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Universidade Estadual de Campinas

1. Santos, Samuel Ricardo dos, 1980-. Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum .

Degree: 2014, Universidade Estadual de Campinas

Resumo: Giardia spp. e Cryptosporidium spp. são organismos desafiadores em monitoramento ambiental, podendo afetar os seres humanos e os animais com grandes impactos na saúde pública. Métodos para detectar esses organismos são descritos na literatura ¿ p.ex.: o método EPA 1623.1. No entanto, muitos não são capazes de detectar a viabilidade destes parasitos. Este trabalho avaliou o uso de marcadores fluorescentes combinados com a técnica de detecção de fluorescência retardada na detecção de viabilidade de Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum. Testes de incubação com 6-carboxifluorceina-succinimidil-diacetato-éster (CFDA-SE), C12-resazurina e SYTOX Green foram desenvolvidos com cistos de G. intestinalis e oocistos de C. parvum. Medidas de fluorescência retardada em câmara escura projetada e em dispositivo comercial foram aplicados em amostras purificadas e concentradas de G. intestinalis após incubação com CFDA-SE. Grupos contendo cistos vivos e infecciosos, mortos a 100° C, estressados com luz UV-C e envelhecidos foram analisados via fluorescência retardada e microscopia de epifluorescência em oito séries experimentais. Os resultados demonstram que (oo)cistos vivos e infecciosos não são marcados com os marcadores fluorescentes. Dupla marcação em (oo)cistos mortos é observada após 30 minutos de incubação com C12-resazurina 5,0 ?M e SYTOX Green 100 nM. (Oo)cistos mortos apresentam marcação verde após incubação de CFDA-SE 5,0 ?M. O envelhecimento da amostra foi acompanhado pelo aumento da taxa de marcação celular com cistos apresentando ~50% de marcação aos 30 dias de idade e ~100% aos 50 dias de idade. Testes com fluorescência retardada demonstram que cistos vivos e com idade inferior a 20 dias apresentam intensidades superiores aos cistos mortos e estressados após excitação com 365 nm. A excitação com 365 nm apresentou correlação R2 > 95% após análise de cinética de decaimento com modelo exponencial de segunda ordem. Os dados indicam que o decaimento da fluorescência retardada é acompanhado por duas componentes k1 e k2 onde k2 = 5?k1, estando estas conectadas com as condições fisiológicas da Giardia. O procedimento pode ser efetuado em 10 passos laboratoriais em aproximadamente 60 minutos de análise. A fluorescência retardada apresenta futuro promissor na análise de viabilidade de parasitos em amostras purificadas; Abstract: Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are challenging and important organisms in modern environmental monitoring. These protozoa can affect humans and animals seriously, as reflection of sanitation problems in water quality control, with huge impact over economics and public health. Methods to detect such organisms are well described in literature - i.e. the EPA Method 1623.1 and AWWA 2012. But those ones are not able to detect infectivity. For that, the usual procedures include infection of animal model leading to at least one week for confirming infectivity. Some research with dye probes are being developed in order to provide useful, reliable and low cost procedures for detection of… Advisors/Committee Members: Paterniani, José Euclides Stipp, 1957- (advisor), Gallep, Cristiano de Mello, 1974- (advisor), Benchimol, Marlene (committee member), Daniel, Luiz Antonio (committee member), Coneglian, Cassiana Maria Reganhan (committee member), Roston, Denis Miguel (committee member).

Subjects/Keywords: Giardia; Cryptosporidium parvum; Marcadores fluorescentes

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APA (6th Edition):

Santos, Samuel Ricardo dos, 1. (2014). Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum . (Thesis). Universidade Estadual de Campinas. Retrieved from http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/257131

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Chicago Manual of Style (16th Edition):

Santos, Samuel Ricardo dos, 1980-. “Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum .” 2014. Thesis, Universidade Estadual de Campinas. Accessed January 17, 2020. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/257131.

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MLA Handbook (7th Edition):

Santos, Samuel Ricardo dos, 1980-. “Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum .” 2014. Web. 17 Jan 2020.

Vancouver:

Santos, Samuel Ricardo dos 1. Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum . [Internet] [Thesis]. Universidade Estadual de Campinas; 2014. [cited 2020 Jan 17]. Available from: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/257131.

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Council of Science Editors:

Santos, Samuel Ricardo dos 1. Fluorescência retardada em protozoários : Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum . [Thesis]. Universidade Estadual de Campinas; 2014. Available from: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/257131

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