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Universidade Estadual de Campinas

1. Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de, 1987-. Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins.

Degree: Instituto de Biologia; Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecular, 2013, Universidade Estadual de Campinas

Orientadores: Adriano Rodrigues Azzoni, Anete Pereira de Souza

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Made available in DSpace on 2018-08-24T06:15:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toledo_MarceloAugustoSzymanskide_D.pdf: 15660446 bytes, checksum: 8e64c5b4455cf458c2eb0d9b8e030e70 (MD5) Previous issue date: 2013

Resumo: Apesar de seguros e simples de produzir, o uso de vetores não virais como o DNA plasmidial (DNAp) em estudos de terapia gênica e vacinação por DNA tem sido limitado pela baixa eficiência quando comparados aos vetores virais. Essa limitação provém principalmente da reduzida capacidade de superar as barreiras físicas, enzimáticas e difusionais encontradas durante o tráfego intracelular para o interior do núcleo das células alvo. Dentro deste contexto, o presente trabalho demonstra a utilização de cadeias leves modificadas de Dineína (Lc8 e Rp3) como vetores não-virais de entrega gênica. A escolha de cadeias leves de Dineína justifica-se pela possibilidade de utilizar o transporte retrógrado celular mediado por complexos motores de Dineína para facilitar o tráfego de material genético exógeno através do citoplasma em direção à periferia nuclear. Através da adição de pequenos domínios peptídicos, ricos em aminoácidos polares positivos (arginina e lisina), ao N-terminal de cadeias leves de Dineína foi possível conferir a estas proteínas a habilidade de interagir com material genético condensando-o em partículas. Ensaios de transfecção demonstraram que tais partículas apresentam elevada eficiência de entrega do material genético exógeno ao núcleo de células HeLa, eficiência esta superior àquela apresentada pelo peptídeo protamina, amplamente estudado como vetor não-viral de entrega gênica. A formação de complexos ternários utilizando-se DNA plasmidial, cadeias leves de Dineína modificadas e lipídios catiônicos apresentou eficiência de entrega superior àquelas apresentadas na ausência do lipídio. Adicionalmente, complexos de entrega formados apenas com DNA plasmidial e cadeias leves de Dineína modificadas apresentaram baixo efeito citotóxico em células HeLa, característica esta de grande relevância uma vez que a toxicidade dos vetores de entrega gênica atua como importante fator limitante em sua aplicação clínica. O mecanismo envolvido no processo de entrega gênica mediado por cadeias leves de Dineína modificadas também foi estudado, podendo ser observado que (1) a entrada dos complexos de entrega na célula é altamente dependente do processo de endocitose, (2) a eficiência de entrega observada depende da rede de microtúbulos e (3) parte significativa dos complexos de entrega é degradada na via de endossoma/lisossomo celular. Os vetores não-virais de entrega gênica descritos no presente estudo associam elevada eficiência de transfecção, baixa toxicidade celular e relativo baixo custo de produção, uma vez que as cadeias leves de Dineína recombinantes são produzidas em sistema heterólogo utilizando-se Escherichia coli. Ressalta-se ainda a possibilidade de adição de…

Advisors/Committee Members: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Souza, Anete Pereira de, 1962-, Azzoni, Adriano Rodrigues, 1971-, Torre, Lucimara Gaziola de la, Massirer, Katlin Brauer, Peroni, Luis Antonio, Santos, Sandra Aparecida Cororato dos.

Subjects/Keywords: Entrega gênica; Dineínas; Transfecção; Terapia genética; Plasmideos; Gene delivery; Dyneins; Transfection; Gene therapy; Plasmids

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APA (6th Edition):

Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de, 1. (2013). Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. (Doctoral Dissertation). Universidade Estadual de Campinas. Retrieved from TOLEDO, Marcelo Augusto Szymanski de. Trafego intracelular de vetores não-virais: desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. 2013. 85 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316418>. Acesso em: 24 ago. 2018. ; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316418

Chicago Manual of Style (16th Edition):

Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de, 1987-. “Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins.” 2013. Doctoral Dissertation, Universidade Estadual de Campinas. Accessed April 13, 2021. TOLEDO, Marcelo Augusto Szymanski de. Trafego intracelular de vetores não-virais: desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. 2013. 85 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316418>. Acesso em: 24 ago. 2018. ; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316418.

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Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de, 1987-. “Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins.” 2013. Web. 13 Apr 2021.

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Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de 1. Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. [Internet] [Doctoral dissertation]. Universidade Estadual de Campinas; 2013. [cited 2021 Apr 13]. Available from: TOLEDO, Marcelo Augusto Szymanski de. Trafego intracelular de vetores não-virais: desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. 2013. 85 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316418>. Acesso em: 24 ago. 2018. ; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316418.

Council of Science Editors:

Toledo, Marcelo Augusto Szymanski de 1. Trafego intracelular de vetores não-virais = desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. [Doctoral Dissertation]. Universidade Estadual de Campinas; 2013. Available from: TOLEDO, Marcelo Augusto Szymanski de. Trafego intracelular de vetores não-virais: desenvolvimento de proteínas de fusão para transporte de DNA plasmidial através da interação com proteínas motoras = Intracelullar traffic of non-viral vectors: development of recombinant fusion proteins to mediate plasmidial DNA transport by interaction with motor proteins. 2013. 85 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316418>. Acesso em: 24 ago. 2018. ; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316418

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