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Made available in DSpace on 2019-08-14T13:04:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mendes_sousa__af_2012.pdf: 1206174 bytes, checksum: b23480d1f995c9d4263372308b274c27 (MD5) Previous issue date: 27

A inibição do sistema complemento humano é uma das atividades presentes na saliva e/ou conteúdo intestinal de artrópodes hematófagos e está envolvida na proteção do epitélio do tubo digestivo desses vetores contra a ação deletéria do complemento presente no sangue ingerido. O objetivo deste trabalho foi investigar a ação da saliva de Lutzomyia longipalpis, o principal vetor de Leishmania infantum nas Américas, sobre as vias clássica e alternativa do sistema complemento de cães, galinhas e cobaias. Para isso, foram realizados para as três espécies ensaios hemolíticos e ensaios do tipo ELISA para detecção de C3b na presença de diferentes concentrações de extrato de glândula salivar. Ambos os testes foram realizados em pH 7,4 e em pH 8,15 (pH do lúmen intestinal do inseto logo após a ingestão de sangue). Com soro de cães, foram realizados os experimentos supracitados apenas em pH 7,4 na presença da proteína salivar recombinante LJM19, descrita como inibidora da via clássica humana. Os resultados mostram que a saliva é capaz de inibir fortemente a hemólise pela via clássica de cães e cobaias em ambos os pHs, mas com fraca intensidade a das aves. Em pH 7,4, a saliva não inibiu a atividade hemolítica da via alternativa de nenhuma das espécies estudadas, mas observou-se forte inibição nos testes com soros de cães, ao aumentarmos o pH para 8,15. Os resultados dos testes de deposição de C3b corroboram aqueles encontrados nos ensaios de hemólise. A proteína LJM19 inibiu significativamente tanto a hemólise quanto a deposição de C3b da via clássica de cães. Pode-se concluir que os inibidores salivares de L. longipalpis atuam de maneira espécie-específica, atuando sobre o sistema complemento de mamíferos, mas não sobre o das aves.

Inhibitors of the complement system (CS) are commonly present in the saliva of haematophagous insects. Experimental evidence suggests that these inhibitors are involved in the protection of the midgut against injury by CS present in the ingested blood. Previous studies have shown that the saliva of the Phlebotomine sandfly Lutzomyia longipalpis (the main vector of American Visceral Leishmaniasis) inhibited the human CS. Our aim was to investigate whether L. longipalpis` saliva inhibit the classical and alternative pathways of the complement system from other animals such as dogs, chickens and Guinea pigs. Erythrocyte lysis assays and ELISA for C3b detection assays were performed with dogs, chickens and Guinea pigs sera in the presence of different concentrations of salivary gland extract at pH 7,4 and 8,15 (the vector´s intestinal pH right after the blood meal). Only with dog sera, these assays were also done in the presence of the recombinant protein LJM19, a salivary inhibitor of the human classical pathway. Our results show that sandfly saliva is capable of strongly inhibiting the…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T07:12:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_corrigida_em_pdf.pdf: 1824148 bytes, checksum: 1f9f49c1b71197ee95b96d2a0413061c (MD5) Previous issue date: 3

A doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana, é causada pelo agente etiológico Trypanosoma cruzi, parasito hemoflagelado, unicelular e heteroxeno. É uma doença endêmica na América Latina e emergente em países da Europa e Estados Unidos. A fase aguda da doença dura aproximadamente de 10 a 90 dias após a infecção e é caracterizada por alta carga parasitária, o que permite que o seu diagnóstico seja realizado por exames diretos. Após 12 semanas, a infecção evolui para a fase crônica, que apresenta baixa parasitemia e altos títulos de IgG contra antígenos do parasito. Por esta razão, o diagnóstico na fase crônica é realizado através de ensaios imunoenzimáticos tais como Imunoflorescência indireta, hemaglutinação indireta e ELISA. Entretanto, para a realização destes testes, são utilizados extratos brutos ou semi-purificados das formas epimastigotas, sendo este estágio evolutivo do parasito encontrado apenas no inseto vetor e não no hospedeiro vertebrado. Não obstante, os testes diagnósticos para a doença de Chagas na fase crônica geram discussões por muitas vezes se mostrarem inconclusivos, ambíguos ou contraditórios devido as possíveis reações cruzadas com outros organismos da família Tripanosomatidae, como Leishmania sp e a espécie não patogênica para o hospedeiro vertebrado Trypanosoma rangeli. Na tentativa de aprimorar o diagnóstico da doença de Chagas, diversas proteínas recombinantes são hoje o foco de várias pesquisas por apresentarem uma boa sensibilidade e especificidade. Neste trabalho, o nosso grupo selecionou quatro proteínas possivelmente conservadas entre as diferentes cepas deste parasito, que não estão presentes no proteoma predito de espécies do gênero Leishmania, e que apresentam um alto score de predição de epitopo de célula B pelo programa BepiPred. Dentre as quatro proteínas selecionadas: Tc10, Tc30, Tc80 e Tc170, a última foi expressa de forma recombinante em bactérias BL-21 Star, sendo em seguida utilizada em experimentos de ELISA contra o soro de pacientes chagásicos crônicos, pacientes com leishmaniose visceral e indivíduos sadios, como controle. No entanto, o ELISA realizado com o pool de soros apontou uma maior reatividade desta proteína com pacientes infectados com Leishmania infantum. Tal fato sugere que apesar das proteínas selecionadas não estarem presentes no proteoma de espécies do gênero Leishmania, peptídeos ortólogos entre os dois organismos estão presentes nesta proteína. Para averiguar a reação da proteína Tc170 com soros individuais de pacientes de ambas as enfermidades assim como também com soros de indivíduos não infectados, foi realizado um ensaio de ELISA, que demonstrou que a proteína Tc170 apresentou uma sensibilidade de 84,21% e uma especificidade de 80% entre os soros de pacientes chagásicos, pacientes infectados com Leishmania…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T23:06:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_de_mestrado_da_larissa_ferreira_paranaiba.pdf: 1661329 bytes, checksum: 02a65c516742665f31700538af1054b5 (MD5) Previous issue date: 20

A Leishmania enriettii é uma espécie não infectante ao homem que tem como hospedeiro vertebrado a cobaia Cavia porcellus. Alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro neste modelo ainda são desconhecidos principalmente envolvendo moléculas de superfície do parasito. Vários Lipofosfoglicanos (LPGs) e glicoinositolfosfolípides (GIPLs) de espécies de Leishmania do Novo e Velho Mundo já foram descritas, porém aspectos da glicobiologia de L. enriettii ainda são desconhecidos. Neste estudo, caracterizou-se preliminarmente os LPGs e GIPLs de duas cepas de L. enriettii (L88 e Cobaia) isoladas de seus hospedeiros vertebrados em 1945 e 1985, respectivamente. Além disso, foi avaliado o papel destas moléculas in vitro na interação com macrófagos murinos e sua infectividade in vivo em Cavia porcellus. Os LPGs foram extraídos, purificados e analizados por western-blot mostrando que o LPG da cepa L88 apresentou maior peso molecular. Os LPGs e GIPLs foram despolimerizados e seus açúcares foram analizados através da eletroforese de carboidratos. A região de unidades repetitivas dos LPGs das duas cepas não apresentou cadeias laterais, sendo representado pelo dissacarídeo Gal(1,4)Man(1)-PO4. O GIPL da cepa L88 apresentou galactose em sua estrutura, similar ao GIPL do tipo II. O GIPL da cepa Cobaia apresentou uma abundância de glicose, uma característica ainda não observada. Os polimorfismos observados nos LPGs e GIPLs foram avaliados in vitro em macrófagos murinos. Para se avaliar que tipo de receptor estava sendo reconhecido por LPGs e GIPLs das duas cepas, macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6 e knock-out (TLR2 -/- e TLR4 -/-), foram primados com IFN- e estimulados com os glicoconjugados e seus respectivos parasitos vivos (MOI 10:1). Nenhuma ativação de NO ou citocinas foi observada com os parasitos vivos. Por outro lado, os LPGs e GIPLs foram capazes de ativar a produção de NO e citocinas (IL-6, IL-12 e TNF ), sendo que os LPGs foram agonistas mais potentes que os GIPLs, preferencialmente via TLR2 e secundariamente via TLR4. Para se avaliar isoladamente o papel de cada TLR, foram utilizadas células de ovário de hamster chinês (CHO). Neste modelo, foi observado que os LPGs e os GIPLs não foram capazes de ativar TLR2 e TLR4, sugerindo uma co-participação dos dois receptores. Para se avaliar a infectividade das duas cepas, foram utilizados cobaias machos da espécie Cavia porcellus. Estes animais foram inoculados com parasitos das duas cepas na presença ou não de extrato de glândula salivar do flebotomíneo (GSF) Lutzomyia longipalpis e avaliados semanalmente por 91 dias. Os animais infectados começaram a desenvolver protuberância e/ou lesão a partir da 4ª e 5ª semana de infecção, mas apenas a cepa L88 foi capaz de causar lesões ulceradas. O tamanho, o tempo de desenvolvimento e…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T08:33:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_paula_monalisa_departamento_parasitologia.pdf: 9967901 bytes, checksum: 2e1388336e2f6590600d2488cf1e39ad (MD5) Previous issue date: 16

Os parasitos tripanosomatídeos são responsáveis por graves doenças no homem. Durante seu ciclo de vida são submetidos a condições extremamente adversas. Moléculas ancoradas por glicosilfosfatidilinositol (GPI) são os principais antígenosexpressados na membrana plasmática dos tripanosomatideos e auxiliam no processo de infecção. Dentre essas, as GPI-mucinas são glicoconjugados importantes em Trypanosoma cruzi e desempenham um papel crucial na sobrevivência dos parasitos. Este parasito é capaz de liberar vesículas extracelulares (EVs) enriquecidas por GPImucinascontendo resíduos terminais de a-galactosil (a-Gal) e TS/gp85. Contudo, o comportamento de células do sistema imune no curso da infecção da doença de Chagas após a estimulação com EVs de T. cruzi de cepas de diferentes DTUs ainda é desconhecido. Assim, o este trabalho avaliou o impacto destas vesículas das cepas Colombiana (Tc I), YuYu (Tc I), Y (Tc II) e CL-14 (Tc VI) no perfil de ativação da resposta imune inata e crônica. As EVs foram purificadas e exibiram diferenças intraespecíficas na quantidade de proteína e de epítopo a-Gal. Durante a resposta imuneinata, vesículas das cepas YuYu e CL-14 induziram altos níveis de citocinas próinflamatórias (TNF-a e IL-6) e óxido nítrico via TLR2. Não foi observada diferença na ativação de MAPKs (ERK1/2, p38 e JNK) após estimulação com as vesículas. A produção de citocinas no sobrenadante de cultura de células esplênicas derivadas decamundongos crônicos infectados com os quatro tipos de cepas mostrou perfil proinflamatório após estimulação com vesículas de Colombiana e Y, independente do tipo de cepa usada na infecção in vivo. Para testar a importância funcional desta modulação, foi avaliada a expressão de citocinas intracelulares após exposição in vitro apenas nas cepas Colombiana e YuYu. As vesículas foram capazes de induzir produção de citocinas. Foi observada alta frequência de IL-10 em linfócitos T CD4+ e CD8+, além de um perfil misto de produção de TNF-a e IL-10 em células B. Finalmente, células dendríticas produziram TNF-a após estimulação com as vesículas. Em conclusão, variações intra-específicas nas EVs de T. cruzi são importantes para a ativação dosistema imune inato e modular os eventos imunopatológicos nas fases aguda e crônica da Doença de Chagas.

Tripanosomatid parasites are the causative agents of a wide spectrum of clinical manifestations. The parasites have an outstanding ability to avoid destruction in the hostile environments during their life cycles. Their main strategies include the expression of major glycoconjugates attached to the membrane by glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchors. The GPI-mucins are important glycoconjugate of Trypanosoma cruzi. Those molecules play an important role on the protozoan infection and survival. Trypomastigote forms of T.…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T15:50:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 agna_cristina_guimar_es_disserta__o_de_mestrado_programa_de_p_s_gradua__o_em__parasitologia.pdf: 1788396 bytes, checksum: dd58edad98950005b7e159d105744090 (MD5) Previous issue date: 22

Leishmania (L.) major é uma espécie presente em regiões do Velho Mundo sendo um importante agente etiológico da leishmaniose cutânea (LC) nestas áreas. Esta espécie dependendo da região de transmissão tem como vetores principais Phlebotomus papatasi e P. duboscqi. Em países do continente Americano (Equador, Peru, Paraguai, México e Venezuela) alguns isolados semelhantes a L. (L.) major têm sido descritos sendo denominados L. major-like. No Brasil, três isolados de pacientes que relataram nunca ter saído do país foram caracterizados como L. major-like (BH49, BH121 e BH129), devido ao parentesco genético com a cepa referência de L. major (Friedlin FV1). Vários trabalhos têm caracterizado estas cepas do ponto de vista bioquímico, biológico e molecular. Entretanto, aspectos da glicobiologia e da interação com vetores ainda são desconhecidos para estas cepas. No presente estudo, caracterizamos preliminarmente as unidades repetitivas dos lipofosfoglicanos (LPGs) das cepas de L. major-like e constatamos variações intraespecíficas no nível de galactosilação e arabinosilação entre elas. As cepas BH49 e BH129 assim como o controle FV1 foram mais galactosiladas do que a cepa BH121. Em relação à análise pelo anticorpo específico para Ara (1,2), apenas a cepa BH129 e FV1 foram arabinosiladas. Galactose é um açúcar importante na interação parasito-hospedeiro, pois reconhece um receptor no intestino de P. papatasi (PpGalec). Para avaliar se diferentes níveis de galactosilação iriam afetar na interação com vetores, foram realizados ensaios de infecção in vivo em Lutzomyia longipalpis (vetor permissivo) e P. papatasi (vetor restritivo). As cepas de L. major-like foram oferecidas em repasto artificial para os vetores. Posteriormente, estes foram avaliados no 1º, 5º e 8º dia pós-infecção. Todas as cepas foram capazes de infectar ambos os vetores, com a colonização da válvula do estomodeu já no 5º dia e maior porcentagem de metaciclogênese no 8º dia pós-infecção. A cepa BH121 (menos galactosilada) apresentou uma menor intensidade de infecção embora tenha também colonizado com sucesso ambos os vetores. Os dados obtidos sugerem que polimorfismos no LPG de L. major-like podem afetar na interação com o hospedeiro invertebrado.

Leishmania (L.) major is an Old World species of causing cutaneous leishmaniasis (LC). It is mainly transmitted by Phlebotomus papatasi and P. duboscqi. In the Americas (Ecuador, Peru, Paraguay, Mexico and Venezuela) some isolates similar to L. (L.) major have been described as L. major-like. In Brazil, three isolates from patients who never left the country, were characterized as L. major-like (BH49, BH121 and BH129), due to genetic linkage to the reference strain of L. major (Friedlin FV1). Several studies have characterized those…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T11:22:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_angelica.pdf: 2098581 bytes, checksum: 94b6dc1e009398c43355fc28b00d2987 (MD5) Previous issue date: 17

A leishmaniose visceral é a mais grave dentre as leishmanioses e sua forma zoonótica, causada por Leishmania infantum, representa 20% da leishmaniose visceral humana mundial. No Brasil, uma das medidas de controle é a identificação e eliminação de cães infectados. Os métodos diagnósticos utilizados para identificação desses animais não são capazes de detectar 100% deles, o que compromete a eficácia dessa medida de controle. Além disso, o desenvolvimento de uma vacina eficiente seria altamente desejável. Dessa forma, visando contribuir para o diagnóstico e o controle da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), tivemos o objetivo de produzir e testar dois novos antígenos. Anteriormente, realizamos um trabalho no qual dez peptídeos foram identificados como antigênicos em ELISA para diagnóstico da LVC. Na atual proposta, esses dez peptídeos foram reunidos em um gene sintético. Além disso, outros vinte peptídeos foram identificados como bons epitopos para células T em publicação do nosso grupo. Da mesma forma, esses peptídeos foram unidos em uma molécula. Ambos os genes foram clonados e expressos em Escherichia coli, produzindo duas proteínas quiméricas: PQ10 e PQ20. Esses antígenos foram utilizados em ELISA para LVC com sensibilidades de 80,1% para a PQ10 e 84,9% para a PQ20 e especificidade de 65,6% para ambas. Esses antígenos foram capazes de identificar cães assintomáticos (80% do total) de maneira mais eficiente que o DPP® (10%) e o ELISA Biomanguinhos (0%), testes atualmente utilizados pelo programa de controle da LVC. Além disso, a detecção de cães no início da infecção também ocorreu, com positividades oscilando entre 23% e 65%, de acordo com o período da coleta. Em amostras de soros de uma coorte, a soroconversão ocorreu mais precocemente para as PQs do que para o ELISA Biomanguinhos. As proteínas se mostraram imunogênicas na obtenção do soro policlonal em coelhos. Com esse soro, foi possível identificar que apenas alguns peptídeos são os maiores responsáveis pela imunogenicidade das proteínas quiméricas. Em ensaios de imunização de camundongos e de estímulo de células mononucleares do sangue periférico de cães, foi possível observar que as proteínas estimulam um padrão de resposta imune do tipo Th2, com produção de IL-4 e IL-10. Em suma, nossos estudos demonstram que as proteínas quiméricas construídas com epitopos para células B possuem um grande potencial em imunodiagnóstico, podendo beneficiar programas de controle da leishmaniose visceral canina.

Visceral leishmaniasis is the most severe form among leishmaniasis. The zoonotic disease, caused by Leishmania infantum, represents 20 % of the world's human visceral leishmaniasis with increasing incidence in urban areas of the tropics. In Brazil, one of the control measures is the identification and elimination of infected dogs. The diagnostic methods used to…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T15:15:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_doutorado_thallyta_maria___departamento_parasitologia___ufmg.pdf: 7102201 bytes, checksum: a952fa15b2708c2f7c2d579919f86907 (MD5) Previous issue date: 14

Os quirópteros possuem grande diversidade de espécies, hábitos alimentares e abrigos. Em consequência da fragmentação ambiental estão cada vez mais se estabelecendo nos centros urbanos. O presente estudo foi realizado para verificar a ocorrência de tripanossomatídeos em morcegos capturados em dois bairros (Vila Luiza -VL e Nossa Senhora das Graças -NSG) e dois parques (Parque Estadual da Sapucaia- PMS e Parque Estadual da Lapa Grande - PELG) do Município de Montes Claros MG, no período de abril de 2014 a abril de 2015. Foram capturados 1.100 morcegos pertencentes a quatro famílias: Emballonuridae (3,5%), Molossidae (10,3%), Phyllostomidae (75,9%), Vespertilionidae, (10,3%). Destes, 247 indivíduos foram utilizados para investigar a presença de tripanossomatídeos. Utilizou-se cultivo NNNLIT, com 2,1% (16741) positivos e 1,6 (12741) estabilizados e criopreservados. Os isolados foram identificados através da técnica de sequenciamento direcionada à região V7V8 do gene SSU rRNA como Trypanosoma dionisii (1014) e Trypanosoma cruzi (214). A técnica da PCR foi adotada para amplificação do gene SSU rRNA e detecção de DNA de Leishmania nas amostras de sangue, pele, baço, fígado e medula. Para a identificação das espécies de Leishmania utilizou-se PCR RFLP hsp70 e Hae III, com positividade de 4,9% (7/144), sendo quatro amostras identificadas como Leishmania braziliensis e as outras tês não identificadas. O DNA das 7 amostras de tecido positivas pelo alvo hsp70, e o DNA das 247 amostras de sangue foram analisadas pela PCR direcionada a região V7V8 do gene SSU Rrna, que detecta a família Trypanosomatidae. As amostras positivas foram sequenciadas para identificação das espécies. A positividade de infecção por tripanossomatídeos, nos morcegos coletados, foi de 25,9% (64/247). Sendo que o gênero Leishmania foi representado pelas espécies Leishmania amazonensis (9,3%), Leishmania braziliensis (7,8%), Leishmania infantum (4,6%) e Leishmania sp. (4,6%), e o gênero Trypananosoma pelas espécies Trypanosoma dionisii (40,6%), Trypanosoma cruzi (4,6%), e Trypanosoma sp. (32,8%). O PELG e o bairro NSG, apresentaram o maior número de morcegos infectados por Leishmania sp., sugerindo a ocorrência dos ciclos silvestre e urbano destas espécies. Os parques PELG e PMS apresentaram maior positividade de espécies do gênero Trypanosoma indicando uma maior participação dos morcegos no ciclo silvestre destes parasitos. No presente estudo constatou-se a ocorrência da infecção de morcegos por tripanossomatídeos em diferentes áreas de Montes Claros, o que é de grande importância ecológica, epidemiológica, de saúde pública e sanidade animal.

The bats have great abundance and diversity of species, eating habits and shelters. Because of habitat fragmentation, they have increasingly settled in urban…

Submitted by Larissa Paranaiba ([email protected]) on 2019-12-10T16:37:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: cfd6801dba008cb6adbd9838b81582ab (MD5) Tese LFP - 2019.pdf: 2561879 bytes, checksum: e4182bf4917b905c3bf44891b3c6e37b (MD5)

Rejected by Eliane Andrade ([email protected]), reason: Prezada Larissa, Recebemos o “Termo de Autorização” referente à disponibilização de seu trabalho no Repositório Institucional, porém ao conferirmos seu arquivo no site verificamos que o mesmo estava incompleto (faltou a ficha catalográfica e ata de defesa ou folha de aprovação com as assinaturas dos membros da banca). Gentileza realizar nova inserção de seu trabalho no site www.repositorio.ufmg,br. Instruções sobre o processo podem ser obtidas no menu "Instruções aos autores" (https://repositorio.ufmg.br/custom/instructions.jsp). A fim de agilizar o processo de emissão do “Atestado de Entrega” pedimos que certifique-se de que o trabalho é compatível com as “Orientações para normalização de trabalhos acadêmicos”, disponíveis no mesmo menu. Colocamo-nos à disposição para quaisquer esclarecimentos. Atenciosamente, Equipe RI/UFMG on 2019-12-17T12:15:11Z (GMT)

Submitted by Larissa Paranaiba ([email protected]) on 2019-12-17T12:48:47Z No. of bitstreams: 2 Tese LFP - 2019.pdf: 2722071 bytes, checksum: 63f82bc764974bdbf6564f72ebf98edb (MD5) license_rdf: 811 bytes, checksum: cfd6801dba008cb6adbd9838b81582ab (MD5)

Rejected by Eliane Andrade ([email protected]), reason: Prezada Larissa, Recebemos o “Termo de Autorização” referente à disponibilização de seu trabalho no Repositório Institucional, porém ao conferirmos seu arquivo no site verificamos que o mesmo estava incompleto (ata de defesa com as assinaturas dos membros da banca). Gentileza realizar nova inserção de seu trabalho no site www.repositorio.ufmg,br. Instruções sobre o processo podem ser obtidas no menu "Instruções aos autores" (https://repositorio.ufmg.br/custom/instructions.jsp). A fim de agilizar o processo de emissão do “Atestado de Entrega” pedimos que certifique-se de que o trabalho é compatível com as “Orientações para normalização de trabalhos acadêmicos”, disponíveis no mesmo menu. Colocamo-nos à disposição para quaisquer esclarecimentos. Atenciosamente, Equipe RI/UFMG on 2019-12-18T11:00:37Z (GMT)

Submitted by Larissa Paranaiba ([email protected]) on 2019-12-18T23:26:51Z No. of bitstreams: 2 Tese LFP - 2019.pdf: 2993581 bytes, checksum: 1b366e689b2abdeaa5250f2c957d10b3 (MD5) license_rdf: 811 bytes, checksum: cfd6801dba008cb6adbd9838b81582ab (MD5)

Approved for entry into archive by Eliane Andrade ([email protected]) on 2019-12-19T12:17:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese LFP - 2019.pdf: 2993581 bytes, checksum: 1b366e689b2abdeaa5250f2c957d10b3 (MD5) license_rdf: 811 bytes, checksum: cfd6801dba008cb6adbd9838b81582ab (MD5)

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Made available in DSpace on 2019-08-13T09:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_corrigida_v_nia_santos.pdf: 1194712 bytes, checksum: 39c9ce61e405c6dc865a9348f7e2514b (MD5) Previous issue date: 10

O controle do pH intestinal em Lutzomyia longipalpis é primordial para o inseto lidar com os diferentes itens de sua dieta. Os flebotomíneos necessitam mudar repentinamente de um pH 6,0, adequado a digestão de açúcares, para um pH próximo de pH 8,0, que aumenta a eficiência da digestão do repasto sanguíneo. Antes da ingestão de sangue, o pH no intestino médio de L. longipalpis é rigorosamente mantido em pH 6,0 por um eficiente mecanismo regulador. Aparentemente, a alcalinização observada seria viabilizada pela volatilização do CO2 presente no sangue ingerido, e também por outro mecanismo ainda não caracterizado até então. Assim, o presente trabalho teve como primeiro objetivo, caracterizar o estímulo inicial, presente no sangue ingerido, responsável pela desativação da manutenção do pH 6,0, e pelo disparo do mecanismo de alcalinização do pH no intestino médio abdominal. De acordo com os nossos resultados, a ingestão de diferentes proteínas (não só aquelas presentes no sangue), induziu o processo de alcalinização do pH intestinal. Aminoácidos livres, na concentração normalmente encontrada no sangue não foram capazes de promover o aumento de pH no intestino médio, mas quando ingeridos em alta concentração, dispararam o mecanismo de alcalinização do pH. Umextrato preparado com o conteúdo de células intestinais foi capaz de promover uma suave alcalinização do pH intestinal quando aplicado diretamente em intestinos dissecados, e previamente acidificados. A serotonina, um hormônio provavelmente liberado na hemolinfa logo após o início do repasto sanguíneo, também foi aplicada em tubos digestivos dissecados, mas se mostrou ineficiente em promover a alcalinização do pH intestinal. A anidrase carbônica parece estar envolvida no processo de aumento do pH intestinal, uma vez que a acetazolamida (inibidor da anidrase carbônica) diminuiu a eficiência de alcalinização do intestino médio abdominal promovida pela ingestão de proteína. Um modelo geral para explicar o mecanismo de alcalinização é sugerido no presente trabalho. Utilizando-se microeletrodos íons sensíveis, foram medidas as concentrações de sódio e potássio no conteúdo intestinal ao longo da digestão do repasto sanguíneo. Foi observado que o sódio diminui, ao passo que o potássio aumenta àmedida que o sangue é digerido. Estes resultados indicam que a manutenção do pH alcalino durante o processo digestivo pode ter relação com o transporte de sódio e potássio entre o lúmen e o citoplasma das células intestinais. Levando-se em consideração a importância do pH intestinal no desenvolvimento de Leishmania intantum em seu vetor, o pH do intestino médio de L. longipalpis infectados foi medido através de microeletrodos H+ sensíveis. Foi observado que, 30h após o repasto sanguíneo, ocorre uma acidificação precoce do pH nos insetos infectados (pH ~7,0), quando…