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Made available in DSpace on 2019-08-11T16:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 matheus_delgado_fernandes_pdf.pdf: 617040 bytes, checksum: 2c0e8cfd0d2d4bceecf7109dfea618f1 (MD5) Previous issue date: 10

Toxoplasma gondii é o agente causador da toxoplasmose, uma doença de grande prevalência mundial, de especial interesse em pacientes imunodeficientes e gestantes. A toxoplasmose no Brasil apresenta grande interesse para pesquisa, devido a maior gravidade dos casos humanos ocorridos no país, principalmente em função do genótipos atípicos predominantes. O tratamento da toxoplasmose é, em geral, realizado através da combinação da Sulfadiazina e da Pirimetamina. No entanto, por diversas razões, uma série de casos tratados apresenta evolução não satisfatória e/ou efeitos adversos significativos, que podem requerer a interrupção do tratamento. Neste trabalho, camundongos Swiss foram infectados com sete cepas de T. gondii isoladas de recém nascidos com toxoplasmose congênita (TgCTBr1, TgCTBr4, TgCTBr9, TgCTBr13, TgCTBr17, TgCTBr23, TgCTBr25), de genótipo atípico e virulentas para camundongos. Os animais foram divididos em 10 grupos de tratamento: SDZ10, SDZ40, SDZ160, SDZ640 tratados via oral com 10 à 640mg/kg por dia de Sulfadiazina; PM3, PM12, PM50, PM200 tratados via oral com 3 à 200mg/kg por dia de Pirimetamina e SDZ+PM tratado com uma combinação da menor dosagem das duas drogas. Os camundongos foram avaliados para mortalidade e presença de cistos cerebrais. ELISA e bioensaios também foram usados para determinar a eficácia dos esquemas terapêuticos. Foi observado que as cepas TgCTBr4 e TgCTBr17 (pertencentes ao genótipo108 do ToxoDB - http://toxodb.org/toxo/) apresentaram menor susceptibilidade ao tratamento, enquanto TgCTBr9 (com genótipo BrII) foi a que apresentou maior sensibilidade ao tratamento, com ambos medicamentos. A associação de Sulfadiazina e Pirimetamina, em dosagens reduzidas, proporcionou um tratamento mais eficaz na toxoplasmose experimental com cepas de T. gondii isoladas no Brasil.

Toxoplasma gondii is the parasite responsible for toxoplasmosis, a disease with prevalence around the world and is of great interest on imunocompromised patients and pregnant women. Toxoplasmosis in Brazil presents great research interest because of the bigger severity of native cases, especially due to the predominant atypic genotypes. Toxoplasmosis is, usually, treated with the combination of Sulfadiazine and Pyrimethamin. However, for many reasons, a series of cases do not present satisfactory evolution and/or significant adverse effects, which can lead to treatment interruption. In this work, Swiss mice were infected with seven diferente strains of T. gondii, isolated from newborns with congenital toxoplasmosis (TgCTBr1, TgCTBr4, TgCTBr9, TgCTBr13, TgCTBr17, TgCTBr23, TgCTBr25), with atypic genotypes and virulent for mice. The animals were divide into 10 treatment groups: SDZ10, SDZ40, SDZ160, SDZ640 treated with 10 to 640mg/kg per day of Sulfadiazine; PM3, PM12, PM50, PM200 treated with 3 à…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T13:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_costa_jgl_2012.pdf: 1716007 bytes, checksum: 28814ea39e65c0124b92726c580be319 (MD5) Previous issue date: 29

A transmissão congênita do Toxoplasma gondii em humanos tem sido associada à ocorrência de abortos, natimortos e mortalidade neonatal. Recém-nascidos infectados podem apresentar hidrocefalia, retinocoroidite, calcificações cerebrais e retardo mental ou perturbações neurológicas. A maioria das crianças infectadas que nascem sem sintomatologia aparente, quando não tratadas, podem desenvolver lesões oculares tardias. As estratégias de diagnóstico (sorológico ou parasitológico) comumente utilizadas possuem limitações que dificultam e/ou atrasam o diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita, essencial para o início do tratamento e consequente melhora no prognóstico da doença. Esse trabalho tem por objetivo identificar a presença do T. gondii no DNA extraído do sangue periférico de recém-nascidos infectados. A técnica de qPCR, utilizando uma sequência repetitiva do genoma do parasito (rep529) foi testada como uma alternativa para o diagnóstico rápido da toxoplasmose congênita. O resultado de 183/220 (83,2%) amostras foi considerado pela ausência de inibidores de PCR ou produtos inespecíficos. Em 84/183 (45,9%) das amostras a presença do parasito foi confirmada pela amplificação do alvo rep529. A técnica de qPCR-rep529 obteve boa reprodutibilidade (82,86%). Doze amostras (6,5%) com diagnóstico molecular positivo foram negativos para a pesquisa de IgG após 12 meses de vida. Não foi observada associação entre a qPCR-rep529 e a presença de calcificações cerebrais, entretanto, em relação à presença de lesão ocular, a diferença foi significativa (p= 0,013), O risco relativo (RR) de uma criança ter toxoplasmose ocular, dado que a qPCR foi positiva, é 1,8 vezes maior do que em uma criança, previamente triada como positiva, onde a qPCR foi negativa Considerando os tipos de lesão foi demonstrado que as crianças com retinocoroidite ativa possuem RR de 2,3 (p = 0,009) e as com retinocoroidite cicatrizada de 1,9 (p = 0,034). Através da quantificação do número de parasitos presentes no sangue periférico dos recém-nascidos foi avaliada uma possível associação entre a carga parasitária e a idade das crianças ou os principais sinais clínicos apresentados pelas crianças infectadas: calcificações cerebrais e retinocoroidite. A carga parasitária encontrada nas crianças foi pequena, 68% das amostras positivas apresentavam o número estimado de parasitos menor que 0,5 taquizoíto/mL de sangue periférico. As crianças possuíam em média 58 meses de vida e não foi observada associação significativa entre a idade das crianças e a carga parasitária. Da mesma forma não foi observada associação entre a presença de calcificações cerebrais ou a presença de retinocoroidite e a carga parasitária. Foi observada uma variação intraespecífica no número de cópias do alvo rep529 em oito cepas de genótipo recombinante e fenótipo virulento para…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T03:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_mariana_maciel_cunha.pdf: 2538968 bytes, checksum: be130abebb35d85e576973f80330af13 (MD5) Previous issue date: 26

A obtenção de isolados a partir de bioensaio em camundongos é a metodologia mais utilizada para a caracterização molecular de Toxoplasma gondii. A realização da genotipagem diretamente em amostras biológicas pode ser uma ferramenta útil e rápida, que permite a análise de um grande número de amostras. O objetivo deste trabalho foi realisar a genotipagem de T. gondii a partir de diferentes amostras biológicas utilizando a técnica de Multiplex multilocus nested PCR-RFLP (Mn-PCR-RFLP). Foram utilizados pulmão e cérebro de camundongos experimentalmente infectados com cinco isolados de T. gondii, 15 amostras de coração de galinhas caipiras naturalmente infectadas e 12 amostras de sangue humano de recém-nascidos com toxoplasmose congênita. Os genótipos obtidos foram identificados e comparados com os existentes no banco de dados ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Em camundongos experimentalmente infectados, a genotipagem completa foi obtida a partir de DNA extraído de pulmão após sete dias de infecção. Em cérebro, não houve amplificação na maioria das amostras. A diferença observada entre as amplificações nos dois órgãos pode refletir a cinética de dispersão e multiplicação do parasito, além da capacidade patogênica dos diferentes isolados. Em galinhas caipiras naturalmente infectadas, foi possível realizar a genotipagem completa em duas amostras e parcial em 13 amostras. Os dois novos genótipos obtidos ainda não haviam sido descritos na literatura. Em sangue obtido de recém-nascidos com toxoplasmose congênita, foi possível realizar a genotipagem parcial de oito das 12 amostras analisadas.

The isolation of Toxoplasma gondii by mouse bioassay is the most used method for molecular characterization of this parasite. Genotyping directly in biological samples can be a useful and fast tool, which allows the analysis of a large number of samples. The aim of this study was genotyping T. gondii from different biological samples using multiplex multilocus nested PCR-RFLP (Mn PCR-RFLP). Lung and brain of mice experimentally infected were used with five isolates of T. gondii, 15 heart samples from naturally infected free-range chickens as well as 12 human blood samples of newborns with congenital toxoplasmosis were used. The genotypes obtained were identified and compared with ToxoDB database (http://toxodb.org/toxo/). In experimentally infected mice, the complete genotype was obtained from DNA extracted from lungs after seven days of infection. In the brain, there was no amplification in most samples. The difference between the amplifications in the two organs may reflect the kinetics of dispersion and multiplication of the parasite and the pathogenic ability of different isolates. In naturally infected free-range chickens, it was possible to perform complete genotyping in two samples and partial genotyping in…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T22:55:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_joana_l_barbosa.pdf: 4730200 bytes, checksum: f98aa89a3bbe4872c66dc330530952ca (MD5) Previous issue date: 20

Aproximadamente dois bilhões de pessoas, em todo o mundo, estão infectadas cronicamente com o parasito Toxoplasma gondii, com amplas consequências. A infecção é extremamente bem sucedida. O parasito é capaz de atravessar a barreira hemato-encefálica e após o estabelecimento de uma resposta imune eficaz, estabelecer infecção crônica. A reativação da doença em indivíduos imunocomprometidos causa encefalite toxoplásmica que pode levar à morte. O tratamento para toxoplasmose é limitado e pode ser tóxico ao hospedeiro. No Brasil, o T. gondii possui uma estrutura genética populacional incomum, que tem sido correlacionada com as manifestações mais graves da doença. Nós utilizamos uma cepa virulenta, recém isolada e genotipada, obtida a partir do sangue um de recém-nascido diagnosticado com toxoplasmose congênita em Minas Gerais/Brasil. Para avaliação da infecção in vitro de neurônios e células da glia pela cepa virulenta TgCTBr9, nós utilizamos culturas primárias de neurônios e células da glia obtidos a partir da remoção do gânglio cervical superior de camundongos C57BL/6 com 1 a 2 dias de vida. As culturas foram infectadas a um MOI de 10 e acompanhadas por 24, 48, 72, 96 e 192 horas pós infecção e então fixadas e analisadas para danos neuronais, infectividade e marcadores estruturais e funcionais. Foram detectados parasitos em neurônios e células da glia em todos os tempos analisados, além do crescente aumento da taxa de infecção ao longo do tempo. Com 72 horas de infecção foi identificada a expressão de elementos da parede do cisto e esse processo estava completo com 192 horas. Nesse tempo nós também observamos a presença de bradizoítos. De 24 a 96 horas, as taxas de sobrevida neuronal e da densidade neurítica não foram estatisticamente significantes em relação aos controles intraexperimentais. No entanto, evidências de danos neuronais foram qualitativamente observadas com 96 horas, quando a taxa de infecção é significativamente maior. Quanto à função neuronal e morfologia, foi observado que a -tubulina é expressa ao redor de taquizoítos em neurônios infectados que também demonstram diminuição na intensidade da expressão de tirosina hidroxilase com o aumento do tempo de infecção. Nossos resultados demonstram de forma original que a cepa virulenta TgCTBr9 não só é capaz de infectar neurônios e células da glia in vitro, mas também de se diferenciar e encistar espontaneamente com 192 horas.

Approximately two billion people are infected chronically with Toxoplasma gondii worldwide, showing unknown consequences. The infection is extremely successful. The parasite is able to cross the biological brain barrier inducing a chronic stage after the establishment of an immune response. The reactivation of the disease in immunocompromised patients causes toxoplasmic encephalitis that can lead to death. The…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T23:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacaobarbara.pdf: 4829445 bytes, checksum: 3f5c0d5fdaf9a60506f5fbe449c16aaf (MD5) Previous issue date: 14

INTRODUÇÃO: Há escassez de informação sobre o uso de amostras de sangue capilar para a triagem pré-natal da toxoplasmose e sobre a acurácia dos testes de rastreamento em sangue seco. A existência de um programa de triagem pré-natal em Minas Gerais que utiliza sangue sexo motivou este estudo. OBJETIVOS: Revisar de forma sistêmica a evidencia cientifica publicada sobre os métodos sorológicos utilizados em programas de triagem pré-natal da toxoplasmose. Determinar o desempenho do teste Imunoscreen (ELISA da captura) em sangue seco para a detecção de IgM e IgG anti-Toxoplasma gondii na gestação em comparação com o teste ELFA-VIDAS em soro, utilizado com método de referencia, e avaliar a concordância entre eles. METODO: Na primeira parte do estudo, realizou-se uma revisão sistemática da literatura de acordo com recomendações das diretrizes PRISMA e Cochrane, com busca nas bases de dados PUBMED e LILACS até 29 de março de 2015. Na segunda parte, realizou-se estudo transversal em gestantes do Programa de Controle da Toxoplasmose Congênita em Minas Gerais (PCTC-MG) com coleta simultânea de sangue seco e soro entre 01 de julho e 31 de dezembro de 2014. Para elaboração do banco de dados e analise estática, utilizou-se o software Statistical Package for Social Sciences (SPSS) 18.0. O projeto de pesquisa obteve apoio das instituições envolvidas, foi aprovado pelo Comitê de Ética da UFMG e contou com recursos do CNPq. RESULTADOS: Os programas de triagem pré-natal identificados na revisão sistemática empregaram o soro como amostra biológica e citaram, com maior freqüência, os teste imunoenzimaticos para IgG e IgM como triagem, sendo o teste de avidez em IgG o mais utilizado entre os testes confirmados. No estudo transversal, foram recebidas 750 amostras. Após exclusão de 40 amostras (inadequadas ou com longos intervalos de coleta entre papel filtro e soro), restaram 70 gestantes, em que a prevalência da toxoplasmose foi de 45,2%. Para possibilitar avaliação da concordância, foram adicionadas 33 gestantes IgM positivas detectadas pelo PCTC-MG entre 01 de agosto e 31 de dezembro de 2014, sendo analisadas, finalmente, 734 amostras. Encontrou-se moderada concordância entre os testes para IgM (Kappa 60,0%) e muito boa concordância (91,1) quando o Kappa foi ajustado pela prevalência de IgM. A concordância para IgG foi muito boa (Kappa 81,6%). A especificidade foi alta tanto para IgM (98,4%) quanto para IgG (96,9%) e a sensibilidade para IgG também foi alta (84,0%). A sensibilidade de IgM no teste em estudo foi mais baica (55,3%). Um novo valor de cut-off obtido na curva ROC para IgM resultou em melhor performance do teste. CONCLUSÃO: A concordância para IgG entre sangue seco e soro foi muito boa, assim como para IgM após ajuste do Kappa pela prevalência. A menor sensibilidade observada pelo IgM deve ser melhor avaliada em…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T01:10:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_breno_pinheiro.pdf: 1823604 bytes, checksum: 946faaf8a24231026bb3523674b7fda2 (MD5) Previous issue date: 28

Sabe-se que a patogênese da toxoplasmose depende, dentre outros fatores, da estrutura genética da cepa do parasito e do hospedeiro, além da dose e rota de infecção. Estudos com cepas geneticamente distintas isoladas na América do Sul são ainda incipientes e estudos de associação entre essa estrutura genética distinta e a patogenia em camundongos de linhagens isogênicas são escassos, fazendo-se necessárias maiores abordagens nesse contexto. Recentemente, foram isoladas 27 cepas de casos humanos de toxoplasmose congênita no estado de Minas Gerais, dentre as quais três foram selecionadas para o presente trabalho: TgCTBR5, TgCTBR9 e TgCTBR16. Camundongos isogênicos BALB/c e C57BL/6 foram inoculados pela via oral com 10 cistos teciduais de cada uma das três cepas e foram avaliados quanto à sobrevivência, morbidade e histopatologia. Enquanto todos os camundongos inoculados com a cepa TgCTBR5 sobreviveram, nenhum resistiu à infecção pela cepa TgCTBR9. Camundongos infectados com a cepa TgCTBr16 apresentou 80% de sobrevivência, independentemente da linhagem do animal. Camundongos inoculados com a cepa TgCTBr5 apresentaram queda de peso corporal significativa, além de lesões teciduais irreversíveis, demonstrando que, mesmo não letal, cepas avirulentas podem ser patogênicas para camundongos. Camundongos C57BL/6 se mostraram mais suscetíveis do que animais BALB/c na análise de morbidade e histopatológica. No entanto, os primeiros foram mais resistentes à formação de cistos teciduais no cérebro após 30 dias de infecção. A análise histopatológica demonstrou o fígado e pulmões como órgãos mais afetados, resultado já descrito em vários outros trabalhos e associados à morte de animais durante a segunda semana de infecção. A cepa TgCTBr9, virulenta, se mostrou mais lesiva aos tecidos dos animais do que as demais e camundongos C57BL/6 apresentaram lesões mais consideráveis do que animais BALB/c. A sorologia dos sobreviventes após 30 dias confirmou 100% de infecção nos camundongos de ambas as linhagens inoculados com a cepa TgCTBr5. Em contrapartida, a cepa TgCTBr16 apresentou baixa infectividade, principalmente pela via oral. A genotipagem dessa cepa, não realizada anteriormente, foi concluída e revelou genótipo atípico BrIII, o mesmo da cepa TgCTBr5 nos loci analisados. Os resultados do presente trabalho sugerem fortemente que a patogênese da toxoplasmose depende, sobretudo, de fatores intrínsecos às cepas do parasito.

The pathogenesis of toxoplasmosis depends on the genetic structure of the parasite strain and the host, as well as the dose and route of infection, among other factors. There is a lack of pathological studies using inbred strains of mice after inoculation with strains of Toxoplasma gondii belonging to atypical genotypes commonly found in Brazil. Previously, 26 strains were isolated from human cases…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T08:10:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_jamila_27.09.2016.pdf: 2100686 bytes, checksum: 2366bec1c0342adbd5a476b8b1280463 (MD5) Previous issue date: 9

A destruição de hemácias não infectadas tem sido associada à anemia na malária, porém, os mecanismos imunológicos envolvidos na destruição dessas células permanecem desconhecidos, principalmente nos casos de infecção por P. vivax. Um dos fatores que poderiam contribuir para a destruição dessas hemácias são os auto-anticorpos produzidos durante a infecção. Entretanto, nota-se, na literatura, uma escassez de estudos no que se refere à relação entre autoimunidade e anemia em infecções por P. vivax. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar as associações entre a resposta de anticorpos, IgG e IgM, contra moléculas de hemácias de diferentes grupos sanguíneos (A, B e O) e a anemia em pacientes infectados por P. vivax. Para isso, ensaios de Cell-ELISA foram realizados, utilizando-se eritrócitos de indivíduos saudáveis nunca expostos à malária e pertencentes a três grupos sanguíneos (A, B e O). Foram incluídos, ainda, pacientes com malária vivax não grave residentes em áreas de baixa transmissão na Amazônia brasileira (n = 75) e pacientes com malária vivax grave residentes em área de transmissão intensa no Peru (n = 18). Verificou-se que, para pacientes com malária não grave, o reconhecimento, por anticorpos IgG, contra moléculas de hemácias do grupo sanguíneo A, foi inferior ao observado para hemácias dos grupos B e O. Por outro lado, no que se refere à resposta de IgM, observou-se que as hemácias do grupo B foram menos reconhecidas que os eritrócitos dos demais grupos sanguíneos. Ainda no que se refere aos pacientes não graves, não foi encontrada nenhuma associação significativa entre a exposição ou a parasitemia e a resposta de anticorpos contra moléculas de hemácias dos diferentes grupos sanguíneos. Além disso, associações negativas entre os níveis de hemoglobina e os de anticorpos IgG, bem como os de IgM, foram observadas. Quando comparamos a resposta de anticorpos IgG ou IgM entre pacientes anêmicos e não anêmicos, observou-se que ambas as respostas foram maiores para pacientes anêmicos. Resultados contrários foram encontrados para pacientes com malária grave residentes no Peru, já que nesse caso, os pacientes anêmicos apresentaram níveis de IgG e IgM inferiores aos observados para os não anêmicos. Todos esses achados ampliam a nossa compreensão sobre a relação entre a resposta de anticorpos direcionada contra hemácias dos diferentes grupos sanguíneos e a anemia na malária vivax.

The destruction of uninfected RBCs has been associated with anemia in malaria but the mechanisms involved in this clearance remain unknown, particularly in regard to P. vivax. One of the factors that could contribute to this destruction is self-antibodies produced during the infection. However, few studies have concerned the relationship between autoimmunity and anemia in P. vivax infections. The aim of this…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T03:18:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo___erica_viana_machado_carellos.pdf: 79527 bytes, checksum: 40a69aa84db224c835f7cf1879222f83 (MD5) Previous issue date: 23

Em novembro de 2006 foi iniciado um estudo intitulado Triagem Neonatal para Toxoplasmose congênita em Minas Gerais. Foi realizado o rastreamento para toxoplasmose em sangue seco, durante sete meses, em todos os recém-nascidos participantes do Programa Estadual de Triagem Neonatal de Minas Gerais (PETN-MG). As crianças com resultado positivo ou indeterminado foram convidadas a comparecer aos ambulatórios do Hospital das Clinicas da Universidade Federal de Minas Gerais (HC-UFMG) para realização dos testes confirmatórios em soro, e para avaliação pediátrica, oftalmológica, auditiva e exames de neuroimagem. O tratamento antiparasitário foi iniciado a partir do diagnostico e continuado ate completar um ano. Entre 146.307 recém-nascidos triados (cerca de 95% dos nascidos vivos no período), foi confirmado o diagnostico de toxoplasmose congênita para 190 crianças, resultando em uma prevalência de 13 infectados para cada 10.000 nascidos vivos. Entre as crianças com diagnostico confirmado, 178 foram atendidas nos ambulatórios do HC-UFMG. A partir dos dados encontrados, no estudo acima citado, foi proposto este trabalho intitulado "Epidemiologia da toxoplasmose congênita em Minas Gerais, Brasil . um estudo populacional " com objetivo de avaliar a distribuição da toxoplasmose congênita nos municípios que compõem o Estado de Minas Gerais, e verificar os fatores de risco epidemiológicos associados com a sua ocorrência. A avaliação incluiu dois estudos com abordagens analíticas diferentes. Inicialmente foi realizado um estudo ecológico para avaliar as características demográficas e socioeconômicas dos municípios associadas com a maior prevalência da toxoplasmose congênita. Em seguida foi realizado um estudo caso-controle para avaliar a associação entre a toxoplasmose congênita e a exposição materna aos fatores de risco para infecção. Para realização do estudo ecológico, os municípios foram caracterizados do ponto de vista demográfico utilizando o censo populacional do IBGE, ano referencia de 2000. Foram utilizados dois indicadores socioeconômicos para avaliar os aspectos socioeconômicos dos municípios associados com a ocorrência da toxoplasmose congênita - o Índice de Desenvolvimento Humano (IDH), e o Índice Mineiro de Responsabilidade Social (IMRS), que se trata de um indicador composto criado pela Fundação João Pinheiro com objetivo de retratar o nível de desenvolvimento de cada município. O IMRS contem informações referentes às áreas da saúde; educação; meio ambiente e saneamento; segurança publica; renda e emprego; cultura, esporte e lazer; e finanças municipais. Para avaliar a associação entre a prevalência da toxoplasmose congênita e as características demográficas e socioeconômicas dos municípios foi utilizado o modelo de Poisson com inflação de zeros, que possibilitou a inclusão de todos os…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T06:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_juliaglcosta.pdf: 3070911 bytes, checksum: 1e5d45bf0661b55f85ed012693f15b08 (MD5) Previous issue date: 22

A reinfecção por Toxoplasma gondii em modelo animal vem sendo estudada desde que relatos de caso sugeriram a ocorrência de reinfecção natural em humanos. O Brasil é uma região endêmica para a toxoplasmose e com enorme diversidade de genótipos do parasito, que sugere que múltiplas exposições a diferentes tipos genéticos aumentem o risco de reinfecção. Apesar da demonstração da reinfecção em modelo animal, muito pouco se conhece sobre os eventos que ocorrem logo após o desafio, momento no qual os taquizoítos circulantes podem alcançar o feto causando toxoplasmose congênita. Neste estudo foi utilizado um modelo de reinfecção em que camundongos BALB/c cronicamente infectados por uma cepa avirulenta (D8 - genótipo ToxoDB#8 BrIII) foram desafiados com cepas de elevada virulência e genótipos distintos: EGS (genótipo ToxoDB229 - virulenta) e CH3 (genótipo ToxoDB#19 virulência intermediária) ou com a própria cepa D8. Os resultados foram comparados com controles de infecção aguda por cada uma dessas três cepas assim como com a infecção crônica pela cepa D8. A infecção primária protegeu os animais do desafio com as cepas letais. A morbidade foi reduzida nos animais reinfectados conforme demonstrado pelo acompanhamento do peso e pela análise histopatológica do intestino, pulmão, fígado, cérebro e baço que mostraram alterações patológicas minimizadas. A reinfecção foi confirmada, entretanto o padrão de disseminação do parasito se deu de forma distinta daquele que ocorre na primoinfecção. Foi observada a chegada precoce dos parasitos aos pulmões e atraso tanto na multiplicação destes no intestino quanto na chegada ao cérebro. Nos animais desafiados não ocorre um aumento de citocinas inflamatórias ou modulatórias no soro ou mesmo no local de infecção (intestino) em comparação aos animais apenas com infecção crônica. Outros mecanismos da resposta imune devem estar envolvidos garantindo esse equilíbrio entre parasito e hospedeiro que permite a sobrevivência de ambos. A análise da proteína de virulência ROP16 auxiliou no entendimento da maior inflamação causada na infecção pela cepa EGS. Porém a análise combinada das proteínas ROP5 e ROP18 na predição da virulência das cepas foi adequada em apenas duas das três cepas em estudo.

Animal model of Toxoplasma gondii reinfection has been studied after cases of natural human reinfection were described. Brazil is an endemic area for toxoplasmosis with enormous genetic diversity of parasites. Multiples exposures with different strains likely occur with great frequency, increasing reinfection risk. Although animal model prove reinfection, little is known about the events that occur just after challenge. To better understand these events, BALB/c mouse were chronically infected with D8 strain (genotype ToxoDB#8 BrIII) and challenge with two different strains: EGS (genótipo ToxoDB…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T20:29:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_doutorado_patricia_silveira.pdf: 2828835 bytes, checksum: fa39cf9c777a82fcbab5c4ee095d03a8 (MD5) Previous issue date: 5

Plasmodium juxtanucleare, uma de duas espécies causadoras de malária em galinhas, pode ser encontrada em diferentes países do mundo, incluindo o Brasil. O objetivo geral deste estudo foi avaliar a infecção por P. juxtanucleare em pintinhos livres de patógenos (SPF) e previamente imunossuprimidos pelo vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV). Para o estabelecimento deste modelo foram abordadas duas estratégias experimentais: (i) avaliação de alterações hematológicas, biológicas e patológicas, (ii) avaliação da resposta celular das aves infectadas. Para isso, definiram-se quatro grupos experimentais: Grupo P. juxtanucleare: aves infectadas exclusivamente por P. juxtanucleare, Grupo CAV: aves infectadas exclusivamente por CAV, Grupo co-infectado: aves co-infectadas por P. juxtanucleare e por CAV e Grupo controle: aves não infectadas. A parasitemia por P. juxtanucleare apresentou-se baixa em ambos os grupos infectados por P. juxtanucleare (grupos P. juxtanucleare e co-infectado); entretanto, valores significativamente maiores foram detectados nas aves co-infectadas. Anemia foi observada nos três grupos infectados. No entanto, aves co-infectadas apresentaram anemia mais severa, observada pela redução significativa do hematócrito quando comparadas aos outros grupos infectados. A mortalidade foi maior e detectada precocemente no grupo co-infectado, entretanto as lesões patológicas foram moderadas quando comparadas às lesões acentuadas observadas nas aves dos grupos P. juxtanucleare e CAV. Esses resultados indicam que os microrganismos apresentam efeito patogênico potencializado durante ambas às infecções. O número total de leucócitos e de linfócitos apresentaram redução significativa (p<0,05) nos grupos CAV e co-infectado. O grupo P. juxtanucleare apresentou aumento de leucócitos e de linfócitos e diminuição de heterófilos. Além disto, demonstrou-se o aumento de células T auxiliares e citotóxicas co-estimuladas e ativadas neste grupo. Já as aves dos grupos CAV e co-infectado apresentaram diminuição significativa de células citotóxicas co-estimuladas e ativadas e auxiliares co-estimuladas. As aves do grupo CAV, diferentemente do observado no grupo co-infectado, apresentaram redução de células T auxiliares e auxiliares ativadas, além de alterações no número células B. Esses dados apontam para um efeito imunomodulatório dependente de células T e B na co-infecção P. juxtanucleare-CAV diferente quando comparadas as infecções exclusivas por CAV ou P. juxtanucleare.

Plasmodium juxtanucleare, one of the two species that cause malaria in chickens, can be found in different countries around the world including Brazil. The aim of this study was to evaluate the effect of infection caused by P. juxtanucleare in specific pathogen free (SPF) chicks previously immunosuppressed with chicken anemia virus…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T02:09:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_luciana__2_.pdf: 1139710 bytes, checksum: 29a6b14b6c7b718e7a4554a9ef0094ac (MD5) Previous issue date: 16

Os triatomíneos são insetos hematófagos e importantes vetores do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas nas Américas. Um dos principais procedimentos preconizados pelo Programa de Controle da Doença de Chagas (PCDCh) consiste na identificação de residências infestadas e eliminação dos triatomíneos vetores. Os métodos atuais utilizados nos inquéritos entomológicos são considerados caros, precisam de mão de obra treinada e são sujeitos a erros. Sendo assim, é interessante desenvolver novos métodos que auxiliem ou substituem os atuais. Como a saliva dos triatomíneos entra em contato direto com o sistema imune do hospedeiro, uma alternativa atraente é o monitoramento do nível de anticorpos anti-saliva presentes no soro de indivíduos de regiões endêmicas. Sendo assim, os objetivos deste trabalho forma identificar antígenos salivares imunogênicos de triatomíneos e avaliar sua utilização como marcador de contato por Rhodnius prolixus. Para isto, grupos de camundongos foram expostos a altas e baixas infestações por diferentes espécies de triatomíneos e seu soro foi utilizado em ensaios imunoenzimáticos e western-blot para identificação dos antígenos salivares mais imunogênicos. Os antígenos identificados foram purificados e avaliados por ELISA quanto ao reconhecimento cruzado entre as espécies e espécie específico. Os ensaios imunoenzimáticos mostraram que camundongos expostos a altos e baixos níveis de infestação pelo R. prolixus e Triatoma infestans desenvolvem uma resposta espécie específica anti-saliva mediada por IgG. Não foi observada diferença significativa no soro de camundongos expostos a altos e baixos níveis de infestação pelo R. prolixus. O western-blot mostrou que os antígenos mais imunogênicos da saliva de R. prolixus são duas são proteínas 48,5 e 18,2 kDa. A proteína de 48,5 kDa foi purificada e identificada como a apirase salivar do R. prolixus. Resultados do ELISA mostraram que a apirase salivar é reconhecida por anticorpos IgG presentes no soro de camundongos expostos a infestação por R. prolixus, mas não é reconhecida por anticorpos IgG presentes no soro de camundongos expostos a infestação por T. infestans e Triatoma brasiliensis. Buscas realizadas nos bancos de dados (NCBI) identificaram duas apirases expressas na glândula salivar do R. prolixus, sendo uma endógena e uma secretada (provavelmente o antígeno de 48,5 kDa). De forma geral, os resultados indicam que apirase salivar possui potencial para ser utilizada como marcador de contato para R. prolixus, mas novos ensaios devem ser realizados para avaliar a reação cruzada com outras espécies de triatomíneos e com outros artrópodes.

Triatomines bugs are important haematophagous insects and vectors of Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease in America. Identification of triatomine infestations and…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T04:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_thaisa.pdf: 1480449 bytes, checksum: 966307c0a6c7394d0333254ea2e8437f (MD5) Previous issue date: 5

A amebíase é uma doença humana causada pelo protozoário Entamoeba histolytica, um parasito patogênico e invasivo que causa morte de cerca de 100 mil indivíduos por ano em todo mundo. Algumas espécies do gênero Maytenus têm sido utilizadas na medicina popular brasileira para tratamento da diarreia. Estas plantas são promissoras fontes de triterpenos bioativos de interesse medicinal. Doze extratos brutos e quatro triterpenos, previamente conhecidos, isolados a partir de galhos e raízes de Maytenus gonoclada, foram investigados in vitro em relação ao potencial amebicida em diferentes intervalos de tempo. Extratos brutos, lupeol, 3-30-di-hidroxi-lup-20(29)-eno e 3-oxo-11-hidroxilup-20 (29)-eno não exibiram atividade contra E. histolytica, contudo, o triterpeno tingenona foi ativo. A citotoxicidade da tingenona foi avaliada utilizando células mononucleares do sangue periférico humano. A IC50 encontrada foi de 8,9 µM. Neste caso a dose citotóxica está muito próxima da dose amebicida, inviabilizando o prosseguimento dos estudos com a substância in natura. A citotoxicidade da tingenona sobre células humanas poderia constituir restrição para seu emprego em tratamentos antiparasitários. Contudo a facilidade de obtenção e grandes quantidades, sinaliza sua utilização para modificações na estrutura da molécula visando obter derivados com potente atividade e menor toxicidade.

Amebiasis is a human disease caused by the protozoan Entamoeba histolytica, a parasite that causes invasive pathogenic and death of about 100.000 individuals per year worldwide. Some species of the genus Maytenus have been used in Brazilian folk medicine to treat diarrhea. These plants are promising sources of bioactive triterpenes of medicinal interest. Twelve extracts and four triterpenes, previously known, isolated from the branches and roots of Maytenus gonoclada were investigated "in vitro" against potential amoebicide at different time intervals. Crude extracts, lupeol, 3-30-dihydroxy-lup-20 (29)-ene and 3-oxo-11-hydroxylup-20 (29)-ene exhibited no activity against E. histolytica, however, the triterpene tingenone was active. The cytotoxicity was evaluated using the tingenone mononuclear cells human peripheral blood. The IC50 of 8.9 M was found. In this case the cytotoxic dose is very close to the dose amoebicide, precluding further studies with substance "in nature". The cytotoxicity of tingenone on human cells could be restricted to its use in parasite treatments. However the ease of obtaining large amounts and, pointing their use for changes in the structure of the molecule to obtain derivatives with potent activity and lower toxicity.

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Made available in DSpace on 2019-08-10T17:11:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_doutorado___anderson_machado.pdf: 6129499 bytes, checksum: 614696aa34f05ea1dce4ed525dab037f (MD5) Previous issue date: 13

O desenvolvimento de uma resposta imune adequada é fundamental para o controle do T. gondii, mas também para reduzir as sequelas da infecção congênita. A toxoplasmose ocular é a principal manifestação clínica da toxoplasmose, e o entendimento dos mecanismos imunopatológicos envolvidos é fundamental para uma abordagem terapêutica mais adequada. Neste trabalho foi coletado o sangue de recémnascidos com toxoplasmose congênita apresentando diferentes formas clínicas da doença ocular para avaliar possíveis alterações do perfil imunológico através da imunofenotipagem de células mononucleares circulantes e da análise de citocinas intracitoplasmáticas após estimulação in vitro. Nossos resultados mostraram que, devido a infecção congênita, há aumento de linfócitos e monócitos nos recém-nascidos infectados. Numa análise mais detalhada, verificou-se aumento de monócitos próinflamatórios, indicando que a persistência da resposta pró-inflamatória pode estar relacionada com o desenvolvimento da patologia. Células NK e células T NK também estavam aumentadas em recém-nascidos infectados com T. gondii, sendo um fator importante na resposta imune contra o parasito. A análise da resposta imune adaptativa mostrou que linfócitos T CD4+ aparentemente estão associados com o fenótipo de lesão ativa. Adicionalmente, foi mostrado que as células T CD8+ podem ser um importante biomarcador de morbidade nos recém-nascidos infectados. Em conjunto, os resultados do perfil fenotípico das células mononucleares circulantes nos recém-nascidos com toxoplasmose congênita sugerem maturação da resposta imune. Finalmente, verificamos possíveis alterações na produção de citocinas por parte das células mononucleares circulantes dos recém-nascidos com toxoplasmose congênita. Na resposta imune inata verificamos um perfil misto com predominância de citocinas reguladoras em neutrófilos, perfil pró-inflamatório modulado por IL-10 em monócitos e perfil próinflamatório em células NK. A análise da produção de citocinas em células da imunidade adaptativa mostrou perfil pró-inflamatório nas células T CD4+ e T CD8+, e perfil regulatório em células B. A análise da produção de citocinas em subgrupos de crianças com diferentes manifestações oculares mostrou o aumento de IL-1Ò e TNF-Ñ somente nas células de recém-nascidos sem lesão ocular ativa. A citocina IL-17 apresentou aumento em neutrófilos e células T CD4+ somente nos recém-nascidos com lesão retinocoroideana ativa. As principais citocinas pró-inflamatórias no controle da toxoplasmose, IL-12 e IFN-×, estavam aumentadas em monócitos e células T CD4+ de todos os grupos com infecção congênita. O presente estudo apresenta-se como uma excelente oportunidade para o entendimento de alguns aspectos fundamentais da resposta imune durante a infecção congênita, além do levantamento de possíveis…

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Made available in DSpace on 2019-08-09T22:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1___tese_11_5_12__vers_o_final_.pdf: 5802867 bytes, checksum: ca9a5bf6a278b78168d0089f720da2dd (MD5) Previous issue date: 25

O objetivo deste estudo foi estimar a soroprevalência e fatores de risco para toxoplasmose em ovinos do estado do Rio Grande do Norte, bem como caracterizar os isolados de Toxoplasma gondii obtidos de animais de produção (ovinos, caprinos, suínos e galinhas caipira) naturalmente infectados do Estado. Foram testados através da técnica de ELISA soros de 930 ovinos provenientes de duas mesorregiões com características climáticas distintas, além da aplicação de dois questionários com dados da propriedade e individuais de cada animal. Anticorpos anti- T. gondii foram encontrados em 205 (22,1%) dos 930 ovinos testados. Os fatores de riscos para a infecção por T. gondii foram: presença de gatos, idade dos ovinos e a utilização de fonte de água não exposta para estes animais, caracterizando a existência de transmissão da infecção associada a oocistos esporulados de T. gondii no meio ambiente. A avaliação da avidez de anticorpos IgG em 205 amostras positivas pelo ELISA convencional, mostrou que 168 (81,95%) dos animais apresentaram anticorpos IgG de alta avidez e 37 (18,05%) anticorpos de baixa avidez. Estes resultados sugerem a presença de ovinos emfase aguda da toxoplasmose no Estado do Rio Grande do Norte. Para isolamento de T. gondii, amostras de soros de 223 ovinos de 4 municípios, 50 caprinos de 3 municípios, 18 suínos de três municípios e 43 galinhas caipira de um município, abatidos para consumo humano no Estado do Rio Grande do Norte, foram testadas através do ELISApara detectar a presença de anticorpos anti-T. gondii. Dos animais soropositivos realizou-se o bioensaio em camundongos e foram obtidos 19 isolados, sendo 1 de caprino, 5 de suínos e 13 de galinhas caipira. T. gondii não foi isolado de ovinos. Os isolados foram divididos em dois grupos de acordo com o fenótipo de virulência para camundongos. Dezessete isolados (89,5%) foram caracterizados como virulentos eapenas dois (10,5%) foram identificados como avirulentos. Não foram observados isolados com fenótipo de virulência intermediária. A variabilidade genética dos isolados foi analisada por Tamanho de Fragmento de Restrição (PCR-RFLP) em 11 loci (SAG1,53SAG2, SAG2 alt, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico). As cepas RH (Tipo I), ME49 (Tipo II) e VEG (Tipo III) foram utilizadas como cepas de referência. Seis genótipos diferentes foram identificados, sendo três novos genótipos. Não foi identificado nenhum genótipo arquétipo tipo I, II ou III nos isolados estudados.Não foi observada associação entre virulência e genotipagem dos isolados. Este estudo confirma a variabilidade genotípica do parasito no Brasil.

This work aimed to evaluate the seroprevalence and risk factors for toxoplasmosis in sheep from the state of Rio Grande do Norte, Brazil, as well as to characterize the isolates of Toxoplasma gondii obtained from…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T02:05:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_de_doutorado___d_bora_de_almeida_aloise.pdf: 6223078 bytes, checksum: 60e71daf15e1409a7508c06d4adb63eb (MD5) Previous issue date: 9

A toxoplasmose é uma das mais comuns infecções parasitárias em todo o mundo e as estimativas de soroprevalência para populações humanas e animais apresentam grandes variações até mesmo dentro de uma mesma região. Estudos relacionados a toxoplasmose nos estados do Nordeste do Brasil são poucos e nenhum trabalho nestesentido foi encontrado na literatura no que diz respeito ao município de Santa Cruz RN. Neste trabalho analisou-se a prevalência da infecção por Toxoplasma gondii tanto em humanos como em animais (cão, gato e ave) desse município. O ensaio imunoenzimático (ELISA) para detectar IgG mostrou que 66,2% da população humana apresentavam anticorpos anti T. gondii. Anticorpos IgM anti-T. gondii foram identificados em 4,0% desses voluntários, dos quais 22,1% apresentaram resultado IgG negativo (IgM+/IgG-), e 77,9% apresentaram sorologia positiva tanto para IgM como para IgG (IgM+/IgG+). O teste de avidez, realizado nos soros IgG positivos, associado à presença de IgM identificou 2% desses voluntários com infecção classificada como recente. Os fatores de risco associados a infecção foram identificados através da aplicação de questionário. Permaneceram no modelo final após análise logística multivariada os seguintes fatores: idade (> 45 anos/ OR 7,4; 95%IC; Intervalo 3,7-14,8; p=0,01), grau de escolaridade (Analfabeto/OR 2,8; 95%IC; Intervalo 1,6-5,0; p=0,00), quantidade de gatos na residência (> 3 gatos/ OR 2,0; 95%IC; Intervalo 1,2-3,5; p=0,01), ausência de caixa d´água (OR 2,0; 95%IC; Intervalo 1,4-3,1; p=0,01) e ingestão de leite cru/não pasteurizado (OR 2,0; 95%IC; Intervalo 1,3-3,0; p=0,01). Após acompanhamento dos voluntários soronegativos por, aproximadamente, um ano, a taxa de incidência da infecção por T. gondii observada neste município foi de 6,8/1000 pessoas / mês. Os ensaios sorológicos para detectar IgG realizados nos animais, presentes no domicílio soroprevalência de 47,4% nas aves, 75,8% nos cães e 60,1% nos gatos. Exceto para cães, a infecção por este protozoário mostrou associação estatística com a idade (Aves: idade > 12 meses/ OR 4,5; 95%IC; Intervalo 1,5-13,5; p=0,00 / Gato: idade > 5 anos/ OR 3,4; 95%IC; Intervalo 1,4 8,3; p=0,00). A infecção toxoplásmica em humanos é frequentemente subclínica, no entanto pode evoluir e apresentar um quadro clínico, principalmente com retinocoroidite. A resposta imune provavelmente apresenta um papel relevante na evolução da infecção e, neste trabalho, encontramos associação estatística entre toxoplasmose ocular e o polimorfismo do gene APEX1 (rs1130409). A análise de regressão logística mostrou maior chance de desenvolver a lesão ocular naqueles pacientes com alelos polimórficos (GG) ou heterozigotos (GT). Nenhuma correlação foi encontrada, na população estudada, entre o gene MyD88 (rs7744) e lesão ocular. Também não se…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T23:36:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta_ao_mestrado_luiza_carvalho_mour_o_2011.pdf: 2358744 bytes, checksum: 5af2b1d06a9205c307670ed54ec8978f (MD5) Previous issue date: 18

Como a imunidade antimalárica ao repertório de antígenos de Plasmodium é complexa e compreende componentes distintos que interagem entre si, uma etapa importante para o desenvolvimento de uma vacina é a identificação da natureza precisa dos antígenos que atuam como potenciais alvos da resposta imune naturalmente adquirida. Numa tentativa de identificar esses alvos, nós investigamos as respostas de anticorpos específicas para duas proteínas de P. vivax candidatas à vacina, PvMSP-119 e PvMSP-3, bem como as suas relações com a anemia e a trombocitopenia em pacientes infectados por P. vivax. De uma forma geral, PvMSP-119 foi o antígeno mais imunogênico e a frequência de respondedores para esta proteína foi maior em pacientes com parasitemias mais elevadas. Para ambos os antígenos, as respostas de IgG foram inferiores em pacientes primoinfectados. As análises univariadas revelaram que os pacientes anêmicos apresentaram níveis de IgG superiores aos observados para os não anêmicos. O efeito da atuação conjunta das diferentes subclasses foi avaliado por meio de uma análise multivariada mais robusta, com o objetivo de se identificar o padrão de resposta que poderia estar envolvido na anemia. Pacientes anêmicos apresentaram maiores níveis de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 anti-MSP3 quando comparados aos não anêmicos. Como PvMSP-3 é um antígeno polimórfico secretado, nós acreditamos que ele pode se aderir à superfície de hemácias infectadas e não infectadas, resultando na ligação de IgG ou complemento e acelerando a destruição das hemácias normais. Esses dados acrescentam informações importantes que poderão auxiliar na compreensão dos aspectos imunológicos envolvidos na patogênese da malária vivax.

Since antimalarial immunity to the antigen repertoire of Plasmodium is complex and comprises distinct but interacting components, an important step before design a vaccine is identifying the precise nature of immune responses that function as targets of naturally acquired antibodies. In an effort to identify such targets, we investigated specific antibody responses against two Plasmodium vivax valuable vaccine candidates, PvMSP-119 and PvMSP-3, as well as their relationship with anemia and thrombocytopenia in P. vivax infected patients. Overall, PvMSP-119 was the most immunogenic antigen, and the frequency of responders to this protein tended to increase in patients with higher parasitaemia. For bothantigens, IgG antibody responses tended to be lower in patients who had experienced their first malaria. Univariate analysis revealed that anemic patients presented higher IgG antibody responses to PvMSP-3 than non-anemic ones. The joint effects of different IgG isotypes were further evaluated by robust multivariate analysis, aiming to detect the antibody profile that could be involved in anemia. Anemic…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T17:40:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o___norinne.pdf: 2676802 bytes, checksum: ba22d8e7d0271dfb8a3e14ed1bc5e2c4 (MD5) Previous issue date: 18

ResumoA malária é a doença parasitária mais grave da humanidade, sendo um problema de saúde pública em mais de 100 países. A malária cerebral (MC), causada pelo Plasmodium falciparum, é uma das formas de manifestação mais grave da malária humana e a principal causa de óbitos, apresentando mecanismos ainda desconhecidos. A patogênese da malária está associada a uma resposta imune inapropriada ou excessiva desenvolvida pelo hospedeiro para eliminar o parasito. Devido às dificuldades em acompanhar casos humanos e da limitada possibilidade de examinar os processos patológicos, modelos experimentais de MC foram desenvolvidos. Embora nenhum modelo reproduza totalmente a condição humana, o modelo experimental utilizando roedores é bem caracterizado e a grande diversidade de linhagens de camundongos, associada à infecção com diferentes espécies de Plasmodium, tem contribuído para elucidar aspectos envolvidos na patogênese da doença. Assim, o objetivo do nosso trabalho foi avaliar a resposta inflamatória cerebral envolvida na patogênese da malária experimental induzida por Plasmodium berghei cepa NK65 em camundongos jovens (seis semanas de idade) das linhagens BALB/c e C57Bl/6. Camundongos BALB/c e C57Bl/6 foram infectados com inóculo padronizado de 106 hemácias parasitadas por injeção intraperitoneal. A parasitemia foi monitorada diariamente, a partir do terceiro dia pós-infecção (dpi), e apresentou uma evolução gradual, com diferença significativa entre as duas linhagens ao longo da infecção (p<0.01). Sinais clínicos e sobrevida dos animais foram avaliados durante doze dias, com expressiva perda de massa corporal nos animais infectados em relação aos animais controles, em ambas as linhagens. A mortalidade também apresentou um perfil diferente entre as linhagens de camundongos, estando concentrada nos dias seis e sete pós-infecção para C57Bl/6 e oitavo dia para BALB/c. Camundongos das duas linhagens foram submetidos à análise histopatológica para determinação da progressão das alterações morfológicas no cérebro. Animais C57Bl/6 apresentaram alterações teciduais precoces, porém discretas, já no terceiro dia pós-infecção. As alterações cerebrais, semelhantes às descritas na MC, tornaram-se mais evidentes ao longo do tempo e foram mais intensas em camundongos da linhagem C57Bl/6 em relação à linhagem BALB/c, o que justifica a morte precoce daquela linhagem. A interação leucócito-endotélio na microcirculação cerebral foi avaliada através de microscopia intravital nos vasos da pia-máter de animais infectados (5 dpi) e animais controle (não-infectados). Os animais infectados apresentaram aumento do número de leucócitos em rolamento e aderidos na parede do endotélio em relação aos animais controle. A contagem total e diferencial de leucócitos (linfócitos, monócitos neutrófilos, eosinófilos e basófilos) presentes no…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T18:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 completo_final_banca.pdf: 1051631 bytes, checksum: fe564a7e9b647fe6181e1bcc87b68ab8 (MD5) Previous issue date: 25

A ocorrência de reinfecção pelo Toxoplasma gondii foi confirmada em modelos experimentais utilizando camundongos, contudo, ainda não está estabelecido se esse processo é genótipo-dependente e ainda não existem estudos que avaliem a reinfecção em camundongos imunossuprimidos. Para verificar interferência das diferenças genotípicas entre as cepas de T. gondii no processo de reinfecção e avaliar o efeito imunossupressor da ciclofosfamida (Cy) na suscetibilidade ao desafio, grupos de camundongos BALB/c foram primo infectados com a cepa D8 (recombinante I/III) ou ME49 (tipo II), ambas não virulentas, e após 45 dias foram desafiados com as cepas CH3 ou EGS (recombinantes I/III e virulentas). Outros camundongos foram inoculados seguindo o mesmo protocolo, porém foram imunossuprimidos semanalmente pela Cy, iniciando 5 dias antes do desafio. Trinta dias após o desafio, cistos cerebrais de cada camundongo sobrevivente foram inoculados em camundongos BALB/c para realizar o bioensaio. O restante foi inoculado em camundongos Swiss para obtenção de taquizoítos que foram recuperados e submetidos à análise por PCR-RFLP (marcadores L363 e cS10-A6) para confirmar a reinfecção. A cinética da produção de anticorpos IgG total, IgG1, IgG2a, IgM e IgA anti- T. gondii foi avaliada pelo método de ELISA. Além disso, foi avaliada a ação da Cy sobre os leucócitos circulantes de camundongos primo infectados. De forma geral, a infecção primária com a cepa D8 conferiu maior proteção ao desafio com as cepas CH3 e EGS do que a infecção primária com a cepa ME49. A PCR-RFLP foi mais sensível que o bioensaio para confirmar a reinfecção, e mostrou que camundongos primo infectados com a cepa ME49 se reinfectam com as cepas CH3 e EGS, enquanto camundongos primo infectados com a cepa D8 se reinfectam apenas com a cepa EGS, mais virulenta que a cepa CH3. A imunossupressão aumentou as taxas de reinfecção e de mortalidade dos animais. A reinfecção nos camundongos imunocompetentes foi relacionada ao aumento nos níveis de anticorpos IgM e IgA após o desafio. Por outro lado, 30 dias após o desafio, os camundongos imunossuprimidos e desafiados apresentavam níveis de IgM e IgA significativamente menores que os não imunossuprimidos desafiados, sugerindo que essas imunoglobulinas participam da proteção contra a reinfecção. A Cy causou leucopenia significativa em camundongos primo infectados, com redução no número de linfócitos e neutrófilos, o que provavelmente favoreceu a reinfecção. Conclui-se que a suscetibilidade de camundongos BALB/c à reinfecção pelo T. gondii está relacionada às diferenças genotípicas entre as cepas da infecção primária e do desafio, à virulência da cepa usada no desafio e à alteração da integridade imune do hospedeiro, o que provavelmente compromete a proteção previamente estabelecida pela infecção primária.

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Made available in DSpace on 2019-08-13T19:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacaoufmg_carneiro2006_.pdf: 864291 bytes, checksum: 4db33ee4972632af2c744f54e8bec8c8 (MD5) Previous issue date: 29

RESUMOO objetivo deste trabalho foi realizar um estudo soroepidemiológico da toxoplasmose caprina e ovina no Estado de Minas Gerais. Foram avaliados soros de 767 caprinos e 711 ovinos provenientes das regiões Centro, Oeste e Sul do Estado além de questionários com dados da propriedade e individuais de cada animal. O ELISA se mostrou sensível, específico e reprodutível no diagnóstico da toxoplasmose caprina e ovina. Para os caprinos, a prevalência encontrada foi de 43,0% e 46,0% através do ELISA e RIFI, respectivamente. Foi identificado uma maior prevalência de anticorpos anti-T. gondii em caprinos de raça pura. Não foi observada associação significativa entre a positividade para toxoplasmose e o sexo ou idade dos animais. Os fatores de risco para a infecção por T. gondii em caprinos foram: idade superior a 36 meses (OR= 1,21 IC 95% 1,02 1,44), presença de aprisco (OR= 1,83 IC 95%1,01 3,31) e tipo racial puro (OR= 2,49 IC 95% 1,11 5,59). Para os ovinos, foi encontrada uma prevalência de 31,0% através do ELISA e 43,0% utilizando a RIFI. Foi observada diferença estatística na relação entre a prevalência da toxoplasmose e a faixa etária dos ovinos. Para as variáveis sexo e tipo racial não foram observadas associações. O único fator de risco encontrado para infecção por T. gondii em ovinos do Estado de Minas Gerais foi a idade. Animais com idade superior a 36 meses tiveram risco 1,45 maior de estarem infectados, quando comparados com os mais novos (IC 95% 1,20 1,74). Foi observado que 26,8% e 19,0% dos caprinos e ovinos, respectivamente, possuem anticorpos IgG para T. gondii de baixa avidez. Este resultado sugere a presença de animais em fase recente da toxoplasmose nas regiões do Estado de Minas Gerais.

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Made available in DSpace on 2019-08-12T12:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_mestrado.pdf: 1803088 bytes, checksum: 51523a4ac217439a4b4f14e24df6a377 (MD5) Previous issue date: 21

RESUMOA Giardia lamblia é um protozoário intestinal humano de ampla distribuição mundial. A giardíase é responsável por diarréia, síndrome de má absorção e perda de peso, depauperando física e mentalmente crianças de países subdesenvolvidos. É ainda, principal causa de diarréia em países desenvolvidos. Em 1962, o metronidazol passou a ser utilizado no tratamento da giardíase, por apresentar excelente eficácia e baixa toxicidade. Contudo, tem sido observado que isolados de G. lamblia, provenientes de pacientes de diferentes regiões do mundo, apresentam diferenças na sensibilidade ao metronidazol in vitro. Há ainda, relatos de pacientes refratários ao tratamento. Desta forma, a pesquisa de análogos do metronidazol mais efetivos contra o parasita torna-se uma opção importante para o controle desta parasitose. O presente trabalho tem por objetivo investigar o potencial giardicida de quatro análogos nitroimidazóis, X-etil-2-metil-5-nitroimidazol (X = OMs, MTZMs, X = Br, MTZBr , X = N3, MTZN3 , X = I, MTZI), sintetizados a partir do metronidazol. A eficácia dos compostos foi avaliada in vitro, utilizando a amostra Portland de G. lamblia, através da DE50 (dose efetiva que inibe em 50% o crescimento dos trofozoítos) e da CIM (concentração inibitória mínima necessária para inibir ao máximo o crescimento dos trofozoítos). O metronidazol foi utilizado como controle de eficácia.A eficácia do metronidazol, foi avaliada inicialmente por dois métodos quantitativos: contagem dos trofozoítos em câmara de Neubauer e por colorimetria.Considerando a sensibilidade e precisão do método, a técnica colorimétrica apresentou resultados mais precisos quando comparado com a contagem de trofozoítos em câmara de Neubauer.Trofozoítos de G. lamblia, em fase logarítmica de crescimento, foram distribuídos em placas de cultura de células de 24 poços para associação com os derivados nitroimidazóis, em condições anaeróbicas a 37 °C. O metronidazol e seus derivados foram associados aos trofozoítos em concentrações crescentes buscando determinar a DE50 e CIM.O metronidazol apresentou DE50 = 1,96 0,13 uM e CIM = 34,10 1,95 uM. Todos os análogos testados apresentaram elevado potencial giardicida quando comparados ao metronidazol.

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Made available in DSpace on 2019-08-12T03:44:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_iara_pdf.pdf: 5018335 bytes, checksum: 8e397778c487aff12aa3765f8b64c242 (MD5) Previous issue date: 19

No presente trabalho, foi avaliada a influência das nucleobases (guanina, adenina, citosina e uracila), sobre a atividade biológica in vitro dos complexos Sbv-ribonucleosídeos. A complexação do Sbv a purino-nucleosídeos, em especial a guanosina, influenciou na atividade citotóxica para macrófagos, nos níveis de incorporação de antimônio intracelular e potencializou a atividade anti-Leishmania do fármaco antimonial. Os complexos Sbv-purínicos estimularam o crescimento de formas promastigotas do parasito e foram mais citotóxicos e eficazes contra Leishmania chagasi que os Sbv-pirimidínicos, que apresentaram atividade equivalente àquela dos medicamentos antimoniais de referência, SbK e antimoniato de meglumina. Dos complexos Sbv-purínicos, o Sbv-G foi o mais tóxico e ativo em todos os ensaios, enquanto o Sbv-A embora tenha apresentado citotoxicidade e atividade anti-Leishmania, essa atividade não foi diferente dos compostos antimoniais de referência. Essas diferenças entre o potencial dos fármacos Sbv-purínicos Sbv-G e Sbv-A, pode ser devida ao fato dos nucleosídeos de guanosina e adenosina, desencadearem diferentes respostas quanto à produção de óxido nítrico em macrófagos segundo a literatura, o que interferiria diretamente na atividade anti-amastigota de cada fármaco. Os achados de citotoxicidade e atividade anti-Leishmania, reforçam o modelo de que a interação do Sbv com nucleosídeos purínicos pode mediar as ações farmacológicas dos antimoniais pentavalentes, e abrem perspectivas para novos estudos sobre a influência dos nucleosídeos purínicos adenosina e guanosina na resposta imune do macrófago a infecção por Leishmania chagasi.

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Made available in DSpace on 2019-08-10T01:15:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 disserta__o_de_mestrado_de_joely_ferreira_figueiredo_parte1.pdf: 12201000 bytes, checksum: 5263370bd53de8f4f4938756d8a2dc27 (MD5) disserta__o_de_mestrado_de_joely_ferreira_figueiredo_parte2.pdf: 7524669 bytes, checksum: c6cef7118c1fb2e23394f42f817e756e (MD5) Previous issue date: 13

A babesiose bovina, causada pelas espécies Babesia bovis e Babesiabigemina, constitui fator limitante para o desenvolvimento da pecuáriabrasileira. As variedades climática e topográfica deste país implicamdiversas situações epidemiológicas, que podem ser mensuradas através de testes imunodiagnósticos. Com o intuito de identificar antígenos de Babesia bovis para uso potencial em testes imunodiagnósticos, um painel de anticorpos monoclonais foi produzido e caracterizado através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ELISA e Western , blotting. Após a fusão celular, os híbridos resultantes foram selecionados por RIFI, clonados, mantidos em cultivo celular ecriopreservados em nitrogênio liquido. Doze clones produtores deanticorpos monoclonais reagiram com merozoíto todo de B. bovis,cinco reagiram com superfície de merozoito e somente um clone reagiucom região polar de merozoito. Em ELISA todos os anticorposmonoclonais apresentaramse positivos, sendo observada variação dedensidade óptica de 0,365 a 0,502 (cutof`f : 0,022). As bandasprotéicas reconhecidas pelos anticorpos monoclonais apresentarampesos moleculares aproximados entre 162 a I9 kDa. Quatro clones reconheceram apenas um polipeptídio (73 l·;Da), e outros quatro não seligaram em nenhum polipeptídio em Westem blotting. Esses antígenosidentificados possibilitarão o desenvolvimento de testes diagnósticosmais sensíveis e específicos para estudos epidemiológicos, bem como a sua utilização como imunógenos na imunoprofilaxia da babesiosebovina no Brasil.

With the aim of identifying antigens of Babesia bovis, with potencialuse in immunodiagnostic tests, a panel of monoclonal antibodies wasproduced and characterized by the indirect fluorescent antibody test,ELISA and Westem blotting. The resultant hybrids, after fusion wereselected by the indirect fluorescent antibody test, cloned, maintained in vitro culture and cryopresewed in liquid nitrogen. Twelve clonesproducing monoclonal antibodies reacted against merozoites, while fivereacted on the surface of merozoites and one clone reacted against the ,polar region of merozoites. All monoclonal antibodies reacted inELISA. with optical density varying Som 0.365 to 0.502 (cut-off =0.022). The bands recognized by the monoclonal antibodies in Westemblotting had molecular weights ranging from 162 to 19 kDa. Fourclones recognized only one band of 73 l<.Da and the other did not reactin Westem blotting. These antigens will be usetiil for the developmentof more sensitive and especific immunodiagnostic tests for use inepidemiological studies on bovine babesiosis in Brazil.

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Made available in DSpace on 2019-08-11T09:34:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_geane.pdf: 6981151 bytes, checksum: 7e309fb8fb5f36a95e901fca4c5d6abe (MD5) Previous issue date: 22

No presente trabalho foi estudado a reinfecção de camundongos BALB/c e C57BL/6 pelo Toxoplasma gondii. Para determinar se o genótipo das cepas pode modificar o padrão de proteção, a primo infecção e o desafio foram realizados utilizando diferentes cepas recombinantes tipo I-III de T. gondii. Os camundongos foram primo infectados com a cepa D8, não virulenta, e desafiados após 45 ou 180 dias da primo infecção com as cepas EGS, CH3 e N, recombinantes tipo I-III. Após trinta dias do desafio, os cistos cerebrais obtidos dos camundongos sobreviventes foram inoculados em camundongos BALB/c ou C57BL/6 para a realização do bioensaio e em camundongos swiss para induzir uma infecção aguda e replicação dos taquizoítos que foram obtidos pela lavagem do peritônio. As amostras de DNA purificadas dos taquizoítos foram submetidas à PCR-RFLP utilizando os marcadores cS10-A6 e L363 para distinguir diferentes cepas de T. gondii em possíveis coinfecções. A resposta imune anti-T. gondii foi avaliada por meio da dosagem de IFN- e IL-10 em sobrenadantes de culturas de esplenócitos obtidos de camundongos BALB/c e C57BL/6, 45 e 180 dias após a primo infecção e estimulados in vitro com antígeno de T. gondii. No plasma destes animais foram dosados os níveis de IgG total, IgG1, IgG2a, IgM e IgA. A PCR-RFLP demonstrou que 45 dias após a primo infecção com a cepa D8 a reinfecção ocorreu em camundongos BALB/c desafiados com as cepas EGS e N ou EGS, CH3 e N aos 180 dias da primo infecção. Os camundongos C57BL/6 se reinfectaram com as cepas EGS, CH3 e N aos 45 e 180 dias após a primo infecção. Em camundongos BALB/c foram detectados altos níveis de IFN- após a infecção com D8, sem diferença significativa entre 45 e 180 dias. Entretanto, foram observados níveis significativamente maiores de IL-10 na cultura de esplenócitos e de IgG1 e IgA plasmáticos quando foram testadas as amostras obtidas aos 180 dias de infecção. Os níveis de IFN- após infecção com D8 foram mais baixos em camundongos C57BL/6 que em camundongos BALB/c. Em camundongos C57BL/6 foram observados níveis plasmáticos maiores de IgG1 e IgG2a quando testadas as amostras obtidas aos 180 dias da primo infecção em comparação às amostras obtidas aos 45 dias. Em conclusão, camundongos BALB/c e C57BL/6 são susceptíveis a reinfecção com diferentes cepas de T. gondii e a susceptibilidade de camundongos BALB/c se correlaciona com o aumento da produção de IL-10. Foi demonstrado que a reinfecção pelo T. gondii depende da linhagem de camundongo, do tempo de infecção e do genótipo da cepa utilizada no desafio.

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Made available in DSpace on 2019-08-14T12:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__omestrado_rica_mendes.pdf: 994779 bytes, checksum: ff2880eb44f21b616e3373454707fe5f (MD5) Previous issue date: 21

As proteínas de superfície (SAGs) presentes em taquizoitos de T. gondii encontram-se envolvidas na ativação de resposta imune contra o parasita. No presente estudo nós avaliamos a capacidade de adenovírus recombinantes codificando os genes de SAG1, SAG2 e SAG3 em induzir a ativação de resposta imune humoral e celular, além de imunidade protetora contra cepa cistogênica do parasita. A ativação de resposta imune humoral foi avaliada em camundongos C57BL/6 vacinados com adenovírus recombinantes (AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCtrl) e a resposta imune celular foi avaliada tanto em BALB/c (resistentes) quanto em C57BL/6 (susceptíveis) à cepa ME49 de T. gondii. Peptídeos correspondentes a epítopos MHCI-restritos, específicos para os haplótipos H2-Db e H2-Ld, foram determinados para cada proteína, através da análise de seqüência no programa SYFPEITHI. Tais peptídeos foram produzidos por meio de síntese em fase sólida, de acordo com a metodologia Fmoc. Camundongos BALB/c e C57BL/6 receberam duas doses de 109 p.f.u. de AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCTRL, com intervalo de seis semanas. Amostras de soro obtidas dos animais C57BL/6 quatro semanas após a última imunização foram submetidas a Western-blot contra lisado total de taquizoítos (TLA). Os resultados demonstraram que a imunização gerou anticorpos IgG específicos contra as três proteínas nesses animais. Duas a quatro semanas após a última imunização, esplenócitos de ambas as linhagens de camundongos foram coletados para ensaios de ELISPOT. Os esplenócitos foram reestimulados in vitro com os peptídeos sintéticos identificados no programa SYFPEITHI. A imunização com AdSAG1 levou a ativação de células T CD8+ produtoras de IFN-g em ambas as linhagens. Estas células se mostraram responsivas a um epítopo previamente identificado na seqüência da proteína SAG1. Camundongos C57BL/6 vacinados foram desafiados com a cepa ME49 duas semanas após o término do protocolo de imunização. Consistente com a capacidade de induzir ativação de resposta imune celular foi observada proteção parcial em camundongos C57BL/6 vacinados com AdSAG1, os quais apresentaram maior taxa de sobrevivência e menor número de cistos cerebrais se comparado ao grupo controle.

The tachyzoite SAG proteins are involved in activation of protective immune responses against the parasite T. gondii in infected individuals. In the present study, we have evaluated the activation of humoral and cellular immunity in mice vaccinated with recombinant adenoviruses coding for SAG1, SAG2 or SAG3 from T. gondii. Peptides corresponding to MHCI-binding epitopes, specific for the H2-Db and H2-Ld haplotype, were predicted in SAG1, SAG2 and SAG3 proteins by sequence analysis on SYFPEITHI software. Those peptides were produced by solid-phase synthesis employing the Fmoc methodology. BALB/c and C57BL/6 mice received two…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T20:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_29_1_.06.11_depois_da_banca.pdf: 10031144 bytes, checksum: a15f59aaee65e4d8ad756e48192cd134 (MD5) Previous issue date: 31

Toxoplasma gondii é um parasito apicomplexo amplamente distribuído de grande importância médica. Em humanos, a transmissão congênita tem sido responsabilizada pela ocorrência de abortos, natimortos, debilidade e mortalidade neonatal. A infecção por T. gondii pode ser diagnosticada indiretamente, através de métodos sorológicos, e diretamente por isolamento do parasito em camundongos (bioensaio) e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Através do Programa Estadual de Triagem Neonatal em Minas Gerais, 146.307 crianças foram submetidas à pesquisa de anticorpos IgM anti-T. gondii, em amostras de sangue seco em papel filtro. Dessas, 220 que apresentaram resultado positivo/duvidoso foram selecionadas para esteestudo. Foram coletadas amostras de sangue periférico desses recémnascidos para PCR e bioensaio. A toxoplasmose foi confirmada em 178crianças que apresentaram anticorpos IgG persistentes até o 12º mês de vida. A amplificação do gene B1 por nested PCR foi realizada em todas as amostras de sangue verificando 64/220 (29,1%) crianças positivas por PCR (31,46% de sensibilidade e 80,95% de especificidade). A nested PCR do gene B1 não se mostrou suficientemente sensível e específica para ser uma ferramenta útilpara o diagnóstico da toxoplasmose congênita em amostras de sangueperiférico de recém-nascidos. Através do bioensaio foram obtidos 27 isolados de T. gondii. A presença do T. gondii foi evidenciada no sangue em 15,2% (27/178) dos recém-nascidos com toxoplasmose congênita. Os isolados foram divididos em três grupos de acordo com o fenótipo de virulência para camundongos. Quatorze isolados (54%) foram caracterizados como de virulência intermediária, dez (38%) como virulentos e apenas dois (8%) foram identificados como avirulentos. A variabilidade genética dos isolados foi analisada por Tamanho de Fragmento de Restrição (PCR-RFLP) em 11 loci (SAG1, 53SAG2, SAG2 alt, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico). As cepas RH (Tipo I), ME49 (Tipo II) e VEG (Tipo III) foram utilizadas como cepas de referência. O genótipo completo foi obtido em 25/27 (92,6%) dos isolados. Quatorze genótipos diferentes foram identificados, sendo dozenovos genótipos, e um isolado com infecção mista. Dois genótipos encontrados são comuns no Brasil (BrII e BrIII). Não foi identificado nenhum genótipo arquétipo tipo I, II ou III nos isolados estudados. Não foi observada associação entre os sinais clínicos da toxoplasmose congênita e os resultados obtidos pelo diagnóstico molecular, bioensaio, virulência e genotipagem dos isolados. Este estudo confirma a variabilidade genotípica do parasito no Brasil além de ser oprimeiro registro de genotipagem de isolados de sangue de recém nascidos em nosso país.

Toxoplasma gondii is a widely distributed Apicomplexa parasite with great medical importance. Congenital…

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Made available in DSpace on 2019-08-09T13:09:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 veloso_vm___tese.pdf: 28388987 bytes, checksum: 6042d384fadfeb565e2050675fab5b17 (MD5) Previous issue date: 29

Vários aspectos da história natural da doença de Chagas foram avaliados em cães Beagle, experimentalmente infectados com três cepas do Trypanosoma cruzi, com características biológicas e genéticas distintas. Para isso, 34 cães foram inoculados com 2000 ou 4000 tripomastigotas sangüíneos (TS) das cepas, Be-78, Y ou ABC do T. cruzi/kg de peso corporal. Os animais foram avaliados clinicamente durante as fases aguda e crônica da infecção e a permanência do parasito no sangue e nos tecidos desses animais foi monitorada ao longo de 24 meses, por meio de exames parasitológicos, moleculares e imuno-histoquímico. Além de ter sido avaliada a sensibilidade das técnicas utilizadas, a positividade dos testes parasitológicos foi relacionada com a positividade da PCR em tecidos cardíacos. As alterações histopatológicas foram avaliadas pela análise semi-quantitativa da presença de infiltrado de células adiposas, inflamação e fibrose em fragmentos do coração. Além disso, os parasitos isolados na fase aguda e crônica foram avaliados geneticamente por quatro marcadores moleculares distintos.A avaliação clínica dos animais, durante a fase aguda da infecção, mostrou alterações clínicas discretas. Nos animais inoculados com as cepas Be-78, Y ou ABC, o exame de sangue a fresco (ESF) apresentou 86% (19/22) de positividade. Entretanto, a freqüência de testes positivos foi variável entre os animais inoculados com essas cepas. Durante a fase crônica da infecção foram realizadas 88 hemoculturas (Hc) em 22 animais, sendo observado uma taxa de positividade de 46,6% (41/88). A freqüência de testes positivos, na fase crônica da infecção foi similar entre os animais inoculados com as cepas Be-78 (75%) e ABC (62.5%), e significativamente menor (6,2%) naqueles inoculados com a cepa Y. Durante a fase crônica da infecção a taxa de positividade da PCR foi de 72,7% (64/88), superior a da Hc. Nos testes de PCR realizados no sangue dos animais inoculados com as cepas Be-78, Y ou ABC a positividade foi de 94,4%, 41,6% e 93,7%, respectivamente. O T. cruzi foi demonstrado, pela análise imuno-histoquímica (IMH), nos fragmentos cardíacos de todos os animais avaliados durante a fase aguda da infecção, porém, na fase crônica foi negativa em todos os fragmentos analisados. Entretanto, a presença do parasito foi demonstrada, na fase crônica da infecção, em todos os animais infectados com as três cepas, por meio da PCR. O parasitismo tecidual médio avaliado na fase crônica, pela PCR, em seis fragmentos cardíacos, foi semelhante entre os animais inoculados com as diferentes cepas. Porém, o padrão histopatológico das lesões cardíacas, observado na fase crônica, foi relacionado com a cepa do T. cruzi. Os resultados das avaliações realizadas nos animais inoculados com 2000 TS foram similares aos inoculados com 4000 TS. A caracterização molecular dos isolados do…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T07:45:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_paulo_guedes.pdf: 1576482 bytes, checksum: 078fac6fd2bfe596fd48489ca90a81bd (MD5) Previous issue date: 1

RESUMOCom a finalidade de compreender melhor a gênese das lesões na miocardiopatia chagásica crônica humana, cães da raça Beagle foram infectados com cepas do Trypanosoma cruzi que apresentam diferentes graus de virulência e patogenicidade. Foram analisadas características biológicas inerentes as cepas do parasito (polimorfismo de formas tripomastigotas, infectividade in vitro, curva de parasitemia) e aspectos da resposta imune do hospedeiro (cinética de produção de imunoglobulinas IgA, IgM, IgG, IgG1 e IgG2; produção de anticorpos líticos; proliferação de células mononucleares do sangue periférico/CMSP; dosagem de citocinas in situ no linfonodo cervical e no átrio direito) correlacionando com as alterações cardíacas (cardiomegalia, inflamação e fibrose presentes no miocárdio) durante as fases aguda (eutanásia: 30 dias após a infecção) e crônica (dois anos após a infecção). As cepas Y e ABC do T. cruzi que apresentaram alta infectividade in vitro, quando foram inoculados em cães, os níveis de parasitemia foram mais elevados que aqueles observados com a cepa Berenice-78. Todos os animais infectados mostraram o mesmo perfil de resposta proliferativa CMSP. Não houve diferença nos níveis de anticorpos dos isotipos IgA, IgM e de anticorpos líticos nos animais infectados com as três cepas do T. cruzi. Entretanto, os anticorpos IgA juntamente com IgM pode ser utilizado como marcador de fase aguda da infecção. Os níveis de anticorpos detectados na sorologia convencional (SC) e na citometria de fluxo (CF) (IgG total e IgG2) foram similares e detectados a partir de 15 dias da inoculação na maioria dos animais infectados. Por outro lado, altos níveis de IgG1 foram detectados na SC e na CF nos soros dos animais infectados com a cepa Berenice-78, enquanto foram ausentes ou detectados em níveis baixos naqueles infectados com as cepas Y e ABC, e negativos nos animais não infectados. Durante a fase aguda, todos os animais infectados apresentaram linfadenopatia e esplenomegalia e somente 50% (cepas Y e ABC) e 25% (Berenice-78) dos animais infectados apresentaram discreta cardiomegalia. Também foi observada uma severa miocardite em todos os animais infectados. Na fase crônica, somente 50% e 25% dos animais infectados com as cepas Berenice-78 e ABC, respectivamente, apresentaram linfadenopatia. No entanto, todos animais permaneceram com esplenomegalia, porém menos intensa que na fase aguda. A cardiomegalia, a inflamação e a fibrose foram observadas em 100%, 50% e 100% dos animais infectados com as cepas Y, Berenice-78 e ABC, respectivamente. A produção de IFN-, TNF e IL-10 in situ (linfonodo cervical e átrio direito) durante a fase aguda foi similar em todos os animais infectados. Entretanto, durante a fase crônica os níveis de produção destas citocinas foi semelhante nos linfonodos dos animais infectados enquanto na área…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T21:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tesevivianevasconcelos.pdf: 5042189 bytes, checksum: 296468e2f0f339abe56c62381f9adb6e (MD5) Previous issue date: 30

Resumo Angiostrongylus vasorum  é um nematóide parasito cujas formas adultas podem ser encontradas no sistema circulatório de cães domésticos e canídeos silvestre s. Cães infectados por A. vasorum podem apresentar diversas manifestações clínicas podendo levar o animal ao óbito. Os testes padronizados para o diagnóstico sorológico utilizando antígeno bruto de parasito adulto de  A. vasorum não são considerados ideais. A identificação e purificação de proteínas espécie-específica é de grande importância para obter maiores índices de sensibilidade e especificidade nos testes de diagnóstico. Neste estudo foram utilizadas amostras de soro de 20 cães infectados experimentalmente com larvas de terceiro  estádio (L3) e amostras de soro de 60 cães infectados naturalmente por outros helmintos gastrointestinais para a separação e identificação das proteínas espécie-especificas . Immunoblotting revelou reatividade para. IgG, IgM, IgA e IgE contra proteínas de A. vasorum  com peso molecular de 18 a 209 KDa. As proteínas de 51,63,92 e 209 KDa não foram reconhecidas por anticorpos IgG presentes no soro de cães naturalmente infectados por outros helmintos. Anticorpos específicos anti-A. vasorum foram adsorvidos por imunoafinidade e acoplados em resima Sepharose proteína A para a purificação de proteínas específicas. A proteína de 51 KDa foi obtida. O teste de Elisa demonstrou alta reatividade espécie-específicas com soro de cães experimentalmente  infectados por A. vasorum obtendo um índice de 100% de sensibilidade e especificidade.

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Made available in DSpace on 2019-08-14T10:03:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_doutorado___carlos_henryque_de_souza_e_silva.pdf: 5121081 bytes, checksum: 87a37348e425dce2150dafccf6777f47 (MD5) Previous issue date: 26

Toxoplasma gondii possui importância médica e veterinária, sendo um patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos e fetos de mães recentemente infectadas. Entre novembro/2006 e maio/2007, foram identificados 220 recém-nascidos positivos para IgM anti-T. gondii e suas respectivas mães entre 146.307 crianças estudadas, participantes do Programa Estadual de Triagem Neonatal em Minas Gerais. A toxoplasmose foi confirmada em 190 crianças apresentando anticorpos IgG persistentes até o 12º mês de vida, enquanto 45 tiveram o diagnóstico de toxoplasmose congênita descartado. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer uma comparação entre os resultados do teste de ELISA destes recém-nascidos com toxoplasmose congênita, quando utilizados antígenos solúveis (STAg) e recombinantes (rSAG1 erMIC3) de T. gondii, associando as subclasses de IgG aos sinais clínicos encontrados nos mesmos, além de comparar a sorologia das mães e dos recém-nascidos. Foram avaliadas 175 crianças dentre as 190 com toxoplasmose congênita confirmada e 42 dentre as 45 com diagnóstico negativo. As proporções de amostras reativas de recémnascidos infectados e aqueles não-infectados foram distintas ao realizar ELISA utilizando antígenos recombinantes. Todos os antígenos testados apresentaram alta sensibilidade e baixa especificidade para detectar IgG total e IgG1 anti-T. gondii em crianças com toxoplasmose congênita e baixa sensibilidade e alta especificidade para detectar IgG3 e IgG4. Diferença na proporção entre recém-nascidos infectados com mães não-infectadas e recém-nascidos não-infectados com mães infectadas foi observada, demonstrando a produção de anticorpos anti-T. gondii pelo feto infectado durante a gestação. Maior chance de se detectar IgG total anti-T. gondii pelo teste de ELISA em crianças sem lesões oculares quando comparadas com crianças com lesões ativas e cicatrizadas foi observada, enquanto a detecção de IgG2 e IgG4 anti-T. gondii relacionou-se com lesão ocular, quando comparada com crianças sem lesões. Relação entre o ELISA e casos de alterações neurológicas foi observada para IgG2 e IgG4 anti- T. gondii, enquanto IgG3 foi relacionada com crianças sem alterações neurológicas. A partir desses resultados, pode-se afirmar que antígenos recombinantes, em conjunto com a pesquisa de subclasses de anticorpos IgG são importantes ferramentas diagnósticas indiretas capazes de predizer as possíveis alterações encontradas em recém-nascidos com toxoplasmose congênita

Toxoplasma gondii has medical and veterinary importance, being an opportunistic pathogen in immunocompromised patients and fetuses of mothers recently infected. From November/2006 to May/2007 220 newborns positive for IgM anti-T. gondii and their mothers were identified from 146,307 screened babies, participants of the Newborn Screening…