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Objetivo: Popularmente, pacientes têm creditado a melhora da constipação intestinal ao uso de alimentos industrializados que contém probióticos. Estudos têm sido realizados em crianças e adultos. Porém, ainda questiona-se a eficácia dos probióticos na constipação, principalmente na faixa etária pediátrica. O objetivo desse artigo é proporcionar uma revisão atualizada sobre o uso de probióticos no tratamento da constipação intestinal crônica funcional da criança. Método: Foi realizada revisão não sistematizada da literatura médica internacional nos sites do Medline. Utilizaram-se os seguintes descritores: constipation, microbiota, probiotics, gastrointestinal disorders, child e randomised controlled trial. Resultados: Até o momento, existem poucos estudos avaliando probiótico e constipação intestinal principalmente em crianças. Mesmo incluindo publicações em adultos, o número de participantes envolvidos ainda é pequeno e há limitações metodológicas em vários estudos. Conclusão: Não há evidências suficientes comprovando a eficácia dos probióticos na constipação intestinal, principalmente em crianças. Porém, os resultados encorajam a realização de novos ensaios clínicos randomizados placebo controlado.

Objective: Popularly patients have credited improvement of constipation in products that contain probiotics. Researchers have been made in adults and children. Until now, there is uncertainty regarding the use of probiotics for the treatment of constipation, mainly in children. The aim of this article is to evaluate and update evidence on the efficacy of the use of probiotics in children with functional constipation. Data Sources: A non systematic review of the international medical literature was carried out through the sites Medline. The used descriptors were as follows: constipation, probiotics, gastrointestinal disorders,child e randomised controlled trial. Data synthesis: Until now, there are few studies of probiotics in constipation mainly in children. Even if studies in adults are included, the number of participants is low and there are methodological problems in some of those researchers. Conclusions: There is not sufficient evidence to support the effectiveness of probiotics in constipation mainly in children. However, the results encourage new randomised controlled trials.

Advisors/Committee Members: Elizabet Vilar Guimaraes, Jacques Robert Nicoli, Elizabet Vilar Guimaraes.

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A busca por medidas de prevenção e controle para a aterosclerose, bem como para seus fatores de risco, possui grande relevância clínica, pelo fato dessa ser a principal causa das doenças cardiovasculares (DCVs). Com isso, há grande interesse em se identificar compostos naturais que atuem como agentes protetores. Nesse contexto, o quefir, uma bebida fermentada pela ação dos grãos de quefir (mistura de bactérias e leveduras agrupadas em uma matriz polissacarídea), foi o objeto deste estudo, por possuir alegações populares de vários benefícios à saúde, algumas já relatadas na literatura. O presente estudo investigou os efeitos do quefir aquoso (em solução de açúcar mascavo), uma forma popularmente consumida, no desenvolvimento da aterosclerose e em seus fatores de risco (metabolismo lipídico e estresse oxidativo). Para isso, a bebida preparada de forma caseira foi administrada a camundongos APOE-/- alimentados com dieta comercial, por 4 semanas. Os animais foram divididos em grupo Controle e grupo Quefir, que recebeu o quefir (fermentado de 50g de grãos de quefir/ 1L de solução de açúcar mascavo) em substituição à água. A ingestão do quefir foi capaz de aumentar os níveis séricos de HDL, acarretando na redução do índice aterogênico. Além disso, o quefir promoveu redução dos triglicerídeos séricos e houve uma tendência a aumento desses no fígado. A peroxidação lipídica e a atividade da enzima catalase no fígado apresentaram-se reduzidas no grupo Quefir. Em contrapartida, o quefir não interferiu na concentração sérica de anticorpos anti-LDL oxidada dos ApoE-/-, medida indireta da oxidação de LDL. No desenvolvimento da placa aterosclerótica, as áreas de lesão na válvula aórtica e na aorta abdominal e torácica foram semelhantes entre os grupos. As lesões apresentaram grande acúmulo de macrófagos, mostrado por imunohistoquímica, mas também semelhantes em porcentagem de área entre os grupos. Assim, os resultados apresentados nos levam a concluir que, embora alguns fatores de risco para a aterosclerose apresentaram melhora com a ingestão de quefir por 4 semanas, este efeito não foi de intensidade suficiente para alterar o curso da doença na raiz da válvula ou na aorta especificamente.

The search for prevention and control for atherosclerosis, as well as its risk factors, has great clinical relevance, because this is the main cause of cardiovascular diseases (CVDs). Thus, there is a strong effort to identify natural compounds that act as protective agents. In this context, kefir, a fermented drink generated by the action of kefir grains (a mixture of bacteria and yeasts grouped in a polysaccharide matrix), was the object of study, since popular consumption claims several health benefits, some already reported in the literature. The present study investigated the effects of aqueous kefir (solution of brown sugar), a form commonly consumed, in the development of atherosclerosis and its risk factors (lipid metabolism and oxidative stress). For this, kefir was administered to ApoE-/- mice, fed by a commercial diet, for 4 weeks.…

Advisors/Committee Members: Jacqueline Isaura Alvarez Leite, Jacqueline Isaura Alvarez Leite, Jacques Robert Nicoli, Dirce Ribeiro de Oliveira, Evelyn de Souza Oliveira, Jacques Robert Nicoli.

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The oral microbiota is composed by about 500 bacteria species, but, in a given endodontics infection, only about 1 to 12 species are recovered. Factors such as bacterial interactions, by the action of antagonist substances and bacteriocins, can influence bacterial growth in this site. In this study, bacterial interactions that occur among microorganisms recently recovered from human endodontics infections are evaluated in vitro. With this objective, the diffusion technique in agar by the use of different culture media (agar BHI-S, MRS e AC) was used. The antagonist substance produced by Clostridium butyricum was also partially characterized. The bacterial species selected were: Bifidobacterium adolescentis, Gemella morbillorum, Clostridium butyricum, Fusobacterium nucleatum, Peptostreptococcus. micros, Lactobacillus acidophilus, Prevotela intermedia/nigrescens. Synergism wasnt observed among the selected species, while Antagonism was detected among the following interactions: G.morbillorum and L. acidophilus, P. intermedia/nigrescens; B. adolescentis and G.morbillorum, C. butyricum, F. nucleatum, P. intermedia/nigrescens, P. micros; C. butyricum and B. adolescentis, G. morbillorum, F. nucleatum, P. intermedia/nigrescens; F. nucleatum and B. adolescentis, C. butyricum, P. micros; P. micros and B. adolescentis, C. butyricum, P. intermedia/nigrescens, L. acidophillus; L. acidophillus and B. adolescentis, F. nucleatum; P. intermedia/nigrescens and all the producing species. The presence of bacteriophages in the inhibition zones wasnt detected. It can be observed that the type of culture media used interfered in the results: the AC media, when concentrated, showed better results than the BHI-S. Finally, the results referring to partial characterization of the substance produced by C. butyricum showed that it is stable in pH ranging from 3.5 to 6.5 and in temperatures of 60º, 70º and 100ºC; being insensitive to the action of proteolitics enzymes: trypsin, alpha-chymotripsin and papain, therefore demonstrating that it is a thermo-resistant antagonist substance and apparently of non-proteic nature. The results confirm data from literature, which indicate that factors such as pH, cultive media and temperature interfere in the expression of antagonist substance activity, therefore being important ecological determinants in the selection of bacteria on the inside of the Root Canal Systems.

A microbiota oral é constituída por aproximadamente 500 espécies bacterianas, sendo que em uma dada infecção endodôntica apenas cerca de 1 a 12 espécies são ali recuperadas. Fatores como as interações bacterianas, substâncias antagonistas e bacteriocinas podem influenciar o crescimento bacteriano naquele sitio. Neste estudo, foram avaliadas, in vitro, as interações bacterianas que ocorrem entre microrganismos recuperados de infecções endodônticas humanas. Para tal, utilizou-se a técnica de difusão em ágar, mediante uso de diferentes meios de cultura: BHI-S, MRS e AC. Caracterizou-se também, parcialmente, a substância antagonista produzida…

Advisors/Committee Members: Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Jacques Robert Nicoli, Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Jacques Robert Nicoli, Ana Paula Vieira Colombo, Paula Prazeres Magalhaes.

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O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica das citocinas pró-inflamatórias (RANKL, TNF- e IFN-) e regulatórias (TGF- e IL-10) em resposta à infecção experimental em molares de camundongos Balb/c com os microrganismos Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) e Enterococcus faecalis (ATCC 19433), em mono ou em bi-associação. Os animais foram sacrificados após 10 e 20 dias, e os tecidos periapicais coletados, dosando-se a presença das citocinas por PCR em tempo real. Observou-se que a mono-infecção com o F. nucleatum induziu, no 10º dia, alta expressão de RANKL e TNF- e que a modulação dessa resposta se deveu à IL-10. O E. faecalis provocou uma alta expressão de IFN- no 20º dia, mas essa modulação observada na expressão do RANKL e TNF- foi independente da IL-10 e TGF-. A bi-associação (F. nucleatum e E. faecalis) estimulou uma alta expressão das citocinas RANKL, TNF- e IFN-, no 10º dia, que seria modulada pela presença aumentada do TGF-. Pode-se concluir que, neste modelo, a expressão gênica das citocinas pró-inflamatórias prevalece nos períodos iniciais de indução das alterações periapicais com concomitante redução no período tardio e isto se deve à modulação promovida pelas citocinas regulatórias IL-10 e TGF-, mas de uma maneira infecção-específica.

The aim of this study was evaluate the gene expression of proinflammatory (RANKL, TNF- e IFN-) and regulatory (TGF- e IL-10) cytokines in response to experimental infection in Balb/c mice molars by microorganisms Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) and Enterococcus faecalis (ATCC 19433) in single and bi association. The animals were sacrificed after 10 and 20 days, the periapical tissues were collected and the PCR real time dosed the cytokine expression. It was observed that the single infection with F. nucleatum induced high expression, on the 10º day, of RANKL and TNF- and this response modulation was due to IL-10. E. faecalis caused high expression of IFN- at 20º day, but this modulation in RANKL e TNF-expression was independent of IL-10 e TGF-. The bi association (F. nucleatum e E. faecalis) encouraged high expression of RANKL, TNF- e IFN-, on the 10º day, would be modulated by TGF- increased expression. It can be concluded that, in this model, gene expression of proinflammatory cytokines prevails in earlier periods of periapical changes induction with concomitant decrease in the late periods, and this is due to the regulatory cytokines IL-10 e TGF- modulation, but in a way infection-specific.

Advisors/Committee Members: Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Jacques Robert Nicoli, Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Jacques Robert Nicoli, Maria Auxiliadora R de Carvalho, Gil Moreira Júnior.

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O kefir é um tipo de leite fermentado refrescante, carbonatado e com um sabor levemente ácido, produzido, tradicionalmente, a partir da fermentação do leite pelos grãos de kefir. Todavia a espécie e quantidade dos micro-organismos presentes nestes grãos sofrem mudanças durante produções sucessivas, levando a fabricação de uma bebida com qualidade não padronizada. Há evidências de que o kefir possui efeitos benéficos sobre o sistema imune e gastrointestinal, contudo há poucos estudos publicados sobre experimentos em animais e humanos que sustentem esta visão. O trabalho teve por objetivos determinar o tempo de vida-de-prateleira de amostras de kefir elaboradas com os grãos de kefir (Método tradicional) e com culturas puras isoladas desses grãos (Método com cultura iniciadora) e também verificar o efeito de proteção dessas amostras na infecção experimental com Salmonella enterica sorovar Typhimurium em modelo animal. O kefir cultura iniciadora apresentou os menores valores de pH e sinérese e os maiores de acidez e viscosidade durante o armazenamento. O teor de etanol do kefir tradicional aumentou significativamente durante o armazenamento. A contagem média de bactérias ácido lácticas no kefir tradicional e cultura iniciadora variou de 9,19 a 8,37 log UFC/mL e 9,37 a 9,78 log UFC/mL, respectivamente, e a de leveduras no kefir tradicional e no kefir cultura iniciadora variou de 6,34 a 6,52 log UFC/mL e 5,75 a 6,10 log UFC/mL. O tempo de armazenamento influenciou nos atributos de presença de espuma, sabor ácido, sabor alcoólico e off-flavor em ambas amostras de kefir. A granulosidade, sabor ácido e cremosidade foram os atributos que, aparentemente, mais diferenciaram o kefir tradicional do kefir cultura iniciadora. Na infecção experimental com Salmonella Typhimurium, observou-se que a taxa de sobrevida dos animais tratados com kefir tradicional (30%) e com kefir cultura iniciadora (20%) não foi diferente estatisticamente quando comparadas ao grupo controle (21,1%). O grupo tratado com kefir tradicional apresentou ausência de lesão no fígado e cólon na maioria dos animais. O método de fermentação do kefir por cultura iniciadora demonstrou ser o melhor tecnologicamente, por resultar em uma bebida com um padrão de qualidade constante e com tempo de vida útil maior, além de possuir características sensoriais semelhantes às do kefir tradicional, enquanto nenhum dos kefir apresentaram efeito de proteção na infecção com Salmonella Typhimurium em camundongos.

Kefir is a carbonated fermented milk with a slightly acidic flavor. It is traditionally produced by the kefir s grain inoculation in milk. However the amount and species of microorganisms in kefir grains may change after successive productions, becoming difficult to standardize the drink quality. There are evidences that the kefir produces beneficial effects for the immune and gastrointestinal systems, however there are a few published studies about animals and human experiments proving it. In this work we analyzed the stability of physicochemical, microbiological and…

Advisors/Committee Members: Evelyn de Souza Oliveira, Jacques Robert Nicoli, Evelyn de Souza Oliveira, Elisabeth Neumann, Jacques Robert Nicoli, Silvana da Motta.

▼ A incidência de doenças alérgicas tem aumentado tanto em países desenvolvidos como em desenvolvimento. A alergia alimentar é uma reação de hipersensibilidade imediata mediada por IgE que ocorre após a ingestão de determinados alimentos por indivíduos previamente sensibilizados. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu um modelo animal para o estudo da alergia alimentar à ovalbumina. Neste modelo, os camundongos são sensibilizados com ovalbumina (OVA) e desafiados com uma solução de clara de ovo a 20% (SCO). Um dos sintomas apresentados pelos camundongos BALB/c no nosso modelo de alergia alimentar é a perda de peso corpóreo após o desafio oral que persiste enquanto durar a ingestão do antígeno. Este emagrecimento não foi associado a um menor consumo líquido, nem a um menor consumo de ração. Macrófagos provenientes dos animais alérgicos produzem mais óxido nítrico que os animais normais. Foi observado também que animais alérgicos apresentam maior infiltrado eosinofílico no intestino delgado. No presente trabalho foi demonstrado que os animais alérgicos, que foram suplementados com selênio orgânico, vitamina E e todas as suplementações juntas, perderam peso corpóreo na primeira semana de desafio oral. A partir da segunda semana de desafio, esses animais recuperaram o peso corpóreo, sendo a recuperação do grupo suplementado com vitamina E, a mais expressiva. Além disso, os animais alérgicos expressaram mais iNOS no intestino, e quando foram suplementados com vitamina E a expressão dessa enzima foi semelhante à dos animais controles. Os animais alérgicos apresentaram um grande infiltrado de eosinófilos no intestino delgado e a vitamina E teve participação na diminuição do infiltrado. Esses resultados demonstram que a vitamina E apresenta efeitos positivos na alergia alimentar experimental. Os mecanismos pelos quais ela age devem ser investigados. 14 Advisors/Committee Members: Jacques Robert Nicoli, Denise Carmona Cara Machado, Jacques Robert Nicoli, Wagner Luiz Tafuri, Danielle da Gloria de Souza, Denise Carmona Cara Machado.

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No presente estudo foi testada a capacidade de produção de lipase extracelular pelofungo filamentoso Colletotrichum gloesporioides, por dois métodos de fermentação: emsubstrato líquido e em substrato sólido. A fermentação em substrato líquido propiciou a maior produção de lipase por este microorganismo e foi selecionado como método para a obtençãoda preparação bruta de lipase extracelular. Alíquotas da preparação bruta de lipasearmazenadas a 4°C e a -20°C não se mantiveram estáveis, apresentando uma quedaprogressiva em relação à atividade lipásica. A preparação bruta foi então concentrada porultrafiltração, alcançando 81% de recuperação da atividade lipásica e um fator deconcentração de 1,5 vezes. Em seguida, a preparação lipásica concentrada foi liofilizada.Este processo possibilitou a estabilidade, ao longo do tempo, da atividade lipásica da preparação liofilizada, que foi aplicada nos ensaios preliminares de hidrólise enzimática doóleo de oliva. Estes ensaios levaram à elaboração da equação ajustada que explicou avariação do grau de hidrólise em função da variação simultânea da concentração de enzima e do tempo de reação: y = 35,25 + 3,19x1 + 8,65x2. O grau de hidrólise do óleo de olivavariou de 18,8 a 43,7%, havendo um aumento de rendimento da reação de,aproximadamente, 57%. Finalmente, a evolução da hidrólise do óleo da amêndoa damacaúba foi acompanhada, baseando-se na combinação dos parâmetros escolhidos comoos adequados, a partir da hidrólise do óleo de oliva, encontrando-se uma relação direta entreo grau de hidrólise do óleo da amêndoa da macaúba e o tempo de reação..

Extracellular lipase production by the filamentous fungi Colletotrichum gloesporioides was tested using two fermentation methods: in liquid substrate and in solid substrate. The liquid substrate fermentation yielded a larger production of lipase by this microorganism and was selected as the method for obtaining the extracellular lipase crude solution. Aliquots of the lipase crude solution stored at 4° C and at - 20° C were not stable, and presented a progressive decrease in lipase activity. The crude solution was then concentrated by ultrafiltration, reaching a recovery of 81% of the lipase activity and a 1.5 fold concentration factor. Then, the concentrated lipase solution was lyophilized. This process led to stabilization, through time of the lipase activity of the lyophilized solution, which was applied on the preliminary tests of the enzymatic hydrolysis of olive oil. These tests led to the adjusted equation which explained the variation of hydrolysis degree in relation to the simultaneous variation of enzyme concentration and reaction time: y = 35,25 + 3,19x1 + 8,65x2. The hydrolysis degree of the olive oil varied between 18.8 and 43.7%, and there was a 57% increase in the reaction yield. Finally, the evolution of the Macaúba kernel oil was followed up, based on the combination which was chosen as the most advantageous, from the olive oil hydrolysis, reaching a direct relationship between the degree of hydrolysis and the reaction time.

Advisors/Committee Members: Gecernir Colen, Gecernir Colen, Jacques Robert Nicoli, Evelyn de Souza Oliveira.

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A produção de leites fermentados no Brasil baseia-se na utilização de microorganismos iniciadores, comercializados por empresas estrangeiras. Existe um grande potencial para a utilização de bactérias fermentadoras da lactose isoladas a partir de produtos lácteos artesanais brasileiros, como o queijo de coalho. O presente trabalho teve como objetivos elaborar leites fermentados a partir de bactérias ácido-lácticas, isoladas de queijo de coalho produzido em Pernambuco, Brasil; avaliar a habilidade das bactérias Weissella confusa e Lactobacillus acidophilus, isoladas ou em associação, em fermentar o leite e resultar em produtos finais com características sensoriais distintas; avaliar a viabilidade dessas culturas, bem como as características físico-químicas e microbiológicas dos leites fermentados durante 40 dias de estocagem sob refrigeração à 8-10ºC; avaliar a aceitação dos leites fermentados sem e com concentrado protéico de soro, em dois tempos distintos, dez e 40 dias de estocagem sob refrigeração e estudar o efeito da adição de concentrado protéico do soro no tempo de fermentação do leite por estas bactérias ácido-lácticas. As curvas de fermentação obtidas a partir dos resultados de pH, acidez titulável e contagem das culturas lácticas indicaram valores de acidez titulável (%) mais altos e de pH mais baixos nos leites fermentados por Lactobacillus acidophilus e contagens adequadas do ponto de vista probiótico e superiores à legislação brasileira em todos os leites fermentados elaborados. Os leites fermentados por Weissella confusa, independentemente da adição de CPS, apresentaram tempo de fermentação maior, enquanto que os leites fermentados pelas duas culturas associadas apresentaram tempo de fermentação menor. Todos os leites fermentados elaborados, independentemente da adição de CPS, apresentaram durante 40 dias de estocagem sob refrigeração a 8-10ºC concentrações adequadas de microorganismos viáveis (108 UFC/g). Durante as análises sensoriais, os provadores não identificaram diferença no sabor entre os leites fermentados acrescidos ou não de CPS (p>0,05). Aos 10 e 40 dias de estocagem a 8-10ºC, os leites fermentados por Lactobacillus acidophilus apresentaram melhor aceitação (p<0,05) pelos provadores. A associação das culturas de bactérias ácido-lácticas utilizadas mostrou-se potencialmente mais vantajosa na elaboração de futuros produtos comerciais, sem a necessidade de adicionar CPS e podendo ser estocados a 8-10ºC por 40 dias

The manufacture of fermented dairy products in Brazil is based on the use of starter cultures, which are commercialized by foreign companies. In spite of that, there is a great potential to exploit indigenous lactic acid bacteria, isolated from artisanal dairy products. Therefore, this work was carried out in order to produce fermented milks using lactic acid bacteria, isolated from coalho cheese artisanaly made of raw milk in Pernambuco state, Brazil. Weissella confusa and Lactobacillus acidophilus strains, isolated from that food and previously tested according to some probiotic…

Advisors/Committee Members: Marcelo Resende de Souza, Marcelo Resende de Souza, Maria Jose de Sena, Jacques Robert Nicoli.

▼ O ambiente ocupado por pacientes colonizados ou infectados pode se tornar contaminado por bactérias resistentes e constituir um reservatório secundário, favorecendo a transmissão cruzada. A identificação de potenciais reservatórios de microrganismos de importância epidemiológica no ambiente hospitalar constitui uma importante medida de prevenção da sua disseminação. Objetivou-se determinar as características epidemiológicas de microrganismos de importância clínica quando presentes nas superfícies, soluções, equipamentos e hemocultura de pacientes de uma Unidade de Terapia Intensiva de Belo Horizonte. Tratou-se de um estudo transversal, realizado entre julho e outubro de 2009. As amostras foram obtidas de soluções degermante e por swabs das superfícies (monitor de função cardíaca, ventilador mecânico, grade lateral da cama, torneira, mesa de cabeceira, estetoscópio e pia). As amostras ambientais sem diluições foram cultivadas em meios: Infuso de Cérebro e Coração (BHI), MacConkey e Agar Sabouraud a 37º por 48 horas. Os isolados bacterianos foram identificados pela morfologia da colônia, coloração de Gram, teste de catalase e Kit API. O teste de sensibilidade foi realizado com a utilização de antibiograma por disco de difusão para o imipenem, vancomicina, ceftriaxona e ciprofloxacina. Os isolados bacterianos com perfil de resistência aos antimicrobianos testados foram comparados às amostras de hemocultura pelo teste repetitive extragenic palindromic sequences (rep-PCR) para análise de similaridade. As análises foram realizadas nos laboratórios de Ecologia e Fisiologia de Microrganismos e de Genética de Microrganismos da Universidade Federal de Minas Gerais. Verificou-se importante contaminação de superfícies e equipamentos em UTI (P<0,004). Os estetoscópios, ventiladores mecânicos e torneiras apresentaram as maiores médias de contaminação. Não houve contaminação da solução degermante (PVP-I 10%). Nos estetoscópios da unidade de isolamento, registrou-se a presença de Enterococcus faecalis resistente à vancomicina, Staphylococcus aureus e Acinetobacter baumannii multirresistente. Entre o isolado de Acinetobacter baumannii multirresistente detectado no ventilador mecânico e uma amostra de hemocultura de paciente houve 80% de similaridade. Consideráveis percentuais de similaridade (60-65% - IC: 85%), ainda foram observados entre outros isolados do ambiente e hemoculturas de pacientes. As similaridades entre os isolados bacterianos do ambiente e pacientes reforçam a importância da vigilância epidemiológica quanto a possibilidade da transferência horizontal de patógenos. Conclui-se, que as superfícies inanimadas frequentemente tocadas e equipamentos próximos ao paciente na UTI contaminam-se por bactérias resistentes, sugerindo relação clonal com isolados bacterianos de hemocultura de pacientes. Assim, observa-se a necessidade de reforçar as medidas de controle, redução e prevenção da disseminação de microrganismos resistentes, além de dedicar maior atenção à descontaminação de superfícies e equipamentos em UTI e à avaliação… Advisors/Committee Members: Adriana Cristina de Oliveira, Adriana Cristina de Oliveira, Jacques Robert Nicoli, Denise de Andrade.

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Em Minas Gerais, a produção de queijo artesanal é atividade tradicional de vários municípios. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da altitude e do tipo de cadastramento oficial pelo Instituto Mineiro de Agropecuária das queijarias sobre características microbiológicas e físico-químicas de queijo Minas artesanal da Serra da Canastra. Foram coletadas amostras de leite, soro-fermento e queijo de queijarias distribuídas em três níveis de altitude e dois estágios de cadastramento. Houve diferença (p<0,05) entre as médias de NMP de coliformes a 30°C e a 45°C das amostras de queijo quando foi considerado o tipo de cadastramento. Staphylococcus spp. foi encontrado em contagens elevadas nas amostras de queijo. Elevadas populações de bactérias ácido-lácticas (BAL) foram observadas nas amostras de leite, soro-fermento e queijo. A altitude foi relevante nas contagens média de BAL nas amostras de queijo. Os gêneros de BAL mais freqüentemente isolados de leite, soro-fermento e queijo foram Enterococcus, Lactococcus e Lactobacillus, respectivamente. As espécies de BAL mais isoladas em queijo foram L. rhamnosus, L. casei e L. plantarum, sendo que L. hilgardii e L. paraplantarum foram isolados, sem haver descrições prévias na literatura consultada. Amostras de leite provenientes de queijarias cadastradas apresentaram teores percentuais de gordura e EST mais elevados

The production of Minas artisanal cheese is traditional in Minas Gerais State and there are few data about the microbiota present in this food. The influences of altitude and official registration at the state inspection office (SIO) on the microbiological and physical-chemical characteristics of Serra da Canastra Minas artisanal cheese were evaluated. Samples of milk, cheese whey, and cheese from 18 rural properties were analyzed. Means of most probable number of coliforms in cheeses were different (P<0.05) considering the registration at the SIO. Staphylococcus spp. was found in high numbers in cheeses, irrespectively of the studied factors. Salmonella spp. was not isolated in the samples of cheese. High counts of lactic acid bacteria (LAB) were observed in all samples, being mostly affected by the altitude. Enterococcus, Lactococcus, and Lactobacillus were predominantly identified (PCR ARDRA-16S-23S) in milk, cheese whey, and cheese samples, respectively. In cheeses, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus casei, and Lactobacillus plantarum were the major LAB. Lactobacillus hilgardii and Lactobacillus paraplantarum were also identified and it is probably the first description of these LAB in artisanal cheese. Indeed, improvement in this cheese making is strongly recommended in order to obtain a uniform quality product considering it as a Brazilian Cultural Patrimony

Advisors/Committee Members: Marcelo Resende de Souza, Marcelo Resende de Souza, Maria Jose de Sena, Jacques Robert Nicoli.

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A produção de alimentos saudáveis e nutritivos em grande quantidade tem se tornado um desafio para todos os profissionais que trabalham com toda a cadeia produtiva alimentícia. A produção mundial de suínos cresceu e o Brasil teve um aumento significativo nas exportações de carne suína. Para que a atividade de criação de suínos se mantenha produtiva, com a geração de lucros, promotores de crescimento têm sido incorporados às rações, com objetivo de melhorar o processo digestivo e o desempenho zootécnico dos animais, resultando em maior ganho de peso e redução do número de doenças. Entretanto, nos últimos anos tem aumentado a conscientização sobre o uso excessivo destes produtos, bem como se tornado evidente os possíveis transtornos à saúde destes animais e do homem, como conseqüências desta suplementação. As alternativas disponíveis para substituição dos antimicrobianos na suinocultura incluem a utilização de probióticos, prebióticos, simbióticos e agentes fitoterápicos. Quanto aos Sistemas Agroindustriais (SAG) existentes no Brasil, sabe-se que o sucroalcooleiro se destaca pela importância social, econômica e política. O aumento da produção de álcool acarretará um problema ao meio ambiente, devido à maior quantidade de vinhoto, resíduo produzido em grande volume. Seguindo esta linha de raciocínio, este trabalho propôs realizar a prospecção de microrganismos probióticos e testar o vinhoto descartado nas usinas de álcool e alambiques de cachaça como veículo ou meio de cultivo para microrganismos em formulações probióticas a serem utilizadas em suinocultura. Pelos resultados obtidos, foi possível avaliar e constatar, que é possível produzir um preparado probiótico de bactérias lácticas a base de vinhoto para a alimentação de animais monogástricos (suínos) recém-nascidos e terminados. Verificandose neste caso, até o presente momento, que a melhoria dos processos de multiplicação celular em vinhoto visando à máxima produtividade a custos aceitáveis para a sua produção em larga escala se faz necessário. Bactérias lácticas podem ser utilizadas para uso como probiótico utilizando como critério a sua capacidade de sobrevivência e crescimento no vinhoto, deixando evidente, em alguns momentos, a possibilidade limitada de outras aplicações como a fertirrigação devido ao elevado valor de DBO alcançado no resíduo líquido pós-cultivo de Lactobacillus devido à suplementação obrigatória à multiplicação celular. Em função dos resultados obtidos, concluiu-se que o probiótico estudado não apresentou diferenças significativas sobre os demais tratamentos testados em suínos, embora fosse constatado a não existência de problemas decorrentes do consumo de vinhoto e que nos testes de colonização do trato gastrointestinal, de adesão, antagonismo in vitro e ex vivo, susceptibilidade antimicrobiana e exames histopatológicos, os resultados se mostrem promissores e refletem a necessidade de novos testes no futuro.

The healthful and nutritional food production in high amount it has become a challenge for all the professionals who work with all…

Advisors/Committee Members: Jacques Robert Nicoli, Marcelo Resende de Souza, Jacques Robert Nicoli, Marcelo Resende de Souza, Carlos Gil Turnes, Andrea Marçal Silva, Carlos Augusto Rosa, Elisabeth Neumann.

▼ Probióticos são definidos como microrganismos viáveis que exibem um efeito benéfico na saúde do hospedeiro, quando ingeridos em quantidades suficientes. Muitas espécies de bactérias são usadas para esse fim e a única levedura utilizada como probióticos em seres humanos é Saccharomyces boulardii. Resultados anteriores obtidos em nosso laboratório mostraram que a levedura Saccharomyces cerevisiae linhagem UFMG 905, isolada da produção de cachaça, foi ca az de colonizar e sobreviver no trato gastrintestinal de camundongos, isentos de germes e convencionais, respectivamente, além de proteger esses animais contra um desafio oral com Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Typhimurium e Clostridium difficile. Na primeira parte desse trabalho, os efeitos de S. cerevisiae UFMG 905 na translocação de Salm. Typhimurium para os linfonodos mesentéricos, placas de Peyer, baço e fígado, assim como o efeito no sistema imune, pela contagem de células de Küpffer, produção de imunoglobulinas e clareamento de Escherichia coli B41 da corrente sanguínea, foram avaliados em camundongos gnotobióticos e/ou convencionais. O tratamento com a levedura reduziu significantemente a translocação de Salm. Typhimurium para o fígado de animais gnotobióticos e, para todos os órgãos testados, em animais convencionais. O número de células de Küpffer (por 100 hepatócitos) foi significantemente maior (P <0,05) em camundongos monoassociados com a levedura (52,9 ± 15,7) que em camundongos isentos de germes (38,1 ± 9,0). Provavelmente, como uma consequência do aumento do número de células de Küpffer, o clareamento de E. coli B41 da corrente sanguínea foi mais eficiente nos animais monoassociados com a levedura, quando comparado com os animais controle isentos de germes. Foram observados maiores níveis de sIgA no conteúdo intestinal e de IgA e IgM no soro (P <0,05) nos camundongos monoassociados com a levedura que no grupo isento de germes. Concluindo, a proteção observada contra a bactéria enteropatogênica em nosso estudo anterior foi, provavelmente, devida à modulação local e sistêmica do sistema imune de camundongos tratados com S. cerevisiae UFMG 905. Na segunda parte desse trabalho, estudou-se os efeitos de S. boulardii e S. cerevisiae UFMG 905 na inflamação e na sinalização celular induzidos pela Salm. Typhimurium 14028, em células T84. Observou-se que os dois probióticos mantiveram a resistência elétrica transepitelial e diminuiram, significativamente, a secreção de IL-8 em células T84 infectadas por Salm. Typhimurium 14028 (P <0,05). Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 e S. boulardii diminuiram, significativamente, os níveis de invasão pela Salm. Typhimurium 14028 (P <0,05), mas nenhum efeito das leveduras no crescimento ou adesão bacteriana em células T84 foi observado. Diferentemente de S. boulardii, S. cerevisiae UFMG 905 não foi capaz de diminuir a ativação de Rac1 e Cdc42 em células infectadas por Salm. Typhimurium 14028. Essas duas proteínas são Rho-GTPases ativadas pela bactéria e estão envolvidas na internalização de bactérias invasivas. A… Advisors/Committee Members: Vera Lúcia Snepadian, Jacques Robert Nicoli, Francisco Jose Penna, Dorota Czerucka, Jacques Robert Nicoli, Dorotoa Czerucka, Francisco Jose Penna, Ieso de Miranda Castro, Maria Auxiliadora R de Carvalho, Marcia Regina Fantoni Torres.

▼ Os estudos sobre a produção de substâncias de origem microbiana são realizados a partir de cepas adquiridas de coleções de cultura ou cepas isoladas de nichos naturais. No presente estudo foi avaliada a capacidade de produção de lipase por 73 cepas fúngicas, 14 obtidas de coleções de cultura e 59 isoladas de amostras do solo do cerrado de Minas Gerais, com o emprego de técnicas de enriquecimento seletivo. O isolamento e seleção primária foram realizados em meio de cultura contendo ágar, emulsão de óleo de oliva, sais biliares e nutrientes. As colônias lipolíticas foram detectadas pela presença no meio opaco de uma zona clara ao redor delas. Vinte e uma cepas foram avaliadas como produtoras em potencial e a capacidade de produção determinada em condições de cultivo submerso e cultivo em estado sólido (seleção secundária). Apenas 7 delas foram selecionadas como boas produtoras. A cepa melhor produtora, identificada como Colletotrichum gloesporioides, produziu 27.700 U/L de lipase, empregando-se inóculo vegetativo, com cultivo submerso em frascos agitados a 150 rpm e 30 °C, durante 96 h, em meio de cultura basal contendo peptona bacteriológica (20,0 g/L), óleo de oliva (8,0 mL/L) e sais inorgânicos, no pH 7,0. A preparação bruta da enzima foi capaz de hidrolisar amplo espectro de substratos incluindo gordura de porco (banha), óleos vegetais e tributirina. Foram realizados estudos visando a determinação das melhores condições para a produção da lipase pelo C. gloesporioides. Inicialmente foram identificados os fatores (variáveis) mais importantes, tendo sido, em seguida, selecionados como significativos a peptona bacteriológica, o óleo de oliva e o pH inicial do meio de cultura. Os estudos para a determinação das condições otimizadas para a produção da lipase foram realizados aplicando-se a metodologia de superfícies de respostas, com o emprego de um planejamento fatorial 23 com cinco pontos centrais. Foi demonstrado que o modelo estatístico linear que indicou a variação da produção da enzima em função da concentração da peptona (na faixa de 10 a 30 g/L), do óleo de oliva (na faixa de 4-16 mL/L) e do pH (na faixa de 6-7) foi representado pela equação ajustada ~ = 27,2 3,4 x1 4,1 x2 + 0,7 x3 1,8 x1 x2 + 0,6 x1 x3 + 0,7 x2 x3 2,1 x1 x2 x3, sendo simplificada para ~ = 27,2 3,4 x1 4,1 x2, devido ao efeito do pH e das possíveis interações entre os efeitos não serem significativos. Desse modo, foi verificado que a representação bidimensional da superfície de resposta do referido modelo foi um plano inclinado obliquamente em relação aos eixos cartesianos com direção descendente indo da direita para a esquerda. Concluiu-se que, para serem conseguidos maiores rendimentos de produção, devia-se deslocar a região experimental para menores valores de x1 (peptona) e de x2 (óleo de oliva). Seguindo essa orientação conseguiu-se que a cepa fúngica produzisse cerca de 36.000 U/L de lipase extracelular que se mostrou bastante ativa em pH alcalino. Advisors/Committee Members: Tasso Moraes e Santos, Tasso Moraes e Santos, Jacques Robert Nicoli, Everson Alves Miranda, José Geraldo Sabioni, Leonides Rezende Júnior, Roberto Goncalves Junqueira.

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Malnutrition, highly prevalent in developing countries, is an old suffering that afflicts the humanity. The protein-energy malnutrition is presented as a state of food deficiency, with deficit in proteins and calories, provoking lower supplying of nutrients to the cells. Some studies have shown evidences of interaction between malnutrition and bacterial translocation. Bacterial translocation is a process in which microorganisms from gut normal microbiota cross the intestinal mucosa in order to reach other organs. This can occur due to three situations: dysfunction of the intestinal mucosal barrier, alterationof intestinal microbiota and host immune deficiency. In our study, the distal ileum was ligated for induction of the intestinal obstruction in rats. Protein-energy food restriction imposed throughout the experiment had the aim of evaluating the influence of malnutrition on intestinal translocation in the animals. Control group animals fed diet ad libitum and the malnourished rats fed 65% of the amount consumed by the control group. In order to control for surgical stress, wellnourished and malnourished rats were Sham operated. Wellnourished and malnourished animals were submitted to ileum ligation. All animals were inoculated in the ileum with 99mTc-E.coli (108 CFU). The animals were sacrificed 24 hours after 99mTc-E.coli inoculation, blood sample was collected and some organs removed (mesenteric lymphonodes, liver, spleen, and lungs) for verification of the bacterial translocation. The bacterial translocation was evaluated by the determination of the radioactivity in the organs and blood. The results showed that in the animals submitted to the intestinal ligation, bacterial translocation was significantly higher (p 0,05) than in Sham operated animals. Animals submitted to the intestinal obstruction and Sham operated wellnourished animals, compared to the malnourished ones, did not show significant differences in bacterial translocation to the organs and blood (p>0,05). Therefore, the obtained data suggest that protein-energy-malnutrition imposed to the rats did not interfere with the process of bacterial translocation in the experimental model of ileum ligation in order to obtain intestinal obstruction

Desnutrição, altamente prevalente em países em desenvolvimento, é um mal antigo que aflige a humanidade. A desnutrição energético protéica apresenta-se como um estado de deficiência alimentar, com déficit global de proteínas e calorias, provocando menor aporte de nutrientes às células. Alguns estudos têm mostrado evidências de interação entre desnutrição e translocação bacteriana. Translocação bacteriana é um fenômeno em que ocorre a passagem de microorganismos da microbiota intestinal normal, através da mucosa intestinal, para outros orgãos. Isto pode ocorrer devido a três situações: disfunção da barreira intestinal, alteração da microbiota intestinal e deficiência imunológica do hospedeiro. Em nosso estudo, realizamos uma ligadura do íleo terminal para induzir obstrução intestinal em ratos. Associamos…

Advisors/Committee Members: Jacques Robert Nicoli, Valbert Nascimento Cardoso, Tasso Moraes e Santos, Valbert Nascimento Cardoso, Enio Cardillo Vieira, Luiz Gonzaga Vaz Coelho.

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A glutamina é aminoácido essencial em situações de injúria, nas quais a disfunção da barreira intestinal predispõe ao aumento da permeabilidade do intestino e promove a translocação bacteriana. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da glutamina na translocação bacteriana e na permeabilidade intestinal. Para estudo da translocação bacteriana, 21 camundongos machos Swiss foram divididos aleatoriamente em três grupos: grupo glutamina (GLUT), grupo sham e grupo obstruído (OINT). O grupo GLUT recebeu solução de glutamina (500mgkg-1d-1), por gavagem, e ração especial. Os demais grupos receberam ração adicionada de caseína a fim de manter as dietas isocalóricas e isoprotéicas. O tratamento foi realizado durante 7 dias antes da operação. No oitavo dia, os animais receberam 108 UFC/mL of E. coli marcada com 99mTecnécio (99mTc-E.coli). Após 90 minutos da administração, os animais foram anestesiados e submetidos à ligadura do íleo terminal. O grupo sham sofreu apenas laparotomia mediana. Dezoito horas após a operação, os animais foram anestesiados para coleta do sangue e os órgãos foram removidos para a determinação da radioatividade. A permeabilidade intestinal foi avaliada em outro grupo de 45 animais divididos conforme descrição acima e recebendo o mesmo tipo de tratamento e procedimento cirúrgico. Após 7 dias, os animais receberam 0,1 mL de ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA) marcado com 99mTc por gavagem e, decorridos 90 minutos, foram submetidos à operação. Nos tempos de 4, 8 e 18 horas, os animais foram anestesiados para a coleta do sangue e determinação da radioatividade. Para cada tempo investigado foram utilizados cinco animais. Para análise estatística foram utilizados os testes t, Kruskal-Wallis e ANOVA. Os animais do grupo glutamina apresentaram ingestão e ganho de peso menor que os demais grupos avaliados (p<0,05). O nível de translocação bacteriana e permeabilidade intestinal foi maior no grupo OINT do que nos demais grupos (p<0,05). A glutamina reduziu a translocação bacteriana e a permeabilidade intestinal para níveis fisiológicos quando comparados com o grupo OINT (p<0,05). Os resultados obtidos sugerem que a glutamina reduz a permeabilidade intestinal e, conseqüentemente, a translocação bacteriana.

Glutamine is an essential amino acid in injury situations, when an intestinal barrier dysfunction predisposes to increase of the mucosal permeability and promote bacterial translocation. The aim of this study was to evaluate the effect of glutamine on bacterial translocation and intestinal permeability. Swiss male mice (21) were randomly divided into three groups to bacterial translocation studies: glutamine group (GLUT), sham group and intestinal obstruction group (OINT). The glutamine animals received glutamine solution (500mgkg-1d-1) by gavage for seven days before surgery and received a specially prepared chow. The other groups received a chow added of casein to keep it isocaloric and isoproteic. On the 8th day, the animals received 108 CFU/mL of E. coli labeled with 99mTechnetium…

Advisors/Committee Members: Valbert Nascimento Cardoso, Valbert Nascimento Cardoso, Maria Isabel Toulson Davisson Correia, Jacques Robert Nicoli, Jose Virgilio Coelho, Neuza Maria Brunoro Costa.

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A técnica do Multiple Displacement Amplification (MDA) vem sendo utilizado para amplificar uniformemente o genoma bacteriano presente em pequenas amostras, fornecendo grandes melhorias nas análises moleculares. O propósito desta pesquisa foi associar o MDA e a hibridização DNA-DNA (checkerboard) para examinar a microbiota de infecções endodônticas. Sessenta e seis amostras foram coletadas de infecções endodônticas. As amostras não amplificadas e aquelas amplificadas pelo MDA foram analisadas pelo checkerboard para a determinação dos níveis e proporções de 77 taxas bacterianas. Computaram-se a contagem, percentagem do total de DNA e percentagem de dentes colonizados para cada espécie em amostras amplificadas e não amplificadas. As diferenças significantes para cada espécie entre as amostras amplificadas e não amplificadas foram determinadas utilizando-se o teste de Wilcoxon e ajustado para comparações múltiplas. A quantidade média de DNA presente nas amostras clínicas variou de 6,80 (± 5,2) ng sem amplificação a 6,26 (± 1,73) ìg após a utilização do MDA. Setenta das 77 sondas de DNA hibridizaram com uma ou mais das amostras não amplificadas, enquanto todas as sondas hibridizaram com no mínimo uma amostra após a amplificação. As espécies mais comumente detectadas no nível >104 células bacterianas, nas amostras amplificadas e não amplificadas, foram Prevotella tannerae e Acinetobacter baumannii numa freqüência que variou de 89-100% das amostras. O número médio (± SEM) de espécies nas contagens >104 células bacterianas, nas amostras amplificadas, foi de 51,2 ± 2,2 e, nas não amplificadas, foi de 14,5 ± 1,7. A combinação do MDA e da hibridização DNA-DNA (checkerboard) demonstrou a presença de uma grande variedade de espécies bacterianas nas amostras endodônticas demonstrando sua utilidade naqueles estudos que avaliam a microbiota presente nas infecções endodônticas.

Multiple Displacement Amplification (MDA) has been used to uniformly amplify bacterial genomes present in small samples, providing abundant targets for molecular analysis. The purpose of this investigation was to combine MDA and checkerboard DNA-DNA hybridization to examine the microbiota of endodontic infections. 66 samples were collected from teeth with endodontic infections. Non-amplified and MDA amplified samples were analyzed by checkerboard DNA-DNA hybridization for levels and proportions of 77 bacterial taxa. Counts, % DNA probe counts and % of teeth colonized for each species in amplified and non-amplified samples were computed. Significance of differences for each species between amplified and non- amplified samples was determined using the Wilcoxon signed ranks test and adjusted for multiple comparisons. The average amount of DNA present in clinical samples ranged from 6.80 (± 5.2) ng before to 6.26 (± 1.73) ìg after MDA. 70 of the 77 DNA probes hybridized with one or more of the non-amplified samples, while all probes hybridized with at least one sample after amplification. Most commonly detected species at levels >104 in both amplified and…

Advisors/Committee Members: Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Sigmund S. Socransky, Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Ana Paula Vieira Colombo, Jacques Robert Nicoli, Maria Guiomar de Azevedo Bahia.

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A candidíase vaginal é uma doença causada por fungos do grupo das leveduras e do gênero Candida. É um problema que aflige milhões de mulheres anualmente em todo o mundo. A maior parte dos casos é resolvida com o uso de antifúngicos, mas estima-se que 5 a 10% das pacientes apresentem infecções recorrentes. Por esta razão, terapias alternativas têm sido propostas, como o uso de lactobacilos. Neste trabalho, foi avaliado o potencial probiótico de 15 amostras de Lactobacillus crispatus e seis amostras de Lactobacillus johnsonii, obtidas do fluido vaginal de mulheres saudáveis, contra espécies de Candida. As duas espécies utilizadas foram as mais freqüentemente isoladas em estudo prévio da microbiota vaginal de 16 mulheres ginecologicamente saudáveis. Para os estudos in vitro, foram feitos testes de antagonismo pela técnica de difusão em ágar contra as seguintes linhagens de leveduras: C. albicans ATCC 18804, C. tropicalis ATCC 750 e C. krusei ATCC 20298. Todos os testes foram feitos em duplicata. Três amostras de L. crispatus revelaram atividade antagonista contra maior número de linhagens de Candida spp. e foram selecionadas para testes in vivo subseqüentes, que foram realizados com fêmeas de camundongos BALB-c da linhagem NIH, isentos de germes. Os testes in vivo foram realizados em três etapas, variando-se a cada vez a amostra de Candida utilizada. Os animais dos grupos teste (n=7, 6 e 6) e controle (n=7, 6 e 6) foram respectivamente inoculados intravaginalmente com um coquetel contendo as três amostras de L. crispatus e com caldo MRS estéril. Quatro dias após, os camundongos dos dois grupos receberam inóculos subcutâneos com estrogênio, para garantir a viabilidade das infecções experimentais por Candida spp. Sete dias após o inóculo com lactobacilos, ambos os grupos foram inoculados com uma das seguintes linhagens de leveduras: C. albicans ATCC 18804, C. tropicalis ATCC 750 e, ainda, uma amostra de C. albicans isolada de uma paciente com candidíase vaginal. Para a análise estatística dos testes in vivo, foi utilizado o teste T de Student. Não foi observada diferença significativa entre os grupos controle e teste quando utilizadas C. albicans ATCC 18804 e C. albicans de origem clínica (p<0,05). Por outro lado, houve diferença estatística quando utilizada C. tropicalis ATCC 750. Neste caso, os lactobacilos não apresentaram eficácia na redução das infecções experimentais por Candida tropicalis, mas dificultaram o aumento dos níveis populacionais de leveduras. Os dados obtidos indicam possível atividade probiótica dos lactobacilos testados, embora mais testes sejam necessários para melhor avaliação de suas propriedades antagônicas e aplicabilidade no tratamento da candidíase vaginal.

Vulvovaginal candidiasis is a disease caused by a fungus from the group of yeasts and the genus Candida that affects millions of women every year worldwide. Most cases can be solved by antifungals, but it is estimated that 5 to 10% of women present recurrence. For this reason, alternative therapies have been proposed, such as the use of…

Advisors/Committee Members: Maria Aparecida de Resende, Jacques Robert Nicoli, Maria Aparecida de Resende, Regina Maria Nardi Drummond, Marcos Mendonca.

▼ Minas traditional Serro cheese is a product that has a high consumption and appreciation in Brazil. The main objective of this work was to verify the ripening and dry and rainy seasons influence on hygienical-sanitary indicators, pathogenic microorganisms, Staphylococcal enterotoxins and physicochemical characteristics of this cheese to find out the microbiological and physicochemical quality of this product. In addition, yeast populations, volatile compound composition and amine biogenic contents were also determined. This study was made with cheeses produced by five farmers that were in the last part of good manufacturing practices implement and have certification by the Instituto Mineiro de Agropecuária. Fifty samples produced in dry season and 50 produced in the rainy season were collected. Ten cheeses with two days of ripening were collected from each farm that was stored in a cold room, without package, until complete the desired ripening period. Analyses were made with two cheeses from each farmer with 3, 15, 30, 45 and 60 days of ripening. High levels of total and fecal coliforms and E. coli were found in the beginning of ripening period decreasing with 60 days. The contamination by coagulasepositive Staphylococci was reduced at the end of the ripening period. After 45 days of ripening the cheeses made in dry and in the rainy seasons presented coagulase-positive Staphylococci counts under the limit recommended by the Brazilian legislation (1000 cfu/g). Salmonella spp. was not detected. SEC and TSST-1 were detected in three and five samples, respectively from cheeses manufactured on dry season. From the cheeses of the rainy season analyzed, one presented simultaneously SEB, SEC and TSST-1 and 16 samples presented TSST-1. None of the 9 pools from isolates of Staphylococcus spp. analyzed produced the enterotoxins A, B, C and D, although three pools produced TSST-1. The great variation on percentages of moisture, fat content in the dry matter and protein indicate the lack of standardization of the cheesemaking process of the traditional Serro Minas cheese. Seventeen yeast species were identified during the ripening, being Debaryomyces hansenii, Kodamaea ohmeri and Kluyveromyces marxianus the most prevalent species. An increase in the yeast counts was found during cheese ripening. Some species were detected only in the cheese manufactured in the dry season and others were detected only in the cheese manufactured in the rainy season. Biogenic amines such as putrescine, cadaverine, spermidine, 2- phenylethylamine, spermine and tryptamine had high contents during ripening, in the cheese manufactured in the dry season; histamine, in the cheese manufactured in both seasons and agmatine, in the cheese manufactured in the rainy season. Tryptamine and histamine showed higher contents in the cheese manufactured in the dry and rainy seasons, respectively. Individually, biogenic amines searched not reached contents that could cause adverse effects to human health. A total of 53 volatile compounds were detected during the… Advisors/Committee Members: Carlos Augusto Rosa, Zenilda de Lourdes Cardeal, Carlos Augusto Rosa, Jacques Robert Nicoli, Elisabeth Neumann, Ricardo Souza Dias, Fátima de Cássia Oliveira Gomes.

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Estudos experimentais demonstraram que a suplementação com arginina em situações de trauma, septicemia e estresse apresentou efeitos positivos sobre a mucosa intestinal, diminuindo a translocação bacteriana. Desse modo, o objetivo desse trabalho foi avaliar o papel da arginina, pura ou presente em fórmula enteral, no processo de translocação bacteriana em um modelo experimental de obstrução intestinal em ratos, utilizando Escherichia coli marcada com 99mTecnécio. Ratos machos Wistar (250 a 300 gramas) foram divididos em seis grupos: grupo padrão (animais sadios), grupo controle (sham operados + ração convencional), grupo OINT (ração convencional + OI), grupo Arg 300mg/dia (ração suplementada com 300mg de arginina/dia + OI), grupo Arg 600mg/dia (ração suplementada com 600mg de arginina/dia + OI) e grupo Impact® (ração suplementada com fórmula enteral Impact® + OI). Decorridos sete dias após o início do experimento, os animais foram anestesiados e incisão mediana foi feita no abdome com exposição do íleo terminal. Em seguida, realizou-se ligadura com nó simples do íleo terminal e E.coli marcada com 99mTecnécio (99mTc-E.coli) foi administrada no lúmen intestinal. Após 24 horas, os animais foram sacrificados e linfonodos mesentéricos, fígado, baço, pulmões e sangue foram coletados para determinação da radioatividade. O rendimento médio de marcação da E. coli com 99mTecnécio foi de 98,34% (±1,38). Os animais do grupo Impact® apresentaram ingestão calórica estatisticamente maior em relação aos demais grupos (p<0,05). A ingestão protéica se mostrou estatisticamente elevada nos animais dos grupos Arg 300 mg/dia e Arg 600 mg/dia (p<0,05). Entretanto, não houve diferenças significativas no ganho de peso entre os grupos (p>0,05). Sangue, NLM, baço, fígado e pulmões dos animais do grupo OINT apresentaram maior captação da 99mTc-E.coli quando comparados aos animais do grupo controle (p<0,05), validando o modelo de obstrução intestinal utilizado neste trabalho. A administração de arginina (300mg/dia, 600mg/dia e presente na fórmula enteral) reduziu o nível da translocação bacteriana para sangue e todos os órgãos analisados (p<0,05). O percentual de monócitos apresentou-se mais elevado nos animais dos grupos Arg 300mg/dia e Impact® comparados ao grupo OINT(p<0,05). Ainda nos animais do grupo Impact®, o percentual de fagócitos com Candida albicans (21%) foi estatisticamente maior quando comparado aos animais dos demais grupos. Os resultados mostraram que a arginina foi eficaz na redução dos níveis de captação da 99mTc-E.coli no sangue e nos órgãos investigados dos animais que receberam este aminoácido como suplemento dietético.

Recent studies have shown that arginine reduces bacterial translocation in trauma and septic animal models whose diets were supplemented with it. The aim of this study was to evaluate the effects of arginine on bacterial translocation in an intestinal obstruction model in rats. Male Wistar rats (250g-350g) were randomized to six groups: Standard group (healthy animals), control group (sham operated +…

Advisors/Committee Members: Marialice Pinto Coelho Silvestre, Valbert Nascimento Cardoso, Maria Isabel Toulson Davisson Correia, Jacques Robert Nicoli, Valbert Nascimento Cardoso, Maria Isabel Toulson Davisson Correia.

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Sheep milk, obtained from one of the oldest domestic animals, is unique for its high solids ratio. Its cheese are more famous than the milk itself. Lactic acid bacteria, abundant in milk from several mammals, include most of the probiotic microorganisms, which bring benefits to their consumers when ingested in viable and adequate portions. Few data are available in the literature on the microbiota of ewe milk as well on its possible probiotic features. Therefore, the objective of this work was to identify the species of lactic acid bacteria in milks from Lacaunes, Santa Inês and its breeds and evaluate their in vitro probiotic potential. The identification was made through Sangers 16S rDNA sequencing method. The identified species were Enterococcus faecium (56.25%), E. durans (31.25%) and E. casseliflavus (12.5%). Their probiotic potential was evaluated by gastric pH and biliary salt resistance and antimicrobial susceptibility; and antagonism against samples and reference microorganisms. It was observed that 75% of the tested enterococci were resistant to gastric pH (2.0) and 56.25% to 0,3% of oxgall (biliary salts). All the tested enterococci were resistant to ceftazidime, oxaciclin, and streptomycin and sensible to clindamycin, erythromycin, and penicillin. The resistance to ciprofloxacin, gentamicin, tetracycline, and vancomycin varied among the tested species. All the tested enterococci strongly inhibited Escherichia coli and Listeria monocytogenes samples, moderately inhibited E. faecalis and Staphylococcus aureus samples, and didnt inhibit Psedomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium samples and also one E. durans sample isolated from the evaluated sheep milk. Four samples of E. faecium, one of E. durans, and one of E. casseliflavus presented the best probiotic potential. However, more studies are needed to prove that these samples dont carry neither virulence genes nor antimicrobial resistance genes, as well as their probable transmission to other microorganisms

O leite de ovelha, obtido de um dos animais domésticos mais antigos do mundo, é diferenciado por seu alto teor de sólidos. Seus produtos derivados, principalmente os queijos, têm maior importância social e econômica que o leite de ovelha em si. As bactérias ácido-lácticas, abundantes no leite de todas as espécies domésticas leiteiras, incluem a maior parte dos microrganismos probióticos, que trazem benefícios ao consumidor quando ingeridos em quantidades adequadas e viáveis. Poucos dados estão disponíveis na literatura sobre a microbiota do leite de ovelha, bem como sobre seu potencial probiótico. Então, o objetivo desse trabalho foi identificar as espécies de bactérias ácido-lácticas no leite de ovelhas das raças Lacaune, Santa Inês e suas mestiças além de avaliar o seu potencial probiótico in vitro. A identificação foi realizada por técnicas de biologia molecular como o sequenciamento pelo método de Sanger do 16S rDNA. As espécies identificadas foram Enterococcus faecium (56,25%), E. durans (31,25%) e E. casseliflavus (12,5%). Não…

Advisors/Committee Members: Marcelo Resende de Souza, Alvaro Cantini Nunes, Marcelo Resende de Souza, Andréia Marçal da Silva, Jacques Robert Nicoli.

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A incidência de câncer vem aumentando progressivamente. Em decorrência disso, é extremamente importante a implementação de estratégias para evitar novos casos. Vários estudos têm mostrado que a ingestão de certas cepas probióticas reduz o risco de câncer de cólon. O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito dos probióticos Lactobacillus delbrueckii UFV-H2b20, Bifidobacterium animalis var. lactis Bb12 e Saccharomyces boulardii na prevenção de lesões pré-neoplásicas no cólon de camundongos Swiss. Após período de adaptação de sete dias à suplementação com probióticos, os camundongos foram submetidos a seis injeções de 1,2- dimetilhidrazina, com manutenção concomitante dos probióticos ao longo de todo o período experimental. O uso de DMH induziu translocação dos probióticos e maior mortalidade dos animais suplementados com lactobacilo e bifidobacteria, entre 48 e 72 horas após a primeira aplicação da droga. Treze semanas após a injeção inicial de DMH, os camundongos suplementados com os probióticos apresentaram redução do número total de focos de criptas aberrantes (lactobacilo 45% e bifidobactéria 55%). Focos contendo uma a três criptas aberrantes encontraram-se significativamente diminuídos naqueles animais tratados com lactobacilo. Esses dados indicam que L. delbrueckii UFV-H2b20 e B. animalis var. lactis Bb12 exercem efeito protetor no processo de carcinogênese colônica.

The incidence of cancer is increasing worldwide. Therefore, it is extremely important to implement strategies in order to prevent new cases. Several studies have shown that ingestion of certain probiotic strains reduces the risk of colon cancer. The aim of the present study was to determine the effect of Lactobacillus delbrueckii UFV-H2b20, Bifidobacterium animalis var. lactis Bb12 and Saccharomyces boulardii in the prevention of preneoplasics lesions in mice colon. After a seven day period adaptation to the probiotic supplementation, the mice were submitted to six injection of 1,2-dimethylhydrazine (DMH, 25 mg/kg/week, s.c.) while maintained on probiotics throughout the whole experimental period. The use of DMH resulted in probiotic translocation and also higher mortality among animals supplemented with lactobacilli and bifidobacteria among 48 and 72 hours after drug utilization. Thirteen weeks after the initial DMH injection, mice supplemented with probiotics presented with reduction of the total number of aberrant crypt foci (lactobacilli 45% and bifidobacteria 55%). Also, Foci containing one to three aberrant crypts were significantly decreased in those animals treated with lactobacilli. These data indicate that L. delbrueckii UFV-H2b20 and B. animalis var. lactis Bb12 exert protective effect on the process of colon carcinogenesis.

Advisors/Committee Members: Maria Isabel Toulson Davisson Correia, Maria Isabel Toulson Davisson Correia, Gecernir Colen, Jacques Robert Nicoli, Maria do Carmo Gouveia Peluzio.

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Tributirina é o triacilglicerol composto por três moléculas de ácido butírico que tem efeitos benéficos na saúde intestinal por sua ação trófica e efeitos anti-inflamatórios, pró-apoptóticos e anticancerígenos. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos e os possíveis mecanismos de ação da suplementação com tributirina na colite experimental induzida por sulfato de sódio dextrano. Para isso, camundongos receberam dieta padrão (controle) ou suplementada com tributirina (0,5%) durante dez ou quinze dias. A indução da colite ulcerativa foi feita pela administração de sulfato de sódio dextrano a partir do sétimo dia experimental, por três ou sete dias. Lesões na mucosa, percentual e ativação das células do sistema imunológico: eosinófilo, neutrófilo, macrófago, célula dendrítica, linfócitos B, linfócitos T auxiliar e linfócitos T reguladores, e concentração das citocinas TNF-, INF-, IL-4, IL-17, IL-1, TGF- e IL-10 foram determinadas por escore histológico, citometria de fluxo e ELISA, respectivamente. Por microscopia intravital foi analisado o rolamento e a adesão de leucócitos in vivo. O estresse oxidativo foi determinado pela concentração de hidroperóxido e pela atividade de superóxido dismutase e catalase. 99mTcDTPA (ácido dietilenoaminopentacético) foi utilizado como marcador de permeabilidade intestinal. Comparado com o grupo colite (não suplementado com tributirina), o grupo colite + TBT apresentou redução do dano da mucosa e dos infiltrados de neutrófilos e eosinófilos na mucosa associados à maior percentagem de células T reguladoras e das citocinas anti-inflamatórias TGF- e IL-10 na lâmina própria. A adesão de leucócitos na microvasculatura do cólon mostrou-se diminuída, in vivo, após a ingestão de tributirina. Menor concentração de hidroperóxidos e maior atividade de superóxido dismutase e de catalase foram associados à suplementação com tributirina. Animais do grupo colite + TBT mostraram redução da permeabilidade intestinal para níveis intermediários entre os grupos controle e colite. Além disso, com três dias de ingestão de sulfato de sódio dextrano, foi observada lesão da mucosa igual nos dois grupos com indução da colite e também aumento do infiltrado de neutrófilos, além do aumento do estresse oxidativo pelo aumento da concentração de hidroperóxidos e diminuição da atividade da catalase nesses dois grupos, mostrando que a tributirina leva à melhora do quadro da doença pela modulação do estresse oxidativo e do infiltrado de neutrófilos. Em conclusão, nossos resultados sugerem que a tributirina administrada por via oral apresenta efeitos positivos na colite experimental, reestruturando a mucosa colônica por modular a resposta imune, aumentando concentração de citocinas anti-inflamatórias e população de células T reguladoras e diminuindo infiltrado de eosinófilos e neutrófilos, e por modular o estresse oxidativo, aumentando atividade de enzimas antioxidantes.

Tributyrin is the triacylglycerol composed by three molecules of butyric acid, which has beneficial effects in intestinal health due to its…

Advisors/Committee Members: Jacqueline Isaura Alvarez Leite, Ana Maria Caetano de Faria, Jacqueline Isaura Alvarez Leite, Ana Maria Caetano de Faria, Dan Linetzky Waitzberg, Reinaldo Barreto Oriá, Maria de Lourdes de Abreu Ferrari, Jacques Robert Nicoli.

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The majority of contacts with foreign antigenic materials occurs on the gut mucosa, and is represented by food proteins and the microbiota. Approximately 30 kg of food proteins reach the human intestine per year and 130±190 g of these proteins are absorbed daily in the gut (Mestecky, 1987). Recently, we described a mouse model where we replaced intact dietary proteins with equivalent amounts of amino acids (Aa) from weaning and investigated its effects on the development of the immune system. We observed that adult animals reared on a balanced protein-free diet (Aa-mice) have a poorly developed gut-associated lymphoid tissue resembling suckling mice. In vitro cytokine production by cells from several lymphoid organs shows a predominant Th2 profile with a high concentration of IL-10 and IL-4, and a low concentration of IFN-g (Menezes e cols., 2003). In this study, we observed that introduction of a protein-containing diet to mice treated with Aa diet from weaning up to 8 weeks of age recover ed their immunoglobulin levels in three days. This recovery is dependent on the amount of protein present in the diet. At least 10% of casein are necessary to promote normal standards of GALT development and immunoglobulin production. To study the role of dietary proteins in development of infectious disease, we infected mice that were treated with Aa diet with Leishmania major. Mice that were fed Aa diet since weaning were inoculated with 1 million parasites and lesion development was followed for 4 weeks. Aa mice show an increase in footpad lesion and parasite load as well as a reduction in IFN-g production by in vitro stimulated popliteal lymph node cells when compared to control mice. In addition, Aa diet-fed mice have a decreased expression of CD40 in macrophages and CD80 in dendritic cells when compared to control mice. Interestingly, antigen presenting cells from Aa-mice and from 3 week-old pre-weaning mice have a similar level of expression of co-stimulatory molecules such as CD40, CD80 and CD86. Our data indicates that stimulation by dietary proteins has a physiological role in maturation of immune system probably by activating antigen presenting cells and, as a consequence, T lymphocytes. The immature state of Aa-fed C57BL/6 mice seems to interfere in their ability to clear infection with Leishmania major.

A maioria dos contatos com materiais antigênicos ocorre na mucosa intestinal, e são representados pela microbiota e pelas proteínas da dieta. Recentemente, foi descrito em nosso laboratório um modelo de camundongos alimentados, desde o desmame até a idade adulta, com uma dieta onde as proteínas intactas da dieta são substituídas por quantidades equivalentes de aminoácidos (Aa). Os animais que consumiram a dieta de Aa apresentaram um baixo desenvolvimento dos tecidos linfóides associados à mucosa e a diminuição na produção de IgA secretória. Sistemicamente, foi observada a redução dos níveis séricos de IgG e IgA. A produção de citocinas por células de diferentes órgãos linfóides desses animais mostrou ainda uma…

Advisors/Committee Members: Ana Maria Caetano de Faria, Ana Maria Caetano de Faria, Momtchilo Russo, Luis Carlos Crocco Afonso, Jacques Robert Nicoli, Enio Cardillo Vieira, Leda Quercia Vieira, Leda Quercia Vieira.

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Existem evidências dos efeitos benéficos dos probióticos na proteção da barreira intestinal e modulação da função imunológica, reduzindo a translocação bacteriana (TB). O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos das células viáveis e não viáveis dos probióticos, Saccharomyces boulardii (Sb) e Saccharomyces cerevisiae UFMG 905 (Sc) na TB induzida em modelo murino de obstrução intestinal (OI), assim como os mecanismos de ação. Foram utilizados 6 grupos de animais. Grupo I: Sham; Grupo II: OI; Grupo III: OI + Sb; Grupo IV: OI + Sb não viável, Grupo V: OI + Sc ; Grupo VI: OI + Sc não viável. Os animais receberam durante 10 dias por gavagem solução salina (grupos I e II) ou tratamento com células viáveis ou não viáveis dos respectivos probióticos os (III a VI). No décimo dia, todos os camundongos foram submetidos a OI, exceto o grupo I. A TB que foi determinada por meio da captação de 99mTc-Escherichia coli no sangue, linfonodos mesentéricos, fígado, baço e pulmões e foi significativamente maior no grupo II em relação ao grupo I. Os tratamentos com ambas as leveduras, com células viáveis e não viáveis, reduziram a TB para o sangue e todos os órgãos investigados, além de inibirem o aumento da permeabilidade intestinal, conforme determinado pela captação no sangue do 99mTc-DTPA. Esses dados foram coerentes com o exame histológico intestinal que mostrou lesões mais graves no grupo II quando comparado aos grupos I e tratados com probióticos. Além disso, os tratamentos com probióticos foram capazes de aumentar significativamente (p <0,05) os níveis de IL-10, e tiveram o mesmo efeito sobre os níveis de sIgA quando comparados com os animais do grupo II. O grupo VI foi o único a não apresentar aumento significativo nos níveis de sIgA. Concluindo, os tratamentos com os dois probióticos viáveis ou não foram capazes de impedir a TB, provavelmente por imunomodulação e pela manutenção da integridade da barreira intestinal. No caso da levedura S. cerevisiae UFMG 905 alguns de seus efeitos, como estímulo à produção de sIgA, parecem depender de sua viabilidade.

There is evidence of the beneficial effects of probiotics in the intestinal mucosa protection and modulation of immune function, reducing bacterial translocation (BT). The aim of this study was to evaluate the effects of viable cells and nonviable probiotics, S. boulardii and S. cerevisiae (UFMG 905) in BT as well as its means of action in model intestinal obstruction (IO) in mice. We used 6 groups. Group I: Sham operated, Group II: intestinal obstruction (IO), Group III: IO+Sb and Group IV: IO+not viable Sb, Group V: IO+Sc, Group VI: IO+ not viable Sc. Animals in groups I and II were given for 10 days, gavage saline, and the animals in other groups received their treatments by gavage with probiotics. In 10 day all mice underwent the operation for the promotion of IO, except the Sham group. BT was determined by uptake of 99mTc-E.coli in the blood, lymph nodes, liver, spleen and lungs was significantly higher in group HI than in group Sham. Treatment with both yeasts, with…

Advisors/Committee Members: Valbert Nascimento Cardoso, Valbert Nascimento Cardoso, Celia Lucia de Luces Fortes Ferreira, Andreia Marçal da Silva, Ana Maria Caetano de Faria, Elisabeth Neumann, Jacques Robert Nicoli.

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A doença de Crohn (DC) é uma afecção caracterizada por uma inflamação crônica recorrente, que pode acometer qualquer sítio do trato digestivo. Um dos principais objetivos terapêuticos é a prevenção da recidiva. Entre os fatores etiológicos, destaca-se a diminuição da integridade da mucosa, que permite a apresentação de antígenos ao sistema imune da mucosa, determinando o início ou a manutenção do processo inflamatório. Sugere-se que a administração de probiotas pode exercer efeito benéfico sob a flora intestinal e, consequentemente melhorar a função de barreira exercida pela mucosa intestinal. É objetivo desse estudo avaliar a influência do S. boulardii na permeabilidade intestinal de pacientes com DC em fase de remissão. Foram incluídos 34 pacientes, divididos em dois grupos, randomizados a partir da Classificação de Viena. Para o primeiro grupo foi administrado o Placebo e para o segundo grupo foi administrado o S. boulardii. As medicações utilizadas na fase de remissão foram mantidas. O teste de permeabilidade intestinal foi realizado imediatamente antes do início do tratamento, no final do primeiro e do terceiro mês de tratamento, nos pacientes com doença de Crohn. Onze voluntários saudáveis também se submeteram à realização do exame. Neste grupo, a mediana da porcentagem de excreção da lactulose foi de 2,56%, do manitol foi de 23% e a relação de excreção entre os mesmos foi de 0,1. Quando comparados com os resultados nos pacientes com DC, o valor de p foi de 0,002 para lactulose, 0,58 para o manitol e 0,016 para a relação entre os mesmos. Para avaliar a influência do S. boulardii na permeabilidade intestinal, foi realizada a comparação entre as médias das diferenças das porcentagens da lactulose, do manitol e da relação entre ambos. No grupo Placebo, a porcentagem de excreção inicial da lactulose foi de 16,3% e no final do terceiro mês foi de 20,13% (p = 0,16); a porcentagem de excreção do manitol foi de 21,14% antes do tratamento e de 21,93% no final (p= 0,39) e a relação entre a excreção dos mesmos foi de 0,79 no início e de 0,935 no final (p= 0,164). Com relação ao grupo S. boulardii, os resultados foram de 19,88% e 16,04% para lactulose (p=0,017), 21,42% e 20,82% para o manitol (p= 0,49) e 0,95 e 0,775 para relação entre ambos (p= 0,011). Quando foi comparado com o CDAI, os valores de r2 foram menores que 0,1. Apenas uma paciente apresentou reativação da doença e pertencia ao grupo Placebo (p>0,05). Assim, pode-se concluir que os pacientes com DC em fase de remissão apresentam alterações importantes da integridade da mucosa intestinal; o S. boulardii melhorou a permeabilidade intestinal desses pacientes, mas não a normalizou; o comportamento do teste de permeabilidade intestinal não se correlacionou com o CDAI e a utilização do S. boulardii não influenciou no comportamento clínico da doença no período de acompanhamento.

Crohns disease (CD) is a condition characterized by a tendency chronic and relapsing inflammation, within the gastrointestinal tract. One of the primary goals of treatment is to maintain…

Advisors/Committee Members: Aloisio Sales da Cunha, Aloisio Sales da Cunha, Luiz Ernesto de Almeida Troncon, Aderson Omar M. C. Damião, Jose Renan da Cunha Melo, Jacques Robert Nicoli.

▼ As enzimas proteolíticas são de grande valor comercial, sendo amplamente utilizadas nas indústrias, representando 59% de todas as enzimas comercializadas no mundo. Elas têm uma grande variedade de aplicações industriais, sendo utilizado na fabricação de alimentos, bebidas, papel, detergentes, nos produtos farmacêuticos e no processamento de couros, além de ter um importante papel em pesquisas básicas. Para as várias aplicações industriais, tem-se utilizado proteinases de microrganismos. Neste trabalho foi estudada a produção, purificação e caracterização da proteinase extracelular PI da levedura Candida krusei AP176 isolada de frutos do amapá (Parahancornia amapa) uma árvore da floresta amazônica. C. krusei AP176 produziu quatro proteinases extracelulares em meio líquido YCB (Yeast Carbon Base) suplementado com caseína 0,01%. As proteinases foram denominadas de PI, PII, PIII e PIV. A proteinase PI foi selecionada para este estudo, a qual foi purificada do sobrenadante do meio de cultivo em dois passos, utilizando-se de cromatografia em coluna de gel filtração e coluna de troca iônica. A enzima apresentou massa molecular de aproximadamente 36 KDa, estimada em eletroforese de gel de poliacrilamida na presença de SDS (SDS-PAGE). A proteinase PI apresentou atividade proteolítica na faixa de temperatura e pH que variaram de 10 a 50 e 2,0 a 9,0 respectivamente. A enzima apresentou boa estabilidade térmica mantendo 98,5% de atividade entre 15 e 30 °C, quando mantida por 2 horas, antes da determinação da atividade enzimática. Aproximadamente 98,6% da sua atividade foi mantida quando incubada em pH 4,0 (tampão citrato de sódio 50 mM) por um período de 12 horas em temperatura ambiente (24 °C 2 °C). O valor ótimo de pH e temperatura de atividade proteolítica da proteinase produzida por C. krusei AP176 foi de 4,0 e 25 °C, respectivamente. Os maiores valores de atividade foram em valores de pH ácido (pH 3,0 a 5,0) em uma faixa de temperatura de 20 a 30 °C. As propriedades físico-químicas apresentadas pela proteinase PI podem, favorecer possíveis aplicações desta enzima nos diversos processos biotecnológicos para os quais as enzimas proteolíticas são utilizadas. Advisors/Committee Members: Valter Roberto Linardi, Valter Roberto Linardi, Jacques Robert Nicoli, Marcelo Matos Santoro, Vera Lucia dos Santos, Rachel Passos Rezende.

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Staphylococcus aureus produz uma larga variedade de fatores de virulência, que são relacionados à sua patogenicidade, além de oferecer grande resistência aos antimicrobianos existentes. Este microorganismo participa como agente infeccioso em importantes doenças, dentre elas a mastite. Neste trabalho foram identificados e testados 127 biotipos isolados de amostras de leite bovino, quanto à atividade enzimática: produção de coagulase e termonuclease; a toxigenicidade, produção de hemolisinas alfa, beta e delta; enterotoxinas (SEs) A-D e toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1); além de testar a susceptibilidade in vitro frente a vários antimicrobianos. Todas as amostras testadas apresentaram reação positiva para coagulase e termonuclease (100%) pelo teste em tubo e difusão metacromática respectivamente. As amostras apresentaram um alto índice de toxigenicidade, 86,6% delas apresentaram algum tipo de hemólise (alfa, beta, alfa/beta), em placas de ágar sangue ovino; 42,5% produziram algum tipo de SE e 47,2% produziram TSST-1, detectadas pelo método de imunodifuso (OSP).Testes de Susceptibilidade aos antimicrobianos, pelo método de difusão em discos, revelaram sensibilidade a cefotaxima (100%), enrofloxacina (98,4%) e gentamicina (98.4%). Por outro lado, verificou-se resistência à polimixina-B (72.3%), penicilina (64.9%) e ampicilina (62,7%).

Staphylococcus aureus has been isolated at high frequency from bovine milk. This microorganism produces a wide variety of vimlence factors, which may contribute to the pathogenicity of this organism. ln this study, 127 S. aureus strains isolated from bovine milk were examined for their productivity of virulence-associated factors and their susceptibility to antimicrobial drugs. The positive rates of the total isolates for various virulence factors were as follows toxic shock syndrome toxin-l (TSST-1) (47,2%) and staphylococcal enterotoxins (SEA-D) (43,3%); ot-haemolysin (43,3%), B-haemolysin (43,3%) and 5-haemolysin (17,3%); tliermostable nuclease (TNase) and coagulase (100%). On the antimicrobial tests 127 (100 %) strains of S. aureus were susceptible to cefotaxime, 125 (98,4%) to gentamicin and enrofloxacin while resistance to ampicillin, penicillin and polymyxin B were most common with 80-82 (62 -64 %) of strains. The results provide evidence that these pathogens use different mechanisms to produce intrammamary infections and their susceptibility to antimicrobial agents should be analyzed.

Advisors/Committee Members: Nivaldo da Silva, Nivaldo da Silva, Francisco Carlos Faria Lobato, Antonio de Pinho Marques Junior, Jose Britto Figueiredo, Jacques Robert Nicoli.

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A proposta deste estudo experimental foi avaliar e comparar as possíveis alterações morfológicas dos tecidos gengivais em ratos, sob administração dos imunossupressores, ciclosporina e tacrolimus. Essa pesquisa foi motivada pela alta prevalência de crescimento gengival associado ao uso de ciclosporina, que pode acarretar alterações estéticas, fonéticas, funcionais e pelos relatos de casos clínicos que demonstraram redução significativa do crescimento gengival após a substituição da ciclosporina pelo tacrolimus. A amostra constou de 50 ratos Sprague Dawley, machos, com quatro a seis semanas de vida com peso médio entre 165 a 225 gramas. Os animais foram divididos em três grupos e receberam, durante 54 dias, por via oral, doses terapêuticas e doses superiores à terapêutica com a finalidade de exacerbar as possíveis alterações adversas. Os animais foram selecionados e divididos homogeneamente em grupos, de acordo com o peso. Após a seleção dos animais, três grupos foram estabelecidos. O grupo controle (Gc), com 10 animais, recebeu medicamento placebo (água destilada). O grupo ciclosporina (Cs), com 20 animais, foi subdividido em dois sub-grupos de 10 animais que receberam 10mg/kg/dia (Cs1) e 30mg/kg/dia (Cs2) de ciclosporina. O grupo tacrolimus (Tc), também com 20 animais, foi subdividido em dois sub-grupos de 10 animais e receberam 3,2mg/kg/dia (Tc1) e 6,4mg/kg/dia (Tc2) de tacrolimus. Os resultados mostraram que a ciclosporina induziu crescimento gengival nos grupos tratados com esse medicamento. A gravidade do crescimento gengival foi maior no grupo de animais que recebeu ciclosporina em dose superior à terapêutica (Cs2) do que no grupo que recebeu a dose terapêutica (Cs1), mostrando uma relação positiva entre dose e gravidade do crescimento gengival. O grupo de animais que recebeu tacrolimus não apresentou nenhuma alteração morfológica nos tecidos gengivais, apresentando apenas alteração na cor dos tecidos. As evidências dessa pesquisa mostram que o tacrolimus pode ser uma importante opção para prevenção das alterações periodontais nos indivíduos que apresentam grave crescimento gengival.

The purpose of this experimental study was to evaluate and compare the possible morphological alterations in the gingival tissues of rats, under the administration of the imunossupressors cyclosporine and tacrolimus. This research was motivated by the high prevalence of gingival overgrowth associated with the use of cyclosporine, which can cause aesthetic, phonetic and functional alterations, and also by the reports of clinical cases that had shown significant decrease in gingival overgrowth after the replacement of the cyclosporine by the tacrolimus. The sample included 50 Sprague Dawley male rats, four to six weeks old, with an average weight of 165 to 225 grams. The animals were divided in five groups and received, during 54 days, through oral medication, therapeutic and higher than therapeutic doses in order to exacerbate the possible negative side effects. The animals were homogeneously selected and divided in groups,…

Advisors/Committee Members: Fernando de Oliveira Costa, Fernando de Oliveira Costa, Jose Eustaquio da Costa, Jacques Robert Nicoli, Jose Eustaquio da Costa, Allyson Nogueira Moreira.

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A terapia endodôntica visa, por meio do preparo mecânico-químico, eliminar ou pelo menos reduzir o número de bactérias viáveis presentes no sistema de canais radiculares (SCR) infectados. Acredita-se que, apesar de não se alcançar a esterilidade, após essa conduta, o número de microrganismos remanescentes é insuficiente para recolonizar os SCR. O objetivo deste estudo foi estabelecer a concentração de Enterococcus faecalis (ATCC 4083) e de Prevotella nigrescens (ATCC 33563) capaz de se implantar nos SCR de camundongos isentos de germes (IG), e de se translocar para os linfonodos submandibulares (LSM). Utilizaram-se 72 camundongos IG, de 1 mês de idade e de ambos os sexos, dos quais os canais radiculares foram instrumentados e inoculados, em monoinfecção, com E. faecalis nas concentrações 102 e 101 UFC e com P. nigrescens nas concentrações 105, 104, 103 e 102 UFC e, posteriormente selados. Três animais, para cada dose infectante, foram sacrificados, nos 2º, 3º, 6º e 10º dias. Os resultados demonstraram que o E. faecalis implantou-se, em 83,33% dos casos, nas concentrações 102 e 101 UFC. A translocação ocorreu em 58,33%, para o inóculo de 102 UFC e em 33,33% para o inóculo de 101 UFC. A P. nigrescens implantou-se em 25%, 16,67%, 8,33% e 0%, para os inóculos 105, 104, 103 e 102 UFC, respectivamente. Em nenhuma concentração utilizada, para a referida espécie, observou-se o fenômeno da translocação. Estes resultados nos permitem concluir que: dependendo da espécie bacteriana, a capacidade de implantação no SCR e de translocação para os LSM varia, provavelmente, em função do tipo morfo-tinturial (Gram + ou Gram -) bem como do tipo respiratório (anaeróbio estrito ANS ou anaeróbio facultativo ANF).

The aim of the endodontic therapy is to reduce the number of viable bacteria present in the infected root canal system (RCS) by means of a chemo-mechanical preparation. It is believed that although complete sterilization is not reached after this procedure, the number of remaining microorganisms is not enough to recolonize the RCS. The purpose of this study was to establish the concentration of E. faecalis (ATCC 4083) and P. nigrescens (ATCC 33563) able to implant in the root canal system (RCS) of germ-free (GF) mice and translocate to the submandibular lymph node (SML). Seventy-two one-month-old germ-free mice, both male and female, whose lower central incisive canal was instrumented and inoculated with E. faecalis at 102 and 101 UFC concentrations or P. nigrescens at 105, 104, 103 102 UFC concentrations and sealed. The results have demonstrated that E. faecalis implanted, in 83,33% of the cases, at 102 and 101 UFC concentrations. Translocation has occurred in 58.33%, for the 102 UFC inoculum, and in 33.33% for the 101 UFC inoculum. P. nigrescens implanted in 25%, 16.67%, 8.33% and 0%, for the 105, 104, 103 and 102 UFC inocula, respectively. The translocation phenomenon has not been observed at any concentration used for the mentioned species. These results allow us to conclude that E. faecalis was able to implant in the RCS…

Advisors/Committee Members: Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Luiz de Macêdo Farias, Antonio Paulino Ribeiro Sobrinho, Luiz de Macêdo Farias, José Freitas Siqueira Júnior, Jacques Robert Nicoli.

▼ As propriedades tóxicas e carcinogênicas da samambaia (Pteridium aquilinum) têm sido extensivamente descritas em animais domésticos e experimentais. Alguns estudos epidemiológicos têm associado a exposição humana à samambaia e/ou suas toxinas com um aumento do risco de ocorrência de câncer de esôfago e estômago no Japão, Brasil, Costa Rica, Reino Unido e Venezuela. No entanto, estes estudos epidemiológicos não são suficientes para, inequivocadamente, estabelecer uma relação causal entre a samambaia e o surgimento destes cânceres em humanos. Assim, propusemo-nos no presente trabalho, a investigar a presença de marcadores moleculares da ação das toxinas da samambaia sobre o genoma de animais que, se encontrados, pudessem ser utilizados na avaliação do risco da exposição à samambaia para humanos. Investigamos inicialmente a formação de adutos de DNA em tecidos alvos normais de ratas tratadas via intragástrica com uma dose aguda única de extratos alcoólicos obtidos do broto de samambaia ou com diferentes preparações de broto de samambaia por médios e longos prazos. Utilizamos a metodologia de pós-marcação com 32P para identificação de adutos de DNA. Nossos resultados indicam que adutos de DNA detectáveis por pós-marcação com 32P não são formados em estômago e íleo de ratas tratadas com broto de samambaia via digestiva. Avaliamos a presença de adutos em amostras de DNA de tubos digestivos superior de camundongos tratados com dose aguda de extrato e esporos de samambaia e encontramos três adutos que já haviam sido descritos e ainda outros quatro adutos que não foram caracterizados. Nenhum destes adutos apresentou mobilidade cromatográfica similar ao único aduto obtido de DNA modificado in vitro com o ptaquilosídeo ativado (glicosídeo carcinogênico extraído da samambaia). Assim, concluímos que outras substâncias presentes na samambaia, além do ptaquilosídeo, são capazes de induzir a formação de adutos de DNA, podendo contribuir para a carcinogenicidade da samambaia em camundongos. Como parte da estratégia para identificação de marcadores moleculares da ação da samambaia sobre o genoma de ratos, e usando a carcinogênese de tumores colorretais humanos como modelo, examinamos oito tumores malignos induzidos pela samambaia em ratos para a presença de mutações nos genes associados com a via clássica para o câncer colorretal, p53 e ras e também avaliamos a via mutadora estudando microssatélites. Os exons 5 9 do gene p53 e os exons 1 e 2 dos genes K-ras e H-ras foram examinados por seqüenciamento de DNA e nenhuma mutação foi encontrada nos oito tumores malignos. A amplificação de cinco locos de microssatélites previamente validados (um com repetição de mononucleotídeo, três com repetições de dinucleotídeos e um com repetições de tetranucleotídeos) nos tumores malignos e em tecido normal adjacente não revelou qualquer instabilidade. O envolvimento de mutações em outros genes supressores de tumor ou oncogenes da via clássica bem como em genes requeridos para a segregação cromossômica e eventos epigenéticos devem ser ainda… Advisors/Committee Members: Sergio Danilo Junho Pena, Sergio Danilo Junho Pena, Jacques Robert Nicoli, Jacqueline Isaura Alvarez Leite, Andrew John George Simpson, Luisa Lina Villa.