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Foram realizados quatro tratamentos: tratamento 1: desde o nascimento e até nas primeiras 48 horas de vida, o bezerro mamou na própria mãe, nas quatro tetas, sendo um pouco em cada teta ad libitum; tratamento 2: desde o nascimento e até nas primeiras 48 horas de vida, o bezerro mamou apenas na teta anterior direita ad libitum; tratamento 3: desde o nascimento e até nas primeiras 48 horas de vida, todas as tetas foram ordenhadas e o colostro foi fornecido ao bezerro em mamadeira; tratamento 4: desde o nascimento e até nas primeiras 48 horas de vida, todas as tetas foram ordenhadas e um sucedâneo foi fornecido ao bezerro em mamadeira. Foi mensurada a concentração de imunoglobulina G (IgG) de amostras de sangue de 21 bezerros, colhidas às 48 horas de vida. Os testes utilizados para mensurar a concentração de IgG foram: imunodifusão radial, refratometria e coagulação por glutaraldeído. A densidade do colostro fornecido aos animais foi mensurada com lactodensímetro. Nos animais submetidos ao tratamento 3, foi detectada maior transferência IgG que naqueles submetidos aos tratamentos 1 e 2 que, por sua vez, apresentaram maior aquisição de imunidade passiva que os animais do tratamento 4. Não houve diferença significativa entre as respostas mensuradas nos tratamentos 1 e 2. Foi detectada alta correlação entre os resultados obtidos no teste de refratometria (r = 0,90) e os obtidos no teste de imunodifusão radial e houve coagulação em solução de glutaraldeído de todos os soros com concentração de IgG maior que 983,68 mg/dL.

Four treatments were performed: treatment 1: from birth until the first 48 hours after birth, the calf sucked ad libitum on her mother, the four teats, being a little in each teat ; treatment 2: from birth until the first 48 hours after birth, the calf suckled ad libitum on the right front teat; treatment 3: from birth until the first 48 hours of life, all teats were milked and the calf was provided colostrum by bottle; treatment 4: from birth until the first 48 hours of life, all teats were milked and milk replacer was fed to calves by bottle. We measured the concentration of Immunoglobulin G (IgG) in the blood of 21 calves harvested at 48 hours of life. The density of colostrum fed to the animals was measured with a hydrometer . In animals subjected to treatment 3, was detected higher transfer of IgG than those of treatments 1 and 2 which in turn showed acquisition of immunity to the animals of treatment 4. There was no significant difference between the responses measured in treatments 1 and 2. We have detected a high correlation between the results obtained in the test of refraction and the obtained in radial immunodiffusion test (r = 0,90) and there was coagulation solution of glutaraldehyde in all sera IgG concentration higher than 983,68 mg/dL.

Advisors/Committee Members: Joely Ferreira Figueiredo Bittar, Antônio Vicente Mundim, Edmundo Benedetti.

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The study of the physiological traits of calves has contributed to the helped in the explanation, recognition and differentiation of morbid states that affect these animals. Furthermore, this data is essential to ensure the clinical care of these neonates to reduce economic losses in bovine breeding. Based on the age and gender, this study is aimed to evaluate the concentrations of the serum biochemical profile of crossbred calves from birth to 360 days. 30 crossbred calves were used and 13 blood samples were taken from each at monthly intervals. The first withdraw was on the one a thre days of birth. The concentrations of total serum protein, albumin, globulin, ALP, GGT, AST, ALT, calcium, phosphorus, magnesium, calcium ionized, creatinine, urea, triglycerides and cholesterol. Blood analyses were performed by using the automated multichannel analyzer Chem Well. All proteins, enzymes and minerals were influenced by age. Urea was the only parameter that was not statistically different according to age. We conclude that age has an influence on the values of most biochemical parameters.

O estudo das variáveis fisiológicas de bezerros contribui para a elucidação, reconhecimento e diferenciação dos estados mórbidos que acometem esses animais. Além disso, esses dados são essenciais para garantir o atendimento clínico desses neonatos, visando reduzir as perdas econômicas na criação bovina. Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência de fatores etários, nas concentrações dos constituintes bioquímicos séricos de bezerros mestiços, desde o nascimento até os 360 dias de idade. Foram utilizados 30 bezerros mestiços e realizadas em cada animal 13 coletas de sangue, em intervalos mensais, iniciando a primeira coleta um a três dias após o nascimento. Determinou-se em cada amostra as concentrações séricas de proteínas totais, albumina, globulina, ALP, GGT, AST, ALT, cálcio, fósforo, magnésio, cálcio ionizável, creatinina, uréia, triglicérides e colesterol. As análises foram realizadas em analisador automático multicanal ChemWell. Todas as frações protéicas, enzimas e minerais sofreram influência da idade. Para os metabólitos, a uréia foi o único parâmetro que não diferenciou estatisticamente conforme a idade. Dos constituintes analisados apenas o colesterol apresentou variação quanto ao sexo. Conclui-se existir influência da idade nos valores da maioria dos parâmetros bioquímicos analisados.

Advisors/Committee Members: Fernando Antônio Ferreira, Joely Ferreira Figueiredo Bittar, Antônio Vicente Mundim.

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A obesidade é considerada a afecção nutricional e metabólica mais comum nas sociedades desenvolvidas, sendo definida como um transtorno patológico caracterizado pelo acúmulo de gordura em níveis muito superiores ao necessário para o ótimo funcionamento orgânico. Influenciados por diversos fatores, a expectativa de vida dos cães têm aumentado, tornando esta população cada vez mais composta por indivíduos idosos. Com o avançar da idade ocorrem alterações fisiológicas irreversíveis resultando em disfunções orgânicas, sendo que vários sistemas são acometidos por estas mudanças. Portanto, o conhecimento das principais alterações hematológicas e bioquímicas séricas que os cães obesos sofrem à medida que envelhecem, é de grande auxilio ao clínico de pequenos aniamais, podendo permitir uma melhor abordagem deste paciente. Nesse contexto, objetivou-se avaliar o perfil hematológico e bioquímico de cães adultos e idosos que sofram de obesidade de causa natural. No capítulo 2 foram avaliados os hemogramas de 30 cães adultos e 29 idosos, observou-se que independente da faixa etária e sexo, os cães não apresentaram alterações significantes de eritrograma e plaquetograma, mostrando apenas no leucograma um discreto aumento de células jovens sem leucocitose. No capítulo 3 foi avaliado o perfil bioquímico sérico destes mesmos animais, sendo que, independente da faixa etária ou sexo, a obesidade e a senilidade não interferiram nos valores da fosfatase alcalina, alanino aminotransferase, proteína total, albumina, creatinina, glicose, colesterol total e triglicérides. As globulinas apresentaram um discreto aumento em ambos os grupos. Nas fêmeas idosas a concentração sérica de GGT foi muito superior aos valores de referência adotados. Observamos também que para as duas faixas etárias as LDL-C foram as lipoproteínas de maior concentração sérica, seguidas pelas HDL-C e VLDL-C.

Obesity is considered the most common nutritional disorder in developed societies, being defined as a pathological disorder characterized by accumulation of fat at levels higher than necessary for optimal organ function. Influenced by several factors, the life expectancy of dogs has increased, making this population increasingly composed of elderly individuals. With advancing age, irreversible physiological changes occur resulting in organ dysfunction, and many systems are affected by these changes. Therefore, knowledge of the main hematological and serum biochemistry that obese dogs suffer as they age, is of great help to the clinician of small animals, potentially enabling a better approach to this patient. In this context, the objective was to evaluate the hematological and biochemical profile of dogs, and elderly adults suffering from obesity by natural causes. In chapter 2 we evaluated the blood counts of 30 adult dogs and 29 elderly dogs, found regardless of age and sex, dogs showed no significant changes in platelet and red blood cell, showing only a slight increase in leukocyte counts of young cells without leukocytosis. In chapter 3, we avaluated the serum…

Advisors/Committee Members: Carlos Gomes Ferreira, Antônio Vicente Mundim, Joely Ferreira Figueiredo Bittar.

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This study aimed to investigate the sensitivity of parasitological testing when using aspirates or imprints of spleen, lymph nodes and bone marrow in function of time and correlate the parasite load of dogs with clinical symptoms. We used 31 seropositive dogs that were euthanized from the CCZ of Uberlândia. In the UFUs Laboratory of Pathology, the blades were fabricated and evaluated under a light microscope, 100X objective. The slides were evaluated for at most one hour and, if it was positive, the time spent for diagnosis in one, five, 20, 30 and 60 minutes were recorded. In the determination of the parasite load, the amastigotes were displayed and grouped in one, 10, 50, 100, and 500, 1000 and even 1500 views in 100 fields. Among the 31 animals analyzed, 11 (35.48%) were symptomatic, 17 (54.83%) oligosymptomatic and three (9.67%) asymptomatic. In the analysis by PAAF, difference was read of 20 minutes with one minute (p = 0.001), and the test sensitivity with time was greater at 60 minutes than at 20 minutes (p = 0.04). In the analysis of imprint, the test sensitivity was higher with time at 20 minutes than at five (p = 0.03). There was no statistical difference between the two techniques used in collecting samples for each tissue (bone marrow p = 1.0, p = 0.76 lymph nodes, spleen p = 0.57). There was no difference between tissues in the sensitivity of diagnoses made by PAAF, as well as imprint. The worm burden of both techniques demonstrated that asymptomatic animals have lower parasite load than in relation to symptomatic.

O presente estudo objetivou verificar a sensibilidade do teste parasitológico quando se utilizou aspirados ou imprints de baço, linfonodos e medula óssea, em função do tempo, além de correlacionar o resultado, a carga parasitária dos cães com a sintomatologia clínica. Foram utilizados 31 cães sororreagentes e eutanasiados provenientes do CCZ de Uberlândia. No Laboratório de Patologia da UFU, foram confeccionadas as lâminas e avaliadas em microscópio óptico, objetiva 100X. As lâminas eram avaliadas por no máximo uma hora e quando positiva registrou-se o tempo dispensado para o diagnóstico em um, cinco, 20, 30 e 60 minutos. Na determinação da carga parasitária as formas amastigotas eram visualizadas e agrupadas em uma, 10, 50, 100, 500,1000 e até 1500 visualizações em 100 campos. Dos 31 animais analisados 11 (35,48%) eram sintomáticos, 17 (54,83%) oligossintomáticos e três (9,67%) assintomáticos. Na análise por PAAF houve diferença de leitura de 20 minutos com um minuto (p= 0,001), assim como a sensibilidade do teste foi maior com o tempo de 60 minutos do que com 20 minutos (p=0,04). Na análise de imprint a sensibilidade do teste foi maior com o tempo de 20 minutos do que com cinco (p=0,03). Não houve diferença estatística entre as duas técnicas aplicadas na coleta de amostras para cada tecido (medula óssea p= 1,0; linfonodo p=0,76; baço p= 0,57). Não houve diferença na sensibilidade dos diagnósticos realizados por PAAF entre os tecidos, assim como por imprint. A carga parasitária de ambas as…

Advisors/Committee Members: Alessandra Aparecida Medeiros, Márcia Beatriz Cardoso de Paula, Joely Ferreira Figueiredo Bittar.

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O Herpesvírus canino tipo 1 (CaHV-1) está associado a desordens reprodutivas e mortalidade neonatal, podendo ser encontrado em cães saudáveis assintomáticos ou associado a manifestações clínicas variadas como lesões vesiculares genitais, infecções oculares e doença respiratória. O objetivo deste estudo foi detectar a presença do CaHV-1, através da reação em cadeia de polimerase (PRC), em amostras de urina e em swab ocular e vaginal de cadelas na cidade de Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. Foram utilizadas 20 cadelas com histórico ou sinais de desordens reprodutivas. Dois animais apresentaram resultado positivo na PCR (10%) nas amostras de urina e secreção ocular, respectivamente, um diagnosticado com piometra e outro saudável e histórico de natimortalidade. Todas as amostras de secreção vaginal foram negativas. No sequenciamento de DNA as amostras positivas apresentaram 100% de similaridade de nucleotídeos com outras quatro cepas de CaHV-1 já descritas e depositadas no Genbank. Os cães positivos na PCR no presente estudo provavelmente eram portadores de infecção latente. A detecção do DNA viral nas amostras avaliadas confirma a presença do CaHV-1 na população canina do município de Uberlândia. Trata-se da primeira detecção molecular do agente na região sudeste do Brasil.

Canine herpesvirus-1 (CaHV-1) is known to cause reproductive disorders and fatal infections in puppies, and may also be found in asymptomatic dogs or related to vaginal vesicular lesions, ocular infections and respiratory diseases. The aim of this study was investigate the ocurrence of CaHV-1 using the polymerase chain reaction (PCR) within urine samples, ocular and vaginal swab samples from Uberlândia, MG, Brazil. Twenty mature bitches, with at least one estrous and reproductive disorders history and/or symptoms were used. Two out of twenty dogs (10%) were positive in the urine and ocular swab samples, respectively, one with pyometra diagnosis and another one healthy with history of stillbirth. No positive results were detected within vaginal swab samples. Sequence analysis of the DNA polymerase gene of the positive samples indicated 100% identity with the sequence of the four CaHV-1 strains selected from Genbank. These findings suggest that positive dogs might be CaHV-1 latent carriers. Additionally, the results confirm the presence of CaHV-1 circulating within urban canine population of Uberlândia, MG. This is the first report that a CaHV-1 infection has been detected in the Southeast Brazil.

Advisors/Committee Members: Anna Monteiro Correia Lima Ribeiro, Alessandra Aparecida Medeiros, Joely Ferreira Figueiredo Bittar, Selwyn Arlington Headley.

▼ A dissertação foi dividida em dois estudos. No primeiro estudo objetivou-se verificar se galinhas imunizadas com uma solução de Leptospiras inativadas e proteínas de membrana externa do sorovar Hardjo, poderiam produzir anticorpos policlonais específicos anti-Leptospiras, detectáveis em testes ELISA. Foram imunizados oito galinhas com 25 semanas de idade, da raça White Leghorn, sendo três imunizadas com uma suspensão de Leptospiras inativadas, três com uma solução de proteínas de membrana externa extraída do sorovar Hardjo e duas controle. Coletas de sangue foram realizadas quinzenalmente e de ovos diariamente. A IgY foi purificada a partir da gema dos ovos utilizando para a delipidação o método de diluição em água ácida e a precipitação com sulfato de amônio. Realizou-se testes ELISA para verificar a especificidade da IgY, nestes foi possível observar a produção de anticorpos anti-Leptospira, tanto no soro quanto nas gemas purificadas. O pico de produção de anticorpos específicos ocorreu na 5 semana após a primeira imunização. Foi possível induzir a produção de anticorpos específicos em galinhas, por meio de imunizações destas com Leptospira inativada e proteínas de membrana externa do sorovar Hardjo. Galinhas imunizadas com uma suspensão de Leptospiras inativadas e com PME de Leptospira interrogans do sorovar Hardjo produziram anticorpos reativos a PME Hardjo detectáves por teste ELISA. No segundo estudo objetivou-se com identificar epítopos ou mimetopos (sequências que imitam epítopos verdadeiros), por meio da técnica de phage display tendo como alvo anticorpos IgY anti-Leptospira e anti-PME Hardjo. Os anticorpos IgY utilizados como alvo foram produzidos em galinhas imunizadas com proteínas de membrana externa de Leptospira interrogans sorovar sorovar Hardjo (anti-PME Hardjo), suspensão de Leptospiras inativada (anti-Leptospira) e IgY controle. No biopanning uma biblioteca comercial de peptídeos randômicos Ph.D. 12 mer, New England BioLabsInc foi incubada primeiramente com a IgY controle, realizando um processo denominado seleção negativa e depois com a IgY anti-Leptospira e anti-PME Hardjo, a eluição dos fagos selecionados foi então realizada de forma competitiva e ácida. Após três ciclos de seleção, 288 clones foram isolados e sequenciados, gerando 132 sequências válidas. Os clones foram submetidos a testes ELISA com o anticorpo usado como alvo no biopanning para verificar a especificidade destes. Nos resultados dos testes ELISAs verificou-se que nove fagos (PMEcomp17, PMEac10, PMEac12, PMEac19, PMEac29, PMEac35, Lep6, Lep7 e Lep20) apresentaram melhores resultados. Estes foram alinhados com a sequência primária de proteínas de Leptospira spp e Leptospira interrogans sorovar Hardjo, e as análises in Silico mostraram que os nove peptídeos têm similaridade com proteínas imunogênicas de Leptospiras. Foram selecionados nove peptídeos com similaridade a proteínas de Leptospira interrogans consideradas imunogênicas. Os peptídeos foram similares a proteínas de membrana externa, lipoproteína, LipL32, LipL41, LigA, SecY,… Advisors/Committee Members: Anna Monteiro Correia Lima, Alessandra Aparecida Medeiros, Ricarda Maria dos Santos, Joely Ferreira Figueiredo Bittar.

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Anticorpos policlonais específicos podem ser obtidos em grandes quantidades a partir da gema do ovo de galinhas imunizadas, denominados anticorpos IgY. Embora semelhantes funcionalmente aos anticorpos IgG de mamíferos, os anticorpos IgY apresentam vantagens: (i) extração sem estresse para o animal; (ii) menor número de animais utilizados na produção; (iii) grandes concentrações de anticorpos por gema; (iii) não sofre interferência do fator reumatóide e de proteínas do sistema complemento de mamíferos; (iv) interage apenas com receptores para Fc de galinha. Os anticorpos IgY são utilizados em estudos da relação patógeno versus hospedeiro, proteômica e biologia de agentes infecciosos. Toxoplasma gondii é um parasito amplamente distribuído e com grande número de hospedeiros, incluindo o homem, e pode ocasionar lesões em fetos humanos e de animais domésticos. A relação T. gondii versus hospedeiros, o papel dos antígenos do parasito nos processos de infecção e manutenção do parasitismo intracelular, podem ser investigados pela incubação do parasito com anticorpos específicos obtidos de mamíferos. Os anticorpos de mamíferos são obtidos em concentrações limitadas e por meio de procedimentos dolorosos. Neste estudo, galinhas foram imunizadas com antígenos solúveis de T. gondii da cepa RH. Foram extraídos, em média, 4 mg de IgY/ mL de gema de ovo. Detectaram-se anticorpos IgY anti-STAg de alta avidez após o segundo booster, também reconheceram alvos antigênicos de distintos pesos moleculares. Os anticorpos IgY anti-STAg detectaram o parasito intracelular em cultivos de células HeLa e também em cortes histológicos de tecido fixado. Diferente dos anticorpos IgG de camundongos, nos ensaios Western blot 1D e 2D, os anticorpos IgY reconheceram proteínas antigênicas de pesos moleculares e pontos isoelétricos distintos, respectivamente. Em ensaio de proliferação do parasito, observou-se que a incubação dos taquizoítos de T. gondii com os anticorpos IgY específicos reduziu parcialmente o parasitismo intracelular. Concluiu-se que anticorpos IgY policlonais são ferramentas eficazes para estudos da biologia de T. gondii e podem auxiliar na pesquisa de alvos antigênicos para utilização em diagnóstico e produção de vacinas.

Specific polyclonal antibodies obtained from egg yolk of the immunized chicken are named immunoglobulin Y (IgY). Although functionally related to mammal immunoglobulin G (IgG), IgY presents advantages, as follows: (i) elevated purified amounts of antibodies from one egg; (ii) the reduced of immunized animal number (iii) no interference with rheumatoid factor or mammal Complement proteins; (iv) binds only to chicken specific Fc fragment receptor. Polyclonal IgY antibodies could be employed as a primary or secondary reagent to investigate pathogen and host relationship, proteomic studies or infectious microorganisms biology. Toxoplasma gondii is a worldwide intracellular parasite which infects warm-blood hosts, including human. Toxoplasmosis causes fetal disorders in human and domestic animals. Tachyzoites and…

Advisors/Committee Members: Deise Aparecida de Oliveira Silva, Marcelo José Barbosa da Silva, Joely Ferreira Figueiredo Bittar, Tiago Wilson Patriarca Mineo, Jair Pereira da Cunha Junior, Rodrigo Martins Soares.