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Made available in DSpace on 2019-08-11T10:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_doutorado_rem_impress_o_corrigida_final.pdf: 26296665 bytes, checksum: 00df6d0d39d582becdc932da1b58e35a (MD5) Previous issue date: 11

As ultimas decadas foram marcadas pela emergencia e reemergencia de virus pertencentes ao genero Flavivirus no Brasil e no mundo. Este genero inclui virus capazes de causar encefalite, uma manifestacao grave que pode levar ao obito ou a sequelas neurologicas, dentre os quais ha o virus da encefalite de Saint (St.) Louis (SLEV). A patogenese da encefalite de St. Louis e pouco compreendida, o que prejudica o desenvolvimento de tratamentos especificos e vacinas, uma limitacao em comum com outros flavivirus como o virus Zika e o virus da dengue. Para tal, desenvolvemos um modelo animal de infeccao pelo SLEV em camundongos a fim de investigar mecanismos envolvidos na resistencia a infeccao e doenca. O modelo animal e baseado nainoculacao da linhagem BeH 355964, um SLEV isolado de uma paciente no Brasil, que quando inoculado pela via intracranial (i.c) causa a morte de camundongos. Esse fenomeno e acompanhado de replicacao viral, inflamacao e dano tecidual no cerebro, caracterizando encefalite. A associacao da replicacao viral com mortalidade pos-infeccao nos levou ao estudo dos interferons (IFNs), que sao tradicionalmente associados ao controle de infeccoes virais. De forma inesperada, a infeccao de camundongos deficientes no receptor de IFN do tipo I (ABR-/-) ou deficientes para IFN do tipo II (IFN-/-) resultou em fenotipos distintos. Camundongos ABR-/- sao muito susceptiveis a infeccao, enquanto camundongos IFN-/- sao moderadamente resistentes. A investigacao dos parametros de doenca indicou que IFNs do tipo I sao essenciais para o controle da replicacao de SLEV ao induzir a expressao de ISGs, dentre os quais RIG-I, uma molecula associada as respostas imunes inatas contra virus de RNA. Em contrapartida, a ausencia de IFN em camundongos resultou na reducao da replicacao viral no cerebro, em associacao a uma expressao alterada de ISGs. Camundongos IFN-/- possuem uma alta expressao de RIG-I no cerebro em condicoes basais, que indicando que RIG-I pode estar relacionado ao controle da replicacao de SLEV. A infeccao por SLEV induziu a expressao de INF tipo III somente nos cerebros de camundongos IFN-/-, indicando IFNs tipo II e III interagem de maneiras ainda desconhecidas no contexto de infeccao. Por fim, concluimos que o modelo de infeccao por SLEV e uma ferramenta util para o estudo da encefalite de St. Louis. Ainda, este modelo pode contribuir para a geracao de conhecimento aplicavel, tais como o delineamento de respostas antivirais no cerebro, aplicavel para infeccoes por SLEV e outros flavivirus, como Zika.

Flaviviruses are a genre of closely-related viral pathogens, which emerged or reemerged in the last decades in Brazil and in the world. Flaviviruses such as St. Louis encephalitis virus (SLEV) can cause encephalitis, a severe disease that may lead to death or neurological…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T11:08:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertao_250113_formatada_certa.pdf: 1108732 bytes, checksum: 2dc403ca74e1eccc3a7a69268ec1912e (MD5) Previous issue date: 19

Durante as respostas inflamatórias, os leucócitos produzem e secretam mediadores responsáveis pelo inicio e manutenção da inflamação. A inflamação que em muitos casos é benéfica e protege o organismo contra agentes nocivos, quando descontrolada pode levar a lesão tecidual. Dessa forma muito se tem estudado sobre os mecanismos que controlam e solucionam a resposta inflamatória, assim como mediadores e células envolvidos nesse processo. Recentemente observou-se que a Angiotensina-(1-7), um metabolito do sistema Renina-Angiotensina, considerado por muito tempo como inativo, apresenta importantes ações no controle da resposta inflamatória. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar se a produção endógena ou administração exógena da Ang-(1-7) pode acelerar a resolução da resposta inflamatória em modelos de artrite em camundongos. Nesse estudo, todos os tratamentos foram realizados 12 horas após a injeção do antígeno, para diferenciar os efeitos pró-resolutivos e anti-inflamatórios. A administração intra-articular de Ang-(1-7), foi capaz de diminuir o número de neutrófilos no lavado sinovial e no tecido periarticular, assim como aumentar o número de neutrófilos apoptóticos, e inibir NF-B na membrana sinovial. Utilizando o tratamento com o DIZE, ativador de ECA2, que induz a formação de Ang-(1-7), os efeitos observados foram semelhantes aos observados com a Ang-(1-7). Esses processos foram revertidos pelo uso do inibidor de caspases, Zvad-FMK, indicando que a ação da Ang-(1-7) seria por indução de apoptose de neutrófilos. A Ang-(1-7) também foi capaz de induzir apoptose diretamente em neutrófilos humanos in vitro, esse efeito foi associado com a inibição da ativação de NF-B nos neutrófilos. Dessa forma, concluímos que a Ang-(1-7) possa representar uma estratégia pró-resolutiva eficaz para o tratamento das doenças nas quais, o acúmulo e presença de neutrófilos possa representar danos.

During inflammatory responses, leukocytes, produce and secrete mediators responsible for the initiation and maintenance of inflammation. Inflammation may be beneficial and protects the body against harmful agents. However, when uncontrolled, it can lead to tissue damage. Thus, there is much interest in understanding mechanisms that control and resolve the inflammatory response, as well as mediators and cells involved in this process. Recently, it was observed that Angiotensin-(1-7), a metabolite of Renin-Angiotensin system may control the inflammatory response. Therefore, the objective of this study was to evaluate whether endogenous production or exogenous administration of Ang-(1-7) could control the resolution of the inflammatory response in models of arthritis in mice. In this study, all treatments were given 12 hous after the injection of antigen in order to separate anti-inflammatory from pro-resolutive…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T15:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2disserta__o_vers_o_final_corrigida.pdf: 2324007 bytes, checksum: b3f749f22d3746e451601eccbf305a64 (MD5) Previous issue date: 20

As doenças inflamatórias intestinais (Inflammatory Bowel Disease - IBD), dentre elas a doença de Crohn e a Colite Ulcerativa, possuem importante impacto na saúde mundial e a incidência tem aumentado por todo o mundo. Acredita-se que o desequilíbrio da microbiota intestinal seja fator contribuinte para o desenvolvimento das IBDs, em indivíduos susceptíveis, e o consumo de prebióticos poderia atuar na modulação das comunidades bacterianas e melhora da resposta inflamatória intestinal. A pectina, fibra alimentar solúvel, devido a sua capacidade de fermentação no intestino, apresenta potencial efeito como prebiótico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da dieta rica em pectina, como pré-tratamento e tratamento, na colite experimental induzida por sulfato de sódio dextrana (dextran sulfate sodium - DSS). Camundongos BALB/c, com colite aguda, submetidos ao pré-tratamento com dieta rica em fibra apresentaram redução dos sinais clínicos da doença (escore clínico e perda de peso), manutenção do comprimento colônico, redução do recrutamento de neutrófilos e da lesão epitelial da mucosa colônica, quando comparado ao grupo alimentado com dieta padrão. Essa melhora refletiu na sobrevida e os animais pré-tratados com dieta rica em pectina apresentaram 100% de sobrevivência, enquanto animais alimentados com dieta padrão apenas 40%, após a administração de DSS (4%). O pré-tratamento com dieta rica em pectina apresentou efeitos semelhantes ao pré-tratamento com acetato (ácido graxo de cadeia curta com conhecida propriedade anti-inflamatória) nos parâmetros clínicos e histopatológicos da colite aguda. Em modelo de colite crônica induzida por DSS (3%), animais pré-tratados com dieta rica em pectina apresentaram melhora clínica, manutenção do comprimento colônico, redução da peroxidase eosinofílica (EPO) e aumento da concentração das citocinas interleucina (IL)-6 e IL-10, no cólon. Já o tratamento com a dieta rica em fibra, iniciada após o estabelecimento da colite (terceiro, quarto ou quinto ciclo de DSS), resultou apenas na redução da EPO e em menor peso colônico, em relação aos animais com colite e dieta convencional, enquanto os outros parâmetros clínicos e inflamatórios, da colite, permaneceram inalterados. Em conclusão, o tratamento com dieta rica em fibra exerceu efeito protetor na colite induzida por DSS e foi similar ao efeito do acetato, sugerindo papel na geração dessa molécula como efeito benéfico da dieta rica em fibra. Como no pré-tratamento foram observados resultados mais efetivos, o uso da dieta rica em fibra, assim como outras estratégias que visam modificar o ambiente intestinal (outros prebióticos ou probióticos) deveriam ser utilizadas no início da evolução da doença.

Inflammatory Bowel Diseases, including Crohns disease and Ulcerative Colitis, have an important impact…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_carol_final__cd.pdf: 2204209 bytes, checksum: fb0030a0776ba14b4b56ab14681370f4 (MD5) Previous issue date: 10

Introdução: A sepse é definida como uma resposta desregulada do hospedeiro ao agente infeccioso que resulta em aumento de moléculas pró-inflamatórias e estimulação de resposta imune celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune inata em pacientes sépticos internados na unidade de cuidados intensivos (UTI) de um hospital universitário. Métodos: Foi realizada uma coorte prospectiva em adultos internados na UTI do Hospital das Clínicas da UFMG (HC/UFMG) no período de outubro de 2014 a janeiro de 2018. Os pacientes foram incluídos mediante diagnóstico clínico de sepse e acompanhados durante um ano para análise de sobrevida. Realizou-se análise do perfil de quimiocinas, citocinas, pentraxin-3 e Neutrophil Extracellular Traps (NETs) presentes no soro de pacientes sépticos em três tempos, quais sejam dias: 1(D1), 3(D3) e 7(D7) após a inclusão no estudo. Além disso, foi avaliada a atividade quimiotática de neutrófilos purificados do sangue e estimulados com fMLP, utilizando a câmara de Boyden modificada. A apoptose foi avaliada através da técnica de citometria de fluxo na qual foi avaliada a marcação celular de Anexina V em neutrófilos nos tempos de 3h, 6h, 12h, 22h e 24h. Todas as análises moleculares foram igualmente realizadas com amostras de voluntários que se autodeclararam saudáveis. Resultados: Foram incluídos no estudo 81 pacientes, com mediana de 59 (18-97) anos de idade e predomínio do sexo feminino (n=42, 52%). A maior parte dos pacientes era proveniente de internação clínica (62%), e 52% deles tinham choque séptico na inclusão. Dezesseis pacientes (20%) faleceram ao longo de 28 dias e 32 (40%) pacientes faleceram em um ano de seguimento. Considerando-se todo o grupo de pacientes, observou-se níveis elevados de CXCL10, CXCL8, CCL3 nos três tempos (D1, D3 e D7) analisados em relação a voluntários saudáveis (p<0.001 nas três análises). Os níveis de PTX3 foi elevado no terceiro dia após detecção da sepse quando comparados a controles saudáveis (p=0.02). As citocinas IL-6, IFN-, TNF- e IL10 apresentaram níveis elevados nas amostras dos pacientes com sepse coletadas em D1, comparada a voluntários saudáveis (p<0.001). A IL6 foi a única citocina associada a choque séptico, sendo mais elevada neste subgrupo (p<0.001), e a CXCL10 apresentou níveis significativamente mais elevadas no subgrupo de pacientes que faleceu no seguimento de um ano (p<0.001). Em média, a atividade quimiotática dos neutrófilos dos pacientes com choque séptico apresentou-se 60% menor que a observada em neutrófilos de voluntários saudáveis. Observou-se atraso na apoptose dos neutrófilos de pacientes sépticos em relação aos voluntários saudáveis (p = 0.04). Por fim, o nível de DNA/NETs revelou-se aumentado nos pacientes sépticos quando comparados a voluntários saudáveis (p<0.001); esse marcador mostrou-se…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T07:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_marina_vers_o_final.pdf: 2892766 bytes, checksum: e6db8816ba808fbe1f87a740d9cef362 (MD5) Previous issue date: 7

A pneumonia pneumocócica é a principal causa de pneumonia adquirida na comunidade e é responsável por altas taxas de mortalidade. A infecção pulmonar pela bactéria Streptococcus pneumoniae caracteriza-se por um intenso infiltrado neutrofílico, que é importante para a eliminação bacteriana, mas também pode causar dano tecidual. Assim sendo, imunomoduladores como a anexina A1 (AnxA1), podem ser alvos terapêuticos interessantes. A AnxA1 é um mediador pró-resolutivo, mimetizado pelo peptídeo sintético Ac226, que ao se ligar ao receptor FPR2 induz a apoptose de neutrófilos seguido da remoção destas células pelo processo de eferocitose, dentre vários outros efeitos imunomoduladores. Portanto, o objetivo desse estudo foi avaliar o papel da AnxA1 e do receptor FPR2 na resposta inflamatória causada pela pneumonia pneumocócica. Para tal, camundongos selvagens (WT) e deficientes (KO) para AnxA1 ou FPR2/3 foram infectados por via intranasal com 5x104 CFU de S. pneumoniae e eutanasiados em diferentes tempos após a infecção para a avaliação de parâmetros inflamatórios e de função pulmonar. Além disso, animais selvagens foram infectados com um inoculo maior - 105 CFU de S. pneumoniae intranasal - e tratados com 6mg/Kg de Ac2-26 e eutanasiados para avaliação de parâmetros inflamatórios. Foi observado que animais AnxA1 KO foram mais susceptíveis à infecção, apresentando uma resposta inflamatória mais intensa, maior carga bacteriana e função pulmonar reduzida quando comparados aos animais WT. De modo semelhante, os animais FPR2/3 KO apresentaram parâmetros similares aos observados nos animais AnxA1 KO, com inflamação mais intensa, carga bacteriana elevada, piora da função pulmonar e redução da sobrevivência quando comparados com animais WT. De modo coerente, os animais tratados com Ac2-26 apresentaram redução dos parâmetros inflamatórios e das contagens bacterianas. Portanto, a deficiência de AnxA1 ou de FPR2/3 contribuiu para a intensificação da resposta inflamatória desencadeada por S. pneumoniae nos pulmões. Neste sentido, a administração de Ac2-26 teve um importante papel no controle da inflamação e da proliferação bacteriana. Assim, a modulação da resposta inflamatória parece ser benéfica em casos de pneumonia pneumocócica grave e o tratamento com o peptideomimético da AnxA1 pode ser uma estratégia terapêutica importante para o tratamento de doenças cuja inflamação é exacerbada.

Pneumococcal pneumonia is the leading cause of community acquired pneumonia and it is responsible for high mortality rates. Pneumonia caused by Streptococcus pneumoniae is characterized by an intense inflammatory response, which is important to eliminate bacteria but can also cause intense tissue damage. In this regard, immunomodulators, like annexin A1 (AnxA1), may be interesting therapeutic targets. AnxA1 is a pro-resolving…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T05:43:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 binder1.pdf: 4407579 bytes, checksum: e625106b0ea80feb86b1688bd895b295 (MD5) Previous issue date: 22

A hanseníase ainda permanece como grave problema de saúde pública no Brasil. Essa doença negligenciada possui ampla variedade de manifestações clínicas e histopatológicas que estão relacionadas com as respostas inflamatória e imune do hospedeiro. Mais recentemente, o inflamassoma, um complexo conjunto de proteínas, assumiu papel relevante na resposta inflamatória contra agentes microbiológicos. Entretanto, é pouco conhecida a participação do inflamassoma na hanseníase. Assim, realizamos um estudo observacional, transversal e comparativo da expressão imunofenotípica de proteínas associadas ao inflamassoma em diferentes formas imunopatológicas da hanseníase por imuno-histoquímica. Foram avaliadas a intensidade e o percentual da imunorreatividade de NLRP3, caspases 1 e 4/5 e interleucinas (IL) 1, 6 e 18 nos compartimentos epiderme, infiltrado inflamatório e endotélio das amostras de pele. Foram observadas fortes expressões de NLRP3 e das caspases inflamatórias 4/5, em todos os compartimentos das amostras do polo virchowiano, e da IL6, no endotélio das amostras do polo tuberculóide, além da pouca ou fraca expressão da caspase-1, IL1 e IL18 nessas formas polares da doença. A forma interpolar ou borderline apresentou imunofenótipo predominantemente similar ao polo virchowiano. Esses resultados demonstram, apesar da forte ativação das vias clássica e não-canônica do inflamassoma NLRP3 nas formas multibacilares, a inativação do inflamassoma NLRP3 na hanseníase, sugerindo evasão imune do M. leprae, o que poderá ser usado no diagnóstico ou tratamento da hanseníase.

Leprosy still remains a serious public health problem in Brazil. This neglected disease has a wide range of clinical and histopathological manifestations which are related to the host inflammatory and immune responses. More recently, inflammasome, a complex set of proteins, has assumed a relevant role in the inflammatory response against microbiological agents. However, the involvement of inflammasome in leprosy is poorly understood. Thus, we performed an observational, cross-sectional and comparative study of the immunophenotypic expression of inflammasome-associated proteins in different immunopathological forms of leprosy by immunohistochemistry. The intensity and percentage of NLRP3, caspase-1 and 4/5 and interleukin (IL) 1, 6 and 18 immunoreactivity in the epidermal, inflammatory infiltrate and endothelial compartments of skin biopsies were evaluated. Strong expressions of NLRP3 and inflammatory caspases 4/5 were observed in all compartments of the virchowian pole and IL6 in the endothelium of the tuberculoid pole, in addition to the low expression of caspase-1, IL1 and IL18 in these polar forms. The interpolar or borderline form showed immunophenotype predominantly similar to the Virchowian pole. Despite of the strong activation of NLRP3 inflammasome classic…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T21:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 binder1.pdf: 1884848 bytes, checksum: 894bf16864a81898f3c96c6ad4c08d97 (MD5) Previous issue date: 29

A Doença do enxerto contra hospedeiro (DECH) aguda e reativação de citomegalovírus (CMV) são importantes complicações do Transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) alogênico. Este trabalho trata-se de um estudo coorte prospectivo realizado no período de janeiro de 2009 a dezembro de 2011, na unidade de transplantes do HC-UFMG, Brasil. Este estudo avaliou o efeito do alemtuzumab na incidência da DECH aguda e reativação de CMV nos primeiros 100 dias após TCTH e avaliou sobrevivência global em um ano. Cinquenta e sete pacientes submetidos ao TCTH alogenico foram incluídos neste trabalho. O alemtuzumab foi administrado no condicionamento na dose de 1mg/kg em crianças (máximo de 40mg) e 30mg/ dia por 2 dias em adultos ou crianças quando acima de 40kg (total de 60mg). Quarenta e cinco (78.9%) pacientes foram diagnosticados com doença maligna. Alemtuzumab foi usado em 23 (40.4%) pacientes, sendo que dezessete destes pacientes receberam regime de condicionamento de intensidade reduzida. Onze pacientes apresentaram DECH (graduação 2-4) e deste total somente um paciente recebeu alemtuzumab no condicionamento. A incidência cumulativa da DECH (graduação 2-4) em 100 dias para pacientes que receberam ou não o alemtuzumab foi de 4.3% e 29.4%, respectivamente (p=0.02). A incidência cumulativa de reativação de CMV em 100 dias para pacientes que receberam alemtuzumab ou não foi de 61.5% e 32.6%, respectivamente (p=0.02). Dezesseis óbitos ocorreram nos primeiros 100 dias após TCTH. Somente dois óbitos foram reportados como causa a DECH aguda e nove (56.5%) óbitos causados por sepse. A sobrevivência global em um ano foi de 50%. O alemtuzumab não impactou na sobrevivência global. O alemtuzumab é eficaz em controlar a DECH aguda, mas aumenta significativamente o risco de reativação de CMV e não melhora sobrevivência global. Nosso resultado pode ser útil para discussão de adaptações no protocolo de prevenção de DECH com alemtuzumab de acordo com condições de transplante e perfil de pacientes submetidos ao TCTH alogênico. Além disso, nós enfatizamos a importância do CMV em pacientes submetidos ao TCTH alogênico no Brasil, especialmente pacientes que receberam o alemtuzumab, e a necessidade de estratégias efetivas para monitoramento e prevenção de reativação do CMV.

Acute Graft-versus-host disease (AGVHD) and cytomegalovirus (CMV) reactivation are important complications of alloHSCT. In this prospective cohort study conducted in the transplantation unit of the HC-UFMG, Brazil, from January 2009 to December 2011, the effect of alemtuzumab on the incidence of AGVHD and CMV reactivation (at 100 days) and overall survival (at one year) after alloHSCT were evaluated. Fifty-seven patients underwent alloHSCT were included. Alemtuzumab was administered before conditioning at a dose of 1mg/kg in children (maximum of 40 mg) and 30mg/ day…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T06:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jana_nasant_annagomide.pdf: 2152019 bytes, checksum: 7ecc73b1ffd89051716045e5a9f04cb2 (MD5) Previous issue date: 2

As redes sociais online fazem parte do cotidiano de milhões de pessoas do mundo inteiro. Cada vez mais pessoas utilizam essas redes para interagir, opinar e compartilhar conteúdos sobre os mais diversos tópicos, como diversão, clima, trabalho, família, trânsito e mesmo sua condição de saúde. Em suma, as redes sociais se tornaram mais um lugar social com significados próprios, evoluindo dinamicamente. Muitos acontecimentos são tardiamente percebidos e divulgados pelos meios de comunicação tradicionais, mas podem acontecer nas redes sociais em tempo real, sendo passíveis deserem detectados e de subsidiarem a construção de modelos de previsão. O objetivo dessa dissertação é utilizar o conteúdo disponível nas redes sociais para detectar a ocorrência e prever eventos da vida real. Para realizar essas tarefas, foi proposta uma metodologia que compreende desde a coleta das mensagens em redes sociaisaté a previsão de ocorrência de eventos, passando pela análise da correlação entre a natureza do conteúdo das mensagens e ocorrência de eventos, em termos de volume, tempo e espaço. A metodologia proposta foi aplicada a dois tipos de eventos reais: epidemia de dengue e enchentes. No caso da epidemia de dengue, observa-se uma altacorrelação (74%) entre mensagens expressando experiência pessoal e a incidência da doença, o que permitiu construir um sistema de alerta da epidemia por localidade com acurácia maior que 90% para cidades com alta incidência. Além disso, foi possível obter resultados comparáveis para o segundo evento, sendo esses capazes de detectar a ocorrência de pontos de alagamento e de prever sua intensidade diariamente.Isso demonstra a aplicabilidade dessa proposta como complemento a mecanismos de vigilância tradicional, muitas vezes permitindo que ações sejam antecipadas e impactos sobre a população afetada sejam reduzidos.

Online social networks are part of the everyday life of millions of people worldwide. More and more people use these networks to interact, provide feedback and share content about several topics such as entertainment, weather, work, family, traffic and even their health. In short, social networks have become a social place with its own meanings and evolving dynamicity. Many events are perceived and released later bythe traditional media, but can occur in social networks in real time, being capable of being detected and subsidize the construction of predictive models. The objective of this dissertation is to use the data available on social networks to detect the occurrence and provide real-life events. To accomplish these tasks, we propose a methodology that extends from the collection of messages on social networks to predict the occurrence of events, through analysis of correlation between the nature of the message content and the occurrence of events in terms of volume, time…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T09:47:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o__luciana_p._tavares__1_.pdf: 2797072 bytes, checksum: c650ed1ae83ffcb783ba7f7ecce4c7d7 (MD5) Previous issue date: 24

A pneumonia pneumocócica é uma importante causa de mortalidade no mundo. A resposta inflamatória contra as bactérias é necessária para controlar a infecção, mas a permanência e ativação excessiva dos neutrófilos nos pulmões podem resultar em dano tecidual significativo. Os inibidores de fosfodiesterase 4 (PDE4), tais como o rolipram, reduzem a inflamação de forma eficiente. O presente estudo analisou o impacto do tratamento com rolipram em um modelo murino de pneumonia pneumocócica. Camundongos Balb/C foram infectados por via intranasal com 103-106 CFU de Streptococcus pneumoniae e a cinética da inflamação desencadeada foi avaliada. Camundongos infectados com 104-105 CFU foram então tratados com o rolipram em um esquema profilático ou terapêutico, em combinação ou não com o antibiótico ceftriaxona. Foram realizadas contagens das células inflamatórias e bactérias recuperadas e ensaios ex vivo de fagocitose. O tratamento com rolipram durante a infecção por S. pneumoniae levou à diminuição do recrutamento de neutrófilos nos pulmões e vias respiratórias e reduziu a lesão pulmonar. A administração profilática de ROL também diminuiu os níveis das citocinas nas vias aéreas. Apesar da modulação da inflamação por ROL melhorar a pneumonia, a carga bacteriana nos pulmões não foi reduzida. Por outro lado, a antibióticoterapia reduziu o número de bactérias sem diminuir a infiltração de neutrófilos, os níveis das citocinas e a lesão pulmonar. O tratamento combinado de rolipram e ceftriaxona foi mais eficiente na redução da inflamação, aumentando a expressão da proteína pró-resolutiva anexina A1, e reduzindo o número de bactérias através do aumento da fagocitose. Ainda, camundongos deficientes em anexina A1 são mais susceptíveis à infecção pneumocócica. Estes dados mostram que os efeitos imunomoduladores dos inibidores de PDE4 são úteis durante pneumonia pneumocócica grave e sugerem o seu potencial como terapia adjuvante nesta infecção.

Pneumococcal pneumonia is a leading cause of mortality worldwide. The inflammatory response to bacteria is necessary to control infection but the permanence and excessive activation of neutrophils in the lungs may cause tissue damage. Phosphodiesterase-4 (PDE4) inhibitors, such as rolipram (ROL), effectively reduce inflammation. This study examined the impact of rolipram in a model pneumococcal pneumonia in mice. Balb/C mice were infected intranasally with 103-106CFU of Streptococcus pneumoniae and the kinects of inflammation were evaluated. 104-104 CFU mice were then treated with ROL in a prophylactic or therapeutic schedule in combination or not with the antibiotic ceftriaxone. Inflammation and bacteria counts were assessed and ex vivo phagocytosis assays were performed. Rolipram treatment during S. pneumoniae infection decreased neutrophil recruitment into the lungs…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T13:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_tatiana_r._fonseca.pdf: 5093076 bytes, checksum: 2095b69d32061e0ecc43cdaa24ef7152 (MD5) Previous issue date: 10

Introdução: O exercício físico agudo promove a liberação de citocinas na circulação. Nossa hipótese é de que o treinamento aeróbio modifica tal resposta. Desse modo, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de seis semanas de treinamento aeróbio sobre a expressão no repouso e induzida (após exercício agudo) de citocinas, adipocinas e BDNF. Também avaliamos os leucócitos circulantes no repouso antes e após o treinamento. Métodos: A amostra foi composta por 21 homens divididos em dois grupos: oito no grupo controle (GC) (25,1±0,9anos; 70,1±3,5kg; 1,79±0,02m; 45,2±1,5mL.kg-1.min-1) e 13 no grupo treinamento (GT) (22,5±0,7anos; 72,9±1,9kg; 1,76±0,02m; 44,9±1,3mL.kg-1.min-1). Todos os testes foram realizados em cicloergômetro. Os voluntários realizaram um teste progressivo para medida do consumo máximo de oxigênio (VO2MAX), de dois a cinco testes de intensidade constante para identificar a máxima fase estável de lactato (MFEL). Após a determinação da MFEL (1), todos os indivíduos realizaram um exercício agudo até a fadiga (exercício agudo) nessa intensidade. Depois foram submetidos a seis semanas de treinamento aeróbio, três vezes por semana na intensidade MFEL (1). Em seguida, os mesmos testes foram realizados para determinar a MFEL do pós-tratamento (MFEL, 2) e os voluntários executaram dois exercícios agudos, sendo um na mesma intensidade relativa do pré-treinamento (MFEL, 2) e outro na mesma intensidade absoluta do pré-treinamento (MFEL, 1). No grupo treinamento durante os exercícios agudos, foram coletadas as amostras de sangue para a determinação de citocinas, adipocinas e BDNF plasmáticos. Essas foram estimadas utilizando o método de ELISA sanduíche. Antes e após o treinamento foram caracterizados diferentes tipos celulares por citometria de fluxo.Resultados: O exercício físico agudo induziu o aumento das concentrações circulantes de IL-6, sTNFR1, CXCL10/IP-10, leptina, resistina e o BDNF no momento do término e de TNF-, IL-10, sTNFR2 e adiponectina na recuperação do exercício. O GT teve aumento de11,2% no VO2MAX e de 14,7% na intensidade da MFEL. O treinamento não alterou os mediadores imunológicos analisados no repouso. O treinamento aeróbio promoveu um aumento menor de IL-6, sTNFR2, leptina e BDNF e uma redução mais rápida do sTNFR1 notérmino do exercício físico agudo com a mesma intensidade absoluta do pré-treinamento. Já as elevações das concentrações de TNF-a, IL-10, CXCL10/IP-10, resistina e adiponectina induzidos pelo exercício físico agudo foram similares ao pré-treinamento. O treinamento aeróbio resultou em concentrações menores de sTNFR1 e de BDNF, na fase de recuperação, após exercício físico agudo com a mesma intensidade relativa do pré-treinamento. Conclusões: O treinamento aeróbio foi eficaz. O exercício físico agudo na intensidade da MFEL foi capaz de alterar as…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T14:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_rafael_elias_marques_.pdf: 1554936 bytes, checksum: de3ca447006dc158a793da4e37a119b1 (MD5) Previous issue date: 3

A dengue é uma importante arbovirose humana, caracterizada por sua alta morbidade, causada pelo Dengue virus (DENV), que coloca em risco mais de 2.5 bilhões de pessoas. Apesar de sua relevância, os mecanismos de patogênese das formas mais graves da doença ainda são pouco compreendidos. A infecção é caracterizada por um processo inflamatório sistêmico, marcado por alterações hematológicas e produção exacerbada de citocinas pró-inflamatórias. Evidências relacionando o sistema das quimiocinas CC com a gravidade da dengue, e dados prévios do nosso grupo mostrando que camundongos deficientes no receptor de quimiocinas CC 5 (CCR5-/-) são resistentes à infecção por DENV fundamentaram esta investigação do receptor CCR5 no contexto da dengue experimental. Camundongos do tipo selvagem (WT) e CCR5-/- foram inoculados com 10 LD50 de DENV adaptado ao camundongo para realização de ensaios de letalidade e avaliação de parâmetros inflamatórios. Camundongos CCR5-/- são resistentes à infecção por diferentes sorotipos de DENV e a resistência pode ser conferida a camundongos WT pelo tratamento com antagonistas de CCR5 antes, mas não após a infecção. A infecção de culturas primárias de macrófagos peritoneais de camundongos WT e CCR5-/- revelou que o receptor CCR5 não participa da entrada do DENV em macrófagos, mas sua deficiência leva ao atraso da replicação viral nas células. O atraso na replicação in vitro, capaz de gerar diferenças em até 10x na carga viral entre os grupos WT e CCR5-/-, pode ser observado in vivo, pela redução marcante da carga viral nos tecidos CCR5-/- em fases iniciais na infecção. A análise de parâmetros inflamatórios revelou que camundongos WT apresentam uma discreta doença ao 5º dia pós-infecção (p.i.) que evolui para um quadro grave ao pico da infecção, ao 7º dia p.i. Camundongos CCR5-/-, apesar de infectados, nunca adoecem, apresentando uma resposta imune capaz de eliminar o vírus sem causar dano tecidual. Esses dados indicam que o receptor CCR5 é uma molécula do hospedeiro requerida à replicação do DENV em macrófagos, relevante na patogênese da doença. O estudo deste mecanismo pode levar ao desenvolvimento de alternativas eficazes para a prevenção e tratamento da dengue.

Dengue is an important human arbovirosis, a public health problem faced by 2.5 billion people. Infection is characterized by a systemic inflammatory response and hematological alterations that may evolve with shock and death in severe cases. Recent clinical and experimental data have shown an association between components of the chemokine network and severity of Dengue, and previous data from our group indicates that CC chemokine receptor 5 deficient mice (CCR5-/-), are markedly protected against dengue virus disease, leading to the investigation of the role of CCR5 receptor in a mice model of dengue. Wild-type…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T23:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ppgbioquimicaimunologia_brauliohenriquefreirelima_tesedoutorado.pdf: 12538248 bytes, checksum: 3e90ad7a6f5b2cb07410ace65e396fcd (MD5) Previous issue date: 6

TLRs e PI3Ks sao proteinas muito importantes para o desenvolvimentode uma resposta inflamatoria robusta e eficiente. Enquanto TLRs sao responsaveis por reconhecer PAMPs/DAMPs e iniciar a resposta, as PI3Ks sao responsaveis por uma diversa variedade de funcoes que compreendem a migracao, ativacao e sobrevivencia celular, sintese de proteinas e outros. Como ambas as proteinas tem acoes complementares para a ativacao celular e desenvolvimentoda resposta imune, um desequilibrio nas suas vias de sinalizacao poderia levar a respostas inflamatorias excessivas. O objetivo deste trabalho foi estudar o papel de PI3K na regulacao da resposta TLR9

TLRs and PI3Ks are very important proteins for the developmentof a robust and efficient inflammatory response. While TLRs are responsible for the PAMPs/DAMPs recognition and initiate the response, PI3Ks are responsible for a myriad function that comprise cell migration, cell activation, protein synthesis, cell survival and others. As both proteins have complimentary actions toward cell activation and response, an imbalance on their signalling could lead to excessive inflammatory responses so, the aim of this work was to study the role of PI3K in the regulation of TLR9 response

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Made available in DSpace on 2019-08-11T18:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ppgbioquimicaimunologia_analet_ciamalheirossilveira_tesedoutorado.pdf: 6401017 bytes, checksum: 664e4b3c5cccedafab8b33acb7a79d08 (MD5) Previous issue date: 11

As doencas inflamatorias intestinais (DII) sao doencas cronicas cuja incidencia tem aumentado mundialmente. O uso de prebioticos e probioticos demonstra ser estrategia terapeutica promissora para o tratamento das DII, devido a capacidade em modular a microbiota intestinal, provavel agente desencadeador dessas doencas em individuos susceptiveis. Resultados anteriores demonstraram que animais pre-tratados, mas nao tratados com dieta rica em fibra alimentar (pectina), que apresenta potencial efeito prebiotico, apresentaram reducao na resposta inflamatoria colonica cronica induzida por sulfato de sodio dextrana (dextran sulfate sodium - DSS), em camundongos BALB/c femeas. Um dos objetivos do atual trabalho foi avaliar se o uso concomitante de dieta rica em pectina e do probiotico, Bifidobacterium longum 51A, no mesmo modelo de colitecronica, teria efeito terapeutico. O uso da dieta rica em fibra, do probiotico ou da associacao de ambas as terapias nao reduziu os escores clinicos e histopatologicos da colite experimental induzida por DSS, um tipo de modelo de DII. A intervencao preventiva foi, de fato, mais eficiente em relacao ao tratamento terapeutico. Associada aresposta inflamatoria intestinal observam-se alteracoes metabolicas nas DII. Outro objetivo do trabalho foi estudar a progressao das alteracoes metabolicas sistemicas, no tecido adiposo e figado de animais com colite aguda e cronica induzida por DSS. Camundongos BALB/c femeas submetidas a colite experimental demonstraramadaptacoes metabolicas na fase aguda da doenca como: reducao na concentracao serica de glicose e aumento nas concentracoes de colesterol total e de triglicerideos, acompanhado por reducao na expressao das enzimas hepaticas glicose-6-fosfatase epiruvato quinase, alem de reducao do conteudo de gordura hepatica e aumento de estresse oxidativo nesse orgao. Observou-se tambem inflamacao do tecido adiposo e alteracoes na producao de adipocinas, como reducao nas concentracoes de adiponectina e resistinae aumento nas concentracoes de leptina serica. Essas adaptacoes iniciais levaram a um quadro de intolerancia a glicose e resistencia insulinica na colite cronica, com caracteristicas similares as observadas na sindrome metabolica: aumento de glicemia, colesterol total, triglicerides, dentre outras alteracoes. Visto que a leptina se mostroualterada na fase aguda e cronica da inflamacao intestinal experimental e por apresentar caracteristica pro-inflamatoria, outro objetivo do atual trabalho foi avaliar o papel dessa molecula na resposta inflamatoria intestinal. Observou-se que a ausencia da sinalizacao da leptina, em camundongos db/db, induziu protecao a inflamacao intestinal, por meio da reducao de neutrofilos e eosinofilos no colon desses animais e, consequentemente reducao da lesao tecidual…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T19:48:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_de_doutorado___lucas_secchim_ribeiro.pdf: 3629999 bytes, checksum: 769a767567b5b0f691673e8877035084 (MD5) Previous issue date: 31

O controle da temperatura corporal contribui para a atividade do sistema imune. Em animais endotérmicos, essa modulação é finamente controlada pelo hipotálamo, com produção local de citocinas e mediadores lipídicos. A febre é a resposta do termostato hipotalâmico à detecção de pirógenos oriundos tanto de micro-organismos infecciosos quanto aqueles produzidos pelo próprio organismo durante uma reação inflamatória. Contudo, a febre é um sinal clínico frequentemente negligenciado, devido ao seu caráter agudo e inespecífico. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi verificar a participação de importantes mediadores inflamatórios para o desenvolvimento da febre induzida por lipopolissacarídeo (LPS). Para isso, foram utilizadas ferramentas de estudo com reconhecida importância para a inflamação: a) a enzima fosfatidilinositol 3-quinase gama (PI3K), de aspecto pleiotrópico e importante em diversas funções, como desenvolvimento celular e ativação gênica; b) o fator ativador de plaquetas (PAF) e seu receptor (PAFR), cuja cascata de sinalização promove ativação leucocitária e liberação de citocinas e c) a microbiota comensal, que atua primando o sistema imunológico e oferecendo diversas vantagens simbióticas ao seu hospedeiro. Nossos resultados indicam que tanto a microbiota comensal quanto a enzima fosfatidilinositol 3-quinase gama são fundamentais para a indução de febre por LPS. A ausência de ambas em camundongos levou à redução da geração de importantes citocinas pró-inflamatórias de caráter pirogênico, como IL-1 e TNF-. No sistema nervoso central, essa menor resposta periférica leva à hiporresponsividade do hipotálamo, com menor expressão da cicloxigenase 2 (COX-2), enzima-chave na produção da prostaglandina E2, mediador final da febre no cérebro. Já os animais deficientes para o receptor do fator ativador de plaquetas tiveram um processo febril atrasado e prolongado em relação ao grupo selvagem. Isso se deve à manutenção de alta concentração de IL-1 no plasma em períodos mais tardios após a injeção de LPS, em um mecanismo independente da expressão central de COX-2 e TNF-. Em conjunto, os dados gerados sugerem que a geração de moléculas pró-inflamatórias na periferia é necessária para a resposta central hipotalâmica e consequente aumento de temperatura, conforme demonstrado nos modelos utilizando animais isentos de microbiota ou deficientes para a enzima PI3K, nos quais intervenções biológicas e farmacológicas suportam tal hipótese. Por outro lado, a deleção ou antagonismo do receptor de PAF gerou um fenótipo distinto e igualmente interessante. O atraso e prolongamento da febre pode indicar a participação desse mediador lipídico na resolução do processo febril. Estudos mais detalhados se fazem necessários para o aprofundamento no assunto, a fim de que deles sejam extraídas conclusões…

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Made available in DSpace on 2019-08-12T15:10:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_nathalia_batista_final.pdf: 2808870 bytes, checksum: c7cf7c14bd64b6ced13e1c2e78ffdc32 (MD5) Previous issue date: 10

A gota é uma doença causada pela deposição de cristais de urato monossódico (MSU) nas articulações. A IL-1 é a citocina chave da gota, que é produzida e liberada através da ativação do inflamassoma NLRP3 que ocorre após células residentes fagocitarem os cristais de MSU. Apesar de ser uma doença conhecida há vários séculos, os mecanismos envolvidos tanto no reconhecimento dos cristais de MSU pelos fagócitos, os quais são responsáveis pela ativação da cascata inflamatória, quanto no controle da resposta inflamatória induzida por esses cristais ainda não estão totalmente esclarecidos. No presente estudo foram identificadas duas moléculas regulatórias importantes nesse contexto: pentraxin 3 (PTX3) e microRNA-135b. Pentraxinassão consideradas como sendo o braço humoral do sistema imune inato enquanto microRNAs são pequenos RNAs responsáveis pela regulação pós-transcricional da expressão gênica. Os resultados apresentados neste estudo mostram que a produção de PTX3 está aumentada tantoem amostras de camundongos submetidos a um protocolo experimental de gota, quanto em amostras de pacientes com gota aguda. Além disso, foi possível demonstrar que PTX3 é importante para a fagocitose de cristais de MSU tanto em células humanas quanto em células de camundongos. Mecanisticamente, foi demonstrado que isto ocorre, em camundongos, por meio de receptores do tipo Fc, principalmente FcRIII. Esses dados sugerem que PTX3 é umimportante mediador para o desencadeamento da inflamação causada por cristais de MSU. Com relação ao microRNA-135b, sua expressão foi encontrada aumentada no contexto da gota experimental e foi demonstrado que a expressão deste microRNA é regulada por IL-1 emmacrófagos. Além disso, foi possível identificar o microRNA-135b como sendo um regulador negativo da via de sinalização de IL-1, tendo como alvos MyD88 e IL-1RAcP. Esses dados sugerem que o microRNA-135b é uma molécula importante no controle da inflamação articular na gota aguda. Dessa forma, a identificação dessas duas moléculas regulatórias da inflamação induzida por cristais de MSU ajuda a entender melhor a natureza da artrite gotosa assim como abrir novas perspectivas de diagnóstico e terapia.

Gout is a disease caused by the deposition of monosodium urate crystals (MSU) into the joints. IL-1 is the key cytokine in gout, which is produced and released through NLRP3 inflammasome activation that occurs after MSU crystal phagocytosis by resident cells. Although this disease is known many centuries ago, the mechanisms involved in bothrecognition of MSU crystals by phagocytes, which are responsible for activating the inflammatory process, and also in the control of the inflammatory response induced by these crystals are still not completely elucidated. In this study, it was identified two important regulatory molecules in the context of gout:…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T08:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_final___soraia.pdf: 5225855 bytes, checksum: 9f59372b5b24b42d45486738e187927b (MD5) Previous issue date: 20

INTRODUÇÃO: Durante a menopausa, a redução dos níveis de estradiol (E2) pode acarretar um processo de osteoporose. Embora esteja bem estabelecido que o E2 apresenta efeitos diretos sobre as células ósseas, seu mecanismo de ação não está completamente esclarecido. Considerando-se que o processo de formação/reabsorção óssea é também influenciado por citocinas e quimiocinas, fica clara a necessidade de avaliar a relação entre o E2 e estas moléculas no controle da homeostase óssea e em processos patológicos, como a osteoporose. OBJETIVOS: 1. Avaliar o efeito da redução do E2 na perda óssea alveolar e se a reposição com E2 leva à modificação do fenótipo; 2. Avaliar o efeito da deleção do receptor de estrogênio ER na reabsorção óssea alveolar e mecanicamente induzida; 3. Avaliar o efeito da deleção do receptor de IL-33, ST2, na reabsorção óssea alveolar associada a ovariectomia (OVX) e mecanicamente induzida. MÉTODOS: Objetivo 1. Foi realizada OVX e reposição hormonal com 17-estradiol (E2) em animais C57BL/6 e Balb/c. Animais intactos foram utilizados como controle. Foi realizada a eutanásia após períodos de 15 e 30 dias para coleta dos ossos maxilares para avaliação por microtomografia computadorizada (microCT) e ELISA e fêmures para análise histomorfométrica; Objetivo 2. O osso alveolar de animais fêmeas e machos homozigotos ER+/+ (wild type - WT) and ER-/- (ERKO - deficiente para o receptor de estrogênio alfa) submetidos ou não à força ortodôntica, foram analisados empregando-se microCT, RT-PCR e espectroscopia de energia dispersiva (EDS). Células de medula óssea (CMO) dos animais WT e ERKO foram utilizadas para obtenção de culturas de osteoblastos e osteoclastos; Objetivo 3. OVX e reposição hormonal com mini-implantes contendo E2 foram realizadas em animais Balb/c (WT) e deficientes para o receptor de IL-33 (ST2-/-). Ossos maxilares submetidos ou não à movimentação ortodôntica foram analisados por meio de análise histológica, histomorfométrica, RT-PCR e CMO foram obtidas para diferenciação em osteoclastos. RESULTADOS: Objetivo 1. As análises por microCT demonstraram que a OVX resultou em diminuição da espessura, densidade e volume ósseo, assim como aumento da separação do osso trabecular. Houve também redução da crista óssea alveolar associada a OVX. Estes efeitos foram associados à redução da porcentagem de osso trabeculado e espessura cortical do fêmur. A reposição hormonal com E2 reverteu o fenótipo ósseo observado nos ossos alveolares e fêmur após OVX. Verificamos ainda, aumento da expressão de TNF- e da razão RANKL/OPG nos tecidos periodontais após OVX, o qual também foi revertido pela reposição com E2; Objetivo 2. Animais fêmeas e machos ERKO demonstraram aumento da perda óssea alveolar e movimentação ortodôntica dentária (OTM) associado com a diminuição da porcentagem de cálcio e aumento da expressão…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T15:40:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_carolin_m_degener_final.pdf: 20530959 bytes, checksum: a9cd959420956da7fc0fecc3c15e654a (MD5) Previous issue date: 4

Nos primeiros três capítulos do presente trabalho, as armadilhas BG-Sentinel (BGS), MosquiTRAP (MQT) e BG-Mosquitito (BGM), projetadas para o monitoramento de Aedes aegypti (L.), foram avaliadas para o seu uso no controle de vetores da dengue em experimentos de coleta massal. No quarto capítulo, dados longitudinais de monitoramento com BGSs e MQTs foram comparados e as associações entre as capturas, a incidência da dengue e as variáveis meteorológicas foram analisadas. No primeiro experimento, o efeito da coleta massal com BGSs sobre as populações adultas de vetores da dengue em Manaus (AM) foi avaliado. Os resultados do monitoramento entomológico indicaram que a coleta massal reduziu significativamente a abundância de Ae. aegypti fêmeas, nos primeiros cinco meses do estudo (estação chuvosa) mas não na época de seca. Nos meses chuvosos subsequentes, menos fêmeas foram capturadas nas áreas tratadas porém, não houve diferença significativa em relação às áreas sem coleta massal. A pesquisa de anticorpos específicos (IgM) indicou que infecções recentes de DENV foram menos frequentes nas áreas tratadas, mas a diferença em relação às de controle não foi significativa. Os resultados não foram conclusivos mas, há evidências de que a BGS é uma ferramenta promissora, que pode ser utilizada como um componente de programas de controle da dengue. Estudos adicionais são necessários para comprovação de um efeito significativo da coleta massal sobre a abundância do vetor e a transmissão da dengue. No Capítulo II, o uso de MQTs foi avaliado para o controle de Ae. aegypti em Manaus. Durante a intervenção, houve um número significativamente maior de Ae. aegypti fêmeas nas áreas tratadas, em comparação com as de controle. Portanto, os resultados do monitoramento entomológico indicaram que a coleta massal com MQTs não reduziu a abundância fêmeas adultas de Ae. aegypti. A frequência de infecções recentes de DENV também não foi menor nas áreas de tratadas. A partir dos resultados obtidos, não houve evidências de que a coleta massal com MQT (três unidades por casa) poderia ser utilizada no combate dos vetores da dengue em Manaus, porém seu uso é recomendável apenas para o monitoramento de Ae. aegypti. No terceiro experimento, a coleta massal com BGMs foi utilizada em um bairro com infestação elevada em Sete Lagoas (MG), detectada pelo sistema MI-Dengue (MI-D). O monitoramento foi realizado com MQTs e BGMs. Os resultados do monitoramento com MQTs mostraram que, durante o período de intervenção, houve um número significativamente menor de Ae. aegypti fêmeas, na área de coleta massal. Contudo, não houve diferença significativa entre as capturas de Ae. aegypti fêmeas, em BGMs de monitoramento. Os resultados sugerem que as BGMs podem ser utilizadas como parte de uma estratégia de controle da dengue, juntamente com o MI-D.…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T23:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_adriana_moura__1_.pdf: 3652001 bytes, checksum: 7f7ace8308c1fa1b9d539509b78fac5c (MD5) Previous issue date: 2

A aplicação de força mecânica sobre o tecido ósseo resulta em remodelação, caracterizada pela reabsorção e deposição óssea em sítios específicos. Esses processos são regulados pela liberação de mediadores inflamatórios, dentre esses os metabólitos derivados do ácido araquidônico (AA). O AA, quando metabolizado pela via 5 lipoxigenase (5-LO) resulta na formação de leucotrieno B4 (LTB4) e cisteinil leucotrienos (CysLTs). Esses metabólitos têm sido amplamente estudados na resposta inflamatória e, mais recentemente, na remodelação óssea. Sendo assim, os objetivos deste trabalho foram: (i) desenvolver um modelo de remodelação óssea associada à movimentação dentária ortodôntica induzida por força mecânica; (ii) investigar o papel dos metabólitos da via 5-LO no processo de remodelação óssea, bem como no recrutamento e diferenciação de osteoclastos. Inicialmente, para definição da força mecânica ideal, camundongos C57BL/6 foram submetidos a uma força de intensidade entre 0,1 N e 0,5 N. A força ideal obtida, 0,35 N, foi aplicada nos demais grupos experimentais: C57BL/6 ou SV129 (Wild Type-WT); animais deficientes da enzima 5-LO (5-LO-/-), ou tratados com veículo (VH), zileuton (ZN) (inibidor da 5-LO) e montelucaste (MT) (antagonista do receptor de CysLTs). A quantidade movimentação dentária e o número de osteoclastos foram avaliados histomorfometricamente. A expressão de marcadores de remodelação óssea e citocinas foi avaliada em sítios de compressão e tensão do periodonto. O efeito dos metabólitos da via 5-LO na diferenciação de osteoclastos, bem como na expressão de TNF- foi avaliada in vitro após estímulo de células RAW 264.7 com LTB4 e LTD4. A força de 0,35 N promoveu movimentação dentária e recrutamento de osteoclastos sem induzir reabsorção radicular. A movimentação dentária e o número de osteoclastos estavam diminuídos na ausência ou inibição da enzima 5-LO e do receptor de CysLTs em comparação com os grupos WT e VH, respectivamente. Foi observada uma expressão diferenciada de citocinas e marcadores de remodelação óssea nos sítios de tensão e compressão. Catepsina K e o TNF- tiveram maior expressão nos sítios de compressão, enquanto OCN e RUNX2 no sítio de tensão. A expressão das moléculas TNF-, IL-10, RUNX2 e RANK estava diminuída nos grupos 5-LO-/- e MT em relação ao WT e ao VH, respectivamente. No grupo ZN a expressão reduzida de TNF-, IL-10 e RUNX2 foi observada em relação ao grupo VH. In vitro, LTB4 promoveu aumento da diferenciação de osteoclastos, enquanto LTB4 e LTD4 induziram a liberação de TNF-. Nossos resultados demonstram a contribuição dos metabólitos da via 5-LO, LTB4 e CysLTs, no processo de remodelação óssea por afetarem diretamente o recrutamento e diferenciação de osteoclastos.

Bone remodeling, induced by mechanical force, results in bone resorption and bone deposition in specific…

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Made available in DSpace on 2019-08-09T22:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_corrida.pdf: 9887691 bytes, checksum: 5556d728b63e12943073531dbcbf2f7c (MD5) Previous issue date: 1

O recrutamento de leucócitos aos tecidos é uma parte essencial da resposta imune inata e esse processo de forma desregulada pode resultar em lesões nos tecidos. Assim, a infiltração de leucócitos tem sido implicada na patogênese da laminite aguda em equinos. Os objetivos desta pesquisa foram: verificar a tolerância de equinos à aplicação de um antagonista alostérico de CXCR1 e CXCR2 (reparixina) pela via intravenosa e verificar sua a ação sobre os sinais clínicos e parâmetros hematológicos de cavalos com endotoxemia e laminite induzida por oligofrutose. Doze eqüinos sem raça definida de origem brasileira receberam oligofrutose (10 g/kg de peso vivo PO no tempo 0) e foram divididos em dois grupos: tratados (30 mg/kg pv de reparixina IV, nos tempos 6, 12, 18 e 24 h) e não tratados. As frequências cardíaca e respiratória, temperatura retal, coloração de membranas mucosas, presença e intensidade de pulso digital, sensibilidade ao exame com pinça de casco e grau de claudicação segundo Obel, bem como parâmetros hematológicos e bioquímicos (hemograma, glicose, uréia, creatinina, ALT, AST, FA, GGT, bilirrubina total e proteína total) foram aferidos nos tempos 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 horas. O modelo usando oligofructose foi adequado para induzir sinais de laminite e endotoxemia, como diarreia, febre e leucocitose em cavalos sem raça definida de origem nacional. Também, não foram observadas quaisquer reações adversas clínicas ou hematológicas relacionadas ao uso intravenoso da reparixina. Contudo essa substância, quando administrada na dose de 30 mg/kg de pv, a cada 6 horas, por quatro aplicações, não foi capaz de prevenir os sinais clínicos e as alterações hematológicas causadas pela endotoxemia na espécie equina. Novos estudos usando biópsias de casco deverão ser conduzidos de forma a verificar possível efeito benéfico da reparixina sobre o tecido lamelar.

Leucocytes recruitment to tissues is an essential part of the innate immune response and an unregulated process can result in tissue damage. Thus, leucocytes infiltration has been implicated in the pathogenesis of acute laminitis. The objectives of this study were to determine the tolerance of horses to the intravenous infusion of reparaxin, an antagonist for CXCR1/2 (achemokine receptor for neutrophils attraction) and these effects on the clinical signs and hematological parameters in horses given oligofructose to induce endotoxemia and laminitis. 30 Twelve horses were given oligofructose (10g/kg bw PO) in time 0 and divided in two groups: treated (30 mg/kg bw. Reparaxin IV, times 6, 12, 18 e 24 h) and no treated. Cardiac andrespiratory frequency, rectal temperature, mucous membrane colour, digital pulse, hoof sensitivity and Obels grade of lameness were recorded. Values for RBC, WBC, glicosis, BUN, creatinin, ALT, AST, alcalin phosphatase, GGT, total…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T14:24:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese___marina_chaves_de_oliveira.pdf: 20501234 bytes, checksum: 5f1f0868207e0f66d90a0d78dd4ff5c8 (MD5) Previous issue date: 20

A inflamação é uma resposta imunitária que visa a proteção do organismo contra antígenos e a manutenção do estado de homeostase. Por conseguinte, esta resposta leva à mobilização de substratos metabólicos para gerar suporte adequado para o mesmo. Dessa forma, tanto a resposta inflamatória interfere no metabolismo intermediário como o estado nutricional do indivíduo interfere na respostainflamatória. O primeiro objetivo desta tese foi avaliar o impacto da inflamação articular aguda sobre o metabolismo. Além disso, objetivou-se verificar se o consumo de dietas que alteram a massa adiposa influencia a resposta inflamatória. A inflamação articular aguda no joelho de camundongos levou a alterações metabólicas. A utilização de inibidor de citocina, e não de neutrófilos, parece ser a melhor alternativa para melhorar tais alterações. Por outro lado, as alteraçõesmetabólicas crônicas induzidas por diferentes composições dietéticas alterou a resposta inflamatória no joelho após o desafio com o antígeno indutor de inflamação articular. Em conjunto, demonstramos que a inflamação aguda altera o metabolismo. Entretanto, animais com alterações metabólicas apresentam inflamação articular atenuada. O segundo objetivo da tese foi analisar o efeito de vesículasextracelulares do leite bovino (BMEVs) na artrite crônica e remodelação óssea. BMEVs foram caracterizadas pela presença de nanopartículas de tamanho <220nm contendo RNAm, miRNA e proteínas. Na artrite experimental crônica, foi mostrado que BMEVs são agentes terapêuticos interessantes à base de nano/micropartículas uma vez que reduzem mediadores pró-inflamatórios e também atenuam os sintomas da doença, apesar de sua forma de ação in vivo ainda permanecer a ser elucidada. Assim, com base em evidências na literatura e nos nossos resultados, hipotetizamos também que BMEVs poderiam ser utilizadas como ferramentas para a terapia de pacientes com artrite. Por outro lado, o consumo de leite é altamente associado a formação óssea, no entanto, ainda é um fato controverso. BMEVs poderiam interferirna homeostase óssea que é um processo orquestrado entre osteoclastos, osteoblastos e os osteócitos. O fato de que a diferenciação dos osteoblastos é acelerada em osteócitos por BMEVs parece influenciar dramaticamente a matriz óssea que conduz à formação de tecido ósseo imaturo, que é mais frágil e maisvulnerável a fraturas, se não substituído pelo osso lamelar. Além disso, houve aumento na diferenciação de osteoclastos pequenos, sua atividade foi comprometida e pareceu estar relacionada com a redução da secreção de ácido. Foi mostrado que as nanopartículas no leite são moduladoras da imunidade e osso por regulação na resposta da artrite, e diferenciação de osteoblastos e osteoclastos. Portanto, nós demonstramos como os componentes da dieta podem influenciar osestados de…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T14:05:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_angelica_t_vieira.pdf: 10253941 bytes, checksum: be04c3a96a569ad2ff3cb57984a5d84b (MD5) Previous issue date: 10

As bactérias comensais do trato gastrointestinal modulam o desenvolvimento do sistema imune. A microbiota intestinal produz fatores que são benéficos pois regulam a resposta imune do hospedeiro. Um desses fatores são os short-chain fatty acids (SCFA) do português: ácidos graxos de cadeia curta, que são produzidos pela fermentação de fibras solúveis da dieta pela microbiota saudável, tais quais os gêneros Bifidobacterium e Bacteroides. Os SCFAs se ligam ao receptor acoplado à proteína G-43 (GPR43), também conhecido como FFAR2), e nesse trabalho demonstramos que a interação SCFAGPR43 exerce efeitos modulatórios nas respostas inflamatórias. A estimulação do GPR43 pelo SCFA é necessária para a resolução da resposta inflamatória. Animais deficientes de GPR43 (Gpr43-/-) mostraram uma exacerbada e não-resolutiva inflamação tanto no modelo de colite, quanto nos modelos de artrite e asma. Interessantemente, os animais Gpr43-/- apresentaram uma resposta ineficiente a gota devido à inabilidade em ativar o complexo inflamassoma. Entretanto, o tratamento com acetato (o mais abundante SCFA) antes e depois da indução da gota nos animais selvagens, aboliu o dano tecidual, promovendo a resolução da resposta induzida pela gota. Além disso, animais alimentados com dieta rica em fibras ou com o próbiotico Bifidobacterium longum apresentaram uma redução do infiltrado celular nos animais desafiados com monossódio de urato (MSU). Animais germ-free (GF), que não possuem bactérias e, desse modo, não produzem SCFAs, mostraram uma resposta similar aos animais Gpr43-/-. Animais GF apresentaram uma resposta exacerbada na colite, na asma, e na artrite reumatóide. No entanto, se tratarmos previamente os animais GF com acetato, observamos uma resposta inflamatória reduzida nesses modelos. Além disso, animais GF desafiados com MSU apresentaram uma hiporresponsividade similar ao Gpr43- /- com reduzido recrutamento celular. Entretanto, tratamento prévio com acetato reverteu esta hiporresponsividade. Assim, esses dados sugerem a habilidade do acetato em primar o sistema imune permitindo o recrutamento de células durante a resposta induzida por MSU. Em resumo, esse trabalho sugere que a microbiota modula a habilidade do hospedeiro em responder aos estímulos inflamatórios e, a interação entre SCFA-GPR43 representa um mecanismo central entre dieta, microbiota e resposta imune, provendo um importante link entre eles.

The commensal bacterial of the gastrointestinal tract shapes the development of the immune system. The gut microbiota produces factors that are beneficial to the host for the regulation of immune responses. One of these factors may be the shortchain fatty acids (SCFA), which are produced by fermentation of dietary fiber by healthy microbiota such as Bifidobacterium and Bacteroides. SCFAs bind to Gprotein coupled receptor 43…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T08:01:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o.pdf: 1094187 bytes, checksum: 36e530874b4e14cfc0be877f031b679f (MD5) Previous issue date: 31

Probióticos são formulações contendo microrganismos viáveis que exercem algum tipo de efeito benéfico sobre a manutenção do equilíbrio da microbiota intestinal e na resistência à infecções. Já foi demonstrado que Lactobacillus delbrueckii UFV-H2b20, um candidato a probiótico, é capaz de estimular as defesas imunes do hospedeiro. No presentetrabalho, nós investigamos os efeitos protetores de L. delbrueckii na resistência contra a infecção por Listeria monocytogenes em camundongos gnotobióticos. Camundongos SWISS isentos de germes receberam uma única dose de 109 L. delbrueckii viáveis. Animais controle receberam salina em lugar do probiótico. Ambos os grupos foram infectados intraperitonealmente dez dias depois com 104 L. monocytogenes vivas. Demonstramos que L. delbrueckii colonizou o trato intestinal dos animais e o número de células viáveis atingiu 108 a109 ufc/g de fezes dez dias após a monoassociação. A monoassociação foi capaz de proteger os animais contra a morte causada por L. monocytogenes e induziu o clareamento mais eficiente da bactéria no baço, fígado e cavidade peritoneal após 1, 3 e 5 dias de infecção.Além disso, houve maior produção de TNF- no soro, cavidade peritoneal e trato intestinal dos animais monoassociados. Os níveis de IFN- encontrados no sobrenadante de cultura de células esplênicas foram mais altos após a monoassociação. Também houve aumento naprodução de óxido nítrico no soro e sobrenadante de cultura de células da cavidade peritoneal dos animais que receberam L. delbrueckii. Nós também mostramos que L. delbrueckii foi capaz de induzir a produção de IL-10 ao nível da mucosa intestinal, mas não a nível sistêmico. Em resumo, nós demonstramos que L. delbrueckii é capaz de colonizar o trato intestinal e aumentar a resistência contra a infecção por L. monocytogenes através da estimulação da produção de mediadores pró e antiinflamatórios da resposta imune.

Probiotics are formulations containing viable microorganisms that have some beneficial influence on the maintenance of a balanced intestinal microbiota and on the resistance to infections. It has been reported that Lactobacillus delbrueckii UFV-H2b20, a probiotic candidate, is able to protect against infections by stimmulating the hosts immuneresponses. In the present study we investigated the protective effects of L. delbrueckii on the resistance to Listeria monocytogenes infection in gnotobiotic mice. SWISS germfree mice received a single dose containing 109 viable L. delbrueckii. Control mice received salineinstead. Both groups were infected intraperitoneally ten days later with 104 live L. monocytogenes. We showed that L. delbrueckii colonized the gastrointestinal tract of gnotobiotic mice and the number of viable cells ranged 108 to 109 cfu/g of feaces 10 days after monoassociation. Survival data indicated a protective effect of L.…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T14:56:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diogo_magnani___resumo_e_abstract_disserta__o_de_mestrado_1_.pdf: 87053 bytes, checksum: 5f5ddad2560e8588f54d15f1aa02ed94 (MD5) Previous issue date: 23

Brucella abortus é uma bactéria gram-negativa, patógeno intracelular, que causa febre ondulante, e artrite em humanos e infertilidade em animas, resultando em sérias perdas econômicas. O reconhecimento de Brucella por receptores associados ao reconhecimento de padrões (PRRs), como os receptores do tipo Toll (TLRs), é importante para o estabelecimento de uma resposta eficaz, uma vez que este culmina na polarização da resposta imune para o perfil Th1, determinante no controle da infecção por esta bactéria (Golding et al., 2001). TLR4 (Campos et al., 2004), TLR2 (Giambartolomei et al., 2004) e TLR9 (Huang et al., 2005) participam no reconhecimento da Brucella abortus in vitro, contudo, TLR 2 e TLR4 não são essenciais ao controle de infecções por Brucella in vivo. Já a molécula MyD88, principal adaptadora na sinalização de TLRs, possui papel relevante no controle de infecções desta bactéria in vivo (Weiss et al., 2005). Embora Brucella seja capaz de estimular diversos TLRs, não se tem compreensão exata de qual modo o reconhecimento por TLRs é utilizado para montar uma resposta eficaz contra a bactéria. As células dendríticas (DCs) são as únicas células encarregadas da produção de IL-12 no baço em resposta a Brucella abortus inativada pelo calor (Huang et al., 2001), o que as torna, além de potencial sítio de infecção (Billard et al., 2005), células importantes no desencadeamento da resposta imune. O objetivo deste trabalho foi, então, avaliar o papel da molécula MyD88 e TLRs no reconhecimento da Brucella abortus em DCs. Surpreendentemente, ao contrário do esperado para uma bactéria gram-negativa, a produção de citocinas pró-inflamatórias TNF- e IL-12p40 e a maturação de células dendríticas derivadas de medula óssea (BMDCs) foi dependente da molécula MyD88. Estudamos então, BMDCs derivadas de camundongos TLR2-/- e TLR4-/-, de onde podemos concluir que a maturação e produção de IL-12 e TNF- em resposta à Brucella abortus nestas células é dependente de TLR2, mas não de TLR4. A dependência de TLR2 para a resposta de BMDCs a Brucella foi ainda confirmada através do bloqueio, com anticorpos específicos, deste receptor em células selvagens, o que as tornou irresponsivas a estimulação por Brucella. Interessantemente, os resultados obtidos variaram de acordo com a linhagem celular, já que macrófagos com TLRs bloqueados por anticorpos apresentaram dependência de TLR2 para a produção de TNF-, mas não IL-12, assim como descrito por outros (Huang et al., 2003). A maturação de células esplênicas de camundongos após estimulação in vivo foi mediada por MyD88, mas não por TLR2. Este resultado contraria, em parte, os dados observados in vitro, possivelmente devido à existência de outros subtipos de células dendríticas no organismo. O sutil papel do receptor do tipo Toll 4 nas respostas de…

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Made available in DSpace on 2019-08-09T17:24:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_ang_lica_thomaz_vieira_imprimir.pdf: 64217995 bytes, checksum: e249128fe29ba52511e73ba0f38627d2 (MD5) Previous issue date: 3

Eosinófilos são células pró-inflamatórias multifuncionais, que participam de diversos processos inflamatórios, incluindo disfunções gastrintestinais. O seu papel na colite ulcerativa, no entanto, ainda é desconhecido. Neste trabalho, avaliamos a participação do eosinófilo usando camundongos deficientes de eosinófilos (ÄdblGATA-1), utilizando o modelo de colite experimental induzida por Sulfato de Sódio Dextrana (DSS). A colite experimental induzida nos animais wild-type (WT) foi acompanhada de 100% de mortalidade, ao contrário dos animais deficientes de eosinófilos, que não morreram. Além disso, um grande acúmulo de eosinófilos foi observado no cólon intestinal dos animais WT com colite, detectado nas análises histopatológicas e no ensaio da atividade enzimática da peroxidase eosinofílica. O acúmulo de neutrófilos também estava aumentado, porém este aumento foi observado somente nos animais WT com DSS. Foi percebido uma elevação nos níveis das quimiocinas: Eotaxina/CCL11, KC/CXCL1-3 e MIP-1á/CCL3 estava aumentado nos animais WT com colite, quando comparados aos animais controle. No entanto, nos animais ÄdblGATA-1, essas quimiocinas não apresentaram diferenças significativas, tanto no grupo com colite quanto no controle. Deste modo, podemos sugerir um importante papel dos eosinófilos no desenvolvimento de disfunções gastrintestinais no modelo experimental de colite ulcerativa, evidenciado pelo aumento da morbidade e mortalidade dos animais.

Eosinophils are multifunctional pro-inflammatory leukocytes implicated in the pathogenesis of numerous inflammatory processes, including gastrointestinal disorders, but its precise role in the development of Ulcerative colitis is unknown. The present study was conducted to determine this role by using a mouse model of eosinophil lineage ablation (ÄdblGATA-1) and we choose oral administration of dextran sulfate sodium (DSS) to induce colitis. All WT mice died after DSS-induced colitis has been installed, while eosinophil deficient mice did not. Furthermore, eosinophil lineage ablation in mice has a protective effect in dextran sulfate sodium- induced colitis. Eosinophil accumulation was higher in WT mice with colitis than in ÄdblGATA-1 mice, as assessed by histopathological analysis and eosinophil peroxidase activity, even with high IL-5 levels in the latter group. Neutrophils accumulation was also significantly increased only in WT-treated with DSS. Furthermore, Eotaxin/CCL11, KC/CXCL1-3 and MIP-1á/CCL3 chemokines were increased in WT mice, compared to controls. However, theses chemokines showed no significant differences in ÄdblGATA-1 with colitis and controls. Thus, we suggest that eosinophils are critical in the development of gastrointestinal dysfunction, and mortality increase of mice submitted to experimental ulcerative colitis.

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Made available in DSpace on 2019-08-10T10:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese.pdf: 660397 bytes, checksum: ea2a96add1dfae06c9a156b3d3e5abf1 (MD5) Previous issue date: 27

O TNF-á tem um papel importante na letalidade e nas lesões queacompanham a reperfusão. Nesse trabalho, nós avaliamos o efeito de dois inibidores duais da enzima conversora de TNF-á (TACE) e dasmetaloproteinases de matriz (MMP), denominados PKF242-484 e PKF241-466. Nós examinamos o papel destas enzimas na modulação dos níveis séricos e teciduais de TNF-á após lesão de isquemia e reperfusão da artéria mesentérica superior em camundongos, observando a letalidade e a extensão da lesão tecidual. Animais que durante a reperfusão foram tratados com PKF242-484 ou PKF241-466 apresentaram uma redução dosedependente dos níveis séricos de TNF-á. De acordo com esse resultado, esses dois compostos foram capazes de retardar ou prevenir parcialmente a letalidade que acompanha as lesões de isquemia reperfusão. A inibição máxima ocorreu com a dose de 10 mg/Kg. Os inibidores duais da TACE e das MMPs reduziram as lesões associadas à reperfusão localmente e à distância, avaliadas pela alteração da permeabilidade vascular, recrutamento de neutrófilos e grau de hemorragia. Além disso, PKF242-484 ou PKF241-466 reduziram a produção de TNF-á, KC e MCP-1 no intestino e pulmão de animais submetidos à reperfusão. Em contraste, nem PKF242-484 ou PKF241-466, afetaram as concentrações séricas e teciduais de IL-10, uma citocina antiinflamatória. Para testar a relevância da inibição das MMPs nesses resultados acima, nós utilizamos um inibidor específico de MMPs que não possui efeito inibitório na TACE, o FN-439. O tratamento com 10 mg/Kg de FN-439, inibiu a atividade das MMPs avaliadas por zimografia mas não demonstrou efeito na letalidade nem foi capaz de reduzir a produção de TNF-á solúvel. Não observamos alterações nos demais parâmetros inflamatórios de lesão tecidual. PKF242-484 e PKF241-466, novos inibidores duais da TACE e das MMPs foram efetivos em melhorar as lesões teciduais associadas à reperfusão assim como a resposta inflamatória sistêmica. A utilização desses compostos pode ser um coadjuvante no tratamento das lesões que acompanham a reperfusão de territórios vasculares isquêmicos. Tratamento com inibidores específicos das MMPs não demonstrou benefício nesse modelo. A inibição da capacidade de clivagem de TNF-á pela TACE parece ser o principal mecanismo envolvido na resposta benéfica com o uso de PKF242-484 ou PKF241-466.

TNF-á plays an important role in reperfusion-induced tissue injury andlethality. Here, we assessed the effect of PKF242-484 and PKF241-466, two dual inhibitors of TNF-á converting enzyme (TACE) and matrixmetalloproteinases (MMPs). We examine the role of these enzymesmodulating TNF-á levels in tissue and serum after ischemia and reperfusion of the superior mesenteric artery in mice using lethality and the extent of tissue injury. Reperfused animals that received PKF242-484 or PKF241-466 treatment had a dose dependent…

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Made available in DSpace on 2019-08-10T07:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pdf.pdf: 90287 bytes, checksum: 58b437253bbae01bc59189b0c1dab8b7 (MD5) Previous issue date: 19

Neutrófilos constituem a primeira linha de defesa contra infecção e contribuem para iniciação da inflamação. No entanto, ainda não está claro o papel dos neutrófilos na resposta a Leishmania, além do que a maioria dos trabalhos foi conduzida no modelo de infecção por Leishmania major, não havendo dados referentes à participação de neutrófilos na resposta imune a Leishmania amazonensis. Deste modo, o objetivo deste estudo foi investigar o envolvimento de neutrófilos na iniciação da resposta imune a L. amazonensis. No presente trabalho mostramos que os neutrófilos são as primeiras células a migrar para o sítio de infecção em resposta a L. amazonensis, compondo o tipo celular predominante no infiltrado inflamatório, e que o acúmulo destas células na orelha infectada acompanha a produção de CXCL1, CXCL2 e TNF-. Comparamos as cinéticas de migração de neutrófilos e de produção de quimiocinas e citocinas entre animais infectados com L. amazonensis e L. major a fim de determinar se diferenças no recrutamento de neutrófilos podem ser responsáveis pelas falhas na indução de células dendríticas e na indução da expressão de quimiocinas e citocinas observadas nos estágios iniciais da infecção por L. amazonensis. Contudo, não detectamos diferenças consideráveis na migração de neutrófilos entre camundongos infectados com L. amazonensis ou L. major que pudessem explicar diferenças na resposta destes animais às duas espécies do parasitas. Procuramos determinar qual o estímulo responsável pela migração de neutrófilos para o sítio de infecção por L. amazonensis, porém o bloqueio das principais vias de migração de neutrófilos não foi capaz de prevenir a migração de neutrófilos em resposta a L. amazonensis, o que indica que mais de um estímulo deve estar atuando simultaneamente, ou ainda, é possível que o próprio parasita produza fatores quimiotáticos específicos para neutrófilos. Além disso, mostramos que a presença de neutrófilos no sítio de infecção é essencial para a formação de um infiltrado inflamatório denso e para a expressão de CCL2, CCL5, TNF- e IL-1 em resposta a L. amazonensis. Finalmente, sugerimos que neutrófilos parecem estar envolvidos em mecanismos que conferem certa resistência a camundongos BALB/c frente à infecção por L. amazonensis, visto que a depleção de neutrófilos tornou tais animais mais susceptíveis à infecção.

Neutrophils provide the first line of defense against infection and also contribute to the initiation of inflammation. However the role of neutrophils in response to Leishmania is not clear yet. Moreover, most of the studies were performed in Leishmania major model of infection, hence there is no information on the involvement of neutrophils in the immune response to Leishmania amazonensis. For this reason, the aim of this work was to investigate the role of neutrophils during the initiation of the immune…

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Made available in DSpace on 2019-08-14T14:13:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_m_nica.pdf: 2855611 bytes, checksum: 906583bc4be74b48f49cb1a1d06b710b (MD5) Previous issue date: 8

O lipídio endógeno, fator ativador plaquetário (PAF), é comumente considerado um mediador pró-inflamatório e pró-angiogênico com base na aplicação exógena deste composto e antagonistas de seus receptores in vitro e in vivo.Neste trabalho, usando camundongos com inativação do gene (nocaute(KO)) para o receptor do PAF (PAFR-KO) foram avaliadas várias atividades deste mediador em dois modelos de angiogênese (modelo de implante de esponjas; angiogênese inflamatória e os tumores sólidos de Ehrlich e cólon; angiogênese tumoral). Nestes modelos foram caracterizadas a neovascularização, a inflamação e a produção de citocinas. Além disso, o crescimento dos tumores sólidos nestes animais foi determinado. A angiogênese, avaliada por análise morfométrica nos implantes e pela dosagem do conteúdo de hemoglobina, nos dois tecidos estava aumentada tanto nos implantes como no tumor de cólon dos animais nocaute. Níveis aumentados do VEGF foram predominantes nos tumores dos animais nocaute (compatível com o aumento da angiogênese) e os do TNF-alfa variaram entre os tecidos avaliados nos dois grupos de animais. O acúmulo de neutrófilos e macrófagos determinados pela atividade das enzimas mieloperoxidade (MPO) e N-acetilglucosaminidase (NAG) respectivamente, nos implantes e tecidos tumorais foram significativamente menores nos animais PAFR-KO, confirmando os efeitos pró-inflamatórios do PAF. Os níveis da quimiocina KC foram maiores no implante dos animais nocaute. Nos tumores, esta quimiocina foi menor apenas no tumor de Ehrlich nestes animais. Não houve diferença entre os pesos dos tumores de cólon nos dois grupos de animais. No entanto, o crescimento do adenocarcinoma de Ehrlich no período de 25 dias foi seis vezes maior nos animais KO comparados aos selvagens. Os resultados deste estudo mostram que a inflamação e a angiogênese em camundongos PAFR-KO não são eventos causais e propomos que o PAF endógeno pode ser um importante mediador inibitório da neo-formação vascular e do desenvolvimento do tumor sólido de Ehrlich.

The endogenous lipid, platelet activating factor (PAF), is usually considered a pro-angiogenic mediator due to its exogenous in vitroand in vivo effects and to studies with PAF receptor (PAFR) antagonists in vivo. In this study, mice with gene inactivation of the receptor for PAF (PAFR-KO) well used to analyze a range of activities exhibited by this mediator. Two experimental designs were used: the sponge implantation and the growth of solid tumors (Ehrlich and colon) to assess neovascularization, inflammation, cytokine production. Angiogenesis as determined by morphometric analysis and hemoglobin content was significantly higher in the implants and colon tumor of knock out (KO) mice compared with the wild type (WT). VEGF content in the tumors was also, higher in these animals. The levels of TNF-alpha were increased…

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Made available in DSpace on 2019-08-13T21:31:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_corrigida_p_s_defesa_13_12_10.pdf: 45652382 bytes, checksum: 9790c77f73f62db51312ea2a6360af2f (MD5) Previous issue date: 5

A gripe é uma doença respiratória de grande relevância mundial, por causar grande número de mortes e internações durante as epidemias e pandemias. Estratégias para o combate ao vírus Influenza enfrentam desafios, como o surgimento de linhagens resistentes a vacinas e antivirais. Sabe-se que respostas inflamatórias exacerbadas ao vírus são causas da grande morbidade associada à infecção. O Fator de Ativação Plaquetária PAF é um mediador fosfolipídico com efeitos diretos em respostas inflamatórias, como transmigração e ativação leucocitária. O presente estudo avaliou o papel do receptor de PAF na infecção pelos subtipos do vírus Influenza H1N1 e H3N1. Para isso, foi padronizado um modelo de infecção murina com dois inóculos do vírus H1N1, 104 e 106 PFU e com o inóculo de 106 PFU do vírus H3N1. Camundongos PAFR KO e WT foram infectados pelos dois tipos de vírus e monitorados quanto à perda de peso e letalidade por 21 dias. Animais infectados pelo vírus H1N1 foram sacrificados no 5° ou 8° dia de infecção para monitoramento do recrutamento e ativação leucocitária, produção de citocinas e quimiocinas, carga viral, sobrevida celular e lesão tecidual. O antagonista do receptor de PAF, PCA 4248, também foi utilizado durante a infecção pelo vírus H1N1 e avaliação de letalidade, perda de peso e parâmetros inflamatórios. Os resultados mostraram que o desenvolvimento dos sinais associados à doença é progressivo e dependente do inóculo e subtipo viral utilizados. O vírus H1N1, mais patogênico, provocou um intenso infiltrado neutrofílico nas vias aéreas e pulmões, edema pulmonar, lesão tecidual e grande produção de citocinas pró-inflamatórias. Animais PAFR KO foram protegidos da letalidade e perda de peso causados pelo vírus H1N1 e H3N1, em relação ao grupo WT. O antagonista PCA conferiu proteção semelhante contra H1N1 à encontrada em animais PAFR KO. A proteção esteve relacionada à redução no recrutamento de neutrófilos para as vias aéreas, no extravasamento protéico e danos pulmonares. Nos animais PAFR KO houve ainda, aumento de células NK e NKT, mas menor produção de citocinas relacionadas à ativação destas células; menor desativação de fagócitos, níveis elevados de apoptose no pulmão, carga viral igual ou menor. A ausência de PAFR manteve a resposta adaptativa à reinfecção. Conclui-se que PAFR possui, então, papel fundamental na patogênese da gripe e pode representar um alvo terapêutico para a contenção da inflamação associada à infecção.

Flu is a respiratory illness of great global relevance, as it causes large number of hospitalizations and deaths during epidemics and pandemics. Strategies to combat the Influenza virus face challenges such as the emergence of strains resistant to vaccines and antiviral drugs. It is known that exacerbated inflammatory responses to the virus are causes of…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T19:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_final.pdf: 5939596 bytes, checksum: 15893b89f8f21b82cc0d444857cabcc9 (MD5) Previous issue date: 13

As quimiocinas participam de uma ampla série de eventos fisiológicos bem como do processo patológico de várias doenças, apresentando-se, assim, como possíveis alvos para novas estratégias terapêuticas. Alguns tipos de vírus e o Schistosoma mansoni burlam o sistema imune do hospedeiro produzindo proteínas que seletivamente neutralizam asquimiocinas que medeiam o processo inflamatório. Os carrapatos possuem em sua saliva uma grande variedade de agentes como as proteínas ligantes de quimiocinas que permitem com que eles se alimentem por logo período de tempo sem serem percebidos pelo sistema imunológico do hospedeiro. Através de uma biblioteca de cDNA construída a partir da glândula salivar do carrapato Rhipicephalus sanguineus foram identificadas três proteínas ligantes de quimiocinas chamadas Evasinas que não apresentam homologia estrutural àsproteínas já descritas. Ao contrário das proteínas ligantes de quimiocinas virais e do Schistosoma mansoni, esta família apresenta uma grande seletividade de seus membros quanto aos ligantes. Estudos in vitro mostram que a Evasina-1 liga-se à MIP-1a/CCL3, MIP-1b/CCL4 e PARC/CCL18. A Evasina-3 liga-se à IL-8/CXCL8 e GRO-a/CXCL1 e homólogos murinos (KC/CXCL1-3 e MIP-2/CXCL1-2). Já a Evasina-4 liga-se à eotaxina/CCL11 e RANTES/CCL5. No presente trabalho, nós avaliamos a atividade farmacológica das evasinas em diferentes modelos de inflamação. A Evasina-1 inibiu o recrutamento celular induzido por MIP-1a/CCL3, bem como diminuiu a inflamação emmodelos de hipersensibilidade do tipo tardia e fibrose pulmonar induzida pela bleomicina. De maneira semelhante, a Evasina-3 e a Evasina-4 preveniram o influxo de neutrófilos ou eosinófilos, respectivamente, induzido por fatores quimiotáticos ou por antígeno em animais sensibilizados. Assim, essas novas proteínas ligantes de quimiocinas, que são menores que os recentemente descobertos anticorpos naturais de camelos que possuem apenas a cadeiapesada, apresentam atividade farmacológica in vivo e são eficazes em reduzir a inflamação em modelos animais. As evasinas podem ser relevantes como estratégias antiinflamatórias no futuro e úteis no planejamento de novos arcabouços estruturais através do planejamentomolecular racional.

The chemokines are involved in physiologic events and pathologic process of many diseases. Then, they are potential targets to new therapeutics strategies. Several virus and Schistosoma mansoni subvert their host immune system by producing proteins that selectivelyneutralize the chemokines that mediate inflammatory process. The ticks present in their saliva many agents, such as chemokines binding proteins that allow them to feed for long periods of time without are detected by immunologic systems of host. Through cDNA library from thesalivary glands of the tick Rhipicephalus sanguineus were identificated three chemokines…

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Made available in DSpace on 2019-08-11T13:12:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_caio_fagundes.pdf: 2625976 bytes, checksum: 73531c9b8e4d54f5065a355dadb53ddd (MD5) Previous issue date: 3

A dengue é hoje a mais importante arbovirose que afeta o homem e constitui um sério problema de saúde pública no mundo, especialmente nos países tropicais, onde as condições do meio ambiente favorecem o desenvolvimento e a proliferação do Aedes aegypti, principal mosquito vetor. Embora o conhecimento sobre a patogênese da doença seja incipiente, atribui-se um importante papel às citocinas na resposta do hospedeiro à infecção. Dentre estas podemos destacar o IFN-, uma citocina com importante função na imunidade contra agentes infecciosos. Neste trabalho, avaliamos o papel desempenhado pelo IFN- e por uma de suas moléculas efetoras, o óxido nítrico (NO), na resposta à infecção pelo vírus da dengue. Para isso, foi utilizado um modelo experimental, baseado na infecção de camundongos com uma isolado clínico de Dengue-2 previamente adaptado ao hospedeiro murino. Camundongos selvagens liberam IFN- após serem infectados com o vírus da dengue. Além disso, animais deficientes na expressão do IFN- (IFN- -/-) apresentaram taxas elevadas de letalidade após a infecção com o vírus da dengue. Esta baixa sobrevida foi associada a uma manifestação agravada da doença quando comparados com animais selvagens infectados, como demonstrado pelo aumento da plaquetopenia, hemoconcentração e hipernocicepção encontrada nestes animais, além de níveis sistêmicos de TNF- e IL-6 elevados. Além disso, houve prejuízo na produção de quimiocinas no fígado de animais IFN – /- infectados e aumento do infiltrado neutrofílico para o pulmão em relação ao observado nos controles selvagens infectados. Esta maior susceptibilidade à infecção foi caracterizada por prejuízo no controle da replicação viral após a infecção, fato que inferimos estar associado à menor capacidade desses animais em produzir o NO. De fato, a produção do gás, catalisada pela enzima iNOS, se mostrou importante durante a infecção, como evidenciado pela susceptibilidade aumentada dos animais iNOS-/-. Estes animais, de maneira semelhante aos animais IFN – /-,apresentaram letalidade acentuada frente à infecção, além de intensa gravidade nos sinais hematológicos como avaliado pelo decréscimo do número de plaquetas e hemoconcentração elevados. Camundongos iNOS-/- também apresentaram níveis de TNF- e IL-6 circulantes elevados, e produção de quimiocinas teciduais e influxo de neutrófilos para o pulmão reduzidos. Por fim, mesmo sendo capazes de produzir IFN-, os animais iNOS-/- se mostraram inaptos a controlar a replicação do vírus da dengue, como acessado pelo alto título viral encontrado no baço destes animais. Desta forma, concluímos que a produção de óxido nítrico induzida pelo IFN- é uma via importante na resposta à infecção pelo vírus da dengue. Na ausência destas moléculas há marcante incapacidade de controle da replicação viral por parte do hospedeiro, levando a uma…