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O objetivo deste estudo foi de verificar o tipo de receptor da angiotensina II (AngII) envolvido na maturação nuclear de oócitos bovinos e a possível participação da bradicinina (BK) como mediadora da AngII nesse processo. O primeiro experimento foi conduzido para analisar o tipo de receptor, para isso os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram cultivados por 7 ou 12h na presença de hemiseções foliculares e AngII (10-11M), com ou sem os antagonistas losartan (10-6M; seletivo para receptores AT1), PD123319 (10-6M; seletivo para receptores AT2) ou saralasina (10-7M; antagonista AT1 e AT2). Adicionalmente, foram utilizados dois grupos controle, onde os oócitos foram cultivados na ausência ou na presença de hemiseções foliculares (controle positivo e negativo, respectivamente). Oócitos cultivados por 7h em presença de AngII atingiram 70,4% de rompimento da vesícula germinativa (RVG). Quando o losartan foi adicionado ao meio de cultivo com AngII, não houve diferença na percentagem de oócitos em RVG (73,2%), porém, quando os CCOs foram incubados na presença de AngII + PD123319, houve queda significativa na maturação nuclear (52,1%; P<0,05). O cultivo dos oócitos por um período maior (12h) não causou diferença significativa em relação a esses tratamentos quando foram realizados às 7h (P<0,05). Esses dados indicam que os receptores AT2 mediam as ações da AngII na maturação nuclear em bovinos. Em um segundo experimento, foi verificado o efeito de diferentes concentrações de PD123319 na maturação nuclear dos oócitos na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares. O cultivo foi realizado por 7h em um delineamento similar ao do experimento anterior e verificou-se que a inibição induzida pelo antagonista ocorreu de maneira dosedependente e há relação linear entre concentração de PD e índices de RVG obtidos (P=0,0306). Para verificar a participação da BK no mecanismo de ação dos receptores AT2, os oócitos foram cultivados na presença de AngII (10-11M) e hemiseções foliculares com ou sem Hoe-140 (antagonista de receptores B2 da BK) em diferentes concentrações (10-6, 10-7, 10-8 e 10-9M) por 7h. Nesse experimento, não houve diferença nos índices de oócitos que atingiram RVG entre os grupos tratados com o antagonista e o grupo AngII (P>0,05). Esses dados permitem inferir que a AngII atua na maturação nuclear dos oócitos bovinos ativando os receptores AT2 e que a via BK/receptor B2 não está envolvida nesse processo.

The aim of this study was to verify the type of angiotensin II (AngII) receptor involved in nuclear maturation of bovine oocytes and the possible participation of bradykinin (BK) as a mediator of AngII in this process. The first experiment was conducted to analyze the type of AngII receptor, for this cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 7 or 12h in the presence of follicular hemisections and AngII (10-11M), with or without the antagonists losartan (10-6M; selective for AT1 receptor), PD123319 (10-6M; selective for AT2 receptor) or saralasin (10-7M; AT1 and AT2 antagonist). Additionally, two control…

Advisors/Committee Members: Katia Padilha Barreto, Juliano Ferreira, José Ricardo de Figueiredo.

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Trabalhos realizados em nosso laboratório, demonstraram que a administração sistêmica do pirazoltiazol 2-[5-triclorometil-5-hidroxi-3-fenil-4,5-dihidro-1h-pirazol-1-il] 4-(4 bromofenil)- 5 metiltiazol (B50) provocou antinocicepção no teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético 0,8%. Porém, não se sabe se a ação antinociceptiva do B50 é central ou periférica. Nesse estudo, nós investigamos o efeito antinociceptivo da administração intratecal do composto B50 em camundongos adultos machos, usando os testes de contorções abdominais induzidos por ácido acético e o teste da placa quente a 50 C. O B50 (200 nmol/5 μl, i.t.) causou antinocicepção 120 minutos depois de sua administração no teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético e 90 minutos depois de sua administração no teste da placa quente. A Naloxona (8,25 μmol/kg, s.c.) reverteu a ação antinociceptiva do B50 (200 nmol/5 μl, i.t.) no teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético, sugerindo que mecanismos opióides estão envolvidos na antinocicepção causada pelo B50. Este pirazol-tiazol não alterou a locomoção espontânea e nem a performance dos animais no cilindro giratório, indicando que o efeito antinociceptivo do B50 não é relacionado a efeitos motores inespecíficos.

Pain is a common symptom in the clinical practice. Therefore, novel analgesic drugs, with more favorable pharmacological properties have been searched. Previous studies from our group showed that the systemic administration of the 2-[5-triclorometyl-5-hidroxy-3-phenyl-4,5-dihydro-1H-pyrazole-1-yl]-4-(4-bromophenyl)-5-metyl-thiazole(B50) causes antinociception in the acetic acid writhing test. However, it is not know whether such an antinociceptive action involves central or peripheral mechanisms. In this study we investigated the antinociceptive effect of the intrathecal administration of the new pyrazole derivative 2-[5-triclorometyl-5-hidroxy-3-phenyl-4,5-dihydro-1H-pyrazole-1-yl]-4-(4- bromophenyl)-5-metyl-thiazole (B50) in adult male mice, using the acetic acid writhing induced by acetic acid and hot-plate tests, in order to determine its putative site of action. B50 caused antinociception (200 nmol/ 5 μl, i.t.), 120 minutes after its administration, in the acetic acid writhing assay and 90 minutes after its administration in the hot plate test. Naloxone (8.25 μmol/kg, s.c.) reverted the antinociceptive action of B50 (200 nmol/ 5 μl, i.t.) in the acetic acid writhing assay, suggesting that opioid mechanisms are involved in the antinociception caused by B50. B50 had no effect on spontaneous locomotion or rotarod performance, indicating that the currently reported antinociceptive effect of B50 is not related to unspecific motor effects.

Advisors/Committee Members: Katia Padilha Barreto, Nilo Zanatta, Maribel Antonello Rubin.

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The aim of the present study was to examine the role of oxytocin (OT) on the control of oocyte meiotic resumption in the events that involves progesterone (P4) and prostaglandins (PGs). Oocytes were co-cultured with follicular hemisections for 15 h to determine the effect of different doses of OT or atosiban (ATO; oxytocin receptor antagonist) on the oocyte meiotic resumption. In another experiment, we examine the effect of P4, OT and PGs interaction on the regulatory cascade of the induction of oocyte meiotic resumption. Oxytocin in the concentration of 1 μM was effective in inducing the resumption of meiosis of oocytes co-cultured with follicular cells (84.0%), not differing statistically from the positive control group (74.4%). Similarly, atosiban inhibited the positive effect of OT on meiotic resumption in a dose-dependent manner, in which the metaphase I (MI) rate was only 27.6% in the presence of 10 μM ATO, not differing from the negative control group (25.5%). The possible toxic effect of ATO was tested in a 15 or 24 h-cumulus-oocyte complex culture system. In the third experiment, we demonstrated that P4 was able to induce the oocyte meiotic resumption, which was inhibited by ATO. However, the positive effect of OT was not blocked by mifepristone (P4 antagonist) but was inhibited by indometacine (a non-selective PTGS2 inhibitor). Collectively, these results evidenced that P4 is upstream to OT and PGs are required for the positive effect of OT to induce oocyte meiotic resumption. In conclusion, our results evince that together with Ang II, already proved by our group as involved in oocyte meiotic resumption, P4, OT and PGs are sequential steps in the hormonal cascade that culminates with resumption of meiosis in cattle.

O objetivo do presente estudo foi examinar o papel da ocitocina (OT) no controle da retomada meiótica de oócitos bovinos, além da interação desse peptídeo com a progesterona (P4) e prostaglandinas (PGs) neste evento fisiológico. Nesse estudo, verificamos a interação da P4, OT e PGs na cascata de indução de retomada meiótica do oócito. Oócitos foram co-cultivados com metades foliculares por 15 h para determinar o efeito de diferentes doses de OT ou atosiban (ATO; antagonista do receptor de ocitocina) no reinício da maturação meiótica A OT na concentração de 1 μM foi eficaz em induzir a retomada da meiose de oócitos co-cultivados com células foliculares (84,0%), não diferindo estatisticamente do grupo controle positivo (74,4%). O ATO inibiu o efeito positivo da OT sobre o reinício da meiose de uma forma dose-dependente onde a porcentagem de oócitos que atingiu o estádio de metáfase I (MI), foi apenas 27,6% na presença de 10 μM de ATO, não diferindo do grupo controle negativo (25,5%). Para confirmar que este efeito não era resultante de toxicidade ocasionada pelo ATO, foi realizado um experimento onde o efeito tóxico do ATO foi testado em um cultivo durante 15 e 24 horas, e foi possível observar que ele não apresenta efeitos tóxicos aos oócitos em cultivo, permitindo a…

Advisors/Committee Members: Rogério Ferreira, Katia Padilha Barreto, Paulo Bayard Dias Goncalves.

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As poliaminas, putrescina, espermidina e espermina estão presentes em altas concentrações no sistema nervoso central e, por sua natureza policatiônica, podem interagir com sítios aniônicos de macromoléculas (ácidos nucléicos e proteínas) e modulam o aprendizado e a memória interagindo com o sítio de ligação das poliaminas no receptor N-metil-D-apartato. Neste estudo nós investigamos os efeitos da administração sistêmica de espermidina e arcaína sobre a memória da tarefa de esquiva inibitória em ratos. Também foi determinado se os efeitos da espermidina e arcaína envolvem dependência de estado. Os animais foram treinados em um aparelho de esquiva inibitória (0,4 mA, 3 seg) e testados no mesmo aparelho, 24 horas depois. A administração imediatamente após o treino de espermidina (50 mg/kg, i.p.) melhorou, enquanto que arcaína (10 e 30 mg/kg, i.p.) prejudicou a latência de descida da plataforma no teste da esquiva inibitória. A administração de espermidina (50 mg/kg, i.p.) 15 minutos antes do teste não afetou a performance dos ratos que foram injetados com espermidina (50 mg/kg, i.p.) ou veículo imediatamente após o treino. Entretanto, a administração de arcaína (30 mg/kg, i.p.) 15 minutos antes do teste reverteu o prejuízo da memória causado pela administração de arcaína (30 mg/kg, i.p.) imediatamente após o treino. A administração de arcaína (30 mg/kg, i.p.) ou MK-801 (0,03 mg/kg, i.p.) antes do teste reverteu parcialmente o prejuízo da memória causado pela administração de arcaína (30 mg/kg) ou MK-801 (0,03 mg/kg) imediatamente após o treino, caracterizando dependência de estado cruzada. Estes resultados sugerem que a melhora da memória causada pela administração de espermidina imediatamente após o treino não é devido à dependência de estado. Em contraste, o prejuízo da memória induzido pela arcaína é devido a uma dependência de estado. A dependência de estado cruzada entre arcaína e MK-801. sugere que a dependência de estado induzida pela arcaína envolve a hipofunção do receptor NMDA.

The polyamines, putrescine, spermidine and spermine, are present in high concentrations in the central nervous system and, because of their policationic nature, they can interact with diverse cellular anionic targets (nucleic acids and proteins) and modulate the learning and memory by interacting with the polyamine binding site at N-methyl-D-aspartate receptor. In this study we investigated the effects of the systemic administration of spermidine and arcaine on the memory of the inhibitory avoidance task in rats. It was also determined whether the effects of the spermidine and arcaine involve state dependence. The animals were trained in an inhibitory avoidance apparatus (0.4 mA, 3s) and tested in the same apparatus 24 hours later. Immediate post-training administration of spermidine (50 mg/kg, i.p.) improved, while arcaine (10 and 30 mg/kg, i.p.) impaired step-down latencies in the inhibitory avoidance test. Administration of spermidine (50 mg/kg, i.p.) 15 minutes before testing did not alter the performance of rats which were…

Advisors/Committee Members: Marino Muxfeldt Bianchin, Katia Padilha Barreto, Maribel Antonello Rubin.

▼ Este trabalho teve como objetivos verificar os efeitos da adição de Ca2+ na ração e na água na sobrevivência e crescimento de juvenis de jundiá (Rhamdia quelen) submetidos a diferentes níveis de amônia e oxigênio dissolvido. No experimento para verificar a eficácia da adição de Ca2+ na ração sobre a concentração letal 96h (CL50-96h) da amônia (NH3) os juvenis (4.060.27g e 7.821.2cm) foram expostos a cinco níveis de NH3 (em mg/L): 0,1070,007 (controle); 0,3600,021; 0,7730,074; 1,1700,071 e 1,6300,315 e quatro níveis de Ca2+ na dieta (em % Ca2+): 0,45; 0,95; 1,45 e 2,45. Para verificar a eficácia do Ca2+ na água sobre a CL50-96h da NH3 , os juvenis (1,850,6g e 6,00,54cm) foram mantidos em cinco níveis de NH3 (mg/L): 0,0970,017 (controle); 0,3560,037; 0,7790,141; 1,4590,185 e 1,7700,070 e quatro níveis de dureza (em mg CaCO3/L): 34,54,4; 62,05,7; 116,09,3 e 174,022,42. No experimento para avaliar a eficácia da adição de Ca2+ na ração sobre a CL50-96h do O2, os juvenis (4,750,65g e 7,560,61cm) foram expostos a cinco níveis de O2 (em mg/L): (0,410,13; 0,710,15; 0,970,13; 1,440,35 e 6,410,60 mg/L) e quatro níveis de Ca2+ na dieta (em % Ca2+): 0,45; 0,95; 1,45 e 2,45. Para verificar a eficácia do Ca2+ na água sobre a CL50-96h do O2, os juvenis (3,660,75g e 7,20,5cm) foram mantidos em cinco níveis de O2 (mg/L): 0,270,10; 0,740,26; 1,330,14; 1,740,32 e 6,550,02 mg.L-1) e quatro níveis de dureza (em mg CaCO3/L): (28, 116, 116 e 180). Para verificar a influência do Ca2+ na água sobre a sobrevivência e o crescimento, os juvenis (2,270,14g e 6,9cm) foram mantidos em dois níveis de NH3 (mg/L), 0,0210,001 e 0,6230,039, e quatro níveis de dureza na água (mg CaCO3/L): 32,14,6; 63,15,9; 119,910,0 e 177,38,1 por 40 dias. No segundo experimento de crescimento, os juvenis (3,660,75g e 7,320,5cm) foram mantidos dois níveis de O2 (1,470,04 e 6,460,06 mg/L), e quatro níveis de dureza na água (mg CaCO3/L): 302,0; 612,5; 1213,0 e 1803,0 por 15 dias. A CL50-96h para NH3 foi de 0,73 mg.L-1 (CI 0,63 0,84) no experimento com Ca2+ na dieta, com uma diferença significativa nos juvenis alimentados com 0,45 e 0,95% de Ca2+ na dieta. A dureza na água não influenciou a LC50-96h NH3, que foi de 1,20 mg/L (CI 1,10 - 1,24). No experimento para avaliar a influência dos níveis de NH3 no crescimento, o ganho de peso, biomassa e taxa de crescimento específico foram significativamente maiores nos juvenis expostos ao nível mais baixo de NH3 , do que naqueles mantidos no nível mais alto de NH3. Nesse experimento o aumento da dureza prejudicou os juvenis expostos ao nível mais baixo de NH3, mas o aumento beneficiou os juvenis mantidos no nível mais alto de NH3 em todos os parâmetros avaliados. A CL50-96h para o O2 foi de 0.89 mg/L (CI 0,64 1,34 mg/L) no experimento com Ca2+ na dieta e foi maior nos juvenis alimentados com 2.45 e 0.45% de Ca2+ na dieta. O ganho de peso, a biomassa, o comprimento e a taxa de crescimento específico foram significativamente maiores nos juvenis mantidos nas concentrações de 1,470,04 mg/L O2 do que os expostos a 6,460,06 mg/L O2. O… Advisors/Committee Members: Paulo Alberto Lovatto, Bernardo Baldisserotto, Joao Radünz Neto, Katia Padilha Barreto.

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O objetivo do presente trabalho foi caracterizar as proteínas Grb10 e Grb14 em complexos cumulus-oócito (CCOs) de bovinos oriundos de folículos em diferentes fases de desenvolvimento e mostrar o envolvimento do estradiol na regulação da expressão de RNAm. Primeiramente, foram obtidos pool de CCOs de folículos de 3-8mm para verificar a expressão de RNAm para Grb10 e Grb14 no oócito desnudo e nas células do cumulus. Tanto o oócito quanto as células do cumulus expressaram RNAm para as proteínas em estudo. Com o intuito de caracterizar o modelo experimental utilizado, foi verificado que a competência à progressão meiótica se da em oócitos oriundos de folículos com diâmetro >2mm (P<0,01) e aumenta ao longo do desenvolvimento folicular, já que, oócitos oriundos de folículos de 1-3 e 4-6mm apresentam taxas de maturação inferiores aos oócitos oriundos de folículos de 6-8 e >8mm (P<0,05). O primeiro experimento foi delineado com o intuito de demonstrar uma expressão diferencial de mRNA para as proteínas Grb10 e Grb14 ao longo do desenvolvimento folicular. Para isso os grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) foram submetidos a extração RNA e transcrição reversa. A expressão relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Nesse experimento foi verificado que a expressão do gene Grb10 em CCOs esteve elevada nos grupos 1-3 e 4-6mm, diminuindo nos grupos 6-8 e >8mm (P<0,05). Já a expressão de mRNA de Grb14 esteve alta no grupo 1-3, diminuindo (P<0,05) conforme o aumento do tamanho folicular. Além disso, foi realizada a localização da proteína Grb10 pela técnica de imunofluorescência. A proteína Grb10 foi localizada tanto no oócito como no cumulus dos grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) porém a localização foi mais evidente em CCOs oriundos de folículos com diâmetro <6mm. Com o intuito de identificar uma influência hormonal na regulação da expressão de Grb10 e Grb14, foi realizado um terceiro experimento no qual CCOs oriundos de folículos de 3-8mm foram co-cultivados com metades foliculares em meio suplementado com estradiol-17β e/ou fulvestrant (antagonista do estradiol) durante 6h. A expressão de RNAm não apresentou diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05). Com base nesses resultados pode-se concluir que há expressão de RNAm para Grb10 e Grb14 bem como localização da proteína Grb10 em CCOs de bovinos, e que a expressão diferencial de RNAm sugere um envolvimento desses genes na aquisição de competência oocitária ao longo do desenvolvimento folicular. Portanto novos estudos precisam ser feitos para entender um mecanismo de regulação na expressão de RNAm.

The aim of this study was to characterize the Grb10 and Grb14 mRNA and protein expression in COCs derived from follicles of different stages of development (1-3, 4-6, 6-8 and >8mm in diameter) and determinate the involvement of the estradiol in the Grb10 and/or Grb14 mRNA expression. Firstly, a pool of the 80 COCs from follicles at 3 to 8mm was used to demonstrate Grb14 and Grb10 mRNA expression in denuded oocytes and respective cumulus cells. The…

Advisors/Committee Members: Katia Padilha Barreto, Paulo Bayard Dias Goncalves, Rafael Gianella Mondadori.

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The peptide bradykinin is one of the most potent algogenic substances and its role in nociception has been intensively studied in the peripheral nervous system. However, its action in pain transmission in central nervous system remains unclear. In this work, we studied the action of this peptide into amygdala, a limbic structure highly involved on pain modulation, in the thermal noxious threshold of rats. Administration of bradykinin (0.025-0.5 nmol/site) into right amygdala of rats promoted a thermal hyperalgesia, verified by a reduction in paw withdrawal latency produced by noxious heat, only in the ipsilateral paw. The hyperalgesic effect of bradykinin (0.25 nmol/site) was not due to an unspecific effect on locomotor activity, visualized on open-field test. The hyperalgesia induced by intra-amygdala injection of bradykinin (0.25 nmol/site) was abolished by co-administration of this peptide with the B2 receptor antagonist Hoe 140 (5 pmol/site), but not by its co-administration with the B1 receptor antagonist des- Arg9-[Leu8]-bradykinin (0.05 nmol/site). This hyperalgesic effect was also inhibited by co-administration of bradykinin (0.25 nmol/site) with the glutamatergic NMDA antagonist MK-801 (5 nmol/site), with the cyclooxygenase inhibitor indomethacin (10 nmol/site) or with the glial metabolic inhibitor fluorocitrate (1 nmol/site) into amygdala of the rats. The results showed that intra-amygdalar administration of bradykinin induces pain sensitization through the release of cyclooxygenase products and the activation of NMDA and B2 receptors present in amygdalas neurones and glia. These findings provide evidence that bradykinin participates of the central pain-modulating circuit.

O peptídeo bradicinina está entre as mais potentes substâncias algogênicas, e seu papel na nocicepção tem sido intensamente estudado no sistema periférico. No entanto, sua participação na transmissão da dor no sistema nervoso central permanece obscura. Neste trabalho avaliou-se a ação desse peptídeo na amígdala, uma estrutura límbica que está amplamente envolvida na modulação da dor, através de um modelo de dor por estimulação térmica. A administração de bradicinina (0,025- 0,5 nmol/sítio) na amígdala direita de ratos promoveu hiperalgesia térmica, verificada como uma redução na latência do reflexo de retirada da pata causado por estimulação térmica nociva, apenas na pata ipsilateral á amígdala injetada. O efeito hiperalgésico da bradicinina (0,25 nmol/sítio) não foi mediado por alteração na atividade locomotora dos animais, avaliada no teste do campo aberto. A hiperalgesia produzida pela injeção intra-amígdalar de bradicinina (0,25 nmol/sítio) foi abolida pela sua co-administração com o antagonista do receptor B2, Hoe 140 (5 pmol/sítio), mas não pela sua coadministração com o antagonista do receptor B1 , des-Arg9-[Leu8]-bradicinina (0,05 nmol/sítio). Esse efeito hiperalgésico também foi inibido pela co-administração de bradicinina (0,25 nmol/sítio) com o antagonista do receptor glutamatérgico do tipo NMDA, MK-801 (5 nmol/sítio), com o…

Advisors/Committee Members: Katia Padilha Barreto, Juliano Ferreira, Adair Roberto Soares dos Santos.

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A depressão e a dor coexistem em muitos pacientes e podem ser moduladas pelos mesmos sistemas de neurotransmissores. Nesse contexto, diversos estudos têm demonstrado que antidepressivos da classe dos inibidores da enzima monoamina oxidase-A (MAO-A) apresentam efeito antinociceptivo em diferentes modelos de dor em animais experimentais, assim como ação analgésica em estudos clínicos. Em vista disso, no presente estudo foram avaliadas as propriedades inibitórias sobre a atividade da MAO-A, assim como os potenciais antidepressivo e antinociceptivo do novo composto imidazolínico 2-(3,4-dimetoxi-fenil)-4,5-diidro-1H-imidazol (2-DMPI) em camundongos. Foi observado que o 2-DMPI é um inibidor misto, reversível e preferencial da MAO-A. O tratamento com 2-DMPI (100-1000 μmol/kg, s.c.) produziu um efeito tipo-antidepressivo no teste de suspensão da cauda, sem afetar a atividade motora dos animais. Os camundongos tratados com 2-DMPI (300 μmol/kg, s.c.) apresentaram uma diminuição na taxa de renovação da serotonina e da dopamina em regiões cerebrais específicas, sugerindo que o efeito tipo-antidepressivo desse composto foi mediado pelos sistemas serotoninérgico e dopaminérgico. Isto foi confirmado por experimentos que mostraram que o efeito tipo-antidepressivo do 2-DMPI foi abolido pelo pré-tratamento com antagonistas de receptores serotoninérgicos e dopaminérgicos. A fim de avaliar um possível efeito antinociceptivo do 2-DMPI, foi utilizado um modelo de dor neuropática, induzida pela injúria por constrição crônica (CCI) do nervo ciático, em camundongos. Observou-se que os camundongos submetidos à CCI apresentaram um aumento na atividade da MAO-A na medula espinhal lombar comparado com os animais falso-operados e que o tratamento com 2-DMPI (30-300 μmol/kg, s.c.) reverteu a hiperalgesia mecânica induzida pela CCI. Além disso, o efeito antinociceptivo do 2-DMPI foi revertido pela administração intratecal do antagonista do receptor serotoninérgico 5-HT3, ondansetrona (10 μg/sítio). Esses resultados sugerem que o 2-DMPI, devido à sua capacidade de modular a atividade da MAO-A e, consequentemente, os sistemas monoaminérgicos, parece ser um protótipo promissor para o desenvolvimento de novos fármacos com propriedades antidepressiva e analgésica.

Depression and chronic pain coexist in several patients and may be modulated by the same neurotransmitter systems. In this context, various studies have demonstrated that antidepressants from the class of the inhibitors of monoamine oxidase-A (MAO-A) enzyme presented antinociceptive effect in different pain models in experimental animals, as well as analgesic action in clinic studies. Thus, in the present study were evaluated the MAO-A inhibitory properties, as well as the antidepressant and antinociceptive potential of the novel imidazoline compound 2-(3,4-dimethoxy-phenyl)-4,5-dihydro-1H-imidazole (2-DMPI) in mice. 2-DMPI showed to be a mixed, reversible and preferential MAO-A inhibitor. The treatment with 2-DMPI (100-1000 μmol/kg, s.c.) produced an…

Advisors/Committee Members: Ana Lúcia Severo Rodrigues, Patricia Dutra Sauzem, Katia Padilha Barreto, Maria Rosa Chitolina Schetinger, Juliano Ferreira.

▼ O selênio (Se) é um elemento traço essencial para humanos e desempenha importante função no crescimento e desenvolvimento de fetos e recém-nascidos. Sabese que a deficiência desse elemento pode ocasionar abortos e nascimentos prematuros. Entretanto, os compostos de Se, dependendo da dose, podem ser tóxicos para diversas espécies de animais. Os compostos orgânicos de selênio, disseleneto de difenila [(ØSe)2] e disseleneto de 3 3-ditrifluormetildifenila [(F3CØSe)2], foram os alvos deste estudo, visto que possuem importantes propriedades farmacológicas. Com isso, faz-se necessário o estudo dos efeitos destes compostos sobre o desenvolvimento embriofetal. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração de (ØSe)2 e (F3CØSe)2 durante o período da organogênese do desenvolvimento intra-uterino de ratas Wistar. No primeiro trabalho, as ratas prenhas foram expostas ao (ØSe)2 (1,5; 3,0 ou 6,0 mg/kg) ou ao seu veículo (óleo de canola) via injeção subcutânea, do 6 ao 15 dia de gestação (Artigo). No 20 dia de gestação foi realizada uma laparotomia para a retirada dos fetos e a observação do aparecimento de malformações morfológicas externas e esqueléticas. Não foram observadas mortes maternas e fetais nos grupos expostos ao (ØSe)2. A exposição causou uma diminuição do ganho de peso corporal materno (corrigido) nas duas maiores doses testadas, além de um aumento no peso relativo do fígado destas ratas, indicando que o composto causou toxicidade materna. A exposição ao ( Se)2 alterou significativamente os parâmetros de desenvolvimento avaliados (peso e medidas corporais fetais). Além disso, verificou-se um aumentou de incidência de alterações na ossificação do esqueleto desses fetos, em todas as doses avaliadas, porém, estas alterações são consideradas variações que são geralmente reversíveis e parecem não apresentar riscos à vida. Observou-se também que as placentas das ratas que foram expostas ao (ØSe)2 apresentavam alterações na morfologia, tais como, congestão vascular, aumento da infiltração leucocitária e uma intensa atividade fagocítica. Estes efeitos parecem ter contribuído para os efeitos adversos encontrados nas proles analisadas. No segundo trabalho apresentado nesta dissertação, as ratas prenhas foram expostas ao (F3CØSe)2 (1; 5 ou 10 mg/kg) ou ao seu veículo (óleo de canola) através de entubação gástrica, do 6 ao 15 dia de gestação (Manuscrito). Foram avaliados os mesmos parâmetros do primeiro trabalho. A administração das doses de 5 e 10 mg/kg de (F3CØSe)2 causou uma diminuição de ganho de peso corporal materno, acompanhada de uma diminuição de consumo de alimento na maior dose administrada. Além disso, as ratas que receberam a maior dose do composto tiveram um aumento do peso do fígado (absoluto e relativo). Estes dados confirmam que o fígado é o órgão alvo da exposição a compostos de Se. Diferentemente da exposição ao (ØSe)2, a administração de (F3CØSe)2 não alterou o peso e as medidas corporais fetais. Entretanto, o composto causou embrioletalidade na maior dose testada. Este efeito parece ser do… Advisors/Committee Members: Cristina Wayne Nogueira, Gilson Rogério Zeni, Katia Padilha Barreto, Luiz Fernando Freire Royes.

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The aim of the work was to evaluate the effect of different protein and lipid sources of animal and vegetable origin on the reproductive performance of black catfish Rhamdia quelen females. Three experiments were accomplished with duration of 90 days each, divided in three phases: Phase I, Reproducers feeding; phase II, Induced reproduction and eggs and larvae incubation; phase III, Larvae culture. Fifteen females of black catfish (around 700g) were used for experiments 1 and 2, and 500g for experiment 3. The females were distributed in three net cages of 1m, 5 fish (4 females for induction and 1 for oocyte collection). The fish were fed for ten weeks using three diets as treatments: experiment 1, meat and bone meal and soybean meal (CS), fish meal and soybean meal (PS) and yeast and soybean meal (LS); For experiment 2, the effect of substitution of the meat and bone meal for the soybean meal in increasing levels was evaluated (0%, 35%, 70%), that were treatments CS 0, CS 35 and CS 70; In experiment 3, pork fat (BP), sunflower oil (OG) and Canola oil (OC). After induced spawning, samples of ten eggs were collected at the moment of the fishes spawning, at 3, 9, 12, 18 and 24 hours. Also samples of ten larvae were collected, at the moment of the eclosion, at 12, 24, 36 and 48 hours. Three samples of larvae of each incubator in the density of 30 larvae/l, were collected and fed during 14 days. Changeable zoogenic were esteem for phases I and III and reproductive for phase II. In experiment 1, females fed with the diet of treatment LS, had shown minor profit in weight, the eggs had equally minor weight. For the embryonic evelopment treatments, CS and PS were superior to treatment LS in the variable (DSV). In the larval development in the incubators, treatment CS showed better performance for the variable (CT). For the experiment 2, females fed with diets CS 70, had not answered the spawning of fishes. The embryonic development, larval vitelline and larvae were superior in treatment CS 0 for the variable (DO and AO), (CT and AT), (CT, CP, Area, SOB) respectively. In experiment 3, the larvae development in the incubators, treatment BP was minor that treatment OG in the variable (CT), equally treatment BP was minor that treatments OG and OC for the variable (DSV). For the larval development until the 14 days treatment OC was greater that treatment BP for the variable (CT and CP). We can conclude that the use of Meat and Bone meal and Soybean meal as protein sources are presented as good option in the feeding of reproductive females of black catfish. The pork fat is so good as sunflower and canola oils as lipid sources for reproductive females and they provide good development of the embryo and jundiás larvae

No trabalho avaliou-se o efeito de diferentes fontes protéicas e lipídicas de origem animal e vegetal sobre o desempenho reprodutivo de fêmeas de jundiá Rhamdia quelen. Foram realizados três experimentos, de 90 dias cada, divididos em três fases: fase I, Alimentação de reprodutores; fase II, Reprodução induzida e…

Advisors/Committee Members: Bernardo Baldisserotto, Joao Radünz Neto, Katia Padilha Barreto, Vania Lucia Loro, Evoy Zaniboni Filho.

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Este trabalho foi conduzido para avaliar o crescimento, perfil lipídico, metabolismo e aceitabilidade dos filés de jundiás. Para isso foram conduzidos quatro experimentos delineados inteiramente ao acaso, onde jundiás de mesma origem genética foram criados em sistemas com recirculação de água. No primeiro, foram avaliados quatro densidades de estocagem (4,2, 6,4, 8,6 e 10,8 kg/m3) em jundiás de ambos os sexos. Utilizou-se um total de 420 peixes (Pi=182,95 2,96 g), que foram alimentados durante 120 dias até a saciedade aparente. Verificou-se diminuição no peso dos peixes com o aumento da densidade utilizada, com elevação do cortisol plasmático. No segundo experimento, testou-se a influência do sexo e do nível de proteína dietário. Em arranjo fatorial 2 X 3 (dois sexos e três níveis protéicos: 24, 27 e 30% de PB), 270 peixes (Pi=207,02 26,73 g) foram alimentados controladamente durante 100 dias. As fêmeas apresentaram crescimento superior, com exigência protéica menor (24% PB) que os machos (30% PB), os quais apresentaram maior rendimento de filé. O aumento da proteína da dieta proporcionou melhora no perfil lipídico dos filés. Foram conduzidos mais dois experimentos separadamente avaliando a utilização do óleo de soja na dieta (0, 2, 4, 6, 8 e 10% de inclusão, alimentação até a saciedade). Os machos (234, Pi=193,32 18,78 g 120 dias de experimento) alimentados com 8% de óleo apresentaram melhor desempenho. As fêmeas (144, Pi=237,75 22,35 g 80 dias de experimento) alimentadas com 10% de óleo obtiveram maior peso final. O consumo aparente de alimento foi maior nos machos. A maior inclusão de óleo de soja nas dietas proporcionou diminuição na quantidade de ácidos graxos saturados e aumento de poliinsaturados (PUFAS) nos filés dos jundiás. Não foram detectadas diferenças pelo painel de provadores no sabor, textura e aparência dos filés de jundiás de ambos os sexos.

This study was conducted to evaluate growth, lipid profile, metabolism and fillet aceitability of jundiá. For this purpose four experiments were conducted in a completely randomly design, where jundiás of the same genetic origin were reared in water re-use system. In the first, it was evaluated four densities (4.2, 6.4, 8.6 and 10.8 kg/m3) in jundiás of both sexes. It was used a total of 420 fish (IW=182.95 2.96 g), that were fed for 120 days until the apparent satiation. It was verified a weight decrease of fish with the increase of the SD used, with elevation of the plasmatic cortisol. In the second experiment, it was tested the sex and dietary protein level influence. In factorial arrangement 2 X 3 (two sexes and three protein levels: 24, 27 and 30% of CP), 270 fish (IW=207.02 26.73 g) were fed controlled during 100 days. The females showed higher growth, with lower protein requirement (24% CP) than that of males (30% CP). These showed higher fillet yield. The increase of the diet protein provided improvement in the fillet lipid profile. Two additional experiments were conducted separately to evaluate the use of soybean oil in the diet (0, 2, 4, 6, 8 e 10%…

Advisors/Committee Members: Tatiana Emanuelli, Bernardo Baldisserotto, Joao Radünz Neto, Irineo Zanella, Katia Padilha Barreto, José Fernando Bibiano Melo.

▼ O primeiro estudo caracterizou a expressão do receptor MAS e de enzimas responsáveis pela produção de Ang-(1-7), tais como, enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2), endopeptidase neutra (NEP) e prolil endopeptidase (PEP) durante o desenvolvimento folicular. Além disso, a regulação local do sistema Ang-(1-7) foi avaliada após a injeção intrafolicular de fulvestrant (inibidor do receptor de estradiol) no folículo dominante. As vacas foram ovariectomizadas quando o tamanho entre o maior (F1) e o segundo maior folículo (F2) não era estatisticamente diferente (D2), ligeiramente (D3) ou marcadamente diferente (D4). A expressão de RNAm do receptor MAS, ACE2, NEP e PEP foi avaliada nas células foliculares do F1 e F2. O receptor MAS foi mais expresso nas células da granulosa do F2 após o estabelecimento da divergência folicular (D4), enquanto a expressão de PEP aumentou durante (D3) e após (D4) o processo de divergência. Entretanto, a expressão de ACE2 foi maior nas células da granulosa do F1 durante e após a divergência. A expressão de PEP não foi regulada no F1 e F2. O receptor MAS foi imunolocalizado nas células da teca e granulosa do F1 e F2 durante a divergência folicular. A expressão de RNAm do receptor MAS aumentou quando o F1 foi tratado com fulvestrant in vivo. Em conclusão, o perfil de expressão do receptor MAS, ACE2, NEP e PEP nos folículos dominante e subordinado indicam que a Ang-(1-7) apresenta uma função na regulação da dominância folicular em bovinos. Em um segundo estudo investigamos a expressão de genes que controlam o reparo do DNA através das vias de recombinação homóloga (HR; 53BP1, ATM, RAD50, RAD51, RAD52, BRCA1, BRCA2, NBS1) e união terminal não homóloga (NHEJ; KU70, KU80, DNAPK) em embriões bovinos com alta, média ou baixa competência de desenvolvimento. Foi também avaliado se embriões bovinos podem responder a quebra na fita dupla de DNA (DSBs), induzida por irradiação UV, através da regulação de genes envolvidos nas vias de reparo HR e NHEJ. Embriões com alta, média ou baixa competência de desenvolvimento foram selecionados pelo tempo de clivagem após a fertilização in vitro e foram removidos do cultivo antes (36 h), durante (72 h) ou após (96 h) o momento esperado para a ativação do genoma embrionário (AGE). Todos os genes foram expressos antes, durante e após a AGE independentemente da competência de desenvolvimento dos embriões. A expressão de 53BP1 e RAD52 foi maior antes da AGE em embriões com baixa competência de desenvolvimento. A expressão de 53BP1, RAD51 e KU70 foi mais baixa as 72 h e maior as 168 h pós fertilização em embriões com DSBs induzida por irradiação UV. Em conclusão, genes importantes para o controle das vias de reparo HR e NHEJ são expressos em embriões bovinos independentemente do tempo de cultivo ou da competência de desenvolvimento. A menor competência de desenvolvimento embrionário parece estar associada com maior expressão de 53BP1 e RAD52. Os embriões bovinos respondem a DSBs após a AGE mas as vias HR e NHEJ são reguladas principalmente no estágio de… Advisors/Committee Members: Alceu Mezzalira, Katia Padilha Barreto, Luiz Ernani Henkes, Valério Valdetar Marques Portela Junior, Paulo Bayard Dias Goncalves.

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The hyperglycemia and oxidative stress are factors strongly involved on development of many disorders that characterize the Diabetes Mellitus. It is known that some organic and inorganic selenium compounds are potent antioxidant agents and present similar activity to the insulin in the control of hyperglycemia. Base on these data, the present study evaluated the effect of the organoselenium compound, diphenyl diselenide, on the δ-ALA-D activity and biochemical parameters of diabetic type 1 rats, induced by alloxan. The animals were treated with 6 consecutives doses of diphenyl diselenide (10 mg/kg, s.c) administrated before (pretreatment) or after (post-treatment) diabetes induction. Diphenyl diselenide presented inhibitory effect per se on hepatic and renal δ-ALA-D activity. However, this effect was not verified on other tissues. Regarding aminotransaminases, there was no difference on aminotransaminases for both diphenyl diselenide pre and post treated rats at the first week of the induction. Besides, the results suggest that diphenyl diselenide seem to possess ability to regulate the levels of plasma glucose and serum fructosamine altered in diabetic animals. Thus, diphenyl diselenide was not effective in protecting δ-ALA-D inhibition verified in this dose and protocol. However, this compound seems to possess hepatic protector effect and property of reducing the hyperglycemia. Considering that diphenyl diselenide has a simple chemistry structure and it is easily prepared, new studies could be carried out to investigate other pharmacological properties as well the mechanisms involved in diphenyl diselenide effects.

A hiperglicemia e o estresse oxidativo são fatores fortemente envolvidos no desenvolvimento de muitos distúrbios que caracterizam o Diabetes Mellitus. Sabe-se que alguns compostos orgânicos e inorgânicos de selênio são potentes agentes antioxidantes e que determinados compostos inorgânicos de selênio apresentam atividade similar à insulina no controle da hiperglicemia. Baseando-se nesses dados, o presente estudo avaliou o efeito do composto orgânico de selênio, disseleneto de difenila, na atividade da enzima δ-ALA-D e em parâmetros bioquímicos de ratos diabéticos tipo 1, induzidos com aloxano. Os animais foram tratados com 6 doses consecutivas de disseleneto de difenila (10 mg/kg, s.c) administrado antes (pré-tratamento) ou após (pós-tratamento) à indução de Diabetes. O composto em questão apresentou atividade inibitória per se sobre a atividade da enzima δ-ALA-D hepática e renal dos animais pré e pós-tratados e sacrificados 14 dias após a indução. Em contrapartida não foi verificado efeito sobre os demais tecidos. Sobre a atividade hepática, o disseleneto de difenila manteve os níveis de aminotransferases comparáveis aos níveis do controle apenas na primeira semana da indução, tanto no pré quanto no pós-tratamento. Além disso, os resultados encontrados sugerem que o disseleneto de difenila parece possuir a habilidade de regular os níveis de glicose sanguínea e frutosamina…

Advisors/Committee Members: Cristina Wayne Nogueira, Katia Padilha Barreto, Vera Maria Morsch.

▼ O objetivo do presente estudo foi determinar o perfil de expressão de anexina II (ANEII) em folículos pré-antrais, oócitos e desenvolvimento embrionário bovino, e sua regulação pelo retinol e fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I). Expressão de ANEII foi verificada em folículos primordial, primário e secundário, em oócitos de folículos antrais de diferentes tamanhos (<3mm, 5-8mm e >8mm de diâmetro), em embriões de 2, 4, 8, 16 e 32 células e em blastocisto e blastocisto expandido. Além disso, foi investigada a influência do retinol sobre a expressão de ANEII em oócitos e no desenvolvimento embrionário e, neste último, também foi estudada a participação do IGF-I na expressão dessa proteína. Ovários de fêmeas bovinas adultas e de fetos foram coletados em abatedouro e submetidos a punção folicular ou isolamento de folículos pré-antrais. Complexos cumulus-oócito e folículos préantrais foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizado reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em diferentes estádios de desenvolvimento em meio SOF e também suplementados com retinol e IGF-I. Os embriões foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e realizada a reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Apenas folículos préantrais secundários apresentaram expressão de ANEII. Em estádio de vesícula germinativa (VG), os oócitos oriundos de diferentes tamanhos foliculares diferiram entre si (p<0,05) quanto à expressão de ANEII, onde oócitos de folículos <3mm e de 5-8mm foram significativamente inferiores aos oócitos de folículos >8mm. Em metáfase II (MII), oócitos de folículos <3mm apresentaram menor expressão de ANEII em relação à oócitos de folículos >8mm (p<0,05) e não diferiram de oócitos de folículos de 5-8mm. No entanto, oócitos de folículos de 5-8mm foram similar na expressão de ANEII aos oócitos de folículos >8mm. O retinol utilizado no período de maturação promoveu um incremento na expressão de ANEII quando comparado ao controle (p<0,05). A ANEII está presente em todos os estádios de desenvolvimento embrionário precoce, com exceção em embriões de 16 células. A utilização de retinol durante o desenvolvimento embrionário, promoveu um incremento significativo (p<0,05) na produção de blastocisto, avaliados no dia 6 após a fecundação, em relação ao grupo controle e ao grupo IGF-I. No grupo controle foi obtido um percentual de 20,5% (24/117) de blastocistos sobre o número total de oócitos cultivados, não diferindo do grupo IGF-I, onde se obteve um índice de 25,8% (24/93) de blastocistos. No grupo retinol, o percentual de blastocisto foi significativamente superior com 37,8% (45/119). Na avaliação semiquantitativa da expressão de ANEII em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I (10ng/ml de meio) ou retinol (0,1ng/ml de meio), foi observado uma menor expressão de ANEII quando estas substâncias estavam presentes no meio em relação ao controle (p<0,05). A… Advisors/Committee Members: Carlos Fernando de Mello, Paulo Bayard Dias Goncalves, Katia Padilha Barreto.

o autor não apresentou RESUMO Advisors/Committee Members: Paulo Bayard Dias Goncalves, Katia Padilha Barreto, João Francisco Coelho de Oliveira.

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O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação de receptores de AngII (AT1 e AT2) no desenvolvimento folicular e maturação de oócitos bovinos. A expressão dos receptores foi avaliada, por meio de RT-PCR em folículos pré-antrais (secundários) e folículos antrais de 3-4mm, 6-7mm e >12mm de diâmetro. Para verificação da maturação de oócitos foram utilizados CCOs de folículos com diâmetro entre 2-8mm obtidos em matadouro. Os tratamentos foram conduzidos com o co-cultivo, por 12h, de 20 CCOs com oito metades foliculares em 200μl de TCM-199 acrescido de 1mg/ml de álcool polivinílico (grupo controle negativo (CON(-)), suplementados com AngII (grupo AngII), AngII mais Losartan (grupo LOS) e AngII mais PD123319 (grupo PD123319). No controle positivo (CON(+)), os CCOs foram cultivados sem metades foliculares. Os oócitos foram analisados quanto a fase de maturação em VG, RVG e MI. Folículos pré-antrais secundários não expressaram receptores para AngII. Folículos antrais expressaram receptores para AngII de forma diferenciada. Receptores AT1 foram expressos em CT e CG em folículos a partir de 6 mm. Receptores AT2 foram expressos em CT a partir de folículos de 3mm, e somente folículos maiores que 12mm expressaram receptores AT2 nas CG. O percentual de oócitos mantidos em VG, observados nos grupos submetidos ao cultivo com inibidores dos receptores AT1 (LOS, 65,5%; 78/119) e AT2 (PD123319, 54,6%; 53/97) foi superior (p<0,05) ao observado nos grupos CON(+) (10,8%; 12/111) e AngII (22,7%; 25/110), porém não houve diferença com relação ao grupo CON(-) (50%; 53/106). Na avaliação da MI, o percentual de oócitos que atingiram esse estádio nos grupos CON(+) e AngII (62,1%; 69/111 e 52,2%; 58/111, respectivamente) foi superior (p<0,05) aos grupos CON(-), LOS e PD123319 (13,2%; 14/106, 0,8%; 1/119 e 1,03%; 1/97, respectivamente). CT e CG expressam receptores para AngII (AT1 e/ou AT2) a partir da formação do antro, de acordo com o tamanho folicular. Ambos os receptores AT1 e AT2 participam do reinício e progressão da meiose de oócitos bovinos.

This study was designed to investigate the role played by AngII receptors (AT1 and AT2) in follicle development and maturation of bovine oocytes. Receptor expression was assessed by the RT-PCR technique using preantral (secondary), 3-8, 6-7, and 12mm follicles. Secondary preantral follicles did not express AngII receptors. Antral follicles expressed AngII receptors distinctly. AT1 receptors were expressed in teca (TC) and granulose cells (GC) from follicles greater than 6mm. AT2 receptors were expressed in TC and GC from follicles >6mm. AT2 receptors were expressed in TC in follicles >3mm. Only follicles >12mm expressed AT2 receptors in GC. The investigation of oocyte maturation was evaluated in cumulus-oocyte complexes (COCs) from 2-8mm follicles obtained in slaughterhouses. The treatments were carried out using the co-culture of 20 COCs with 8 follicle hemi-sections for 12h in 20μL TCM199 plus 1mg/mL polyvinyl alcohol (negative control group: CON(-)), supplemented with…

Advisors/Committee Members: Carlos Fernando de Mello, Paulo Bayard Dias Goncalves, Katia Padilha Barreto, Elgion Lucio da Silva Loreto, João Francisco Coelho de Oliveira.