5%). Among the isolates, one isolate (intermediate) resistant to ciprofloxacin and 1 (intermediate) to ceftriaxone, which are antibiotics recommended by WHO. Molecular typing of the pathogenicity factors showed evidence of the pathogenic potential of shet- 1B subunit of Shigella and can lead to complications related to dehydration. Frequencies of the IpaBCD (the most prevalent factors among isolates) followed by IpaH suspect associations to fever and bowel injury. The IpaH was clearly associated to bloody diarrhea. And finally, differences in the frequencies of Shet-2 positives between febrile-based groups reinforce its role in the inflammatory response. This…

Advisors/Committee Members: Orlandi, Patrícia Puccinelli, CPF:03478565863, Nogueira, Paulo Afonso.

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As salmonelas fazem parte da microbiota intestinal de muitos animais de sangue quente e frio. Podem causar gastroenterite leve ou até mesmo doenças invasivas graves, causadoras de 216 mil mortes/ano, e geralmente está associada a regiões de baixos níveis socioeconômicos e de saneamento básico. O objetivo deste estudo foi descrever as características genotípicas e fenotípicas de Salmonella isolada de área rural e urbana de Manaus/AM. Foram utilizadas amostras diarreicas coletadas de crianças de 0 a 10 anos de idade e amostras não diarreicas, coletadas de adultos, crianças, animais, além de amostras da água. Estas amostras foram isoladas em meio líquido Tetrationato de sódio, semeadas em meios sólidos seletivos para Salmonella. Em seguida foram selecionadas colônias com as características morfológicas para Salmonella e semeadas em provas bioquímicas para a caracterização fenotípica e identificação. Foi realizada a amplificação e o sequenciamento do gene 16S rRNA e análise da similaridade genética pela técnica de Pulsed Field para caracterização genotípica e identificação destas cepas. No total foram caracterizadas 22 salmonelas, sendo 3 (13,6%) S. Paratyphi B, 3 (13,6%) S. Javiana, 3 (13,6%) S. enterica subsp. arizonae, 3 (13,6%) Salmonella enterica, 3 (13,6%) Salmonella sp., 2 (9%) S. Bareilly, 2 (9%) S. Typhimurium, 1 (4,5%) S. Agona, 1 (4,5%) S. Stanley e 1 (4,5%) S. Enteritidis. Entre os 22 isolados, 100% foram sensíveis a ciprofloxacina e, 10 (46%) resistentes a Nitrofurantoína e 8 (36, 3%) a Sulfametaxazol + trimetropima. Estas cepas têm a capacidade para causar infecções invasivas, pois todas apresentaram fatores de virulência com capacidade de invasão, aderência e sobrevivência no interior da célula. A análise de similaridade genética formou perfis diferentes entre os isolados clínicos e isolados selvagens. Chama-se a atenção para realização contínua desse tipo de pesquisa, visando a melhoria no diagnóstico e diminuição da resistência aos antibióticos, além da criação de programas de controle e prevenção da doença.

Salmonella sp. lives in the intestinal tract of many warm and cold blooded animals. Salmonella can cause mild gastroenteritis and severe invasive diseases. Those are responsible for 216 thousands deaths /year, and are most commonly linked with areas of low socioeconomic status and sanitation. The aim of this study was to describe the genotypic and phenotypic characteristics of Salmonella isolated from countryside and urban areas of Manaus / AM. Samples were collected from children 0-10 years old with and without diarrhea in the urban area and in the countryside samples were collected from stools of adults, children, animals, and the water. These strains were isolated in liquid sodium Tetrationado, then, sown on solid media selective for Salmonella, reproduced in predetermined conditions for Salmonella. Colonies were then selected with morphological characteristics for Salmonella and sown in biochemical tests for phenotypic characterization and identification. We performed the amplification and…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, CPF:03478565863.

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Os constantes casos de infecções por bactérias refratárias aos antimicrobianos demonstram os riscos evolutivos envolvidos no processo de resistência. Desta forma, faz-se premente a busca por novos medicamentos e estratégias que venham minimizar esta problemática. Paullinia cupana Kunth (guaraná) e Ptychopetalum olacoides (marapuama) são espécies vegetais endêmicas e cultivadas na região amazônica, com disponibilidade de matéria prima para a obtenção de produtos biotecnológicos. Estas espécies são utilizadas na medicina popular como antibacteriano, com relatos na literatura científica que corroboram esta atividade. O presente trabalho teve como finalidade obter uma fração bioativa a partir dos extratos do guaraná e da marapuama, com maior potencial, vislumbrando a obtenção de um produto biotecnológico. Para alcançar este objetivo o material em pó de Paullinia cupana variedade sorbilis [(Mart.) Ducke] e Ptychopetalum olacoides provenientes do município de Maués/Amazonas foram submetidas à extração exaustiva utilizando sistemas com diferentes solventes, obtendo-se os extratos: aquoso, hidroalcoólico, metanólico, etanólico, em acetato de etila e hexânico. Todos os extratos foram submetidos ao método de difusão em Agar, com o objetivo de determinar a atividade contra treze linhagens bacterianas. Os extratos bioativos mais promissores, hidroalcoólico do guaraná e em acetato de etila da marapuama, foram monitorizados por bioautografia. Os extratos do guaraná foram submetidos à técnica de microdiluição em caldo com a finalidade de determinar seu potencial. Após estes ensaios, o extrato hidroalcoólico do guaraná foi selecionado, os critérios utilizados foram: potencial antimicrobiano, maior espectro de ação e maior rendimento. O extrato hidroalcoólico foi semi-purificado por cromatografia em placa de alumínio, obtendo-se uma fração bioativa com concentrações inibitórias de 1,25 mg/mL para o S. aureus sensível a meticilina (extrato 3,12 mg/mL), 0,65 mg/mL para o S. aureus resistente a meticilina (extrato: ausência de atividade), 1,04 mg/mL para o B. cereus (extrato: 1,56 mg/mL) e 0,65 mg/mL para a C. violaceum (extrato: 6,25 mg/mL). Conclui-se que a fração bioativa apresentou maior potencial antibacteriano, podendo-se vislumbrar o desenvolvimento de um novo produto biotecnológico.

The constant cases of bacterial infections refractory to medication protocols demonstrate the risks involved in rolling resistance. Thus, it is urgent to search for new antimicrobial agents and strategies that will minimize this problem. Paullinia cupana Kunth (guarana) and Ptychopetalum olacoides (marapuama) and endemic plant species are grown in the Amazon region, with availability of raw material for the production of biotechnological products. These species are used in folk medicine as antibacterial, with reports in the scientific literature supporting this activity. This study aimed to obtain a bioactive fraction from extracts of guarana and muirapuama, with the greatest potential, seeing the attainment of a biotech product. To achieve this…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, CPF:03478565863, Veiga Junior, Valdir Florencio da.

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A Shigella é uma bactéria gram-negativa e intracelular, responsável pelo desencadeamento da Shigelose, uma doença diarreica caracterizada pela presença de muco e sangue. Em um estudo epidemiológico realizado por nosso grupo na cidade de Manaus-Amazonas com crianças que apresentavam diarreia severa nos anos de 2007 a 2009, o gênero Shigella foi o quinto patógeno mais isolado (2,2%). A partir dos dados clínicos observamos uma sintomatologia heterogênia entre os pacientes com shigelose, desde então, nosso grupo vem investigando as características genotípicas e fenotípicas desses isolados. Shigella é uma bactéria altamente virulenta, seus mecanismos de patogenicidade se deve a presença de genes plasmidiais e cromossomais. Entre os genes responsáveis pela sua virulência temos, os genes Ipas que promovem a invasão de Shigella nas células epiteliais e a morte dos macrófagos, os genes IpaHs, que modulam a resposta imunológica do hospedeiro e as enterotoxinas Shet1 e Shet2. No presente estudo, nosso principal objetivo foi verificar a variabilidade genética dos principais fatores de virulência em amostras clínicas de Shigella flexneri. Os genes de virulência foram amplificados com iniciadores específicos desenvolvidos no estudo, os amplicons obtidos foram sequenciados e analisados. Os genes Ipa, IpaH, Set1A, Se1B e Sen foram amplificados com sucesso. Um total de 474 sequências referentes aos 19 genes de virulência de Shigella foi sequenciado, no entanto, apenas 12 genes, num total de 154 sequências foram analisadas quanto à presença de polimorfismo. Neste estudo foram identificadas 9 mutações de ponto em 5 genes de virulência de Shigella, sendo eles, o gene IpaD, SenA, IpaH3, IpaH2.5 e IpaH6. O estudo da identificação de determinantes genéticos específicos é essencial para compreender o mecanismo de patogênese e a propagação de variantes virulentas na população de Shigella. Nosso trabalho se baseia em estudos anteriores realizados por nosso grupo, uma vez que a amplificação inicial dos genes de virulência desses isolados foi ineficaz. Apesar de poucos genes serem analisados, variações de nucleotídeos foram encontradas em isolados diferentes, que podem interferir na expressão do fenótipo de virulência. Um novo sequenciamento será necessário para confirmar as variações encontradas no estudo, assim como estudos in vitro e in vivo, para verificar se essas alterações podem interferir no fenótipo de virulência das amostras clinicas de Shigella.

Shigella is a gram-negative and intracellular bacterium responsible for triggering Shigellosis, a diarrheal disease characterized by the presence of mucus and blood. . In an epidemiological study conducted by our group in the city of Manaus-Amazonas with children with severe diarrhea from 2007 to 2009, the genus Shigella was the fifth most isolated pathogen (2.2%). Based on the clinical data we observed a heterogenous symptomatology among patients with shigellosis, since then, our group has been investigating the genotypic and phenotypic characteristics of these isolates. Shigella is a…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, [email protected].

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Shigelose é uma disenteria bacilar causada pela Shigella, um patógeno Gram negativo e intracelular. Um dos modelos animais mais comuns para avaliar a resposta imune da Shigella é a infecção pulmonar em camundongos devido a fácil manipulação e similaridade com as respostas intestinais. Neste estudo, nós levantamos a hipótese de como cepas clínicas isoladas de pacientes com shigelose possuem expressão de resposta imune diferencial quando comparados com cepas padrões (M90T). Nossa principal proposta foi analisar quatro cepas de Shigella clínicas com diferentes genes de virulência e a cepa padrão M90T quanto as respostas imunes após invasão murina em 24 e 48h. Métodos: Cepas clínicas de Shigella foram selecionadas pela presença de genes de virulência específicos por PCR. Primers relacionados ao sistema imune foram desenvolvidos. As cepas clínicas e a padrão foram submetidas à análise de expressão gênica pelo Fluidigm (Bioamark Platform). Os resultados foram analisados em programa estatístico R. Resultados: Nós agrupamos os mRNA em cinco grupos: Pró Inflamatórios (CXCL15, IL-1β, IL-6, IFN-β, TNF-α), Anti Inflamatórios (TGF-β1, TGF-β2 e TGF-β3), Resposta Inata (NOD 1, NOD 2, TLR4 e TLR9), Resposta adaptativa (Th1-like, IFN- γ, IL-17A e IL-17B) e Macrófago (NOS, H2 -Aβ1, H2-Eβ, H2-K1, MHC-like 2). Como principais resultados, todas as amostras clínicas demonstraram uma expressão mRNA em 24h de infecção que foi gradativamente aumentado após 48h, enquanto a cepa padrão M90T teve a regulação oposta com taxas de mRNA em 48h, sugerindo grandes diferenças entre as respostas a cepas clínicas e a padrões bem caracterizados. A cepa clínica5 não alterou a expressão de mRNA em 24 e 48h nos genes da resposta adaptativa, sugerindo baixas taxas de invasão e controle do hospedeiro nas etapas iniciais da infecção. A cepa clínica #11 demonstrou alta atividade macrofágica devido a maior expressão de IFN-γ e NOS. A cepa #14 e #27 demonstraram um possível potencial de proteção Th1 devido a alta expressão mRNA para MHC-like II e Th1 quando comparado a outras cepas e o controle positivo. A presença de alta expressão de IL-17 na cepa #27 relação com células Th17. O potencial imunológico da cepa #27 pode ter relação com as enterotoxinas (shET1A, shET1B e shET2). A presença do conjunto completos destas enterotoxinas foi confirmado na cepa #27 por PCR. Conclusão: As diferenças entre cepas clínicas e padrões foram evidentes neste estudo. Cepa clínica 27 parece ser uma ótima candidata para estudos futuros e pode prover novas perspectivas para as diferenças de invasão e resposta imune vista nos hospitais.

Introduction: Shigellosis is a bacillary dysentery caused by Shigella, a gramnegative intracellular human pathogen. One of most common animal models to evaluate Shigella’s immune response is mice pulmonary infection due easy manipulation and similar gut responses. At this study, we have hypothesized how clinical strains isolated from Shigellosis patients had differential immune response expression when compared…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Mariúba, Luis André Morais, 75852055204, http://lattes.cnpq.br/4784959431673419.

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Pelo fato da periodontite ser uma doença inflamatória e infecciosa, a resposta imune pode resultar em uma mudança na população leucocitária presente na saliva, quando comparada a resposta de indivíduos periodontalmente saudáveis. Até o presente, a imunofenotipagem por citometria de fluxo não havia sido utilizada para investigar padrões imunológicos em amostras de saliva provenientes de indivíduos com processos bucais inflamatórios. O objetivo do presente estudo foi avaliar, pela técnica de citometria de fluxo, a frequência de linfócitos T, linfócitos B, células natural killer bem como a frequência da população de leucócitos na saliva de indivíduos com ou sem periodontite crônica. Paralelamente, foram determinados, por Dot-ELISA, os títulos das imunoglobulinas totais das classes A, G e M presentes na saliva destes indivíduos, além da detecção de sete patógenos periodontais, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Prevotella intermedia, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus e Prevotella nigrecens, pela PCR. Pela técnica de imunofenotipagem foi observado que os pacientes com periodontite crônica apresentaram maior frequência de leucócitos - p=0,0007 (50,43% ± 5,1) e de linfócitos B - p=0,0059 (50,93% ± 6,1) em relação aos indivíduos sem doenças bucais (22,69% ± 0,19 e 13,9% ± 2,6, respectivamente). Um aumento não significativo nos títulos de IgG também foi observado nos indivíduos com periodontite crônica, além de maior frequência de patógenos periodontais. Estes resultados demonstram que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta eficaz para determinação do perfil leucocitário, proveniente de amostras de saliva de pacientes com periodontite crônica e indivíduos periodontalmente saudáveis.

Because periodontitis is an infectious and inflammatory oral disease, the immune response may cause the leukocyte population in saliva of individuals with this condition to be different from that of periodontally healthy individuals. To date, flow cytometric immunophenotyping has not been used to investigate immune patterns in saliva samples from individuals with inflammatory processes in the oral cavity. The objective of this study was to use flow cytometry technique to evaluate the frequency of T lymphocytes, B lymphocytes, natural killer cells and the total leukocyte population in the saliva of individuals with or without chronic periodontitis. In parallel, total IgA, IgG and IgM titers in saliva were determined by Dot-ELISA besides the detection of seven periodontal pathogens, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Prevotella intermedia, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus and Prevotella nigrecens, by PCR. Cell immunophenotyping revealed that patients with chronic periodontitis had a higher frequency of total leukocytes - p=0.0007 (50.43% ± 5.1) and B lymphocytes - p=0.0059 (50.93% ± 6.1) than individuals without oral diseases (22.69% ± 0.19 and 13.9% ± 2.6, respectively). A non-significant increase in IgG titers was also observed in subjects with chronic…

Advisors/Committee Members: Santos, Maria Cristina dos, 10646104802, http://lattes.cnpq.br/4923902785529755, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627.

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Tradicionalmente, o diagnóstico confirmatório da malária é feito pelo exame microscópico do sangue. Logo, o diagnóstico da doença pode ser complicado com a falta de pessoas ou equipamentos necessários para a obtenção de um diagnóstico confiável e rápido. Por esta e outras razões, métodos rápidos, práticos e sensíveis vêm sendo desenvolvidos, como, por exemplo, as fitas imunocromatográficas. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema em fluxo lateral para o diagnóstico de malária causada por Plasmodium falciparum. Logo, anticorpos policlonais e monoclonais contra a proteína HRP2 (“Histidine rich protein 2”) de Plasmodium falciparum foram produzidos utilizando para isso uma proteína recombinante desta fusionada a uma cauda de glutationa-S-transferase (rHRP2-GST, obtida em trabalhos anteriores). Após a obtenção dos hibridomas, apenas 20 responderam contra a proteína rHRP2-GST, e dentre estes apenas 4 apresentaram alguma reatividade contra a proteína nativa. O anticorpo monoclonal que melhor reagiu a este ultimo ELISA e em um ensaio de imunofluorescencia foi utilizado em um sistema de fluxo lateral padronizado nesta tese. Para esta padronização, foi montado primeiramente um sistema em fluxo lateral em formato competitivo seguido de um sistema em sanduíche utilizando anticorpos policlonais anti-rHRP-GST. Nos ensaios utilizando hemácias parasitadas por P. falciparum, foram obtidos resultados positivos (detecção da infecção na fita imunocromatográfica) usando os anticorpos policlonais. O sistema apresentou estabi l idade dentro do período de teste, demonstrando assim que possivelmente, em um ambiente de produção controlado, este sistema em fluxo lateral poderia permanecer estável por um tempo satisfatório para sua comercialização.

Traditionally, confirmatory diagnosis of malaria is made by microscopic examination of blood. Therefore, the diagnosis of the disease may be complicated by the lack of people or equipment necessary to obtain a fast and reliable diagnosis, especially in areas of difficult access. For these and other reasons, rapid, practical and sensitive methods have been developed, such as immunochromatographic strips. Therefore, this work aimed to develop a lateral flow system for the diagnosis of malaria caused by Plasmodium falciparum. So, polyclonal and monoclonal antibodies against the protein HRP2 (Histidine rich protein 2) of Plasmodium falciparum were produced using a recombinant protein that it fused to a glutathione-S-transferase (rHRP2-GST, obtained in previous work). After hibridomas production, only 20 responded against the protein rHRP2-GST, and of these only four showed some react ivity against the native protein. The monoclonal antibody that reacted better on this last ELISA test and in an immunofluorescence was used on a lateral flow system standardized here. For this standardization, the system was first mounted in lateral flow competitive format followed by a sandwich system using polyclonal anti-rHRP2-GST. In assays using red blood cells parasitized by P. falciparum,…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Paulo Afonso, 11933446897, http://lattes.cnpq.br/8053450182210137, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627.

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Devido as crescentes taxas de morbidade e mortalidade causada por Rotavírus humanos, métodos de detecção têm sido empregados rotineiramente em estudos clínicos epidemiológicos. O diagnóstico das infecções por Rotavírus baseia-se na detecção das partículas, antígenos ou RNA virais a partir de material fecal. O objetivo deste estudo foi desenvolver ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de Rotavírus do tipo A. IgG de coelho e camundongos anti-VP4 e anti-VP6 foram obtidos a partir de imunizações feitas com as proteínas recombinantes VP4 e VP6 de Rotavírus A (ambas construídas neste estudo) e testados através de citometria de fluxo e western blot contra o antígeno recombinante e o antígeno nativo. A região da proteína VP4 selecionada para a geração de IgG de camundongo e coelho anti-VP4 foi eficiente para o reconhecimento do antígeno nativo em sua forma desnaturada, como foi possível observar nos ensaios de western blot. As análises de citometria demonstraram que os mesmos anti-VP4 gerados não foram específicos o suficiente para serem utilizados em técnicas onde a proteína VP4 está em sua forma nativa. As regiões selecionadas para a produção da proteína VP6 foram eficientes para a geração de anticorpos anti-VP6 capazes de reconhecer a proteína nativa em sua forma desnaturada e não desnaturada. Futuros trabalhos terão como objetivo o aumento da especificidade dos anticorpos obtidos de modo a permitir sua aplicação em um maior número de imunoensaios.

Due to rising rates of morbidity and mortality caused by human rotavirus, detection methods have been used routinely in clinical and epidemiological studies. The diagnosis of rotavirus infections is based on the detection of particles, antigens or viral RNA from the fecal material. This study aimed to develop the VP4 and VP6 protein detection tools for immunodiagnostic of Rotavirus group A. Rabbit and mice anti-VP4 and anti-VP6 IgGs were obtained from immunizations made with VP4 and VP6 recombinant proteins of Rotavirus A, both built in this study, and tested by flow cytometry and Western blot against the recombinant antigen and the native antigen. The region of the VP4 protein, selected for the generation of mice and rabbit anti-VP4 IgGs, was efficient to recognize native antigen in denatured form, as observed in western blot assays. The cytometry analysis demonstrated that generated anti-VP4 antibodies were not specific enough to be used in techniques where the VP4 protein is in its native form. Selected regions for production of VP6 protein have been efficient for the generation of anti-VP6 antibodies, able to recognize the native protein in its denatured and non-denatured form. Future studies will aim to increase the specificity of the antibodies obtained to allow their use in a greater number of immunoassays.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Mariúba, Luís André Morais, 75852015204, http://lattes.cnpq.br/4784959431673419.

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As gastrenterites humanas estão entre as doenças de maior impacto na saúde pública ao nível mundial. São diversos os agentes etiológicos causadores da diarreia, merecendo destaque o rotavírus, patógeno viral proeminente na gênese de gastrenterite aguda grave na infância, sendo responsável por mais de 200 mil mortes de crianças em todo o mundo. O rotavírus é constituído por um genoma de 11 segmentos de RNA dupla fita que codificam 6 proteínas estruturais (VPs) e 6 proteínas não-estruturais (NSPs). A atual classificação dos rotavírus tem base na caracterização gênica dos 11 segmentos virais para a identificação de seus respectivos genótipos, designados em conjunto como genótipos de constelação. A vigilância epidemiológica que inclui a caracterização molecular é uma importante ferramenta para o estudo da dinâmica de variações das cepas diante de fatores evolutivos como a implementação da vacina Rotarix (GlaxoSmithKline), introduzida no Brasil desde 2006. A finalidade deste estudo foi realizar análises epidemiológicas, detecção e caracterização de genes de rotavírus que infectaram crianças com até 10 anos de idade, atendidas em hospitais públicos de Manaus entre os anos de 2007 e 2008. Foram coletadas 1337 amostras diarreicas. Observou-se um percentual de 5,4 % de positividade para rotavírus. Foram identificados os genótipos virais através das reações em cadeia pela polimerase precedida da transcrição reversa. O genótipo G2P[4] foi encontrado em 93% dos casos, seguido do G[NT-não tipado]P4 em 6% e G2P[9] em 1% das amostras. Dentre as 73 amostras detectadas nesta pesquisa, 58 eram elegíveis à atual vacina. As análises filogenéticas revelaram um padrão de agrupamento das sequências gênicas em clusters que apresentaram similaridade com amostras provenientes de Belém (Brasil) e da China.

The human gastroenteritis are among the diseases of greatest public health impact worldwide. There are several etiologic agents of diarrhea, with emphasis rotavirus, viral pathogen prominently in the genesis of severe acute gastroenteritis in childhood, accounting for over 450,000 deaths in children worldwide. The rotavirus genome consists of a 11 segment of double stranded RNA encoding six structural proteins (VPs) and five nonstructural proteins (NSPs). Classification of rotavirus serotypes and genotypes is based on the epitopes of the glycoprotein VP7 neutralized, called G, and VP4 protease-sensitive protein called P, which generates a binary classification scheme G and P. Epidemiological studies of molecular characterization of genes encoding for proteins of rotavirus are essential for assessing the effectiveness of the vaccine Rotarix (GlaxoSmithKline), introduced in Brazil since 2006, in addition to assessing the possible emergence of new viral genotypes. The aim of this study was to identify and characterize genes of rotavirus in feces of children with diarrhea in Manaus between the years 2007 and 2008. 1337 samples were collected from diarrheal children under 10 years old in the city of Manaus,…

Advisors/Committee Members: Orlandi, Patrícia Puccineli, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Soares, Leidiane Amorim, 71114688215, http://lattes.cnpq.br/4102934680517945, [email protected].

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Introdução: Pseudomonas aeruginosa resistente a múltiplos antimicrobianos (MDR, multidrug- resistance e PDR, pan-drug-resistance) é um agente etiológico frequente em infecções hospitalares, acometendo principalmente pacientes imunossuprimidos, tal como os internados em Unidade de Tratamento Intensivo (UTI). Objetivos: (1) Detectar P. aeruginosa resistente a múltiplos antimicrobianos em pacientes, profissionais e estruturas hospitalares; (2) identificar fatores genéticos que conferem resistência antimicrobiana, tais como integrons, cassetes gênicos e genes codificadores de enzimas β-lactamases; e (3) Detectar grupos clonais entre os isolados MDR/PDR. Metodologia: Foram realizadas coletas de amostras de pacientes, profissionais e estruturas de UTIs dos Hospitais 28 de Agosto (HPS28), Francisca Mendes (HUFM) e João Lúcio Pereira Machado (HPSJL), dos quais foram isoladas e identificadas cepas de P. aeruginosa por metodologia microbiológica clássica e molecular (amplificação e sequenciamento do gene 16s rRNA); O perfil de resistência aos antimicrobianos foi determinado pela técnica de disco-difusão; A pesquisa de grupos clonais foi determinada por similaridade genética entre os isolados MDR/PDR por PFGE; A detecção de genes que codificam resistência (integrons, cassetes gênicos e enzimas β-lactamases) foi realizada por PCR e confirmadas por RFLP e/ou sequenciamento genético. Resultados: Os fenótipos MDRs e PDR foram detectados em, respectivamente, 13,3% e 1,2% dos isolados estudados. Em 32 (38,5%) foram detectados integrons de classe 1. Destes, três (3,6%) também foram positivos para integrons de classe 2. A presença de intengrons nos isolados estudados demonstra correlação estatística (P<0,05) significativas com os fenótipos de resistência aos fármacos testados. Uma alta frequência de integrons não continha cassete gênico ou apenas carregava genes que codificavam resistência aos aminoglicosídeos estreptomicina e espectinomicina e ao trimetropin. A pesquisa de β-lactamases revelou a produção de enzimas KPC-2 (66,7%), VIM (8,3%) e OXA-50 (100%) por isolados de P. aeruginosa MDR/PDR. Dois grupos clonais foram detectados entre os isolados MDR/PDR estudados, indicando disseminação clonal inter e intrahospitalares. Conclusão: O isolamento de P. aeruginosa a partir dos hospitais estudados evidencia que esses patógenos, capazes de causar graves infecções nosocomiais, em especial, cepas MDR e PDR, estão se disseminando em ambiente hospitalar. Além disso, constata-se que a presença de elementos genéticos como integrons, cassetes gênicos e genes codificadores de β-lactamases estão correlacionadas aos fenótops de resistência nesses isolados, sendo, portanto, mecanismos genéticos potenciais capazes de conferir resistência antimicrobiana. Apesar disso, estudos futuros são necessários para avaliar a contribuição de outros mecanismos moleculares e a pressão seletiva exercida pelos antimicrobianos que contribuem para o desenvolvimento destes fenótipos.

Introduction: Pseudomonas aeruginosa resistant to…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Mota, Adolfo José da, 26837596810, http://lattes.cnpq.br/2931501267284226, Nunes, Gustavo, Saito, Daniel.

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A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) tem sido causa frequente de muitos casos de diarreia no Brasil e no mundo, além de ser um dos principais agentes responsáveis pelas taxas de mortalidade entre as crianças de 0 a 5 anos de idade. A EPEC causa uma lesão histológica nas microvilosidades dos enterócitos caracterizada pela formação de uma ultraestrutura em forma de pedestal. Um dos fatores de patogenicidade responsável é o complexo BfpA (bundle forming pili). A BfpA promove a adesão das cepas de EPEC denominadas como típicas. Diferentemente, algumas cepas de EPEC são desprovidas do Fator de Aderência de Escherichia coli -EAF (EPECBfpA-) e tendem a provocar as lesões típicas de pedestal com mais lentidão e por isso são denominadas EPEC atípicas. Como a BfpA é uma proteína imunogênica e recentemente a incidência de EPECBfpA- atípicas vem aumentando, acredita-se que a lesão por estas bactérias ocorra por outras vias tornando importante o desenvolvimento de estratégias para sua identificação. Neste estudo várias sequências antigenicamente preditas foram usadas para sintetizar peptídeos a fim de produzir anticorpos policlonais anti-BfpA em camundongos BALB/c visando a identificação específica da EPEC típica. Para alcançar os objetivos, inicialmente ferramentas de bioinformática de proteínas e de predição de epítopos B foram utilizadas para mapeamento de regiões antigênicas específicas para EPEC. Peptídeos sintéticos foram adquiridos para a imunização de camundongos Balb/c, afim de que antissoros fossem avaliados quanto a especificidade à EPEC. Como resultados foi possível a construção e síntese de seis peptídeos lineares de BfpA (P1-P6). O peptídeo P6 foi selecionado como produto deste estudo devido a habilidade de induzir a produção de anticorpos contra esta proteína e este soro reconhecer a proteína nativa em cepas de EPEC típica. Acredita-se que a caracterização funcional destes anticorpos permita o desenvolvimento de ferramentas para o diagnóstico específico das duas linhagens de EPEC visando a contribuição para estudos futuros sobre o controle do processo fisiopatológico no intestino.

Escherichia coli (EPEC) was frequent cause of many cases of diarrhea in Brazil and around the world, and one of the main agents responsible for high mortality rates among children aged 0-5 years. EPEC is known to cause histological damage to the microvilli of enterocytes, characterized by the formation of a shaped support ultrastructure. One of the factors responsible for pathogenicity is complex BFP (bundle forming pili). The presence of genes BfpA promotes adhesion and consequently the injury of EPEC strains characterized as typical. Differently, some EPEC strains lack EAF (EPECBfpA-) causing lesions shaped as pedestal, but more slowly, called atypical EPEC. BfpA is known as immunogenic and recently the incidence of atypical (EPECBfpA-) is increasing, it is believed that these bacteria injury occurs through other means making it important to develop strategies for identifying. In this study several predicted peptide…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Mariúba, Luis André Morais, 75852055204, http://lattes.cnpq.br/4784959431673419, [email protected].

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Uma complexa sequ?ncia de eventos ? iniciada durante o processo de invas?o na Shigellose. A Shigella spp ? um bacilo pertencente ? fam?lia das enterobact?rias cuja estrat?gia de virul?ncia est? relacionada ? invas?o epitelial e escape do sistema de defesa do hospedeiro. Em modelo in vivo, uma das metodologias utilizadas ? a infec??o pulmonar em murino, que apresenta boa caracteriza??o para estudo do comportamento da Shigella durante a coloniza??o de c?lula epitelial. Justificativa: O conhecimento do comportamento de amostras cl?nicas de Shigella selvagens da regi?o amaz?nica com seus diferentes perfis de virul?ncia e o efeito destes in vivo em modelo animal murino ? in?dito. Objetivo: Foi realizada a avalia??o dos fatores de virul?ncia expressos durante a infec??o por cepas de Shigella spp da bacterioteca da Fiocruz em modelo murino. Material e M?todos: Foram realizados ensaios de PCR em tempo real para express?o g?nica de 18 fatores de virul?ncia com sete amostras de Shigella spp oriundas de um estudo realizado com 1500 crian?as nos anos de 2007 a 2009 dos Hospitais P?blicos de Manaus - Amazonas. Ocorreu a infec??o intranasal com as cepas selvagens de Shigella em camundongos Balb/c para avalia??o in vivo. A an?lise estat?stica foi submetida no t-Teste de Student para verificar a signific?ncia com p ? 0,05. Resultados: O estudo mostrou que os efetores IpaA, IpaB, IpaC e IpaD foram expressos positivamente nas sete amostras cl?nicas de Shigella. Os genes reguladores VirF e VirB foram expressos negativamente nas amostras testadas. Conclus?o: O modelo de infec??o baseado na inocula??o intranasal em camundongos BALB/c ? pratic?vel. O quadro cl?nico patog?nico em Balb/c evidenciou a ocorr?ncia do processo infeccioso. A PCR em tempo real permitiu caracterizar as estrat?gias de virul?ncia de cepas de Shigella . No per?odo de 48h de infec??o houve express?o positiva nas amostras cl?nicas dos genes do SST3 IpaA, IpaB, IpaC e IpaD e regulador VirA, e negativa de seus reguladores VirF e VirB, sugerindo que este panorama reflete os genes de virul?ncia expressos durante a segunda fase da infec??o por Shigella , mantida pela propaga??o c?lula-a-c?lula, na suas fases iniciais.

A complex sequence of events is initiated during the Shigellose invasion process. Shigella spp is a bacillus belonging to the enterobacteria family whose virulence strategy is related to epithelial invasion and escape from the host defense system. At in vivo model, one of the methodologies used is murine pulmonary infection, which presents a good characterization to study the behavior of Shigella during epithelial cell colonization. Rationale: The knowledge of the behavior of wild Shigella clinical samples from the Amazon region carring different virulence profiles and the effect of these in vivo in a murine animal model is unprecedented. Objective: The evaluation of the virulence factors expressed during infection by strains of Shigella spp from the Fiocruz bacterial library in a murine model was performed. Material and Methods: Real-time PCR for gene…

Advisors/Committee Members: Orlandi, Patr?cia Puccinelli, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Matos, Najla Benevides, http://lattes.cnpq.br/4963470094090382, Souza, Jo?o Vicente Braga de, [email protected].

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As gastrenterites humanas est?o entre as doen?as de maior impacto na sa?de p?blica ao n?vel mundial. S?o diversos os agentes etiol?gicos causadores da diarreia, merecendo destaque o rotav?rus, pat?geno viral proeminente na g?nese de gastrenterite aguda grave na inf?ncia, sendo respons?vel por mais de 200 mil mortes de crian?as em todo o mundo. O rotav?rus ? constitu?do por um genoma de 11 segmentos de RNA dupla fita que codificam 6 prote?nas estruturais (VPs) e 6 prote?nas n?o-estruturais (NSPs). A atual classifica??o dos rotav?rus tem base na caracteriza??o g?nica dos 11 segmentos virais para a identifica??o de seus respectivos gen?tipos, designados em conjunto como gen?tipos de constela??o. A vigil?ncia epidemiol?gica que inclui a caracteriza??o molecular ? uma importante ferramenta para o estudo da din?mica de varia??es das cepas diante de fatores evolutivos como a implementa??o da vacina Rotarix (GlaxoSmithKline), introduzida no Brasil desde 2006. A finalidade deste estudo foi realizar an?lises epidemiol?gicas, detec??o e caracteriza??o de genes de rotav?rus que infectaram crian?as com at? 10 anos de idade, atendidas em hospitais p?blicos de Manaus entre os anos de 2007 e 2008. Foram coletadas 1337 amostras diarreicas. Observou-se um percentual de 5,4 % de positividade para rotav?rus. Foram identificados os gen?tipos virais atrav?s das rea??es em cadeia pela polimerase precedida da transcri??o reversa. O gen?tipo G2P[4] foi encontrado em 93% dos casos, seguido do G[NT-n?o tipado]P4 em 6% e G2P[9] em 1% das amostras. Dentre as 73 amostras detectadas nesta pesquisa, 58 eram eleg?veis ? atual vacina. As an?lises filogen?ticas revelaram um padr?o de agrupamento das sequ?ncias g?nicas em clusters que apresentaram similaridade com amostras provenientes de Bel?m (Brasil) e da China.

The human gastroenteritis are among the diseases of greatest public health impact worldwide. There are several etiologic agents of diarrhea, with emphasis rotavirus, viral pathogen prominently in the genesis of severe acute gastroenteritis in childhood, accounting for over 450,000 deaths in children worldwide. The rotavirus genome consists of a 11 segment of double stranded RNA encoding six structural proteins (VPs) and five nonstructural proteins (NSPs). Classification of rotavirus serotypes and genotypes is based on the epitopes of the glycoprotein VP7 neutralized, called G, and VP4 protease-sensitive protein called P, which generates a binary classification scheme G and P. Epidemiological studies of molecular characterization of genes encoding for proteins of rotavirus are essential for assessing the effectiveness of the vaccine Rotarix (GlaxoSmithKline), introduced in Brazil since 2006, in addition to assessing the possible emergence of new viral genotypes. The aim of this study was to identify and characterize genes of rotavirus in feces of children with diarrhea in Manaus between the years 2007 and 2008. 1337 samples were collected from diarrheal children under 10 years old in the city of Manaus,…

Advisors/Committee Members: Orlandi, Patr?cia Puccinelli, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Soares, Leidiane Amorim, 71114688215, http://lattes.cnpq.br/4102934680517945, [email protected].

▼ O Streptococcus agalactiae ou Streptococcus β-hemolítico do grupo B de Lancefield é responsável pela ocorrência de abortamento, infecção urinária, prematuridade, corioamnionite, endometrite puerperal e sepse neonatal precoce com uma alta mortalidade, principalmente entre prematuros. A taxa de colonização materna, a incidência de complicações perinatais causadas pelo EGB, a inquestionável eficácia da intervenção e a escassez de trabalhos nacionais que revele a realidade brasileira, justificam a realização de estudos que possam gerar e ampliar conhecimentos. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi de investigar a colonização por Estreptococo do grupo B (EGB) de gestantes que utilizaram o serviço de pré-natal da Maternidade Estadual Balbina Mestrinho, Manaus/AM, unidade de atendimento as grávidas de baixo risco obstétrico e de referência para alto risco obstétrico. Para tanto, foram estudadas 174 gestantes que se encontravam entre a 35ª e 37ª semanas de gestação, confirmadas pela ultrassonografia e/ou pela data da última menstruação, atendidas no período compreendido de abril a novembro de 2012. Durante a consulta de pré natal foram colhidas as informações demográficas, socioeconômicos, história obstétrica pregressa e atividade sexual, assim como, dados da gestação atual e coletadas amostras clínicas vaginais e anorretais para a realização de exames bacteriológicos e moleculares. Nos exames bacteriológicos foi realizado o cultivo, que no caso de positividade para o estreptococo foi submetido à identificação taxonômica. As amostras clínicas com os isolados de estreptococos foram submetidas às análises de detecção de DNA por técnica de PCR. Para fins de análise dos resultados, conforme os objetivos propostos, a colonização pelo EGB foi determinada quando um ou mais dos métodos diagnósticos (cultivo, ou PCR “in house”) em qualquer das amostras coletadas (vaginal e anorretal), proporcionou uma positividade para o EGB. Para análise das variáveis quantitativas, foram calculados os percentuais de ocorrência dos eventos. Para as analises de sensibilidade e especificidade dos métodos diagnósticos, assim como seus valores preditivos positivos e negativos, foram utilizadas tabelas de contingência do tipo 2x2. Também foram calculados os respectivos Intervalos de Confiança ao nível de 95% (IC95%) e na comparação das proporções foi utilizado o teste do Chi Quadrado (X2) de Pearson, sendo que na impossibilidade da aplicação do mesmo, foi utilizado o teste exato de Fisher. Entre aos resultados obtidos destaca-se uma taxa de colonização de 51,02% pelo cultivo e de 69,39% pela PCR, sendo que essa última forneceu uma ampliação de 18,37%. Pelo método de cultivo a vagina, como local de coleta, mostrou-se mais eficiente que anorretal, apesar de que em 17,33% a colonização ter sido obtida apenas nas amostras anorretal. A caracterização de alto e baixo risco não se traduziu em fator de risco para a colonização, apesar de essa ter sido maior nas gestações de alto risco. Na presente casuística, a… Advisors/Committee Members: José, Julia Ignez do Nascimento Salem, 06403620282, http://lattes.cnpq.br/8677090857739002, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Brock, Mariana Facchinetti, Nogueira, Paulo Afonso.

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O grande aumento da resistência de bactérias, fungos e parasitas aos antimicrobianos convencionais disponíveis vêm se tornando um problema de saúde global gerando um impacto negativo sobre o tratamento destas infecções e com isto gera uma necessidade urgente de novas abordagens terapêuticas. Dentro desse contexto, os estudos com plantas representam prioridade na Amazônia, pela variedade e riqueza de sua flora. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar diversos extratos e frações em diferentes solventes, provenientes de vinte e cinco espécies de plantas amazônicas contra treze cepas de bactérias gram-positivas e vinte quatro Gram-negativas, uma cepa de Candida albicans e uma cepa de Plasmodium falciparum (FCR3). Das vinte cinco espécies de plantas, quinze apresentaram atividades, sendo que onze apresentam atividades frente as bactérias Gram-positivas, nove contra as Gram-negativas, nove apresentaram atividades contra Candida albicans e quatro contra Plasmodium falciparum. Na triagem bacteriana obteve-se resultados mais promissoras para os extratos de Caryocar villosum contra as bactérias Gram-positivas Bacillus liquiniformes, Bacillus subtilis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenis e Gram-negativas Yersinia enterocolítica, Salmonella arizonae, Salmonella choleraesuis, Salmonella typhi e Shigella flexneri. Outras amostras que demostram excelente atividades foram os extratos e frações e isolado composto de Aniba panurensis frente as bactérias Gram-positivas Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Staphylococcus simulans e Streptococcus agalactiae. E as frações em diclorometano dos galhos de Aniba ferrea e Ocotea leucoxylon frente Staphylococcus aureus e Staphylococcus simulans e a fração em acetato de etíla dos galhos de Aniba parviflora frente Staphylococcus simulans. Na triagem da atividade antifúngica, os melhores resultados obtidos, foram para o extrato etanólico das sementes e cascas de Ingá edulis e o extrato hidroalcoólico das sementes de Garcinia madruno e extrato etanólico dos galhos de Ocotea leucoxylon. Na triagem contra Plasmodium falciparum os melhores resultados obtidos foram demostrados nos extratos de Theobroma grandiflorum, Euterpe precatória, Garcinia madruno e Platonia insignis. Os dados aqui relatados são de suma importância, levando em conta a importância médica dos micro-organismos, pois fornecem evidências de que os extratos, frações e isolado possam ser considerados futuros agentes antimicrobianos ou ajudem na ação bactericida de Bacillus liquiniformes, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus resistente a metilicina (MRSA), Streptococcus simulans, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenis, Yersinia enterocolítica, Salmonella arizonae, Salmonella choleraesuis, Salmonella typhi e Shigella flexneri e contra Candida albicans e Plasmodium falciparum.

The great increase of resistance of bacteria, fungi and parasites to conventional antimicrobial available has become a problem of global…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Pieri, Fábio Alessandro, 04804186670, http://lattes.cnpq.br/1622593528670181, Veiga Junior, Valdir Florêncio da, Fernandes, Ormezinda Celeste Cristo.

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A biorremediação é a utilização de microrganismos capazes de metabolizar contaminantes e transforma-los em produtos menos tóxicos. Em estudos anteriores, foi realizado o isolamento de bactérias provenientes de área contaminada por resíduos de petróleo na Amazônia. Apesar de possuírem o potencial de degradação de petróleo, a aplicação de bactérias em ambientes contaminados pode interferir em seu equilíbrio ecológico. Este estudo propôs-se a seleção de uma linhagem bacteriana para promover estudos de caracterização gênica, identificação do potencial de degradação de hidrocarbonetos e definição das proteínas envolvidas no processo de degradação. Para alcançar os objetivos, foram identificadas substâncias degradadas por cromatografia gasosa e proteínas envolvidas por proteômica; A análise do genoma permitiu a caracterização dos genes relacionados a degradação de compostos xenobióticos através da revisão da literatura. A cepa foi identificada como Pseudomonas putida S16. Foram detectadas 51 substâncias por cromatografia gasosa, destas, 23 foram completamente degradadas, incluindo HPAs contendo naftaleno (100%), antraceno (11,49%) e fenantreno (7,41%). Foram identificados 89 genes relacionados a degradação de xenobíoticos no genoma da P. putida S16 AM, genes capazes de degradar naftaleno, antraceno e fenantreno (nah, phn, fdx, catA), produção de citocromo e quimiotaxia. Na análise proteômica, foram expressas proteínas de óxido-redução, processos metabólicos, poliaminas, aldeído desidrogenase, armazenamento de carbono, quimiotaxia e síntese de aminoácidos. Foram identificadas 355 proteínas com redundância expressas durante o contato de 7h da P. putida S16 AM (I4) com o petróleo, e 268 no contato de 75h; Para o glicerol, foram identificadas 467 na interação de 7h, e 228 no contato de 75h. A presença de proteínas relacionadas ao metabolismo e óxidoredução quando a cepa em estudo esteve em contato com o petróleo evidenciam a utilização deste como fonte de carbono para o metabolismo bacteriano. Estes estudos são importantes devido à identificação de genes e proteínas que possuem o potencial de se tornarem produtos biotecnológicos de aplicação prática.

Bioremediation is the use of microorganisms capable of metabolizing contaminants and converts them into less toxic products. In previous studies, we performed bacteria isolation from contaminated area for oil waste in Amazon. Despite its oil degradation potential, the application of bacteria in contaminated sites may interfere with their ecological balance. This study aimed to promote studies of gene characterization and hydrocarbon degradation potential with a selected bacterial strain and identify and define the proteins involved in degradation process. To achieve this objectives degraded substances have been identified by gas chromatography and proteins involved by proteomics; Genome analysis allowed characterization of genes related to xenobiotics degradation. The strain was identified as Pseudomonas putida S16. 51 substances were detected…

Advisors/Committee Members: Orlandi, Patrícia Puccinelli, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Pereira, José Odair, http://lattes.cnpq.br/5559640659851194, Batista, Ieda Hortêncio, Teixeira, Ana Frazão, Chapeaurouge, Donat Alexander de, Lozano, Jorge Luis López, [email protected].

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Introdu??o: Uma complexa sequ?ncia de eventos ? iniciada durante o processo de invas?o na Shigellose. A Shigella spp ? um bacilo pertencente ? fam?lia das enterobact?rias cuja estrat?gia de virul?ncia est? relacionada ? invas?o epitelial e escape do sistema de defesa do hospedeiro. Em modelo in vivo, uma das metodologias utilizadas ? a infec??o pulmonar em murino, que apresenta boa caracteriza??o para estudo do comportamento da Shigella durante a coloniza??o de c?lula epitelial. Justificativa: O conhecimento do comportamento de amostras cl?nicas de Shigella selvagens da regi?o amaz?nica com seus diferentes perfis de virul?ncia e o efeito destes in vivo em modelo animal murino ? in?dito. Objetivo: Foi realizada a avalia??o dos fatores de virul?ncia expressos durante a infec??o por cepas de Shigella spp da bacterioteca da Fiocruz em modelo murino. Material e M?todos: Foram realizados ensaios de PCR em tempo real para express?o g?nica de 18 fatores de virul?ncia com sete amostras de Shigella spp oriundas de um estudo realizado com 1500 crian?as nos anos de 2007 a 2009 dos Hospitais P?blicos de Manaus - Amazonas. Ocorreu a infec??o intranasal com as cepas selvagens de Shigella em camundongos Balb/c para avalia??o in vivo. A an?lise estat?stica foi submetida no t-Teste de Student para verificar a signific?ncia com p ? 0,05. Resultados: O estudo mostrou que os efetores IpaA, IpaB, IpaC e IpaD foram expressos positivamente nas sete amostras cl?nicas de Shigella. Os genes reguladores VirF e VirB foram expressos negativamente nas amostras testadas. Conclus?o: O modelo de infec??o baseado na inocula??o intranasal em camundongos BALB/c ? pratic?vel. O quadro cl?nico patog?nico em Balb/c evidenciou a ocorr?ncia do processo infeccioso. A PCR em tempo real permitiu caracterizar as estrat?gias de virul?ncia de cepas de Shigella . No per?odo de 48h de infec??o houve express?o positiva nas amostras cl?nicas dos genes do SST3 IpaA, IpaB, IpaC e IpaD e regulador VirA, e negativa de seus reguladores VirF e VirB, sugerindo que este panorama reflete os genes de virul?ncia expressos durante a segunda fase da infec??o por Shigella , mantida pela propaga??o c?lula-a-c?lula, na suas fases iniciais.

Introduction: A complex sequence of events is initiated during the Shigellose invasion process. Shigella spp is a bacillus belonging to the enterobacteria family whose virulence strategy is related to epithelial invasion and escape from the host defense system. At in vivo model, one of the methodologies used is murine pulmonary infection, which presents a good characterization to study the behavior of Shigella during epithelial cell colonization. Rationale: The knowledge of the behavior of wild Shigella clinical samples from the Amazon region carring different virulence profiles and the effect of these in vivo in a murine animal model is unprecedented. Objective: The evaluation of the virulence factors expressed during infection by strains of Shigella spp from the Fiocruz bacterial library in a murine model was performed. Material and Methods:…

Advisors/Committee Members: Nogueira, Patr?cia Puccinelli Orlandi, 03478565863, http://lattes.cnpq.br/1887686774621627, Matos, Najla Benevides, http://lattes.cnpq.br/4963470094090382, Souza, Jo?o Vicente Braga de, http://lattes.cnpq.br/7804981785557071, [email protected].